专利名称：((1s)-1-(((2s)-2-(5-(4’-(2-((2s)-1-((2s)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2 ...的制作方法
技术领域：
本申请要求2007年8月8日提交的美国临时申请序列号60/954,592的优先权。
本发明一般性地涉及((1S)-1-(((2S)-2-(5-(4’-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯二盐酸盐的晶型。本发明还一般性地涉及包含该晶型的药物组合物，以及使用该晶型治疗丙型肝炎病毒(HCV)的方法以及获得这种晶型的方法。
背景技术：
丙型肝炎病毒(HCV)是一种主要人类病原体，全世界估计1.7亿人感染丙型肝炎病毒，约为1型人类免疫缺陷性病毒感染人数的5倍。这些HCV感染个体中的相当大部分发展为严重的进行性肝疾病，包括肝硬化和肝细胞癌。
目前最有效的HCV疗法使用α-干扰素和利巴韦林(ribavirin)的联合，导致在40％的患者中持续有效。最新的临床结果证明，作为单一疗法，聚乙二醇化的(pegylated)α-干扰素要优于未改性的α-干扰素。然而，即便采用包含聚乙二醇化的α-干扰素和利巴韦林的联合的实验性治疗方案，仍然有相当大部分的患者对病毒载量没有持续减少。因此，存在明显的和未被满足的需求，以开发用于治疗HCV感染的有效疗法。
发明内容
化合物((1S)-1-(((2S)-2-(5-(4’-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯用于治疗HCV感染。由于在结晶这种化合物方面存在困难，形成纯产物还不可再现。现已发现，式(I)表示的二盐酸盐，其在本文中被称为化合物(I)，可以重复地被结晶成一种具体的多晶型物，在本文中被称为N-2晶型，其能提供高的水溶解性和优异的纯化能力。
化合物(I) 在第一方面，本发明的公开内容提供了下式化合物的N-2晶型
在第二方面，本发明的公开内容提供了下式化合物的N-2晶型
其特征在于，其具有下列单位晶胞参数 晶胞尺寸
α＝74.132度 β＝84.132度 γ＝70.646度 空间群P1 分子/单位晶胞1 其中所述晶型的测量是在约20℃至约25℃的温度下进行的。
在第三方面，本发明的公开内容提供了下式化合物的N-2晶型
其特征在于，在所述单位晶胞内的分数原子坐标列于表3中。
在第四方面，本发明的公开提供了内容下式化合物的N-2晶型
其在约20℃至约25℃之间的温度，在粉末X-射线衍射图案中具有下列特征峰，处于10.3±0.1，12.4±0.1，12.8±0.1，13.3±0.1，13.6±0.1，15.5±0.1，20.3±0.1，21.2±0.1，22.4±0.1，22.7±0.1和23.7±0.1的2θ的值处，基于用具有旋转毛细管的衍射仪(CuKα)收集的高质量图案，其中2θ用NIST其它适宜标准品进行校准。
在第五方面，本发明的公开内容提供了下式化合物的N-2晶型
其特征在于，其具有下列一个或多个 a)具有基本上等于下列的参数的单位晶胞 晶胞尺寸
α＝74.132度 β＝84.132度 γ＝70.646度 空间群P1 分子/单位晶胞 1 其中所述晶型的测量是在约20℃至约25℃的温度下进行的； b)其在约20℃至约25℃之间的温度，在粉末X-射线衍射图案中具有下列特征峰，处于10.3±0.1，12.4±0.1，12.8±0.1，13.3±0.1，13.6±0.1，15.5±0.1，20.3±0.1，21.2±0.1，22.4±0.1，22.7±0.1和23.7±0.1的2θ的值处，基于用具有旋转毛细管的衍射仪(CuKα)收集的高质量图案，其中2θ用NIST其它适宜标准品进行校准；和/或 c)具有典型地在225-245℃范围内开始出现的吸热分解的熔触体。
在第六方面，本发明的公开内容提供了下式化合物的基本上纯的N-2晶型
在第六方面的第一种实施方案中，所述N-2晶型具有至少95重量％的纯度。在第六方面的第二种实施方案中，所述N-2晶型具有至少99重量％的纯度。
在第七方面，本发明的公开内容提供了提供下式化合物的基本上纯的N-2晶型
其在约20℃至约25℃之间的温度，在粉末X-射线衍射图案中具有下列特征峰，处于10.3±0.1，12.4±0.1，12.8±0.1，13.3±0.1，13.6±0.1，15.5±0.1，20.3±0.1，21.2±0.1，22.4±0.1，22.7±0.1和23.7±0.1的2θ的值处，基于用具有旋转毛细管的衍射仪(CuKα)收集的高质量图案，其中2θ用NIST其它适宜标准品进行校准。
在第八方面中，本发明的公开内容提供了一种药物组合物，其包含下式化合物的N-2晶型
和药学上可接受的载体或稀释剂。
在第九方面，本发明的公开内容提供了一种药物组合物，其包含下式化合物的基本上纯的N-2晶型
和药学上可接受的载体或稀释剂。在第九方面的第一种实施方案中，所述N-2晶型具有至少95重量％的纯度。在第九方面的第二种实施方案中，所述N-2晶型具有至少99重量％的纯度。
在第十方面中，本发明的公开内容提供了一种药物组合物，其包含下式化合物的N-2晶型
