用于扩增和检测呼吸道病毒的核酸序列的制作方法

专利名称：：用于扩增和检测呼吸道病毒的核酸序列的制作方法
技术领域：
：本发明涉及呼吸道病毒的检测方法，以及用于它们的特异性检测的化验、试剂和试齐U盒。
背景技术：
：病毒性呼吸道感染(VRTIs)的经济和健康负担极其严重。在美国，呼吸道感染引起接近一半的因传染性疾病而导致的死亡(Wei和Norwood，2001，Obstet.Gynecol.Clin.NorthAm.28:283_304)，流感感染是第六大致死因素(Maher等，2006，Am.J.Infect.Control34:E107)。每年，大约200，000美国人因流感和与流感相关的并发症而入院，且多于36，000人死亡。在过去的100年中，这种病毒在每年的流行病和偶尔的大爆发中已造成损失。事实上，仅在1918年的大爆发中，流感造成了超过2千万人死亡。更快速的诊断方法将给临床医生提供关键信息，可能有助于提高对与呼吸道病毒相关的感染的控制和可能有利于削减医疗卫生费用。过去几十年，基于病毒基因的检测取得了较大进展。然而，一个与基于基因的化验相关的难题在于，遗传材料在不同株系或种类之间的可变性。同样地，为进行有效的诊断，适当的化验要求检测多种病原体的存在，或者甚至是几种病原体株系的存在。解决这些难题的一种方法是，设计用于在相同的化验中进行多个病原体的特异检测的化验，该化验基于通过使用例如聚合酶链式反应(PCR)对病原体遗传材料的扩增。然而，这种类型的化验受到有关缺乏特异性的缺点的影响，即引物和/或探针与来自非期望株系或病原体的遗传材料的交叉反应，以及受到有关缺乏灵敏度和可重复性的缺点的影响。事实上，PCR引物的多重化很难进行，因为在同一容器内同时存在几对引物增加了错配和形成非特异性扩增产物如引物二聚体的可能性。最近已评述了获得呈现特异性、灵敏度和一致性基本特征的探针组组合所需的条件(Loy和Bodrossy，2006，Clin.Chim.Acta263:106-119)。根据他们的分析，高度特异性识别、高效结合和一致的热力学行为的理想特性代表了在实践中很难实现的相矛盾的目标。他们建议使用仔细的设计原则，但是又承认已知这些原则的可预测价值对于固相载体杂交是不可靠的且需要对探针组合进行实验验证。他们建议的其他方法是在探针组合策略中增加冗余。然而，增加更多的探针提高了费用和复杂性，而限制了小型化和平行化能力。Briese等开发出使用PCR扩增与质谱技术的结合可能检测22种VRTIs的化验(Briese等，2005，Emerg.Infect.Dis.11:310_313)。使用这种技术达到的灵敏度是靶基因的500-1000个RNA拷贝。其他小组开发了TaqMan多重PCR化验，用于同时检测7、9或12种呼吸道病毒，全部都包括在本发明中(Gr5ndahl等，1999，J.Clin.Microbiol.371-7；Syrmis等，2004，J.MoI.Diagn.6125-131；Templeton等，2004，J.Clin.Microb.421564-1569；Gunson等，2005，J.Clin.Virol.33:341_344；Bellau-Pujol等，2005，J.Virol.Methods126:53_63)。两项专利已公开了通过多重PCR检测呼吸道病毒。对于这两项发明，目标呼吸道病毒的特异性检测是使用酶杂交化验(美国专利号6，015，664)或微阵列(美国专利号6，881，835)进行的。我们对以上提及文献描述的引物序列的分析表明，由于它们不可能检测目标种类的全部病毒株系，普遍性不完整。因此有对改进的试剂和化验的需求，该试剂和化验使得特异和灵敏地检测大部分临床重要的呼吸道病毒病原体。本发明设法满足这些和其他的需求。发明概述本发明涉及呼吸道病毒的检测方法，以及用于特异的检测临床上相关RNA和DNA呼吸道病毒的试剂、化验和试剂盒。更具体地，本发明提供了用于特异和灵敏地检测15种临床上最重要的呼吸道病毒病原体的方法、试剂、化验和试剂盒，所述15种临床上最重要的呼吸道病毒病原体包括(i)A型和B型流感病毒，(ii)人类呼吸道合胞病毒(RSV)，(iii)人类偏肺病毒(hMPV)，(iv)人类肠道病毒和鼻病毒(全部已知的血清型)，(ν)副流感病毒1型、2型、3型和4型，(vi)冠状病毒NL、229E、0C43和SARS-CoV(与急性重症呼吸综合征(SARS)相关)，以及(vii)与VRTIs相关的全部腺病毒血清型。检测的方法可以通过用病毒特异性寡核苷酸扩增遗传材料、通过用病毒特异性寡核苷酸与遗传材料杂交或者通过扩增和杂交的结合来实现。本发明的重要优势在于，用于各种呼吸道病毒种类的扩增步骤可以在相似或一致的扩增条件下进行。同样地，各种呼吸道病毒种类的扩增可以同时进行。根据本发明的一种实施方案，呼吸道病毒的检测可以平行进行。本发明的另一个重要优势在于，杂交也可以在相似或一致的杂交条件下进行。此外，遗传材料的检测也可以在相似或一致的检测条件下进行。因此，本发明一方面涉及用于检测和/或鉴别呼吸道病毒的方法，该方法可以包括在杂交、扩增和/或检测合适的条件下，将包含或被怀疑包含源自呼吸道病毒的遗传材料的样品与寡核苷酸或寡核苷酸组合物相接触的步骤。所述方法、试剂、化验和/或试剂盒可以基于特异性检测(i)A型流感病毒的基质基因，(ii)B型流感病毒的基质基因，(iii)人类呼吸道合胞病毒的核衣壳基因，(iv)人类偏肺病毒的核衣壳基因，(ν)人类肠道病毒的5’-非编码区，(vi)鼻病毒(全部已知的血清型)的5’-非编码区，(vii)各副流感病毒1型、2型、3型和4型的融合基因，(viii)冠状病毒0C43的基质基因，(ix)各种冠状病毒NL、229E和SARS-CoV的聚合酶基因，以及(χ)与VRTIs相关的腺病毒血清型的六邻体区。由于可以使用相似的扩增条件，本发明的一个优势在于，几种呼吸道病毒种类的扩增可以在相同的小瓶或容器内进行。例如，人类肠道病毒、鼻病毒、人类呼吸道合胞病毒和人类偏肺病毒的扩增可以在相同的小瓶或容器内进行。A型流感、副流感1型、副流感2型和副流感3型的扩增可以在相同的小瓶或容器内进行。冠状病毒SARS-CoV、229E、NL和0C43的扩增也可以在相同的小瓶或容器内进行。腺病毒、B型流感和副流感4型的扩增也可以在相同的小瓶或容器内进行。当然，如果需要，呼吸道病毒的检测可以分开进行(即在分开的或不同的试管内和/或分开的实验中)。本发明一方面涉及能够与呼吸道病毒的遗传材料特异性结合的试剂，包括引物、探针、引物组合物、探针组合物或者引物和探针的组合物。就申请人的全部所知，在此出现的引物和/或探针的组合物以前并未描述过。实际上，在以上提及的研究中提出的其它化验，既不是以检测相同靶基因为目标，也不使用不同扩增引物/探针。相信本发明不仅可以用于检测已知的靶病毒种类，还可以用于检测和鉴别属于目标属的仍然未知的种类。发明详述本领域内已知，遗传材料可以通过使用为它们的特异性检测而最优设计的引物或探针进行扩增和/或杂交来检测。涉及扩增来自病毒的遗传材料的挑战在于，一些病原体的遗传材料具有单链或双链RNA、单链或双链DNA、甚至是RNA/DNA嵌合体的形式。为设计特异性的引物和/或探针，应当记住试图检测的各病原体的遗传材料的特征。然而，本领域内熟知，通过反转录(RT)酶可将RNA转化成DNA。可供选择地，例如当合适的启动子(如RNA聚合酶启动子)和/或其他调控元件与其操作连接时，可将DNA转化成RNA。因此，用于实施本发明的核酸模板(靶分子)可以是DNA(如基因组片段、合成片段、限制性片段等)或RNA，无论是单链或双链。核酸靶分子(来自呼吸道病毒的基因组、基因或基因片段(如限制性片段))可以为纯化、未纯化的形式或者分离的形式。核酸靶分子可以被包含于样品内，所述样品包括例如从患者处获得的生物标本、从环境(土壤、物体等)获得的样品、微生物培养物或组织培养物、细胞系、制备的纯或基本上纯的病原体或病原体混合物等。根据本发明，样品可以从具有或被怀疑具有呼吸道感染症状的患者处获得。寡核苷酸引物和探针设计和合成由于对寡核苷酸引物和/或探针的杂交行为缺少了解，该行为受在固相载体上的固定、立体位阻、混合靶分子解离等影响，获得特异和灵敏的探针序列是挑战，需要仔细解决。例如，非平衡热解离模型似乎不能有效预测在哪种严格的条件下，哪一条引物或探针序列会理想地、特异地与其互补序列相互作用(Pozhitkov等，2007Nucl.AcidsRes.35e70)。在本研究中，从公共数据库的序列数据中已经形成了对于靶呼吸道病毒以及其他相关呼吸道病毒种类的多重序列比对，包括来自动物来源的病毒序列，以及来自由申请人产生的新序列数据，该新序列数据是通过对收集自具有VRTIs患者的临床标本中所选择的靶基因进行测序而产生的(表1)。应用于本发明引物和探针选择的公共序列的登录号列于表1中。形成的比对的肉眼观察使得在各靶病毒种类内选择保守序列，同时使得区分来自其他病毒种类的序列，尤其是紧密相关的那些。该策略致使选择出用于所选靶基因(基质、核衣壳、融合、六邻体、聚合酶以及5’-非编码区)的总共2145条序列，从而产生用于各靶病毒的特异性PCR/RT-PCR引物和探针。作为设计策略的一部分，使用商业程序(即GeneticsComputerGroup(GCG)程序，引物分析软件Oligo6.22)，通过计算机分析来评估全部寡核苷酸(用于杂交的探针和用于通过PCR和反转录PCR(RT-PCR)进行DNA扩增的引物)用于杂交或PCR/RT-PCR扩增的适合度。还在它们合成之前，通过证实不存在不期望的特征，如一条核苷酸的长延伸和3’端G或C残基的高比例，评估PCR引物对的适合度。因此，本发明的引物和探针使得特异地检测属于以下的各靶病毒种类或属的代表性株系(i)A型和B型流感病毒，(ii)人类呼吸道合胞病毒(RSV)，(iii)人类偏肺病毒(hMPV)，(iv)人类肠道病毒和鼻病毒(全部已知的血清型)，(ν)副流感病毒1型、2型、3型和4型，(vi)冠状病毒NL、229E、0C43和SARS-CoV，以及(vii)与VRTIs相关的腺病毒血清型(全部7种血清型)。测试了引物和探针的组合，并选择出最有效的组合。虽然来自所选择的靶基因的序列可以从公共数据库上获得，而且在有些情况下，已被用于开发用于检测这些病毒的基于核酸的化验，但是本发明的引物和/或探针序列的组合表现出优于文献中的独特优势，这是因为它们被设计用于检测各靶病毒种类的大部分株系，而不仅是检测一种或一些株系。因此，由于本发明的试剂和化验可以使得同时检测和/或鉴别大部分已知的呼吸道病毒种类，包括世界上主要的传染性株系，它们可以改进目前用于呼吸道病毒诊断的基于核酸的化验。更具体地，本发明提供了用于呼吸道病毒检测的试剂、化验和试剂盒，使用(i)A型流感病毒的基质基因，(ii)B型流感病毒的基质基因，(iii)人类呼吸道合胞病毒的核衣壳基因，(iv)人类偏肺病毒的核衣壳基因，(ν)人类肠道病毒的5’-非编码区，(vi)鼻病毒(全部已知的血清型)的5’-非编码区，(vii)各副流感病毒1型、2型、3型和4型的融合基因，(viii)冠状病毒0C43的基质基因，(ix)各冠状病毒NL、229E和SARS-CoV的聚合酶基因，以及(χ)与VRTIs相关的腺病毒血清型的六邻体区。引物或探针的寡核苷酸序列可以源自双链DNA的每一条链。在一些情况下，所述引物或探针可以包括任何一种碱基A、G、C或T，或者类似物，且它们可以在一个或更多所选择的核苷酸位点简并，以保证从靶病毒种类的全部株系扩增的普遍性。简并引物是在序列的错配位点具有大量选择的引物组，以允许退火到各种相关序列的扩增。例如，以下引物AIATTAGTGCTTTTAAAGCC可以是引物A￡ATTAGTGCTTTTAAAGCC禾口A1ATTAGTGCTTTTAAAGCC的等摩尔混合。简并明显降低了引物的特异性，意味着错配几率更高，和背景噪音增加；同样，增加简并意味着单个引物浓度降低；因而，最好避免高于512倍的简并。因此，为避免影响化验的灵敏度和/或特异性，应当谨慎设计简并引物。肌苷是一种经修饰的碱基，其能够与任何一种常规碱基(A、T、C或G)结合。为了使寡核苷酸中的简并数量最小化而使用肌苷。国际生物化学联合会(InternationalUnionofBiochemistry,IUB)的代码IUB代码A腺嘌呤，C胞嘧啶，G鸟嘌呤，T胸腺嘧啶，U尿嘧啶，I肌苷碱基I代码A或CMA或GRA或TWC或GS碱基I代码c或τYG或TKUili^几种引物被设计用于有效地扩增在此描述的病原体。应当理解地是，各寡核苷酸分别具有它们自己的用途，因为除了在此描述的目的，可能会将此种寡核苷酸用于其他目的。例如，本发明的引物可以与其它引物组合用于更长或更短的扩增子的扩增。本发明的探针在检测工具如微阵列中，可以与其他探针组合。本发明以能够特异性扩增期望呼吸道病毒种类的引物为特征。本发明一方面涉及用于本发明方法和试剂盒的单个引物、引物对或者引物或引物对组合物。以下是引物、引物对和引物组合物的示例性实施方案。本发明在一方面涉及10至50个核苷酸长的寡核苷酸，该寡核苷酸能够与基因特异性结合，所述基因选自(i)A型流感病毒的基质基因，(ii)B型流感病毒的基质基因，(iii)人类呼吸道合胞病毒的核衣壳基因，(iv)人类偏肺病毒的核衣壳基因，(ν)人类肠道病毒的5’-非编码区，(vi)鼻病毒的5’-非编码区，(vii)副流感病毒1型的融合基因，(viii)副流感病毒2型的融合基因，(ix)副流感病毒3型的融合基因，(χ)副流感病毒4型的融合基因，(xi)冠状病毒0C43的基质基因，(xii)冠状病毒NL的聚合酶基因，(xiii)冠状病毒229E的聚合酶基因，(xiv)冠状病毒SARS-CoV的聚合酶基因，以及(xv)与呼吸道感染相关的腺病毒血清型的六邻体区。根据本发明，所述寡核苷酸优选与一种呼吸道病毒种类的基因结合，而不是与其他呼吸道病毒种类的基因结合。同样根据本发明，所述寡核苷酸能够与一种呼吸道病毒种类的基因特异性结合，而不是与其他呼吸道病毒种类的基因特异性结合。单个引物的示例性实施方案包括以下。本发明在第一个实施方案中，提供了可以包含在SEQIDNO.78的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。在另一个实施方案中，本发明提供了可以包含在SEQIDNO.:79的5’端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。在又一个实施方案中，本发明提供了可以包含在SEQIDNO.80的5’端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。在还一个实施方案中，本发明提供了可以包含在SEQIDNO.:81的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。在另外的实施方案中，本发明提供了可以包含在SEQIDNO.82的5’端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。在又一个另外的实施方案中，本发明提供了可以包含在SEQIDNO.:83的5’端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。在另一个示例性实施方案中，本发明提供了可以包含在SEQIDNO.:84的5’端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸。在又一个示例性实施方案中，本发明提供了可以包含在SEQIDNO.:85的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。在还一个实施方案中，本发明提供了可以包含在SEQIDNO.86的5’端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。在另外的实施方案中，本发明提供了可以包含在SEQIDNO.:87的5’端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。在又一个实施方案中，本发明提供了可以包含在SEQIDNO.88的5’端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。本发明的另外的实施方案涉及可以包含在SEQIDNO.89的5’端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。本发明的又一个另外的示例性实施方案提供了可以包含在SEQIDNO.:90的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。本发明的另一个实施方案涉及可以包含在SEQIDN0.91的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。本发明的另一个实施方案涉及可以包含在SEQIDN0.92的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。本发明的还一个实施方案涉及可以包含在SEQIDN0.93的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。本发明另外的实施方案涉及可以包含在SEQIDN0.94的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。本发明又一个另外的实施方案涉及可以包含在SEQIDN0.95的5’端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。在进一步的示例性实施方案中，本发明提供了可以包含在SEQIDNO.:96的5’端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。在更进一步的示例性实施方案中，本发明提供了可以包含在SEQIDN0.:97的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。在另外的示例性实施方案中，本发明提供了可以包含在SEQIDNO.:98的5’端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。