以及与其结合的一种或两种具有抗-HCV活性的其它化合物。在第十方面的第一种实施方案中，所述N-2晶型具有至少90重量％的纯度。在第十方面的第二种实施方案中，所述N-2晶型具有至少95重量％的纯度。在第十方面的第三种实施方案中，所述N-2晶型具有至少99重量％的纯度。
在第十方面的第四种实施方案中，至少一种具有抗-HCV活性的其它化合物是干扰素或利巴韦林。在第十方面的第五种实施方案中，所述干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化的干扰素α、合意(consensus)干扰素、干扰素α2A和类淋巴母细胞的(lymphoblastiod)干扰素tau。
在第十方面的第六种实施方案中，本发明的公开内容提供了一种药物组合物，其包含下式化合物的N-2晶型，
以及与其结合的一种或两种具有抗-HCV活性的其它化合物，其中至少一种所述其它化合物选自白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、增强1型辅助性T细胞应答的发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特(Imiqimod)、利巴韦林、肌苷5′-单磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺(amantadine)和金刚烷乙胺(rimantadine)。
在第十一方面中，本发明的公开内容提供了一种在哺乳动物中治疗HCV感染的方法，该方法包含对所述哺乳动物给药治疗有效量的下式化合物的N-2晶型
在第十一方面的第一种实施方案中，所述N-2晶型具有至少90重量％的纯度。在第十一方面的第二种实施方案中，所述N-2晶型具有至少95重量％的纯度。在第十一方面的第三种实施方案中，所述N-2晶型具有至少99重量％的纯度。在第十一方面的第四种实施方案中，所述哺乳动物是人类。
本发明公开内容的其它实施方案可以包含在此公开的两种或多种实施方案和/或方面的适宜组合。
本发明公开内容的还有其它实施方案和方面根据下面所提供的说明书将是明然的。
本发明公开内容的化合物还以互变异构体的形式存在；因此，本发明公开内容还包括所有的互变异构形式。
图1说明化合物(I)的N-2晶型的实验的和模拟的粉末X-射线衍射图案(
在T＝室温)。
图2说明化合物(I)的N-2晶型的差示扫描量热图。
图3说明化合物(I)的N-2晶型的固态NMR光谱。
本发明的公开内容涉及化合物(I)的晶型
定义 在此所使用的″多晶型物″是指具有形成晶体的分子、原子和/或离子的相同化学组成但不同空间排列的晶型。
在此所使用的术语″药学上可接受的″是指对应于合理收益/风险比的那些化合物、物质、组合物和/或剂型，其在正确医学判断的范围内，适合与人类和动物的组织接触，而没有过度的毒性、刺激、过敏反应或其它疑难并发症。
在此所使用的术语″基本上纯的″是指化合物(I)的N-2晶型，其纯度大于约90％。这意味着化合物(I)的多晶型物不含有大于约10％的任何其它化合物，特别地，不含有大于约10％的化合物(I)的任何其它形式。
在此所使用的术语″治疗有效量″意欲包括化合物(I)的晶型的数量，当单独或联合给药治疗丙型肝炎时，该数量是有效的。化合物(I)的晶型及其药物组合物可以用于治疗丙型肝炎。如果化合物(I)与另一种药物联合使用，那么在此所述的化合物的联合可以产生协同组合。如Chou和Talalay，Adv.Enzyme Regul.1984，22，27-55中所述那样，当联合给予时化合物的作用大于单独给予作为单一药剂的所述化合物的作用时，出现协同性(synergy)。
术语″治疗″是指(i)对存在于易可以感染所述疾病、障碍和/或病症但还没有被确诊为具有它的患者的疾病、障碍或病症进行预防；(ii)抑制所述疾病、障碍或病症，即阻止它的发展；和/或(iii)减轻所述疾病、障碍或病症，即，引起所述疾病、障碍和/或病症的衰退。
在本发明公开内容的一种实施方案中，本发明提供了化合物(I)的晶型。化合物(I)的这种晶型可以用于药物组合物中，所述药物组合物可以任选包括一种或多种其它组分，所述其它组分选自例如赋形剂、载体，以及不同分子结构的其它活性药物成分活性化学实体之一。
基于在实验测量的PXRD图案中的总峰面积(其是由模拟的PXRD图案中所缺少的额外峰引起的)，在一种实施方案中，所述晶型具有小于10％的相均匀性，在另一种实施方案中，所述晶型具有小于5％的相均匀性，在另一种实施方案中，所述晶型具有小于2％的相均匀性。基于在实验测量的PXRD图案中的总峰面积(其是由模拟的PXRD图案中所缺少的额外峰引起的)，在另一种实施方案中，所述晶型具有小于1％的相均匀性。
在一种实施方案中，提供一种组合物，其基本上由化合物(I)的N-2晶型组成。基于组合物中化合物(I)的重量，此实施方案的组合物可以包含至少90重量％的化合物(I)的N-2晶型。其余物质包含其它形式(们)的化合物和/或反应杂质和/或由其制备中导致的工艺杂质。
反应杂质和/或工艺杂质的存在可以通过本领域已知的分析技术进行测定，诸如，例如，色谱法、核磁共振光谱、质谱或红外光谱。
晶体材料的一般制备 晶型可以通过各种方法制备，包括例如从适合的溶剂中进行结晶或重结晶，升华，从熔融物中生长，从另一相固态转化，用超临界流体结晶，以及喷射喷雾。晶型用溶剂混合物进行结晶或重结晶的技术包括，例如，蒸发溶剂，降低溶剂混合物的温度，向该分子和/或盐的过饱和溶剂混合物中加入晶种，对溶剂混合物进行冷冻干燥，以及向溶剂混合物中加入抗溶剂(抗衡溶剂)。可以使用高流通量结晶技术以制备晶型包括多晶型物。药物晶体，包括多晶型物，制备方法，以及药物晶体的表征在Solid-State Chemistry of Drugs，S.R.Byrn，R.R.Pfeiffer，and J.G.Stowell，2nd Edition，SSCI，West Lafayette，Indiana(1999)中进行了讨论。
对于使用溶剂的结晶技术，对溶剂或诸溶剂的选择典型地取决于一种或多种因素，例如所述化合物的溶解度、结晶技术和所述溶剂的蒸气压。可以使用溶剂的组合，例如，所述化合物可以溶解到第一种溶剂中，以得到一种溶液，接着加入一种抗溶剂以降低该化合物在溶液中的溶解度并得到晶体的生成。抗溶剂是一种其中化合物在其中具有低溶解度的溶剂。
在一种制备晶体的方法中，将化合物悬浮和/或搅拌在合适的溶剂中以获得淤浆，然后加热以促进溶解。在此所使用的术语″淤浆″是指在给定温度下的所述化合物的饱和溶液，其还含有额外量的所述化合物以得到一种所述化合物和溶剂的非均匀混合物。
可以向任何结晶混合物中加入晶种以促进结晶。可以使用晶种以控制具体的多晶型物的生长或控制所述晶体产物的粒径分布。因此，所需晶种数量的计算将取决于可得到的晶种的大小和平均产品颗粒的所期望的尺寸，例如如“Programmed Cooling of Batch Crystallizers，”J.W.Mullin and J.Nyvlt，Chemical Engineering Science，1971，26，369-377中所述。一般地，需要小尺寸的晶种以有效地控制批料中晶体的生长。小尺寸的晶种可以通过大晶体的筛选、研磨或微粒化，或通过溶液的微结晶来产生。应该小心的是，晶体的研磨或微粒化不会导致所需晶形结晶度方面的任何改变(即，变为无定形或变为另一种多晶型物)。
可以在真空下过滤经冷却的结晶混合物，将所分离的固体用合适溶剂如冷的重结晶溶剂洗涤，在氮气吹扫下干燥，得到所需的晶型。所分离的固体可通过合适光谱或分析技术进行分析，如固态核磁共振法、差示扫描量热法、X射线粉末衍射法等，以保证形成产物的优选晶型。基于在结晶步骤中最初所用的化合物的重量，所得晶形典型地以大于约70重量％分离收率、优选大于90重量％分离收率的量制备。如果必要的话，所述产物可以进行共研磨或通过网筛以使产物去块。
晶形可以从制备化合物(I)的最后过程的反应介质中直接制得。这例如可以通过在最后方法步骤中使用化合物(I)可以结晶于其中的溶剂或溶剂混合物来实现。另一种可供选择的方式，可以通过蒸馏或溶剂添加技术来获得晶型。使用于此目的适宜溶剂包括，例如，上述非极性溶剂和极性溶剂，包括质子极性溶剂如醇类，和非质子极性溶剂如酮类。
样品中大于一种多晶型物的存在可以通过技术如粉末X-射线衍射(PXRD)或固态核磁共振光谱法(SSNMR)进行测定。例如，当与模拟的PXRD图案相比时，实验测量的PXRD图案中的额外峰的存在可以表明样品中存在大于一种多晶型物。所述模拟的PXRD可以由单晶X射线数据计算。参见Smith，D.K.，“A FORTRAN Program for Calculating X-RayPowder Diffraction Patterns，”Lawrence Radiation Laboratory，Livermore，California，UCRL-7196(April 1963)。
表征 化合物(I)的N-2晶型可以使用各种技术进行表征，所述各种技术的操作对本领域普通技术人员来说是公知的。表征方法的实例包括，但不局限于，单晶X-射线衍射、粉末X-射线衍射(PXRD)、模拟粉末X-射线图案(Yin，S.；Scaringe，R.P.；DiMarco，J.；Galella，M.and Gougoutas，J.Z.，American Pharmaceutical Review，2003，6，2，80)、差示扫描量热法(DSC)、固态13C NMR(Earl，W.L.and Van der Hart，D.L.，J.Magn.Reson.，1982，48，35-54)、拉曼光谱学、红外光谱学、湿度吸着等温线、热解重量分析(TGA)和热台技术。
所述形式可以使用单晶X-射线衍射进行表征和辨别，其基于N-2晶型的单晶的单位晶胞测定。单位晶胞的详细说明提供于Stout&Jensen，X-Ray Structure DeterminationA Practical Guide，Macmillan Co.，NewYork(1968)，第3章中，其在此引入作为参考。另一种可供选择的方式是，晶格内空间关系中原子的独特排列可以根据观察到的分数原子坐标进行表征。表征晶体结构的另一种方式是粉末X射线衍射分析，其中所述衍射曲线与代表纯粉末材料的模拟曲线相比，二者在相同的分析温度下运行，并且试验对象形式的测量作为一系列2θ值的形式来表征。