在又一个另外的示例性实施方案中，本发明提供了可以包含在SEQIDNO.:99的5’端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。本发明的另一个实施方案涉及可以包含在SEQIDN0.100的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。本发明的又一个实施方案涉及可以包含在SEQIDNO.:101的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。本发明进一步的实施方案涉及可以包含在SEQIDN0.102的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。本发明更进一步的实施方案涉及可以包含在SEQIDNO.:103的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。本发明还涉及可以包含至少两种以上描述的核酸的寡核苷酸的混合物或组合物。为了实施本发明的方法，选择了几种引物组。各引物组可以包含至少一种能够特异性扩增遗传材料的引物。因此，被检测的样品可以在适合核酸扩增的条件下暴露于引物组。根据本发明的实施方案，引物组可以能够在相似的扩增条件下扩增病毒的遗传材料。引物对的示例性实施方案包括以下。包括可以包含在SEQIDNO.78的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDNO.79的5’端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸的引物对。在另一个实施方案中，本发明涉及引物对，该引物对包括可以包含在SEQIDNO.80的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDNO.81的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。在另外的实施方案中，本发明涉及引物对，该引物对包括可以包含在SEQIDNO.82的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDN0.83的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。根据本发明，人类肠道病毒、鼻病毒、人类呼吸道合胞病毒和人类偏肺病毒可以通过以上限定的引物对组合物或混合物扩增。在又一个另外的示例性实施方案中，本发明涉及引物对，该引物对包括可以包含在SEQIDNO.:84的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDN0.85的5’端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。在另一个实施方案中，本发明涉及引物对，该引物对包括可以包含在SEQIDN0.86的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDN0.87的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。在又一个实施方案中，本发明涉及引物对，该引物对包括可以包含在SEQIDN0.88的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDN0.89的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。在进一步的示例性实施方案中，本发明涉及引物对，该引物对包括可以包含在SEQIDNO.:90的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDNO.:91的5’端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。根据本发明，A型流感、副流感1型、副流感2型、副流感3型可以通过以上限定的弓丨物对组合物或混合物扩增。在更进一步的实施方案中，本发明涉及引物对，该引物对包括可以包含在SEQIDN0.92的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDN0.93的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。在另一个示例性实施方案中，本发明涉及引物对，该引物对包括可以包含在SEQIDN0.94的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDN0.95的5’端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。在又一个实施方案中，本发明涉及引物对，该引物对包括可以包含在SEQIDN0.96的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDN0.97的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。根据本发明，冠状病毒SARS_CoV、229E、NL和0C43可以通过以上限定的引物对组合物或混合物扩增。在另一个示例性实施方案中，本发明涉及引物对，该引物对包括可以包含在SEQIDNO.98的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDNO.99的5’端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。在另外的示例性实施方案中，本发明涉及引物对，该引物对包括可以包含在SEQIDNO.:100的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDNO.101的5’端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。在进一步的示例性实施方案中，本发明涉及引物对，该引物对包括可以包含在SEQIDNO.:102的5，端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸和可以包含在SEQIDN0.103的5’端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸。根据本发明，腺病毒、B型流感和副流感4型可以通过以上限定的引物对组合物或混合物扩增。所选择的引物对和探针的更具体的实施方案列于表2中。更具体地根据这些引物对的特异性、灵敏性和它们扩增各目标种或属内所有或大部分成员的能力而被选择。公共数据库分析确实表明，使用表2中描述的引物对扩增的核酸序列仅对15种靶病毒中的一种具有特异性。本发明还以从使用以上描述的PCR引物对扩增的区域选择的杂交探针为特征，即在PCR扩增子内结合。本发明另一方面涉及可以包含单个的探针和探针组合物的寡核苷酸，其可以用于在此描述的方法和试剂盒。为实施本发明，被测样品可以在适合于杂交的条件下暴露于探针。根据本发明的实施方案，所述探针可以能够在相似的杂交条件下与遗传材料杂交。本发明包括了可以包含在表2中列出的任何一种探针或者其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。在此应当理解的是，列举的表达方式将被单独或共同地应用于各核酸序列。探针的示例性实施方案包括以下可以包含在SEQIDN0.106或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.107或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.108或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.109或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.110或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.111或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.112或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.113或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.114或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.115或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.116或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.117或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.118或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.119或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.120或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.194或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.195或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.196或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.121或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.122或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.123或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.124或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.125或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.126或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.127或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.197或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.198或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷。酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.199或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.200或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.128或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.129或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.130或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.131或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.132或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.133或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。单个探针的其他具体实施方案涉及可以包含在表2中列出且确定用于1重的任意一种核酸的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的单个核酸。单个探针的其他示例性实施方案包括以下可以包含在SEQIDN0.134或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.135或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.136或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.137或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.138或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.139或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.140或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.141或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.142或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.143或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.144或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.145或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.146或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.147或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.148或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.149或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.150或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.151或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.152或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.201或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.202或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.203或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.204或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.205或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.206或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.207或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.208或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.153或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.154或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.155或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.156或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.157或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.158或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.209或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.225或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.226或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.,221或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.228或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.229或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。单个探针的其他具体实施方案涉及可以包含在表2中列出且确定用于2重的任意一种核酸的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的单个核酸。