本领域普通技术人员之一将理解，取决于所使用的测量条件，所获得的X-射线衍射图案可能具有测量误差。特别地，通常已知，X-射线衍射图案中的强度可以随所使用的测量条件而波动。应进一步理解，相对强度也可能随实验条件而改变，因此，不应考虑强度的准确数量级。此外，对于常规X-射线衍射图案，衍射角的测量误差典型地为约5％或更少，对于上述衍射角时，应考虑这样程度的测量误差。因此，可以理解，本发明公开内容中的晶形不局限于所提供的X-射线衍射图案完全等同于在此公开的附图中所述的X-射线衍射图案的那些晶形。提供与附图中所公开的那些基本上相同的X-射线衍射图案、DSC热谱或SSNMR光谱的任何晶形都落入本发明公开内容的范围内。确定X-射线衍射图案的基本相同性的能力在本领域普通技术人员之一的范围内。
实用性 化合物(I)的N-2晶型，单独或与其它化合物相结合，可以用于治疗HCV感染。
本发明的公开内容还提供包含治疗有效量的化合物(I)的N-2晶型和至少一种药学上可接受的载体的组合物。
在这些组合物中，活性成分，即，化合物(I)的N-2晶型，典型地占该组合物重量的0.1重量％至99.9重量％，并且经常占约5至95重量％。在一些情况中，所述制剂的pH值可以用药学上可接受的调节剂(例如碳酸钙和氧化镁)调节，以提高所配制的化合物或其递送形式的稳定性。本发明公开内容的多晶型物的制剂还可以含有用于提高吸收和生物利用度的添加剂。
本发明公开内容的药物组合物可以通过口服、胃肠外或通过植入贮库(reservoir)进行给药。如在此使用的术语肠胃外包括皮下、皮内、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、和损伤区注射或输液技术。
药物组合物可以以无菌可注射制剂的形式，例如，以无菌可注射含水或含油悬浮液的形式。可以根据本领域已知的技术使用合适的分散剂或润湿剂以及悬浮剂配制这种悬浮液。关于这些化合物的制备细节是本领域熟练技术人员已知的。
当口服给药时，本发明公开内容的药物组合物可以以任何口服可接受的剂型给药，所述剂型包括，但不限于，胶囊、片剂和含水混悬液和溶液。在口服应用片剂的情况中，通常使用的载体包括乳糖和玉米淀粉。还可以加入润滑剂如硬脂酸镁。对于以胶囊形式进行的口服给药，有用的载体/稀释剂包括乳糖、高和低分子量聚乙二醇和干玉米淀粉。当含水混悬液口服给药时，所述活性成分与乳化剂和悬浮剂混合。如果需要的话，可以加入某些甜味剂和/或调味剂和/或着色剂。
用于上述组合物的其它适宜载体可以在标准药物教课书中找到，例如在“Remington′s Pharmaceutical Sciences″，19th ed.，Mack PublishingCompany，Easton，Penn.，1995中。本领域技术人员已知所述公开内容的关于药物组合物的适宜递送形式的设计和制备的更多细节。
在用于预防和/或治疗HCV介导的疾病的单一疗法中，本发明公开内容中的化合物的剂量水平典型地在约0.05至约100毫克每千克(″mg/kg″)体重每日，更具体地说，在约0.1至约50mg/kg体重每日。典型地，本发明公开内容中的药物组合物可以每天给药约1次-约3次，或者作为连续输液的形式给药。这样的给药可以作为慢性或急性疗法使用。可以与载体材料混合以制备单一剂型的活性成分的数量将随所治疗的宿主和具体的给药方式而改变。
本领域技术人员将会理解，比上面所述剂量更低或更高的剂量可能是需要的。对于任何具体患者的具体剂量和治疗方案取决于各种因素，包括所使用的具体化合物的活性、患者的年龄、体重、一般健康状态、性别、饮食、给药次数、治疗持续时间、排泄速度、药物联合、感染的严重程度和过程、患者对待感染的态度，以及主治医师的判断。在一种实施方案中，单位剂量制剂是含有本文如上所述的活性成分的日剂量或亚剂量的那些或其合适的部分。一般地，用显著小于所述肽的最佳剂量的小剂量开始治疗。其后，以小幅增加来增加剂量，直到达到在此情况下的最佳效果为止。通常，所述化合物在一般获得抗病毒有效的结果而没有引起任何有害的或有毒的副作用的情况下的浓度水平给药是最理想的。
当本发明公开内容中的组合物包含本发明公开内容中的多晶型物和一种或多种其它治疗剂或预防剂的联合时，所述化合物和其它药剂两者通常都以在单一治疗方案中常规所给予的剂量的约10至100％的剂量水平存在，更优选地以约10至80％的剂量水平存在。可以在给予本发明公开内容中的多晶型物之前、之后或同时给予一种或多种其它的药剂。
当所述多晶型物与药学上可接受的载体一起配制时，所得组合物可以体内给予哺乳动物，例如人，以抑制NS5A或治疗或预防HCV病毒感染。这种治疗还可以使用本发明公开内容中的多晶型物与药剂的联合来实现，所述药剂包括，但不局限于免疫调节剂，例如干扰素类；其它抗病毒药例如利巴韦林、金刚烷胺；NS5A的其它抑制剂；HCV生命周期中的其它靶标的抑制剂例如解旋酶、蛋白酶、聚合酶、金属蛋白酶或内部核糖体进入位点；或其组合。其它药剂可以与本发明公开内容中的多晶型物联合以产生一种单一剂型。或者，这些其它的试剂可以以多剂型的一部分分别给予哺乳动物。
下表1列出了可以与本发明公开内容中的化合物一起给药的一些化合物的说明性例子。在联合疗法中，本发明公开内容中的化合物可以与其它抗-HCV活性化合物或者共同或者单独给药，或者通过将这些化合物混合到一种组合物中。
表1 本发明公开内容中的另一方面提供在患者中通过给予本发明公开内容中的多晶型物来抑制HCV NS5A活性的方法。
在一种实施方案中，这些方法用于在患者中降低HCV NS5A活性。如果所述药物组合物仅包含本发明公开内容中的多晶型物作为活性组分，那么这些方法还可以包含给予所述患者一种选自免疫调节剂、抗病毒药、HCV NS5A抑制剂或HCV生命周期中其它靶标的抑制剂诸如，例如解旋酶、聚合酶、蛋白酶或金属蛋白酶的药剂的步骤。这些其它药剂可以在给予本发明公开内容中的化合物之前、同时或之后给予所述患者。
在另一种实施方案中，这些方法在患者中用于抑制病毒复制。这些方法可以用于治疗或预防HCV疾病。
本发明公开内容中的多晶型物还可以被用作实验室试剂。所述多晶型物可以有助于提供用于设计病毒复制分析的研究工具，动物分析体系的验证和结构生物学研究，以进一步提高对HCV疾病机理的知识。
本发明公开内容中的多晶型物还可以用来治疗或预防物质被病毒污染并因此降低与该物质(例如，血液、组织、手术器械和衣服、实验仪器和衣服、以及血液收集或输液装置和材料)接触的实验室人员或医务人员或患者被病毒感染的风险。
具体实施例方式 下列非限制性实施例用于说明本发明的公开内容。
实施例
化合物2的制备 在装有氮气管线、悬吊的搅拌器和热电偶的1升三颈圆底烧瓶中装入20g(83.9mmol，1当量)1，1′-(联苯-4，4′-二基)二乙酮，200mL CH2Cl2和8.7mL(27.1g，169.3mmol，2.02当量)溴。将所述混合物在氮气中在环境条件下搅拌约20小时。所得淤浆中加入200mL CH2Cl2，通过真空蒸馏浓缩至约150mL。然后，所述淤浆进行溶剂交换，换成THF，至通过真空蒸馏得到200mL的目标体积。将该淤浆在1小时内冷却至20-25℃，在20-25℃下再搅拌另一小时。过滤灰白色结晶固体，用150mLCH2Cl2洗涤。所述产物在真空中在60℃干燥，得到27.4g(69.2mmol，82％)所需产物 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.95-7.85(m，4H)，7.60-7.50(m，4H)，4.26(s，4H)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ191.0，145.1，133.8，129.9，127.9，30.8；IR(KBr，cm-1)3007，2950，1691，1599，1199；分析计算值C16H12Br2O2C，48.52；H，3.05；Br，40.34.实测值C，48.53；H，3.03；Br，40.53.HRMS计算值C16H13Br2O2(M+H；DCI+)394.9282.实测值394.9292.mp224-226℃.
化合物3的制备 向安装有氮气管线、热电偶和悬吊搅拌器的500mL夹套烧瓶中加入20g(50.5mmol，1当量)的化合物2、22.8g(105.9mole，2.10当量)1-(叔丁氧羰基)-L-脯氨酸和200mL乙腈。将所述淤浆冷却至20℃，接着加入18.2mL(13.5g，104.4mmol，2.07当量)DIPEA。将所述淤浆温热至25℃并搅拌3小时。所得澄清有机溶液用3x 100mL 13wt％NaCl水溶液洗涤。所述富含乙腈的溶液通过真空蒸馏将溶剂换成甲苯(目标体积＝215mL)，直到存在小于0.5vol％的乙腈为止。
化合物4的制备 在化合物3的甲苯溶液中加入78g(1.011moles，20当量)乙酸铵并加热到95-100℃。将所述混合物在95-100℃下搅拌15小时。反应完成后，将所述混合物冷却至70-80℃，加入7mL乙酸、40mL正丁醇和80mL 5vol％的乙酸水溶液。将所得双相溶液进行相分离，同时保持温度＞50℃。向所述富集有机相中加入80mL 5vol％乙酸水溶液、30mL乙酸和20mL正丁醇，同时保持温度＞50℃。将所得双相溶液进行相分离，同时保持温度＞50℃，将所述富集有机相再用80mL 5vol％乙酸水溶液洗涤。然后，将富集有机相进行溶剂交换，换成甲苯，通过真空蒸馏得到215mL的目标体积。同时保持温度＞60℃，加入64mL甲醇。将所得淤浆加热至70-75℃并熟化1小时。将所述淤浆在1小时内冷却至20-25℃并在此温度下熟化另一小时。过滤淤浆，滤饼用200mL 10∶3甲苯∶甲醇洗涤。所述产物在真空中在70℃下进行干燥，得到19.8g(31.7mmol，63％)所需产物 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.00-11.00(s，2H)，7.90-7.75(m，4H)，7.75-7.60(m，4H)，7.60-7.30(s，2H)，4.92-4.72(m，2H)，3.65-3.49(m，2H)，3.49-3.28(m，2H)，2.39-2.1(m，2H)，2.10-1.87(m，6H)，1.60-1.33(s，8H)，1.33-1.07(s，10H)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ154.1，153.8，137.5，126.6，125.0，78.9，78.5，55.6，55.0，47.0，46.7，33.7，32.2，28.5，28.2，24.2，23.5；IR(KBr，cm-1)2975，2876，1663，1407，1156，1125；HRMS计算值C36H45N6O4(M+H；ESI+)625.3502.实测值625.3502.mp 190-195℃(分解).