单个探针的又一个示例性实施方案包括在表2中被确定用于3重的那些核酸，例如以下可以包含在SEQIDN0.159或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.160或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.161或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.162或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.163或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.164或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。单个探针的进一步示例性实施方案包括以下可以包含在SEQIDNO.165或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.166或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.167或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.168或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.169或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.170或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.171或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.172或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.173或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.174或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.175或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.176或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.177或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.178或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.179或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.180或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.181或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.182或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.183或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.210或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.211或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.212或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.213或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.214或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDNO.184或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.185或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.186或其互补序列的5，端和/或3，端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.187或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。可以包含在SEQIDN0.188或其互补序列的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的核酸。单个探针的其他具体实施方案涉及可以包含在表2中列出且确定用于4重的任意一种核酸的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的单个核酸。寡核苷酸(即核酸，如引物和/或探针)可以包含标记。标记可以存在于核酸内。标记可以附着于核酸的5’端。标记可以附着于寡核苷酸的3’端。在此应当理解的是，任何一种具有序列或由序列组成的寡核苷酸可以被单独或共同(包括全部探针的组合物和至少两种探针的亚组合物)用于鼻病毒和/或肠道病毒的检测，所述序列选自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的序列SEQIDNO.106,SEQIDNO.:107，SEQIDNO.:108，SEQIDNO.:109，SEQIDNO.:110,SEQIDNO.:111，SEQIDNO.:112，SEQIDNO.:113，SEQIDNO.:114，SEQIDNO.:115,SEQIDNO.:116，SEQIDNO.:117，SEQIDN0.118,SEQIDNO.:119，SEQIDNO.:120,SEQIDNO.:194，SEQIDNO.:195和SEQIDNO.:196或它们的互补序列。在此应当理解的是，任何一种具有序列或由序列组成的寡核苷酸可以被单独或共同(包括全部探针的组合物或至少两种探针的亚组合物)用于人类呼吸道合胞病毒的检测，所述序列选自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的序列:SEQIDNO.121,SEQIDNO.-.122,SEQIDNO.:123，SEQIDNO.-.124,SEQIDNO.:125,SEQIDNO.-.126,SEQIDNO.-.127,SEQIDNO.-.197,SEQIDNO.:198，SEQIDNO.:199和SEQIDNO.:200或它们的互补序列。在此应当理解的是，任何一种具有序列或由序列组成的寡核苷酸可以被单独或共同(包括全部探针的组合物或至少两种探针的亚组合物)用于人类偏肺病毒的检测，所述序列选自包含以下在其5’端和/或3’端有O至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的序列SEQIDNO.128,SEQIDNO.:129，SEQIDNO.:130，SEQIDNO.:131，SEQIDNO.:132和SEQIDNO.:133或它们的互补序列。根据本发明，上述的各寡核苷酸可以在分离的容器内提供，或者可以附着于固相载体的特异性位点。在此应当理解的是，任何一种具有序列或由序列组成的寡核苷酸可以被单独或共同(包括全部探针的组合物或至少两种探针的亚组合物)用于A型流感病毒的检测，所述序列选自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的序歹丨J:SEQIDNO.134,SEQIDNO.135,SEQIDNO.136，SEQIDNO.137,SEQIDNO.138，SEQIDNO.:139，SEQIDNO.:140，SEQIDNO.:141，SEQIDNO.:142，SEQIDNO.143，SEQIDNO.:144，SEQIDNO.:145，SEQIDNO.:146，SEQIDNO.:147，SEQIDNO.148，SEQIDNO.:149，SEQIDNO.:150，SEQIDNO.:151，SEQIDNO.:152，SEQIDNO.201，SEQIDN0.:202，SEQIDNO.:203，SEQIDNO.:204，SEQIDNO.:205，SEQIDNO.206，SEQIDNO.:207和SEQIDNO.:208或它们的互补序列。在此应当理解的是，任何一种具有序列或由序列组成的寡核苷酸可以被单独或共同(包括全部探针的组合物或至少两种探针的亚组合物)用于副流感1型的检测，所述序列选自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的序歹丨J:SEQIDNO.:153和SEQIDN0.154或它们的互补序列。在此应当理解的是，任何一种具有序列或由序列组成的寡核苷酸可以被单独或共同(包括全部探针的组合物或至少两种探针的亚组合物)用于副流感2型的检测，所述序列选自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的序列SEQIDN0.155,SEQIDNO.:156和SEQIDNO.:157或它们的互补序列。在此应当理解的是，任何一种具有序列或由序列组成的寡核苷酸可以被单独或共同(包括全部探针的组合物或至少两种探针的亚组合物)用于副流感3型的检测，所述序列选自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的序列SEQIDNO.:158,SEQIDNO.:209和SEQIDNOs.:225至229或它们的互补序列。根据本发明，以上各寡核苷酸可以在分离的容器内提供，或者可以附着于固相载体的特异性位点。在此应当理解的是，任何一种具有序列或由序列组成的寡核苷酸可以被单独或共同(包括全部探针的组合物或至少两种探针的亚组合物)用于冠状病毒SARS-CoV的检测，所述序列选自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的序列:SEQIDNO.:159和SEQIDNO.:160或它们的互补序列。在此应当理解的是，任何一种具有序列或由序列组成的寡核苷酸可以被单独或共同(包括全部探针的组合物或至少两种探针的亚组合物)用于冠状病毒229E的检测，所述序列选自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的序列=SEQIDN0.161或其互补序列。在此应当理解的是，任何一种具有序列或由序列组成的寡核苷酸可以被单独或共同(包括所有探针的组合或至少两种探针的亚组合)用于冠状病毒NL的检测，所述序列选自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的序列=SEQIDNO.:162或其互补序列。在此应当理解的是，任何一种具有序列或由序列组成的寡核苷酸可以被单独或共同(包括所有探针的组合或至少两种探针的亚组合)用于冠状病毒0C43的检测，所述序列选自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的序歹丨J=SEQIDNO.:163和SEQIDNO.:164或它们的互补序列。根据本发明，以上各寡核苷酸可以在分离的容器内提供，或者可以附着于固相载体的特异性位点。在此应当理解的是，任何一种具有序列或由序列组成的寡核苷酸可以被单独或共同(包括全部探针的组合物或至少两种探针的亚组合物)用于腺病毒的检测，所述序列选自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的序列SEQIDNO.165,SEQIDNO.:166，SEQIDNO.:167，SEQIDNO.:168，SEQIDNO.169，SEQIDNO.170,SEQIDNO.:171，SEQIDNO.172,SEQIDNO.173,SEQIDNO.:174，SEQIDNO.175,SEQIDNO.176,SEQIDNO.177,SEQIDNO.:178或它们的互补序列。在此应当理解的是，任何一种具有序列或由序列组成的寡核苷酸可以被单独或共同(包括全部探针的组合物或至少两种探针的亚组合物)用于B型流感病毒的检测，所述序列选自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的序列SEQIDNO.179,SEQIDNO.:180，SEQIDNO.:181，SEQIDNO.:182，SEQIDNO.183,SEQIDNO.:210，SEQIDNO.:211，SEQIDNO.:212，SEQIDNO.:213禾口SEQIDNO.:214或它们的互补序列。在此应当理解的是，任何一种具有序列或由序列组成的寡核苷酸可以被单独或共同(包括全部探针的组合物或至少两种探针的亚组合物)用于副流感病毒4型的检测，所述序列选自包含以下在其5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加、缺失或者添加和缺失组合的序歹Ij:SEQIDNO.184，SEQIDNO.185,SEQIDNO.186,SEQIDNO.187,SEQIDNO.188或它们的互补序列。根据本发明，以上各寡核苷酸可以在分离的容器内提供，或者可以附着于固相载体的特异性位点。选择用于最佳多重化验的探针的更具体的实施方案列于表2。这些探针通过与用所选择的引物对扩增的靶病毒核酸杂交，或者与用信号扩增方法如高灵敏度生物传感器的未扩增的靶病毒核酸杂交，能够用于检测15种靶病毒。当探针与其它探针组合用于同时检测多种病毒时，探针的特异性将基本上不受其它探针存在的影响，即它仍然与靶病毒核酸杂交。优选地，选择用于一种病毒的探针，不与来自其他病毒的核酸杂交。引物或探针可以是由使用者决定的任何合适的长度。在本发明的实施方案中，弓丨物和/或探针(两者是相互独立的)可以是，例如10至50个核苷酸长(包含在内地)，10至40、10至35、10至30、12至40、12至25个核苷酸长(包含在内地)、15至25个核苷酸长(包含在内地)、15至20个核苷酸长(包含在内地)等。虽然为了简洁的目的，在此并未提供长度为10至50个核苷酸长的组合物的全部列表，但是旨在涵盖可以为10至50个核苷酸(包含在内地)的各种或每一种可能的组合物。以下提供的仅是此种可能组合的一些实例12至25、10至30、11至30、10至29、11至29、15至17、14至21等。在此所使用的术语“至少两种”包含“至少三种”、“至少四种”、“至少五种”、“至少六种”、“至少七种”、“至少八种”、“至少九种”、“至少十种”、“至少i^一种”、“至少十二种”、“至少十三种”、“至少十四种”、“至少十五种”、“至少十六种”、“至少十七种”、“至少十八种”、“至少十九种”、“至少二十种”、至少二i^一种”、“至少二十二种”、“至少二十三种”、“至少二十四种”、“至少二十五种”、“至少二十六种”、“至少二十七种”、“至少二十八种”等。在本发明另一个实施方案中，引物和/或探针(二者相互独立)可以是至少10个核苷酸长，至少11个核苷酸长，至少12个核苷酸长，至少13个核苷酸长，至少14个核苷酸长，至少15个核苷酸长，至少16个核苷酸长，至少17个核苷酸长，至少18个核苷酸长，至少19个核苷酸长，至少20个核苷酸长，至少21个核苷酸长，至少22个核苷酸长，至少23个核苷酸长，至少24个核苷酸长，至少25个核苷酸长，至少26个核苷酸长等。表2中所描述的引物和/或探针可以由此在它们的5’端和/或3’端包含核苷酸添加。这些核苷酸的同一性可能会改变。在一些情况下，核苷酸可以从常规的A，T，G或C碱基中选择，而在另一些情况下，核苷酸可能是本领域内已知的经修饰的核苷酸。然而，在本发明的一个实施方案中，核苷酸添加可以与存在于表1中列出的任何一种相应的基因序列或存在于公共数据库中的核苷酸相对应。在此所使用的术语“包含在其5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加”，是指寡核苷酸或核酸可能具有a)在其5’端有0，1，2，3，4或5个核苷酸添加，b)在其3’端有0，1，2，3，4或5个核苷酸添加，或者c)在其5’端有0，1，2，3，4或5个核苷酸添加和在其3’端有0，1，2，3，4或5个核苷酸添加。在此所使用的术语“包含在其5’端和/或3’端有0至5个核苷酸缺失”，是指寡核苷酸或核酸可能具有a)在其5’端有0，1，2，3，4或5个核苷酸缺失，b)在其3’端有0，1，2，3，4或5个核苷酸缺失，或者c)在其5’端有0，1，2，3，4或5个核苷酸缺失和在其3’端有0，1，2，3，4或5个核苷酸缺失。在此所使用的术语“包含在其5’端或3’端之一有0至5个核苷酸添加和/或而在其5’端或3’端的另一个有0至5个核苷酸缺失”，是指寡核苷酸或核酸可能具有a)在其5’端有0，1，2，3，4或5个核苷酸添加，而在其3’端有0，1，2，3，4或5个核苷酸缺失，或者b)在其3’端有0，1，2，3，4或5个核苷酸添加，而在其5’端有0，1，2，3，4或5个核苷酸缺失，c)在其5’端有0，1，2，3，4或5个核苷酸添加，和在其3’端有0，1，2，3，4或5个核苷酸添加，或者d)在其5’端有0，1，2，3，4或5个核苷酸缺失，和在其3’端有0，1，2，3，4或5个核苷酸缺失。术语“包含有0至5个”还包含“包含有1至5个”，“包含有2至5个”，“包含有3至5个”，包含有4至5个”，“包含有0至4个”，“包含有1至4个”，“包含有2至4个”，“包含有3至4个”，“包含有0至3个”，“包含有1至3个”，“包含有2至3个”，“包含有0至2个”，“包含有0至1个”，“包含有0个”，“包含有1个”，“包含有2个”，“包含有3个”，“包含有4个”或“包含有5个”。