化合物5的制备 向250mL装有氮气管线和悬吊搅拌器的反应器中加入25.0g化合物4(40.01mmol，1当量)，接着加入250mL甲醇和32.85mL(400.1mmol，10当量)6M HCl水溶液。将温度增加到50℃并在50℃搅动5小时。将所得淤浆冷却至20-25℃并在搅拌下保持约18小时。过滤淤浆，得到一种固体，该固体依次用100mL 90％甲醇/水(V/V)和2x 100mL甲醇进行洗涤。所述湿滤饼在真空烘箱中在50℃干燥过夜，得到18.12g(31.8mmol，79.4％)所需产物。
化合物5的重结晶 向250mL装有氮气管线和悬吊搅拌器的反应器中加入17.8g上述化合物5，接着加入72mL甲醇。将所得淤浆在50℃搅拌4小时，冷却至20-25℃并在20-25℃在搅拌下保持1小时。淤浆过滤，得到一种结晶固体，该结晶固体用60mL甲醇洗涤。所得湿滤饼在真空烘箱中在50℃干燥4天，得到14.7g(25.7mmol，82.6％)纯化产物 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.5-10.25(br，2H)，10.1-9.75(br，2H)，8.19(s，2H)，7.05(d，J＝8.4，4H)，7.92(d，J＝8.5，4H)，5.06(m，2H)，3.5-3.35(m，4H)，2.6-2.3(m，4H)，2.25-2.15(m，2H)，2.18-1.96(m，2H)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ156.6，142.5，139.3，128.1，127.5，126.1，116.9，53.2，45.8，29.8，24.3；IR(KBr，cm-1)3429，2627，1636，1567，1493，1428，1028.分析计算值C26H32N6Cl4；C，54.75；H，5.65；Cl，24.86；调节至1.9％水C，53.71；H，5.76；N，14.46；Cl，24.39.实测值C，53.74；H，5.72；N，14.50；Cl，24.49；KF＝1.9.mp 240℃(分解).
化合物(I)的制备 在装备有氮气管线和悬吊搅拌器的1升夹套烧瓶中依次加入100mL乙腈、13.69g(89.4mmol，2.5当量)羟基苯并三唑水合物、15.07g(86mmol，2.4当量)N-(甲氧羰基)-L-缬氨酸、16.46g(85.9mmol，2.4当量)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐和另外100mL的乙腈。将所得溶液在20℃搅拌1小时，加入20.4g(35.8mmol，1当量)纯化的化合物5。将所述淤浆冷却至约0℃，在30分钟内加入18.47g(142.9mmol，4当量)二异丙基乙胺，同时保持温度低于10℃。在3小时内，将所述溶液缓慢地加热到15℃并在15℃保持12小时。向所得溶液中加入120mL13wt％NaCl水溶液并加热到50℃达1小时。冷却至20℃后，加入100mL乙酸异丙酯。该双相溶液通过0.45μm过滤器过滤，将所述混合物分离。将富集有机相用2x 240mL 0.5N含13wt％NaCl的NaOH溶液洗涤，接着用120mL 13wt％NaCl水溶液洗涤。然后，所述混合物通过真空蒸馏将溶剂换成乙酸异丙酯，得到400mL的目标体积。将所得雾状溶液冷却至20℃并通过0.45μm过滤器过滤。然后，所述透明溶液通过真空蒸馏将溶剂换成乙醇，得到140mL的目标体积。在保持50℃的温度下，加入66.4mL(82.3mmol，2.3当量)在乙醇中的1.24M HCl。然后，所述混合物中加入33mg(0.04mmol，0.001当量)的化合物(I)晶种(参见下面制备)，所得淤浆在50℃搅拌3小时。将所述混合物在1小时内冷却至20℃并在此温度下再熟化22小时。将所述淤浆过滤，湿滤饼用100mL 2∶1丙酮∶乙醇洗涤。所述固体在真空烘箱中在70℃干燥，得到22.15g(27.3mmol，76.3％)所需产物。
化合物(I)的碳处理和重结晶 化合物(I)的溶液通过将3.17g上述化合物(I)溶解在22mL甲醇中制得。该溶液在～5psig以～58mL/min的流速通过47mm Cuno Zeta
53SP过滤器。该碳过滤器用32mL甲醇漂洗。将该溶液通过真空蒸馏浓缩至16mL。在保持温度40-50℃的同时，加入15.9mL丙酮和5mg化合物(I)的晶种(参见下面的步骤)。然后，在30分钟内，向所得淤浆中加入32mL丙酮。将所述淤浆在50℃保持2小时，在约1小时内冷却至20℃并在20℃保持约20小时。将所述固体过滤，用16mL 2∶1丙酮∶甲醇洗涤，在真空烘箱中在60℃干燥，得到2.14g(67.5％)提纯的化合物(I) 1H NMR(400MHz，DMSO-d6，80℃)8.02(d，J＝8.34Hz，4H)，7.97(s，2H)，7.86(d，J＝8.34Hz，4H)，6.75(s，2H)，5.27(t，J＝6.44Hz，2H)，4.17(t，J＝6.95Hz，2H)，3.97-4.11(m，2H)，3.74-3.90(m，2H)，3.57(s，6H)，2.32-2.46(m，2H)，2.09-2.31(m，6H)，1.91-2.07(m，2H)，0.88(d，J＝6.57Hz，6H)，0.79(d，J＝6.32Hz，6H)；13C NMR(75MHz，DMSO-d6)δ170.9，156.9，149.3，139.1，131.7，127.1，126.5，125.9，115.0，57.9，52.8，51.5，47.2，31.1，28.9，24.9，19.6，17.7；IR(净品，cm-1)3385，2971，2873，2669，1731，1650.分析计算值C40H52N8O6Cl2C，59.18；H，6.45；N，13.80；Cl，8.73.实测值C，59.98；H，6.80；N，13.68；Cl，8.77.mp 267℃(分解). 化合物(I)的晶种的制备 在250mL圆底烧瓶中装入6.0g(10.5mmol，1当量)化合物5、3.87g(22.1mmol，2.1当量)N-(甲氧羰基)-L-缬氨酸、4.45g(23.2mmol，2.2当量)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐、0.289g(2.14mmol，0.2当量)1-羟基苯并三唑和30mL乙腈。然后，向所得淤浆中加入7.33mL(42.03mmol，4当量)二异丙基乙胺，在24-30℃下搅拌约18小时。向混合物中加入6mL水，加热到50℃达约5小时。将混合物冷却，向其中加入32mL乙酸乙酯和30mL水。分离层，富集有机层用30mL 10wt％NaHCO3水溶液、30mL水和20mL 10wt％NaCl水溶液洗涤。然后，将富集有机层在MgSO4中干燥，过滤，浓缩，得到一种残余物。然后，粗物质通过快速色谱法提纯(硅胶，0-10％甲醇在二氯甲烷中)，得到化合物(I)的游离碱。
在20℃下，将化合物(I)的游离碱(0.03g)溶于1mL异丙醇中。加入无水HCl(70μL，溶于乙醇中，约1.25M浓度)，搅拌反应混合物。向所述溶液中加入甲基叔丁基醚(1mL)，所得淤浆在40℃至50℃剧烈搅拌12小时。将结晶淤浆冷却至20℃并过滤。湿滤饼在20℃风干。获得白色结晶固体(化合物(I)的N-2晶型)。
N-2晶型使用一种或多种如下所述的试验方法进行分析。
1单晶X-射线测定 在室温下，使用装备有CuKα辐射的旋转阳极发生器
的Bruker APEX2 Kappa CCD衍射仪来收集衍射数据。使用APEX2软件包/程序组(APEX2数据收集和处理用户界面APEX2用户手册，v1.27；BRUKER AXS，INc.，5465 East Cheryl Parkway，Madison，WI 53711USA)进行所测强度数据的索引和加工。使用完全的数据集确定最终的单位晶胞参数。
通过直接法求解出结构，使用SHELXTL软件包(Sheldrick，GM.1997，SHELXTL.结构测定程序。第5.10版，Bruker AXS，Madison，Wisconsin，USA)通过全矩阵最小平方技术进行精制。在精制中最小化的函数是∑w(|Fo|-|Fc|)2。R定义为∑||Fo|-|Fc||/∑|Fo|而Rw＝[∑w(|Fo|-|Fc|)2/∑w|Fo|2]1/2，其中w是基于所观察的强度中的误差的合适加权函数。在所有精制阶段都考察差异(Difference)傅里叶图谱。所有非氢原子用各向异性热位移参数进行精制。与氢键结合的氢原子位于最终的差异傅里叶图谱中，而其它氢原子的位置由具有标准键长和键角的理想化几何形状计算。它们被赋值各向同性温度因子并且包括于具有固定参数的结构因数计算中。
N-2晶型的晶体数据表示在表2中。分数原子坐标列于表3中。本领域普通技术人员之一应该理解，坐标中的稍许改变是可能的并且被认为在本发明公开内容的范围内。
表2.N-2晶型的晶体数据 温度室温 波长
晶系，空间群 三斜晶系，P1 单位晶胞尺寸
α＝74.132(2)°
β＝84.132(2)°
γ＝70.646(2)° 体积
Z，计算的密度 1，1.257Mg/m3 表3.原子坐标 2.粉末X-射线衍射 将约200mg样品填充到Philips粉末X-射线衍射(PXRD)样品座中。将所述样品转移到Philips MPD装置中(45KV，40mA，Cu Kα)。在室温下在2至32 2θ范围内(连续扫描方式，扫描速率0.03度/秒，自动扩散(autodivergence)和反散射狭缝，接收狭缝0.2mm，取样旋转器ON)收集数据。
PXRD图案和由单晶数据计算得到的模拟图案的结果表示在图1中。
表4列出了描述化合物(I)的N-2晶型的特征PXRD峰。
表4.在室温下的特征衍射峰位置(度2θ±0.1)，基于用具有旋转毛细管的衍射仪(CuKα)收集的高质量图案，其中2θ用NIST其它适宜标准品进行校准。
3.差示扫描量热法 差示扫描量热法(DSC)实验在TA仪TMQ2000，Q1000或2920型中进行。所述样品(约2-6mg)在铝盘中进行称量并精确地记录至百分之一毫克，且转移到DSC中。用50mL/min的氮气吹扫仪器。在室温至300℃之间以10℃/min加热速率收集数据。该图用峰尖朝下的吸热峰制成。
结果表示在图2中。
4.固态NMR(SSNMR) 所有固态C-13 NMR测量用Bruker DSX-400，400MHz核磁共振光谱仪进行。在约12kHz下，使用高功率质子去耦和TPPM脉冲序列以及带魔角旋转(MAS)的斜坡振幅交叉极化(RAMP-CP)，获得高分辨率光谱(A.E.Bennett等.J.Chem.Phys.1995，103，6951)。(G.Metz，X.Wu，andS.O.Smith，J.Magn.Reson.A.，1994，110，219-227)。在每次试验中，将约70mg样品装入筒罐样式的氧化锆滚筒中。化学位移(δ)以设定为38.56ppm的高频共振的外部金刚烷为参照物(W.L.Earl和D.L.VanderHart，J.Magn.Reson.，1982，48，35-54)。