根据本发明，引物和/或探针可以被标记。在本发明的一个实施方案中，引物可以被标记，因此提供被标记的靶扩增子。根据本发明，生成的扩增子可以通过与属和/或种特异性捕获探针杂交来检测。在其他实施方案中，标记探针可以是有用的。适合在本发明中使用的可检测的标记物包括通过光谱学、光化学、生物化学、免疫化学、电学、光学或化学方法可检测的任何一种组分。本发明中有用的标记物包括用于采用标记的抗生蛋白链菌素连接体染色的生物素，磁珠(如Dynabeads)，荧光染料(如荧光素、德克萨斯红、罗丹明、绿色荧光蛋白等)，放射性同位素标记(如3H,125I，35S,14C,或32P)，磷光标记物，酶(如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶以及在ELISA中普遍使用的其他酶)，以及诸如胶体金或有色玻璃或塑料(如聚苯乙烯、聚丙烯、乳胶等)珠的比色标记物。教示这些标记物使用的专利包括美国专利号3，817，837；3,850，752；3,939，350；3,996，345；4,277，437；4，275，149和4，366，241，在此为了所有目的将各专利全文引入作为参考。荧光标记物可以在体外转录反应期间方便地加入，因而代表着令人感兴趣的方法。除了在此提及的病毒特异性寡核苷酸，所述方法和试剂盒还可以包括对照，如对照引物、对照探针、对照样品等。虽然对照的示例性实施例已在表4中提供，本领域内技术人员将理解，可以使用任何类型的对照来验证该方法。呼吸道病毒扩增和检测的方法本发明的其他方面提供了检测呼吸道病毒的方法，所述方法可以包括将含有或被怀疑含有病原体的样品暴露于寡核苷酸混合物的步骤，所述寡核苷酸混合物包括能够特异性与呼吸道病毒种类的遗传材料结合的多寡核苷酸，所述呼吸道病毒种类选自(i)A型流感病毒，(ii)B型流感病毒，(iii)人类呼吸道合胞病毒(RSV)，(iv)人类偏肺病毒(hMPV)，(ν)人类肠道病毒，(vi)鼻病毒，(vii)副流感病毒1型，(viii)副流感病毒2型，(ix)副流感病毒3型，(χ)副流感病毒4型，(xi)冠状病毒0C43，(xii)冠状病毒NL，(xiii)冠状病毒229E，(xiv)冠状病毒SARS-CoV以及(xv)与呼吸道感染相关的腺病毒血清型。根据本发明，所述寡核苷酸混合物可以能够在相似的扩增条件下扩增遗传材料和/或可以能够在相似的杂交条件下与遗传材料杂交。所述方法具体应用于在此描述的呼吸道病毒的靶基因的检测。根据本发明，该多寡核苷酸种类可以包含可以能够特异性扩增遗传材料的多组引物对。因而，所述样品在适合于核酸扩增的条件下被暴露于多组引物对。同样根据本发明，该多寡核苷酸种类可以包含可以能够与呼吸道病毒种类的遗传材料杂交的探针。因而，所述样品在适合于杂交的条件下被暴露于该探针。在此所使用的术语“寡核苷酸种类”是指具有核酸序列的寡核苷酸，该核酸序列可区别于其他寡核苷酸的核酸序列。目前用于扩增遗传材料的一种方法是聚合酶链式反应(PCR)或反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)。然而，在一些情况下，核酸可以是不要求扩增的足够量。在本发明中，设计了使用一步RT-PCR方法的四重化验，用于扩增和检测来自以上提及的呼吸道病毒的核酸。RT和PCR结合于一个步骤中能便于防止污染。然而通常需要最优化试剂和条件，以使两种酶都有高效活性。在此应当理解的是，已发现将扩增反应分离成四重便于操作。然而，扩增可以被分离成多于四个反应。例如，虽然不太方便，1，2，3或4重的病毒在相关时可以被再划分为2，3或4个不同的扩增反应。在本发明中，用于各重的PCR扩增能使用相同的温度循环曲线进行，由此使得全部核酸靶的扩增在相同的时间(同时地)在单个仪器(如热循环器)内进行。虽然经常通过PCR或RT-PCR进行核酸扩增，但是还存在其他方法。这种方法的非限制性实例包括定量聚合酶链式反应(Q-PCR)、连接酶链式反应(LCR)、转录介导扩增(TMA)、自主序列复制(3SR)、基于核酸序列的扩增(NASBA)、链置换扩增(SDA)、重组酶聚合酶扩增(RPA)、环介导等温扩增(LAMP)、解链酶依赖性扩增(HDA)、解链酶依赖性等温DNA扩增(tHDA)、分支DNA(bDNA)、环状探针技术(CPT)、固相扩增(SPA)、滚环扩增技术(RCA)、实时RCA、固相RCA、结合分子锁式探针的RCA(MPP/RCA)、基于核酸识体的RCA(aptamer-RCA)、锚定SDA、引物延伸预扩增(PEP)、简并寡核苷酸引物PCR(DOP-PCR)、不依赖序列的单一引物扩增(SISPA)、接头连接PCR、核酸酶依赖性信号扩增(NDSA)、网状分枝扩增(RAM)、多重置换扩增(MDA)、实时RAM，以及全基因组扩增(WGA)(ffestin,L.等，2000,Nat.Biotechnol.18199-204；Notomi,T.^,2000,NucleicAcidsRes.28:e63；Vincent,Μ.等，2004，EMBOreports5:795_800；Piepenburg,0.等，2006，PLoSBiology4:E204；Yi,J.等，2006，NucleicAcidsRes.34:e81；Zhang,D.等，2006，Clin.Chim.Acta36361-70；McCarthy,E.L.等，2007，Biosens.Biotechnol.22:126_1244；Zhou,L.等，2007，Anal.Chem.79:7492_7500；Coskun,S.禾口Alsmadi，0.，2007，Prenat.Diagn.27:297_302；Biagini,P.等，2007，J.Gen.Virol.882629-2701；Gill,P.等，2007，Diagn.Microbiol.Infect.Dis.59243-249；Lasken,R.S.andEgholm,Μ.，2003,TrendsBiotech.21531-535)。在此应当理解的是，本发明的范围并不限于特异性检测技术。传统地，扩增核酸的检测通过标准溴化乙锭染色的琼脂糖凝胶电泳进行。简而言之，10μ1的扩增混合物通过含有0.25μg/mL溴化乙锭的2%琼脂糖凝胶电泳分离。然后在UV紫外透射仪下肉眼可见扩增子。通过与分子量梯度相比较来评估扩增子的大小。然而很清楚也可以使用用于特异性扩增产物检测的其他方法，这些方法对于常规诊断可能更快和更实用。这些方法可以基于扩增之后或扩增期间的荧光检测。用于监测扩增DNA的一种简单方法是通过测量插入剂如溴化乙锭或SYBRGreenI(MolecularProbes)荧光的增加而测定它的形成速率。若是需要更特异的检测，基于荧光的技术能监测在核酸扩增反应期间特异性产物的出现。双标记荧光探针的应用，如在利用Taq聚合酶的5’-3’核酸外切酶活性的TaqMan体系(AppliedBiosystems)中，是一个良好的实例(LivakK.J.等，1995，PCRMethodsAppl.4:357_362)。TaqMan可以在扩增期间进行，且这种“实时”检测在密闭容器内进行，因而消除了PCR后(post-PCR)样品处理并因此防止扩增子交叉转移的风险。几种其他基于荧光的检测方法可以在实时中进行。这种基于荧光的实例包括邻近杂交探针(Wittwer，C.T.等，1997，BioTechniques22:130_138)、分子信标探针(TyagiS.和KramerF.R.1996.Nat.Biotech.14303~308)和蝎型探针(Whitcomb等，1999，Nat.Biotech.17804-807)0邻近杂交探针通常被设计在扩增引物的内部。一个探针的3’端用供体荧光团标记，而邻近探针的5’端用受体荧光团标记。当两个探针在靠得很近的地方(间隔1至5个核苷酸)特异性杂交时，被外部光源激发的供体荧光团发出的光被第二个受体吸收而发出更多的荧光并产生荧光共振能量转移(FRET)信号。分子信标探针具有茎-环结构，其中环为探针，在茎的底部一端为荧光部分，另一端为猝灭部分。分子信标在它们与它们的靶杂交时经历了荧光构象的变化，因此从它的猝灭剂分离出来荧光染料。在装备了内置荧光计的空气热循环仪中，FRET原理已被应用于PCR扩增子的实时检测(Wittwer，CT.等1997，BioTechniques22:130-138)。用于PCR扩增子实时检测的仪器能够加速PCR循环，无论是与荧光插入剂如SYBRGreenI还是与FRET检测相结合。基于荧光检测的方法在常规诊断中应用特别有前途，因为它们很简单、快速并能定量。实施例部分提供了扩增条件的示例性实施方案。然而，在此所使用的术语“扩增条件”涉及适合于获得靶的可检测量的温度和/或孵育时间。因此，术语“相似的扩增条件”意指若是期望，可以对各靶在相似的温度下进行化验。术语“相似的扩增条件”还指若是期望，可以对各靶在相似的孵育时间下进行化验。在一些情况下，术语“相似的扩增条件”还涉及扩增循环的次数。然而，本领域内熟知，循环的次数并不总是严格的。例如，一些样品可以在其他样品之前被移除或被留下进行附加扩增循环。在其他情况下，术语“相似的扩增条件”还涉及所使用的缓冲液和扩增试剂(酶、核苷酸、盐等)的性质。术语“相似的扩增条件”还指条件(例如，时间、缓冲液、循环次数、温度等)可以稍微改变或可以相同。实施例部分提供了检测条件的示例性实施方案。然而，在此所使用的术语“检测条件”涉及适合于获得可检测的信号(例如，荧光发射、发射光谱等)的温度和/或孵育时间，或适合于获得可检测信号的其他参数。术语“相似的检测条件”还指条件可以稍微改变或可以相同。实施例部分提供了杂交条件的示例性实施方案。在此所使用的术语“相似的杂交条件”意指若是期望，可以对各靶在相似的温度下进行杂交化验。术语“相似的杂交条件”还指若是期望，可以对各靶在相似的孵育时间下进行化验。术语“相似的杂交条件”还可以涉及所使用的杂交溶液的性质(盐、严格性等)。术语“相似的杂交条件”还指条件(例如，时间、溶液、温度等)可以稍微改变或可以相同。病原体的检测和鉴别可以通过测序进行。核酸材料的同时扩增和检测还可以使用实时PCR进行。在此还包含在液体化验或固相化验(芯片、阵列、微珠、薄膜、膜等)中的检测。因此，扩增子检测可以通过使用种-特异性的内部探针的杂交来进行，所述探针能够与期望的扩增产物结合。此种探针可以设计成与用在此描述的引物所扩增的扩增子特异性杂交。所述探针可以用生物素、地高辛或任何其他报告分子标记。在示例性实施方案中，本发明中描述的引物可以用荧光团或包括但不限于Cy3、Cy5等的染料标记。杂交反应的“严格性”可被本领域普通技术人员容易地确定，通常是依赖于探针长度、清洗温度和盐浓度的经验性的计算。一般而言，为了进行适当的退火，较长的探针要求较高的温度，而较短的探针需要较低的温度。杂交通常依赖于变性DNA在互补链存在时，在低于它们的解链温度的环境下的再退火能力而定。探针和可杂交的序列之间所期望的同源性程度越高，可以使用的相对温度越高。因此，结果就是相对温度越高可能倾向于使得反应条件越严格，而较低温度的反应条件没有那么严格。通常靶核酸的杂交在中等至高度的严格性条件下进行。这种高度的严格条件使得探针和靶之间的相互作用具有更高的特异性。杂交可以使用附着于固相载体的探针和包含扩增子的杂交溶液在室温(19-25°C)下进行。使用微流控设备可以实现活跃的杂交，其中包含扩增子的杂交溶液在微阵列上流动。清洗步骤可以用允许在不同严格性下杂交的溶液进行。操作的微流控型式通常在15分钟内进行，包括清洗和漂洗步骤。本领域人员很清楚，可以改变核酸杂交和清洗条件，且仍然能实现灵敏度和特异性可比较的水平，只要全部过程导致用于核酸识别的可比较的严格性即可。因此，设计出靶向PCR扩增子的内部区域的探针(即捕获探针)，该PCR扩增子使用以上描述的扩增引物组生成。基于之前描述的关于探针的序列组合物和它在扩增子上的定位的最优要求，使用多个序列比对选择出这些捕获探针(Peytavi等，2005，Clin.Chem.39:89_96)。为涵盖靶病毒种或属的全部或大部分株系，已设计出用于靶病毒普遍性的种_特异性/属_特异性检测的几种探针。这些捕获探针可以用于实时PCR检测(如TaqMan探针、分子信标)，用于固相载体杂交(如微阵列杂交、基于磁珠的核酸捕获、膜上杂交)或其他。表2提供了探针的示例性实施方案。然而，本领域技术人员将理解的是，可以设计用于检测使用表2中的引物对生成的PCR扩增子的其他探针，虽然具有不同的效率或特异性。同样地，探针的同一性不限于在此提供的列表，或具体提供于表2中的，而是还扩展至可以能够与PCR扩增子的其他区域特异性结合的任意一种探针，包括PCR扩增子的正义链或反义链。寡核苷酸的微阵列代表了对于多参数化验的非常有用的技术，其被本发明涵盖。可获得的低或中密度阵列(HellerMJ.等，pp221-224，In=Harrison,D.J.JPvandenBerg,Α.,1998,Micrototalanalysissystems'98,KluwerAcademicPublisher,Dordrecht)可特异性地捕获荧光标记的扩增子。用于杂交的检测方法不限于荧光；可供选择的检测方法的一些实例是电位分析法、比色法和等离子共振。除了通过杂交检测，核酸微阵列还可以通过杂交用于进行快速测序。质谱分析也可以应用于扩增子的快速鉴别，甚至是扩增产物的测序(ChiuN.H.和Cantor0.R.，1999，Clin.Chem.451578；BerkenkampS.等，1998，Science281:260-262)。为了化验方式的今后，还考虑到将包括样品制备、基因扩增、检测和数据分析的步骤整合于μTAS(Anderson,R.C.等，pp.11-16.In=Harrison,D.J.，禾口vandenBerg,A.，1998,Micrototalanalysissystems'98,KluwerAcademicPublisher,Dordrecht)。在又一个实施方案中，使用本发明描述的探针而无需先PCR扩增。有前途的超灵敏检测技术，例如基于核酸/聚合物复合体的光学性能的聚合生物传感器的应用(Najari，Α.等，2006，Anal.Chem.78:7896_7899；Dore,K.等，2006，J.Fluoresc.16:259_265；Ho,H.-A.等，2005J.Am.Chem.Soc.12712673-12676；Dore,K.等，2004，J.Am.Chem.Soc.1264240-4244；Ho,H.-A.等，2002，Angew.Chem.Int.Ed.411548-1551)可以使得使用杂交探针捕获和检测靶病原体种类，而无需先PCR扩增。本发明还涉及阵列，其包含固相基底(载体)和附着于固相基底(载体)或与固相基底(载体)相关联的多种位置可识别的探针。各探针可以包含不同的核酸序列，且可以能够特异性地结合(i)A型流感病毒的基质基因，(ii)B型流感病毒的基质基因，(iii)人类呼吸道合胞病毒的核衣壳基因，(iv)人类偏肺病毒的核衣壳基因，(ν)人类肠道病毒的5’-非编码区，(vi)鼻病毒的5’-非编码区，(vii)副流感病毒1型的融合基因，(viii)副流感病毒2型的融合基因，(ix)副流感病毒3型的融合基因，(χ)副流感病毒4型的融合基因，(xi)冠状病毒0C43的基质基因，(xii)冠状病毒NL的聚合酶基因，(xiii)冠状病毒229E的聚合酶基因，(xiv)冠状病毒SARS-CoV的聚合酶基因，以及(xv)与呼吸道感染相关的腺病毒血清型的六邻体区。根据本发明，所述各探针可以各自包括10至50个核苷酸。在另一方面，本发明提供阵列，其可以包含a)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失0至5个核苷酸SEQIDNO.:106，SEQIDNO.:107，SEQIDNO.:108，SEQIDNO.:109，SEQIDNO.:110，SEQIDNO.:111，SEQIDNO.:112，SEQIDNO.:113，SEQIDNO.:114，SEQIDNO.:115，SEQIDNO.:116，SEQIDNO.:117，SEQIDNO.:118，SEQIDNO.:119，SEQIDNO.:120，SEQIDNO.:194，SEQIDNO.:195和SEQIDNO.:196或它们的互补序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；b)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失0至5个核苷酸SEQIDNO.:121，SEQIDNO.:122，SEQIDNO.:123，SEQIDNO.:124，SEQIDNO.:125，SEQIDNO.:126，SEQIDNO.:127，SEQIDNO.:197，SEQIDNO.:198，SEQIDNO.:199和SEQIDNO.:200或它们的互补序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；c)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失0至5个核苷酸添加和/或缺失的寡核苷酸SEQIDNO.:128，SEQIDNO.:129，SEQIDNO.:130，SEQIDNO.:131，SEQIDNO.:132和SEQIDNO.:133或它们的互补序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；d)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失0至5个核苷酸SEQIDN0.134,SEQIDN0.135,SEQIDN0.136,SEQIDN0.137，SEQIDN0.138,SEQIDN0.139,SEQIDN0.140,SEQIDN0.141,SEQIDN0.142,SEQIDN0.:143，SEQIDN0.:144，SEQIDN0.:145，SEQIDN0.:146，SEQIDN0.:147，SEQIDN0.:148，SEQIDN0.:149，SEQIDN0.:150，SEQIDN0.:151，SEQIDN0.:152，SEQIDN0.:201，SEQIDN0.:202，SEQIDN0.:203，SEQIDN0.:204，SEQIDN0.:205，SEQIDN0.206,SEQIDN0.:207和SEQIDNO.:208或它们的互补序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；e)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失0至5个核苷酸SEQIDNO.:153和SEQIDNO.:154或它们的互补序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；f)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失0至5个核苷酸SEQIDN0.155,SEQIDNO.:156和SEQIDNO.:157或它们的互补序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；g)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失0至5个核苷酸SEQIDNO.:158，SEQIDNO.209和SEQIDNOs225至229或它们的互补序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；h)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失0至5个核苷酸SEQIDNO.:159和SEQIDNO.:160或它们的互补序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；i)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失0至5个核苷酸SEQIDN0.161或其互补序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；j)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失0至5个核苷酸SEQIDNO.162或其互补序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；k)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失0至5个核苷酸SEQIDNO.:163和SEQIDNO.:164或它们的互补序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；1)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失0至5个核苷酸SEQIDNO.165,SEQIDNO.166,SEQIDNO.167,SEQIDN0.168，SEQIDNO.169,SEQIDNO.170,SEQIDNO.171，SEQIDNO.172,SEQIDNO.173,SEQIDNO.174,SEQIDNO.:175，SEQIDNO.:176，SEQIDNO.:177和SEQIDNO.:178或它们的互补序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；m)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失0至5个核苷酸SEQIDN0.179,SEQIDN0.180,SEQIDN0.181，SEQIDN0.182，SEQIDN0.183,SEQIDNO.:210，SEQIDNO.:211，SEQIDNO.:212，SEQIDNO.:213禾口SEQIDNO.:214或它们的互补序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；η)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失0至5个核苷酸SEQIDΝ0.184,SEQIDN0.185,SEQIDNO.:186，SEQIDNO.:187和SEQIDNO.:188或它们的互补序列，并且所述添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3，端。根据本发明，各寡核苷酸可以附着于固相载体或者可以与固相载体相关联。进一步根据本发明，各寡核苷酸可以位于可寻址的位置。在另外的方面，本发明还涉及包含在此描述的至少两种寡核苷酸的寡核苷酸文库。根据本发明，各寡核苷酸可以在分离的容器内提供，或者可以附着于固相载体。如上所述，本发明一方面涉及包含在此描述的寡核苷酸的试剂盒。更具体地，本发明涉及试剂盒，其可以包含10至50个核苷酸长的多种寡核苷酸，所述寡核苷酸能够与基因特异性结合，所述基因选自(i)A型流感病毒的基质基因，(ii)B型流感病毒的基质基因，(iii)人类呼吸道合胞病毒的核衣壳基因，(iv)人类偏肺病毒的核衣壳基因，(ν)人类肠道病毒的5’-非编码区，(vi)鼻病毒的5’-非编码区，(vii)副流感病毒1型的融合基因，(viii)副流感病毒2型的融合基因，(ix)副流感病毒3型的融合基因，(χ)副流感病毒4型的融合基因，(xi)冠状病毒0C43的基质基因，(xii)冠状病毒NL的聚合酶基因，(xiii)冠状病毒229E的聚合酶基因，(xiv)冠状病毒SARS-CoV的聚合酶基因，以及(XV)腺病毒的六邻体区。根据本发明，所述多种寡核苷酸的各寡核苷酸可以能够结合一种呼吸道病毒种类的基因，而不结合其他呼吸道病毒种类基因。在本发明的实施方案中，所述试剂盒可以包含用于特异性扩增人类肠道病毒、鼻病毒、呼吸道合胞病毒和偏肺病毒的多种寡核苷酸。所述用于特异性扩增人类肠道病毒、鼻病毒、呼吸道合胞病毒和偏肺病毒的多种寡核苷酸可以在单独分离的容器内提供，各容器包含单一的寡核苷酸，或各容器包含病毒(基因)特异性寡核苷酸引物对。多种寡核苷酸还可以在包含用于各靶基因扩增的寡核苷酸混合物的单个容器内提供。在另一个实施方案中，所述试剂盒可以包含用于特异性扩增A型流感病毒、副流感病毒1型、副流感病毒2型和副流感病毒3型的多种寡核苷酸。所述用于特异性扩增A型流感病毒、副流感病毒1型、副流感病毒2型和副流感病毒3型的多种寡核苷酸可以在分离的容器内提供，各容器包含单一的寡核苷酸，或各容器包含病毒(基因)特异性寡核苷酸引物对。所述多种寡核苷酸还可以在包含用于各靶基因扩增的寡核苷酸混合物的单个容器内提供。在另外的实施方案中，所述试剂盒可以包含用于特异性扩增冠状病毒SARS-CoV、229E、NL和0C43的多种寡核苷酸。所述用于特异性扩增冠状病毒SARS-CoV、229E、NL和0C43的多种寡核苷酸可以在分离的容器内提供，各容器包含单一的寡核苷酸，或各容器包含病毒(基因)特异性寡核苷酸引物对。所述多种寡核苷酸还可以在包含用于各靶基因扩增的寡核苷酸混合物的单个容器内提供。在进一步的实施方案中，所述试剂盒可以包含用于特异性扩增腺病毒、B型流感病毒和副流感病毒4型的多种寡核苷酸。所述用于特异性扩增腺病毒、B型流感病毒和副流感病毒4型的多种寡核苷酸可以在分离的容器内提供，各容器包含单一的寡核苷酸，或各容器包含病毒(基因)特异性寡核苷酸引物对。所述多种寡核苷酸还可以在包含用于各靶基因扩增的寡核苷酸混合物的单个容器内提供。所述试剂盒还可以包含以上提及的两组、三组或四组病毒的多种寡核苷酸。根据本发明，所述试剂盒可以包含在分离的容器内或附着于固相载体的用于检测靶基因的寡核苷酸(如探针)。在其他方面，本发明还涉及用于诊断有需要的个体呼吸道感染的方法。所述方法可以包括，采用能够与呼吸道病毒种类的遗传材料特异性结合的寡核苷酸，检测从个体获得的样品中病原体的存在或不存在，所述呼吸道病毒种类选自(i)A型流感病毒，(ii)B型流感病毒，(iii)人类呼吸道合胞病毒，(iv)人类偏肺病毒，(ν)人类肠道病毒，(vi)鼻病毒，(vii)副流感病毒1型，(viii)副流感病毒2型，(ix)副流感病毒3型，(χ)副流感病毒4型，(xi)冠状病毒0C43，(xii)冠状病毒NL，(xiii)冠状病毒229E，(xiv)冠状病毒SARS-CoV，以及(XV)与呼吸道感染相关的腺病毒血清型。根据本发明，病原体的存在可以指征与被检测的病原体相关的呼吸道感染。在本发明的实施方案中，病原体的存在或不存在可以通过检测来自呼吸道病毒种类的遗传材料来确定，如，例如(i)A型流感病毒的基质基因，(ii)B型流感病毒的基质基因，(iii)人类呼吸道合胞病毒的核衣壳基因，(iv)人类偏肺病毒的核衣壳基因，(ν)人类肠道病毒的5’-非编码区，(vi)鼻病毒的5’-非编码区，(vii)副流感病毒1型的融合基因，(viii)副流感病毒2型的融合基因，(ix)副流感病毒3型的融合基因，(χ)副流感病毒4型的融合基因，(xi)冠状病毒0C43的基质基因，(xii)冠状病毒NL的聚合酶基因，(xiii)冠状病毒229E的聚合酶基因，(xiv)冠状病毒SARS-CoV的聚合酶基因和/或(xv)腺病毒的六邻体区以及它们的组合。本发明的更多细节通过以下非限制性的实施例来说明。实施例1使用PCR引物的组合以多重形式特异性扩增和检测15种临床重要的呼吸道病毒使用MagazorbRNA提取试剂盒(Cortex,SanLeandro,CA)和KingFisherML仪器(ThermoScientific，Waltham，CA)从病毒细胞培养上清液中提取RNA。用1μ1纯化的RNA进行RT-PCR。20-μ1PCR混合物包含如以下所述分离成不同重的各引物(SEQIDNos78，79，80，81，82，83，84，85，86，87，88，89，90，91，92，93，94，95，96，97，98，99，100，101，102和103)0.6-。用于裂解对照的引物(SEQIDNos104和105)为0.3μΜ。使用一步RT-PCR试剂盒(Qiagen)进行RT-PCR。病毒从美国模式培养物收集中心(AmericanTypeCultureCollection,ATCC)以及从CHULPavilionoftheCentreHospitalierUniversitairedeQuebec(CHUQ)得到的呼吸道临床标本获得。PCR实验在PTC-200热循环仪(Bio-Rad)上使用以下的温度曲线进行于50°C下反转录单次循环30分钟，然后反转录酶于95°C下失活15分钟，以及TaqDNA聚合酶活化之后进行45次PCR循环，包括于95°C下变性15秒、54°C下引物退火10秒和72°C下延伸25秒的步骤。已开发出用于扩增和鉴别大部分临床相关的呼吸道病毒的四重PCR化验(表2)。1重包括用于检测和鉴别人类呼吸道合胞病毒、人类偏肺病毒、人类鼻病毒/肠道病毒(全部血清型)的引物，以及用于扩增裂解对照的引物。2重包括用于检测和鉴别副流感病毒1、2和3型以及A型流感病毒的引物。3重包括用于检测和鉴别冠状病毒NL、229E、0C43和SARS-CoV的引物。最后，4重包括用于检测和鉴别与人类呼吸道感染相关的腺病毒的全部7种血清型(1，2，3，4，5，7和21)、副流感病毒4型以及B型流感病毒的引物。表2提供了用于各靶病毒的所选择的PCR引物和靶基因列表。扩增产物通过如先前所述的琼脂糖凝胶电泳分析(Ke,D.，等，2000，Clin.Chem.46:324_31)。多重RT-PCR化验的评估确定分析的灵敏度选择用于各病毒的部分或全部靶基因如下进行PCR-扩增和克隆。使用表5描述的病毒如上所述进行RT-PCR。扩增后使用Τ0Ρ0-ΤΑ克隆试剂盒(Invitrogen)直接克隆扩增子。转化到DH5amaxefficiency(Invitrogen)导致回收到运载插入PCR产物的重组质粒。对于各靶基因，包含插入扩增子的几种克隆被测序，以确保不存在可归因于TaqDNA聚合酶造成的核苷酸的错误组合。在Sequencher3.O软件(GeneCodes)的协助下进行序列装配。在通过测序证实插入DNA的准确性后，线性化含有感兴趣基因的靶向部分的重组质粒，然后按照厂商说明使用AmpliscribeT7_Flash试剂盒(Epicentre)用300至600ng质粒DNA转录。随后使用来自Rneasy试剂盒(Qiagen)的RNA清除方案(cleanupprotocol)或KingfisherML上的Magazorb试剂盒(Cortex)按照厂商说明纯化生成的RNA，无需裂解步骤。RNA的定量使用Ultrospec2000(Pharmacia)于260nm下通过分光光度测定法进行，然后将这些数据转化成拷贝数/μ1。在AgilentBioanalyzer上可视化RNA转录体，以证实没有降解(RNA6000NanoLabChipKit)。这些转录体被用于确定各重化验的分析灵敏度，通过用对应于各基因靶向部分的已知量的转录体强化(spiking)各PCR反应。对15种呼吸道病毒的检测限制取决于靶基因，其范围是每个RT-RCR反应病毒基因组的50至100个拷贝(表2)。化验特异性和普遍性的确定对于各靶病毒，使用从细胞培养物中提取的高度浓缩的病毒RNA，以及人类基因组DNA的10000个基因组拷贝当量，和一般与呼吸道感染相关的细菌(即肺炎链球菌、卡他莫拉菌、流感嗜血杆菌和嗜肺军团菌)的30000个基因组拷贝当量来证实RT-PCR化验的特异性。使用人类DNA作为模板时，在溴化乙锭染色的琼脂糖凝胶上观察到非特异性的RT-PCR扩增产物。类似地，用来自其他呼吸道病毒的基因组RNA/DNA，也观察到非特异性扩增。另一方面，用来自所选择的细菌基因组DNA作为模板，并未观察到非特异性扩增产物。使用来自2株肠道病毒、1株柯萨奇病毒、2株鼻病毒、3株RSV、3株hMPV、4株A型流感病毒、8株B型流感病毒、5株副流感病毒1型、2株副流感病毒2型、2株副流感病毒3型、8株副流感病毒4型和8株腺病毒的100个病毒基因组拷贝当量来证实化验的普遍性。对于全部目标种类，特定病毒种类的所有株系都被靶向该种类的多重RT-PCR化验高效扩增和检测。作为本发明的目的，该多重RT-PCR化验当与标准琼脂糖凝胶电泳相结合用于扩增子检测时，使得灵敏和普遍地扩增出15种临床最重要的呼吸道病毒。实施例2在微阵列芯片上同时检测15种呼吸道病毒一般地，双链扩增产物在95°C变性1至5分钟，然后在杂交前于冰上冷却。由于双链扩增子易于与它们的互补链再结合而不是与探针杂交，单链扩增子可能有利地用于杂交。一种生成单链扩增子的方法是采用来自λ噬菌体的核酸外切酶消化一条链。一条链的优先消化可以通过使用用于互补链的5-初始磷酸化引物和用于目标链的荧光标记引物来实现(Boissinot等2007，Clin.Chem.,532020-3)。简而言之，通过将10单位的λ核酸外切酶(New-EnglandBiolabs)直接加入到PCR反应产物中，并于37°C下孵育5分钟消化用此种修饰引物的生成的扩增子。这种被消化的扩增产物可以容易地应用于微阵列杂交，无需任何预加热处理。微阵列通常通过点样针头将寡核苷酸探针点样至载玻片表面而制备，但是本领域技术人员已知存在其他表面和用于将探针附着到表面的其他方法，这些也都被本发明涵盖。侧流式微阵列代表了最近快速固相载体杂交技术的实例(Carter和Cary，2007，Nucl.AcidsRes.35:e74)0对于以下描述的说明性实例，将经5’氨基-接头修饰的寡核苷酸探(Microplottingsolutionplus,TeleChemInternational),^ji用VIRTEKSDDC-2阵列器(Bio-RadLaboratories)以30μM点样于超纯酸载玻片(SuperAldehydeslides,Genetix)上。除了DNA或RNA寡核苷酸，核苷酸类似物如肽核酸(PNA)、锁核酸(LNA)和硫代磷酸酯可以作为探针使用，也是本发明的目的。全部杂交实验使用如上所述的λ核酸外切酶消化的扩增产物来进行。引物(SEQ78，79，80，81，82，83，84，85，86，87，88，89，90，91，92，93，94，95，96，97，98，99，100，101，102和103)用于RT-PCR步骤。用于微阵列与各RT-PCR四重化验杂交的捕获探针描述于表2中。全部杂交实验的阳性对照由氨基修饰的20-mer寡核苷酸与它的Cy3标记的20-mer互补链的杂交组成。被动杂交通过以下进行将4.8μL的PCR扩增反应加入至含有6ΧSSPE,0.03%PVP，30%甲酰胺+5nMCy3_bbcl的15.2μ1杂交溶液中，室温(例如19_25°C)1小时。随后使用含有0.1%SDS的2xSSPE缓冲液(OmniPurEMD)清洗载玻片5分钟，之后用2xSSPE缓冲液的溶液漂洗5分钟。微流控杂交如先前所述进行(Peytavi等，2005，39:89-96)。使用ScanArray4000XL微阵列扫描仪(GSILumonics/PackardBiochips,Billerica,MA)获得所有载玻片的荧光图像，用GenePixPro6.0(MolecularDevices)进行数据分析。操作的微流控型式可以在15分钟内进行，包括清洗和漂洗步骤。本领域技术人员熟知，可以改进核酸杂交和清洗条件，且仍然达到灵敏度和特异性可比较的水平，只要全过程导致用于核酸识别的可比较的严格性即可。本发明的优势在于，全部微阵列杂交和清洗操作可以在对所有探针和多重扩增组合物一致的条件下进行。化验灵敏度的确定如实施例1所述使用RNA转录体的连续稀释来进行，所述RNA转录体来自克隆到质粒的各靶基因。各PCR反应用已知量的靶基因强化、并被扩增和杂交到微阵列上。用微阵列检测的分析灵敏度相当于使用溴化乙锭染色凝胶检测获得的结果(即对15种呼吸道病毒的检测限度取决于靶基因，范围是病毒基因组的50至100个拷贝(表2)。如实施例1中描述验证化验的特异性。通过RT-PCR扩增后，制备PCR反应，用于在寡核苷酸捕获探针的微阵列上杂交。虽然实施例1中证明人和病毒的核酸材料的RT-PCR扩增生成非特异性的扩增子，但是在微阵列上未观测到交叉杂交。化验的普遍性使用如实施例1中描述的来自各靶病毒种类不同株系的100个病毒基因组拷贝当量进行证实。对于所有目标种类，使用靶向该种的多重RT-PCR化验高效地扩增并检测已知病毒种的全部株系。