SSNMR光谱表示在图3中。
表5列出了描述化合物(I)的N-2晶型的特征SSNMR峰。
表5化合物(I)的N-2晶型的SSNMR峰位置。
峰位置δ(以ppm表示)是相对于TMS标度。
权利要求
1.一种下式化合物的N-2晶型
2.一种下式化合物的N-2晶型，
其特征在于，其具有下列单位晶胞参数
晶胞尺寸
α＝74.132度
β＝84.132度
γ＝70.646度
空间群P1
分子/单位晶胞1
其中所述晶型的测量是在约20℃至约25℃的温度下进行的。
3.一种下式化合物的N-2晶型
其特征在于，在所述单位晶胞内的分数原子坐标列于表3中。
4.一种下式化合物的N-2晶型
其在约20℃至约25℃之间的温度，在粉末X-射线衍射图案中具有如下特征峰位于10.3±0.1，12.4±0.1，12.8±0.1，13.3±0.1，13.6±0.1，15.5±0.1，20.3±0.1，21.2±0.1，22.4±0.1，22.7±0.1和23.7±0.1的2θ之值处。
5.一种下式化合物的N-2晶型，
其特征在于，其具有下列一个或多个
a)具有基本上等于下列的参数的单位晶胞
晶胞尺寸
α＝74.132度
β＝84.132度
γ＝70.646度
空间群P1
分子/单位晶胞1
其中所述晶型的测量是在约20℃至约25℃的温度下进行的；
b)其在约20℃至约25℃之间的温度，在粉末X-射线衍射图案中具有下列特征峰位于10.3±0.1，12.4±0.1，12.8±0.1，13.3±0.1，13.6±0.1，15.5±0.1，20.3±0.1，21.2±0.1，22.4±0.1，22.7±0.1和23.7±0.1的2θ的值处；和/或
c)具有典型地在225-245℃范围内开始出现吸热分解的熔融体。
6.一种下式化合物的基本上纯的N-2晶型，
7.权利要求6的晶型，其中所述N-2晶型具有至少95重量％的纯度。
8.权利要求6的晶型，其中所述N-2晶型具有至少99重量％的纯度。
9.一种下式化合物的基本上纯的N-2晶型
其在约20℃至约25℃之间的温度，在粉末X-射线衍射图案中具有下列特征峰位于10.3±0.1，12.4±0.1，12.8±0.1，13.3±0.1，13.6±0.1，15.5±0.1，20.3±0.1，21.2±0.1，22.4±0.1，22.7±0.1和23.7±0.1的2θ的值处。
10.一种药物组合物，其包含下式化合物的N-2晶型，
和药学上可接受的载体或稀释剂。
11.一种药物组合物，其包含下式化合物的基本上纯的N-2晶型，
和药学上可接受的载体或稀释剂。
12.权利要求11的药物组合物，其中所述N-2晶型具有至少95重量％的纯度。
13.权利要求11的药物组合物，其中所述N-2晶型具有至少99重量％的纯度。
14一种药物组合物，其包含下式化合物的N-2晶型，
以及与其结合的一种或两种具有抗-HCV活性的其它化合物。
15.权利要求14的药物组合物，其中所述N-2晶型具有至少90重量％的纯度。
16.权利要求14的药物组合物，其中所述N-2晶型具有至少95重量％的纯度。
17.权利要求14的药物组合物，其中所述N-2晶型具有至少99重量％的纯度。
18.权利要求14的组合物，其中至少一种具有抗-HCV活性的其它化合物是干扰素或利巴韦林。
19.权利要求18的组合物，其中所述干扰素选自干扰素α2B、聚乙二醇化的干扰素α、合意干扰素、干扰素α2A和类淋巴母细胞干扰素tau。
20.权利要求14的组合物，其中至少一种所述其它化合物选自白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、增强1型辅助性T细胞应答的发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特、利巴韦林、肌苷5′-单磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚烷乙胺。
21.一种在哺乳动物中治疗HCV感染的方法，该方法包含对哺乳动物给药治疗有效量的下式化合物的N-2晶型
22.权利要求21的方法，其中所述N-2晶型具有至少90重量％的纯度。
23.权利要求21的方法，其中所述N-2晶型具有至少95重量％的纯度。
24.权利要求21的方法，其中所述N-2晶型具有至少99重量％的纯度。
25.权利要求21的方法，其中所述的哺乳动物是人类。
全文摘要
本发明一般性地涉及((1S)-1-(((2S)-2-(5-(4’-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-4-联苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯二盐酸盐的晶型。本发明的公开内容一般性地还涉及包括晶型的药物组合物，以及使用该晶型治疗丙型肝炎的方法以及获得这种晶型的方法。
文档编号C07D403/12GK101778840SQ200880102478
公开日2010年7月14日 申请日期2008年7月31日 优先权日2007年8月8日
发明者金松景, 高齐, 杨福康 申请人:百时美施贵宝公司