作为本发明的目的，用于微阵列杂交的捕获探针使得特异、灵敏和普遍地检测通过RT-PCR生成的来自15种临床最重要的呼吸道病毒的扩增子。实施例3采用取自患者的临床呼吸道标本评估多重PCR化验收集取自三岁以下儿童的鼻咽抽吸物(NPA)并按等份试样冷冻直至开始进行研究。用于临床研究的患者的选择标准为呼吸道疾病症状的医疗咨询，医师要求进行A型和B型流感和/或RSV的快速免疫诊断测试(BINAX)。使用以下操作提取和纯化来自NPA样品的遗传材料将850μ1异硫氰酸胍(GT)(4.5Μ)加入至装有0.005g硅珠的1.5ml试管中。之后，在试管内加入200μ1NPA标本，通过倒置混合10分钟。GT溶液使得裂解可能存在于NPA样品内的病毒，并使释放的核酸结合于硅珠。于IOOOOg下离心试管1分钟并除去上清液。用750μ1的70%乙醇(使用DEPC制备)处理粒状珠，以清洗核酸，然后再于IOOOOg下离心试管1分钟。除去上清液后，在小粒中加入含有1μ1RNasin(Promega)的30μ1DEPC水，于60°C下孵育10分钟，以释放核酸。然后将试管内的全部内容物转移至Spin-X柱(0，22μΜ滤器，FisherScientific)，根据他们的方案纯化从柱上洗脱的遗传材料。遗传材料的扩增和检测按照实施例1和2中的描述进行。总共测试了134份NPA标本。基于核酸的测试，其中106份为RSV-阳性。相比之下，基于使用BINAX化验的平行测试，134份NPA标本中仅有89份为RSV阳性。其他被检测的病毒，包括肠道病毒/鼻病毒(η=18)、冠状病毒0C43(n=10)、腺病毒(η=9)、PIV-3(η=3)、PIV-4(η=3)、hMPV(η=3)以及A型(η=1)禾口B型(η=2)流感病毒。八份标本对所有测试病毒为阴性。实施例1和2中描述的分子化验使得快速和灵敏地检测来自NPA标本的呼吸道病毒。应当注意的是，一些未检测的病毒在人群内有相对较低的流行性(如造成SARS-CoV的冠状病毒)，而我们未在测试的临床标本中发现任何一种并不奇怪。我们相信本发明提供了能够达到特异性、灵敏性和一致性鉴别15种呼吸道病毒种类的目的的试剂。这些试剂可以满足用于在固相载体上检测的条件要求。虽然本发明在此通过示例性实施方案的方式进行了描述，但是其可以被改变而不背离本发明的范围和性质。本说明书涉及许多文献，其内容在此全部引入作为参考。表1.用于设计检测15种呼吸道病毒的PCR引物和杂交探针的靶基因序列列表*通过本研究确定的基因序列与对应病毒分离物的CCRI(“CentredeRechercheenInfectiologie”收集)编号相一致，他们的每一个指定一个SEQIDNO0从公共数据库中可获得的基因序列与用它们的基因登录号相一致，未指定其SEQIDNO。—呼吸道病毒I把基因I鉴定*ISEQIDNOs_CCRI-15830__10__CCRI-15707__？__CCRI-15634__8__CCRI-15615__I___CCRI-15592__6__CCRI-15591__5__CCRM5590__4__CCRI-15589__3_________CCRI-15587__2__CCRI-15586__1______CCRI-15588__11__CCRI-16240__13__CCRI-16130__12___CCRI-16241__14_U65575;u65569;dq009919;ay947475;y651387;af398876;af138719;af115287;af038274;af038272;afO30271;A型‘；充咸1盾ay611525ii;ay210270ii;ay210269ii;人ay210268ii;ay210267ii;ay210266ii;ay210265ii;ay210264ii;ay210263ii;ay210262ii;ay210261ii;ay210260ii;ay210259ii;ay210258ii;ay210257ii;ay210256ii;ay210255ii;ay210254ti;ay210253ii;ay210252ii;ay210251ii;ay210250ii;ay210249ii;ay210248ii;ay210247ii;ay210246ii;ay210245ii;ay210244ii;ay210243ii;ay210242ii;ay21Q241ii;ay210240ii;ay210239ii;ay210065ii;ay210064ii;ay210063ii;ay210062ii;ay210061ii;ay210060ii;ay210059ii;ay210058ii;ay210057ii;ay210056ii;ay210055ii;ay210054ii;ay210053ii;ay210052m;ay210051ii;ay210050ii;ay210049ii;ay210048ii;ay21004/ii;ay210046ii;ay210045ii;ay210044ii;ay210043ii;ay210042ii;ay210041ii;ay210040ii;ay210039ii;ay210038ii;ay210Q37ii;ay210036ii;ay210035ii;ay210034ii;ay210033ii;ay210032ii;ay210031ii;ay210030ii;ay210029ii;ay210028ii;ay210027ii;ay210026ii;af255374ii;af255373ii;af255372ii;af255371ii;af255370ii;af255369ii;af255368ii;af255367ii;af255366ii；af255365ii；af255364ii;af255363ii;af115287i;af115286;_^_I_af084284i;af084283i;af084282i;_|_<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>呼吸道病毒把基因鉴别ΛSEQIDNOscoxa2_af303036;coxa2_af412341;coxa3_af303037;coxa3一af412342;coxa5af303044;coxa5:af412343;coxa6一af412344;coxa7—af412345;coxa7一af068879;coxa10laf412346;coxa12_af412348;coxa12_af303042;coxal2_af303041；coxal3_af303040;coxa14_af412349;coxal5_af412350;coKa17_af412351;coxal7_af412347;coxal8_af412354;coxal8=af412352;coxal8__af303038;coxal9_af412353;coxa20一af303039;coxa21_af076999;coxa21_af068880;coxa21_af412355;coxa21:aj001339;coxa22:af412356;coxa24—af068881；coxbl—ay373044;coxbl_ay373038;coxb1_ay373041;coxbl_ay373039;coxb1_ay373040;coxbl一ay373037;coxb1_ay373042;coxbl_ay373043;coxb1_ay373045;coxbT_ay373036;coxbT_s76767;coxb2_ay373052;coxb2_ay373046;coxb2_ay373057;coxb2_ay373055;coxb2_ay373054;coxb2_ay373058;coxb2一ay373051;coxb2二ay373050;coxb2—ay373053;coxb2一ay373049;coxb2_ay373056;coxb2:ay373048;coxb2_ay373047;coxb2:af225474;coxb2_af225473;coxb3_ay373063;coxb3_ay373062;coxb3:ay373061;coxb3_ay373064;coxb3—ay373059;coxb3_ay373066;coxb3ay373067;coxb3_ay373060;coxb4_ay373076;coxb4_ay373073;coxb4_ay373075;coxb4_ay373074;coxb4二ay373072;coxb4_ay373069;coxb4_ay373068;coxb4_ay373070;coxb4:ay373071;coxb4_ay373084;coxb5_ay373079;coxb5_ay373089;coxb5__ay373088;coxb5—ay373087;coxb5:ay373082;coxb5_ay373065;coxt)5二ay373086;coxb5一ay373085;coxb5—ay373083;coxb5__ay373081;coxb5_ay373080;coxb5一ay373078;coxb6~af225476;coxb6_af225475;coxb4:ay373077;coxb6_ay373090;coxb6_af225478;coxb6_af225477;echo4_af447482;echo6_af447481;echol1_af447484;echo11_af447485;echol1_af447486;ehol1_af447487;echol1_af447472;echol1_af447474;echol1—af447475;echol1一af447476;echol1一af447477;echol9_af447479;echo19:aW47480;echol9_af447483;echo30ls76768;echo30—s76769;entero75_ay556070;entero74_ay556057;entero90_ay773285;enteroca55_af241359;enterolT_af068885;entero69_ay302560;entero69一af412376;__^_entero70_nc001430;enteroe71u0Q872;I__呼吸道病毒靶基因鉴别*SEQIDNOsentero71_ab183003;entero71_ay465356;rhinola_af108179;rhino6_a"542425;rhino7_af108185;rhinol3_af542452;rhinol7_af542419;rhino2faf108180;rhino27—af542449;rhino29=af108181;rhino37_af108182;rhino43_af542450;rhino45_af542451；rhino51一af542422;rhino52_af542423;rhino59二af542424;rhino58_af108183;rhino62_af108184;「hino69—af542426;rhino70_af542427;rhino72_af108186;rhino84~af542429;rhino86_af542431；rhino87l"ay062273;rhino87_af108187;rhino91一af542432;rhino92_af108149;rhino93一af108154;rhino93_af108155;rhino93二af108151；rhino93_af108152;rhino93=afl08150;rhino94—af108161;rhino94:af108159;rhino94_af108157;rhino94=af108158;rhino94_af108156;rhino94_af108160;rhino95_af108176;rhino95_af108175;rhino95_af108174;rhino95_af108167;rhino95_af108163;rhino95_af108164;rhino95_af108170;rhino95_af108173;rhino95_af108162;rhino95—af108169;rhino93_af108153;rhino95~af108172;rhino95_af108171；rhino95二af108165;rhino95_af108178;rhino95二af108166;___rhino95af108168;rhino95~af108177__PIV-I融合_CCRI-15598__38__CCRI-15560__39_Af016279;af016279i;af457102;af016279;_af457102i;m22347_______CCRI-15838__40_PIV-2融合_CCRI-15641____CCRI-15839______x57559;m55698;m60182;af213351____PIV-3融合_CCRI-15672__45____________CCRI-15867_____D00016;M14892;M21649;S82195;_S82195i;X05303;zll575_____CCRI-15706__47_冠状病毒OC43基质ay391777;ay585228;ay585229;m93390；ay391777;ay585228;ay585229;____ay391777;ay903459;ay382775;ay903460__冠状病毒229E聚合酶X69721;af304460;nc_002645<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>表3.为本发明保留的引物和探针百分比<table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table>*存在于各PCR反应的内部对照模板使得各PCR扩增和/或微阵列杂交的效率得以证实，以及保证了没有核酸扩增和/或检测过程的显著抑制。细胞裂解对照由加入至各PCR反应中的细胞组成，也验证了细胞裂解和核酸提取过程的效率。表5.克隆的RT-PCR产物作为内部对照模板，用于确定化验的分析灵敏度<table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table>权利要求一种检测呼吸道病毒的方法，所述方法包括将包含或被怀疑包含病原体的样品暴露于寡核苷酸混合物，所述寡核苷酸混合物包括能够特异性与呼吸道病毒种类的遗传材料相结合的多寡核苷酸，所述呼吸道病毒种类选自(i)A型流感病毒，(ii)B型流感病毒，(iii)人类呼吸道合胞病毒，(iv)人类偏肺病毒，(v)人类肠道病毒，(vi)鼻病毒，(vii)副流感病毒1型，(viii)副流感病毒2型，(ix)副流感病毒3型，(x)副流感病毒4型，(xi)冠状病毒OC43，(xii)冠状病毒NL，(xiii)冠状病ˉ229E，(xiv)冠状病毒SARS-CoV和(xv)与呼吸道感染相关的腺病毒血清型，其中所述各寡核苷酸混合物能够在相似的扩增条件下扩增遗传材料，或者能够在相似的杂交条件下与遗传材料杂交。2.权利要求1所述的方法，其中所述呼吸道病毒种类的遗传材料选自(i)A型流感病毒的基质基因，(ii)B型流感病毒的基质基因，(iii)人类呼吸道合胞病毒的核衣壳基因，(iv)人类偏肺病毒的核衣壳基因，(ν)人类肠道病毒的5’-非编码区，(vi)鼻病毒的5’-非编码区，(vii)副流感病毒1型的融合基因，(viii)副流感病毒2型的融合基因，(ix)畐Ij流感病毒3型的融合基因，(χ)副流感病毒4型的融合基因，(xi)冠状病毒0C43的基质基因，(xii)冠状病毒NL的聚合酶基因，(xiii)冠状病毒229E的聚合酶基因，(xiv)冠状病毒SARS-CoV的聚合酶基因和(xv)腺病毒的六邻体区以及它们的组合。3.权利要求1或2所述方法，其中所述多寡核苷酸种类包括能够特异性扩增所述遗传材料的多组引物对，并且其中所述样品在适合于核酸扩增的条件下被暴露于所述多组引物对。4.权利要求1或2所述方法，其中所述多寡核苷酸种类包含探针，各探针能够与所述呼吸道病毒种类的遗传材料杂交，并且其中所述样品在适合于杂交的条件下被暴露于所述探针。5.权利要求1至4中任一项所述方法，其中所述遗传材料为RNA或者DNA。6.权利要求1至5中任一项所述方法，其中所述样品使用特异性针对各呼吸道病毒的遗传材料的多寡核苷酸进行扩增。7.权利要求1至5中任一项所述方法，其中所述各呼吸道病毒种类的遗传材料被扩增。8.权利要求1至7中任一项所述方法，其中所述扩增在分离的小瓶或容器内进行。9.权利要求1至8中任一项所述方法，其中所述扩增在对各呼吸道病毒种类相似的扩增条件下进行。10.权利要求1至9中任一项所述方法，其中所述各呼吸道病毒的扩增是同时进行的。11.权利要求1至7中任一项所述方法，其中所述对人类肠道病毒、鼻病毒、人类呼吸道合胞病毒和人类偏肺病毒的扩增在相同的小瓶或容器内进行。12.权利要求1至7中任一项所述方法，其中所述A型流感、副流感1型、副流感2型和副流感3型的扩增在相同的小瓶或容器内进行。13.权利要求1至7中任一项所述方法，其中所述冠状病毒SARS、冠状病毒229E/NL和冠状病毒0C-43的扩增在相同的小瓶或容器内进行。14.权利要求1至7中任一项所述方法，其中所述腺病毒、B型流感和副流感4型的扩增在相同的小瓶或容器内进行。15.权利要求11至14中任一项所述方法，其中所述扩增在相似的扩增条件下进行。16.权利要求11至15中任一项所述方法，其中所述扩增是同时进行的。17.权利要求3至16中任一项所述方法，其中所述引物对的组选自a)包含在SEQIDNO.78的5’端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.79的5’端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，b)包含在SEQIDNO.80的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.81的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，c)包含在SEQIDNO.82的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.83的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，d)包含在SEQIDNO.84的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.85的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，e)包含在SEQIDNO.:86的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.87的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，f)包含在SEQIDNO.88的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.89的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，g)包含在SEQIDNO.90的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.91的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，h)包含在SEQIDNO.92的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.93的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，，i)包含在SEQIDNO.94的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.95的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，j)包含在SEQIDNO.:96的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.97的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，k)包含在SEQIDNO.98的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.99的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，1)包含在SEQIDNO.:100的5’端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.101的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，m)包含在SEQIDNO.102的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.103的5’端有0至5个核苷酸添加或缺失的核酸，以及n)a)至m)中任意一种的组合。18.权利要求17所述的方法，其中所述人类肠道病毒、鼻病毒、人类呼吸道合胞病毒和人类偏肺病毒通过a)、b)和c)限定的组的引物对扩增。19.权利要求17所述的方法，其中所述A型流感、副流感1型、副流感2型和副流感3型通过d)、e)，f)和g)限定的组的引物对扩增。20.权利要求17所述的方法，其中所述冠状病毒SARS、冠状病毒229E/NL和冠状病毒0C-43通过h)、i)和j)限定的组的引物对扩增。21.权利要求17所述的方法，其中所述腺病毒、B型流感和副流感4型通过k)、1)和m)限定的组的引物对扩增。22.权利要求17至21中任一项所述的方法，其中所述探针能够特异性的结合到通过所述组的引物对扩增的PCR扩增子。23.权利要求5至22中任一项所述的方法，其中所述探针选自包含以下任意一种在其5’端和/或3’端有O至5个核苷酸添加、缺失，或者添加和缺失组合的核酸SEQIDNO.106，SEQIDNO.:107，SEQIDNO.:108，SEQIDNO.:109，SEQIDNO.:110，SEQIDNO.111，SEQIDNO.:112，SEQIDNO.:113，SEQIDNO.:114，SEQIDNO.:115，SEQIDNO.116,SEQIDNO.:117，SEQIDNO.:118，SEQIDNO.119,SEQIDNO.:120，SEQIDNO.:121，SEQIDNO.122,SEQIDNO.:123，SEQIDNO.124,SEQIDNO.125,SEQIDNO.:126，SEQIDNO.127,SEQIDNO.128,SEQIDNO.129,SEQIDNO.130,SEQIDNO.:131，SEQIDNO.:132，SEQIDNO.133,SEQIDNO.:134，SEQIDNO.:135，SEQIDNO.136,SEQIDNO.137，SEQIDNO.:138，SEQIDNO.:139，SEQIDNO.:140，SEQIDNO.:141，SEQIDNO.142，SEQIDNO.:143，SEQIDNO.:144，SEQIDNO.:145，SEQIDNO.:146，SEQIDNO.147，SEQIDNO.:148，SEQIDNO.:149，SEQIDNO.:150，SEQIDNO.:151，SEQIDNO.152，SEQIDNO.153,SEQIDNO.:154，SEQIDNO.:155，SEQIDNO.:156，SEQIDNO.:157，SEQIDNO.:158，SEQIDNO.159,SEQIDNO.160,SEQIDNO.:161，SEQIDNO.:162，SEQIDNO.:163，SEQIDNO.164,SEQIDNO.:165，SEQIDNO.166,SEQIDNO.:167，SEQIDNO.:168，SEQIDNO.169,SEQIDNO.170,SEQIDNO.:171，SEQIDNO.172,SEQIDNO.173，SEQIDNO.:174，SEQIDNO.:175，SEQIDNO.:176，SEQIDNO.:177，SEQIDNO.178，SEQIDNO.:179，SEQIDNO.:180，SEQIDNO.:181，SEQIDNO.:182，SEQIDNO.183，SEQIDNO.:184，SEQIDNO.:185，SEQIDNO.:186，SEQIDNO.:187，SEQIDNO.188，SEQIDNO.194,SEQIDNO.:195，SEQIDNO.196,SEQIDNO.:197，SEQIDNO.:198，SEQIDNO.:199,SEQIDNO.:200，SEQIDNO.:201，SEQIDNO.-.202,SEQIDNO.-.203,SEQIDNO.:204,SEQIDNO.-.205,SEQIDNO.-.206,SEQIDNO.-.207,SEQIDNO.:208，SEQIDNO.:209,SEQIDNO.-.210,SEQIDNO.:211，SEQIDNO.-.212,SEQIDNO.:213，SEQIDNO.:214,SEQIDNO.:225，SEQIDNO.226,SEQIDNO.:227，SEQIDNO.228,SEQIDNO.:229互补序列以及它们的组合。24.一种能够特异性的结合到基因的10至50个核苷酸长的寡核苷酸，所述基因选自(i)A型流感病毒的基质基因，(ii)B型流感病毒的基质基因，(iii)人类呼吸道合胞病毒的核衣壳基因，(iv)人类偏肺病毒的核衣壳基因，(ν)人类肠道病毒的5’-非编码区，(vi)鼻病毒的5’-非编码区，(vii)副流感病毒1型的融合基因，(viii)副流感病毒2型的融合基因，(ix)副流感病毒3型的融合基因，(χ)副流感病毒4型的融合基因，(xi)冠状病毒0C43的基质基因，(xii)冠状病毒NL的聚合酶基因，(xiii)冠状病毒229Ε的聚合酶基因，(xiv)冠状病毒SARS-CoV的聚合酶基因和(XV)与呼吸道感染相关的腺病毒血清型的六邻体区，其中所述寡核苷酸能够结合到一种呼吸道病毒的基因而非其他种类呼吸道病毒的基因。25.一种包含权利要求24所述的寡核苷酸的试剂盒。26.一种包含多种能够特异性结合到呼吸道病毒基因的10至50个核苷酸长的寡核苷酸的试剂盒，所述基因选自(i)A型流感病毒的基质基因，(ii)B型流感病毒的基质基因，(iii)人类呼吸道合胞病毒的核衣壳基因，(iv)人类偏肺病毒的核衣壳基因，(ν)人类肠道病毒的5’-非编码区，(vi)鼻病毒的5’-非编码区，(vii)副流感病毒1型的融合基因，(viii)副流感病毒2型的融合基因，(ix)副流感病毒3型的融合基因，(χ)副流感病毒4型的融合基因，(xi)冠状病毒0C43的基质基因，(xii)冠状病毒NL的聚合酶基因，(xiii)冠状病毒229E的聚合酶基因，(xiv)冠状病毒SARS-CoV的聚合酶基因和(xv)腺病毒的六邻体区，其中所述多种寡核苷酸能够在相似的扩增条件下扩增基因，或者能够在相似的杂交条件下与基因杂交。27.权利要求26所述的试剂盒，其中所述试剂盒包括多种用于特异性扩增人类肠道病毒、鼻病毒、人类呼吸道合胞病毒和人类偏肺病毒的寡核苷酸，其中提供的所述多种用于特异性扩增人类肠道病毒、鼻病毒、人类呼吸道合胞病毒和人类偏肺病毒的寡核苷酸在分离的容器内，各容器包含单一的寡核苷酸或各容器包含病毒特异性寡核苷酸引物对，或者提供的所述多种用于特异性扩增人类肠道病毒、鼻病毒、人类呼吸道合胞病毒和人类偏肺病毒的寡核苷酸在单个容器内，所述容器包含用于各基因扩增的寡核苷酸混合物。28.权利要求26或27所述的试剂盒，其中所述试剂盒包括多种用于特异性扩增A型流感、副流感1型、副流感2型和副流感3型的寡核苷酸，其中提供的所述多种用于特异性扩增A型流感、副流感1型、副流感2型和副流感3型的寡核苷酸在分离的容器内，各容器包含单一的寡核苷酸或各容器包含病毒特异性寡核苷酸引物对，或者提供的所述多种用于特异性扩增A型流感、副流感1型、副流感2型和副流感3型的多种寡核苷酸在单个容器内，所述容器包含用于各基因扩增的寡核苷酸混合物。29.权利要求26至28中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒包括多种用于特异性扩增冠状病毒SARS、冠状病毒229E/NL和冠状病毒0C-43的寡核苷酸，其中提供的所述多种用于特异性扩增冠状病毒SARS、冠状病毒229E/NL和冠状病毒0C-43的多种寡核苷酸在分离的容器内，各容器包含单一的寡核苷酸或各容器包含病毒特异性寡核苷酸引物对，或者提供的所述多种用于特异性扩增冠状病毒SARS、冠状病毒229E/NL和冠状病毒0C-43的多种寡核苷酸在单个容器内，所述容器包含用于各基因扩增的寡核苷酸混合物。30.权利要求25至29中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒包括多种用于特异性扩增腺病毒、B型流感和副流感4型的寡核苷酸，其中提供的所述多种用于特异性扩增腺病毒、B型流感和副流感4型的寡核苷酸在分离的容器内，各容器包含单一的寡核苷酸或各容器包含病毒特异性寡核苷酸引物对，或者提供的所述多种用于特异性扩增腺病毒、B型流感和副流感4型的寡核苷酸在单个容器内，所述容器包含用于各基因扩增的寡核苷酸混合物。31.权利要求26至30中任一项所述的试剂盒，进一步包括用于各呼吸道病毒基因扩增的寡核苷酸。32.权利要求26至31中任一项所述的试剂盒，进一步包括在分离的容器内或附着于固相载体的用于基因检测的寡核苷酸。33.一种寡核苷酸，其选自a)包含以下序列或由以下序列组成的寡核苷酸，所述序列选自SEQIDNO.78,SEQIDNO.79,SEQIDNO.80,SEQIDNO.:81，SEQIDNO.:82，SEQIDNO.:83，SEQIDNO.:84，SEQIDNO.:85,SEQIDNO.86,SEQIDNO.:87,SEQIDNO.88,SEQIDNO.89,SEQIDNO.90,SEQIDNO.:91，SEQIDNO.:92，SEQIDNO.:93，SEQIDNO.:94，SEQIDNO.-.95,SEQIDNO.96,SEQIDNO.:97，SEQIDNO.:98，SEQIDNO.99,SEQIDNO.:100，SEQIDNO.:101,SEQIDNO.:102和SEQIDNO.103；b)包含在a)的5’端有0至5个核苷酸添加的寡核苷酸，C)包含在a)的5’端有O至5个核苷酸缺失的寡核苷酸，以及d)以上任意一种的互补序列。34.权利要求33所述的寡核苷酸，其中所述核酸包括标记。35.权利要求34所述的寡核苷酸，其中所述标记位于寡核苷酸的5’端。36.一种包含至少两种权利要求33至36中任一项所述的寡核苷酸的寡核苷酸混合物。37.一种包括寡核苷酸对的寡核苷酸混合物，所述寡核苷酸对选自a)包含在SEQIDNO.78的5’端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.79的5’端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸；b)包含在SEQIDNO.80的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.81的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸；c)包含在SEQIDNO.:82的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.83的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸；d)包含在SEQIDNO.84的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.85的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸；e)包含在SEQIDNO.86的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.87的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸；f)包含在SEQIDNO.88的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.89的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸；g)包含在SEQIDNO.90的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.91的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸；h)包含在SEQIDNO.92的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.93的5’端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸；i)包含在SEQIDNO.94的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.95的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸；j)包含在SEQIDNO.96的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.97的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸；k)包含在SEQIDNO.98的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.99的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸；1)包含在SEQIDNO.:100的5’端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.101的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸；m)包含在SEQIDNO.:102的5，端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，和包含在SEQIDNO.103的5’端有O至5个核苷酸添加或缺失的核酸，以及n)a)至m)中任意一种的组合。38.一种用于特异性检测或扩增人类肠道病毒、鼻病毒、人类呼吸道合胞病毒和人类偏肺病毒的寡核苷酸混合物，所述混合物包括a)包含以下序列或由以下序列组成的寡核苷酸，所述序列选自SEQIDNO.:78，SEQIDNO.79,SEQIDNO.:80，SEQIDNO.:81，SEQIDNO.:82，SEQIDNO.83；b)包含在a)的5’端有0至5个核苷酸添加的寡核苷酸；c)包含在a)的5’端有0至5个核苷酸缺失的寡核苷酸，以及d)以上任意一种的互补序列。39.一种用于特异性检测或扩增A型流感、副流感1型、副流感2型和副流感3型的寡核苷酸混合物，所述混合物包括a)包含以下序列或由以下序列组成的寡核苷酸，所述序列选自SEQIDNO.:84，SEQIDNO.:85,SEQIDNO.:86，SEQIDNO.:87，SEQIDNO.88,SEQIDNO.:89，SEQIDNO.-.90,SEQIDNO.91；b)包含在a)的5’端有O至5个核苷酸添加的寡核苷酸，c)包含在a)的5’端有O至5个核苷酸缺失的寡核苷酸，以及d)以上任意一种的互补序列。40.一种包含用于特异性检测或扩增冠状病毒SARS-CoV、冠状病毒229E、冠状病毒NL和冠状病毒0C43的寡核苷酸混合物，所述混合物包括a)包含以下序列或由以下序列组成的寡核苷酸，所述序列选自SEQIDNO.:92，SEQIDNO.93,SEQIDNO.-.94,SEQIDNO.-.95,SEQIDNO.:96，SEQIDNO.97；b)包含在a)的5’端有0至5个核苷酸添加的寡核苷酸；c)包含在a)的5’端有0至5个核苷酸缺失的寡核苷酸，以及d)以上任意一种的互补序列。41.一种用于特异性检测或扩增腺病毒、B型流感和副流感4型的寡核苷酸混合物，所述混合物包括a)包含以下序列或由以下序列组成的寡核苷酸，所述序列选自SEQIDNO.:98，SEQIDNO.99,SEQIDNO.:100，SEQIDNO.:101，SEQIDNO.:102和SEQIDNO.103；b)包含在a)的5’端有0至5个核苷酸添加的寡核苷酸；c)包含在a)的5’端有0至5个核苷酸缺失的寡核苷酸，以及d)以上任意一种的互补序列。42.一种寡核苷酸，其选自a)具有以下序列或由以下序列组成的寡核苷酸，所述序列选自SEQIDNO.:106至SEQIDNO.:188，SEQIDNO.:194至SEQIDNO.:213，SEQIDNO.:214禾口SEQIDNO.:225至SEQIDNO.:229E；b)包含在a)的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加的核酸；c)包含在a)的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸缺失的核酸；d)包含在a)的5’端或3’端之一有0至5个核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一个有0至5个核苷酸缺失的核酸；以及e)以上任意一种的互补序列。43.权利要求42所述的寡核苷酸，其中所述核酸包括标记。44.权利要求43所述的寡核苷酸，其中所述标记位于核酸的5’或3’端。45.权利要求42至44中任一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能够结合到鼻病毒和/或肠道病毒的5’-非编码区，并且其中所述寡核苷酸选自a)具有以下序列或由以下序列组成的寡核苷酸，所述序列选自SEQIDNO.106,SEQIDNO.107,SEQIDNO.108，SEQIDNO.109,SEQIDNO.110，SEQIDNO.111，SEQIDNO.112,SEQIDNO.:113，SEQIDNO.:114，SEQIDNO.:115，SEQIDNO.:116，SEQIDNO.117，SEQIDNO.118,SEQIDNO.119，SEQIDNO.:120，SEQIDNO.194,SEQIDNO.195和SEQIDNO.196；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有0至5个核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一个有0至5个核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一种的互补序列。46.权利要求42至44中任一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能够结合到人类呼吸道合胞病毒，并且其中所述寡核苷酸选自a)具有以下序列或由以下序列组成的寡核苷酸，所述序列选自SEQIDNO.:121，SEQIDNO.122,SEQIDNO.123,SEQIDNO.124,SEQIDNO.125,SEQIDNO.126,SEQIDNO.127,SEQIDNO.:197，SEQIDNO.:198，SEQIDNO.:199和SEQIDNO.200；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有0至5个核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一个有0至5个核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一种的互补序列。47.权利要求42至44中任一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能够结合到人类偏肺病毒，并且其中所述寡核苷酸选自a)具有以下序列或由以下序列组成的寡核苷酸，所述序列选自SEQIDNO.:128，SEQIDNO.129,SEQIDNO.:130，SEQIDNO.:131，SEQIDNO.:132和SEQIDNO.133；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有0至5个核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一个有0至5个核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一种的互补序列。48.权利要求42至44中任一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能够结合到A型流感病毒，并且其中所述寡核苷酸选自a)具有以下序列或由以下序列组成的寡核苷酸，所述序列选自SEQIDNO.:134，SEQIDNO.135,SEQIDNO.136,SEQIDNO.137,SEQIDNO.138,SEQIDNO.139,SEQIDNO.140,SEQIDNO.:141，SEQIDNO.-.142,SEQIDNO.:143，SEQIDNO.:144，SEQIDNO.145,SEQIDNO.146,SEQIDNO.147,SEQIDNO.148,SEQIDNO.149,SEQIDNO.150，SEQIDNO.:151，SEQIDNO.-.152,SEQIDNO.-.201,SEQIDNO.-.202,SEQIDNO.(203，SEQIDNO.:204，SEQIDNO.-.205,SEQIDNO.:206，SEQIDNO.:207和SEQIDNO.208；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有0至5个核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一个有0至5个核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一种的互补序列。49.权利要求42至44中任一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能够结合到副流感1型，并且其中所述寡核苷酸选自a)具有以下序列或由以下序列组成的寡核苷酸，所述序列选自SEQIDNO.:153和SEQIDNO.154；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有0至5个核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一个有0至5个核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一种的互补序列。50.权利要求42至44中任一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能够结合到副流感2型，并且其中所述寡核苷酸选自a)具有以下序列或由以下序列组成的寡核苷酸，所述序列选自SEQIDNO.:155，SEQIDNO.156和SEQIDNO.157；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有0至5个核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一个有0至5个核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一种的互补序列。51.权利要求42至44中任一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能够结合到副流感3型，并且其中所述寡核苷酸选自a)具有以下序列或由以下序列组成的寡核苷酸，所述序列选自SEQIDNO.:158，SEQIDNO.209和SEQIDNO.225至229；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有O至5个核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一个有O至5个核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一种的互补序列。52.权利要求42至44中任一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能够结合到冠状病毒SARS-CoV，其中所述寡核苷酸选自a)具有以下序列或由以下序列组成的寡核苷酸，所述序列选自SEQIDNO.:159和SEQIDNO.160；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有O至5个核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有O至5个核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有O至5个核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一个有O至5个核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一种的互补序列。53.权利要求42至44中任一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能够结合到冠状病毒229E，其中所述寡核苷酸选自a)具有以下序列或由以下序列组成的寡核苷酸，所述序列选自SEQIDNO.161；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有O至5个核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有O至5个核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有O至5个核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一个有O至5个核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一种的互补序列。54.权利要求42至44中任一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能够结合到冠状病毒NL，其中所述寡核苷酸选自a)具有以下序列或由以下序列组成的寡核苷酸，所述序列选自SEQIDNO.162；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有O至5个核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有O至5个核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有O至5个核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一个有O至5个核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一种的互补序列。55.权利要求42至44中任一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能够结合到冠状病毒0C43，其中所述寡核苷酸选自a)具有以下序列或由以下序列组成的寡核苷酸，所述序列选自SEQIDNO.:163和SEQIDNO.164；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有O至5个核苷酸添加的寡核苷酸；C)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有O至5个核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有O至5个核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一个有O至5个核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一种的互补序列。56.权利要求42至44中任一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能够结合到腺病毒，其中所述寡核苷酸选自a)具有以下序列或由以下序列组成的寡核苷酸，所述序列选自SEQIDNO.:165，SEQIDNO.166,SEQIDNO.167,SEQIDNO.168,SEQIDNO.:169，SEQIDNO.170,SEQIDNO.171,SEQIDNO.:172，SEQIDNO.:173，SEQIDNO.:174，SEQIDNO.:175，SEQIDNO.:176,SEQIDNO.:177和SEQIDNO.178；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有0至5个核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一个有0至5个核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一种的互补序列。57.权利要求42至44中任一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能够结合到B型流感病毒，其中所述寡核苷酸选自a)具有以下序列或由以下序列组成的寡核苷酸，所述序列选自SEQIDNO.:179，SEQIDNO.180,SEQIDNO.181，SEQIDNO.182,SEQIDNO.183,SEQIDNO.210，SEQIDNO.211,SEQIDNO.-.212,SEQIDNO.:213和SEQIDNO.214；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有0至5个核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一个有0至5个核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一种的互补序列。58.权利要求42至44中任一项所述的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸能够结合到副流感病毒4型，其中所述寡核苷酸选自a)具有以下序列或由以下序列组成的寡核苷酸，所述序列选自SEQIDNO.:184，SEQIDNO.185，SEQIDNO.186，SEQIDNO.187和SEQIDNO.188；b)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸添加的寡核苷酸；c)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端和/或3’端有0至5个核苷酸缺失的寡核苷酸；d)其中所述寡核苷酸包含在a)的5’端或3’端之一有O至5个核苷酸添加，而在a)的5’端或3’端的另一个有O至5个核苷酸缺失的寡核苷酸，以及e)以上任意一种的互补序列。59.一种包含至少一种权利要求45、46和47中任一项所述寡核苷酸的寡核苷酸组合，其中所述各寡核苷酸在分离的容器内提供或者附着于固相载体上的特异性位点。60.一种包含至少一种权利要求48、49、50和51中任一项所述寡核苷酸的寡核苷酸组合，其中所述各寡核苷酸在分离的容器内提供或者附着于固相载体上的特异性位点。61.一种包含至少一种权利要求52、53、54和55中任一项所述寡核苷酸的寡核苷酸组合，其中所述各寡核苷酸在分离的容器内提供或者附着于固相载体上的特异性位点。62.一种包含至少一种权利要求56、57和58中任一项所述寡核苷酸的寡核苷酸组合，其中所述各寡核苷酸在分离的容器内提供或者附着于固相载体上的特异性位点。63.一种包含至少一种权利要求45至58中任一项所述寡核苷酸的寡核苷酸组合，其中所述各寡核苷酸在分离的容器内提供或者附着于固相载体上的特异性位点。64.一种包含至少两种权利要求33至35、42至57或58中任一项所述寡核苷酸的寡核苷酸文库。65.权利要求64所述的寡核苷酸文库，其中所述各寡核苷酸在分离的容器内提供或者附着于固相载体。66.一种包含固相基底和多种附着于固相基底的位置可识别的探针的阵列，其中所述各探针包含不同的核酸序列，并且能够特异性结合到(i)A型流感病毒的基质基因，(ii)B型流感病毒的基质基因，(iii)人类呼吸道合胞病毒的核衣壳基因，(iv)人类偏肺病毒的核衣壳基因，(ν)人类肠道病毒的5’-非编码区，(vi)鼻病毒的5’-非编码区，(vii)副流感病毒1型的融合基因，(viii)副流感病毒2型的融合基因，(ix)副流感病毒3型的融合基因，(χ)副流感病毒4型的融合基因，(xi)冠状病毒OC43的基质基因，(xii)冠状病毒NL的聚合酶基因，(xiii)冠状病毒229E的聚合酶基因，(xiv)冠状病毒SARS-CoV的聚合酶基因和(XV)与呼吸道感染相关的腺病毒血清型的六邻体区，所述各探针各自包含10至50个核苷酸。67.一种阵列，其包括a)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失O至5个核苷酸SEQIDNO.106,SEQIDNO.107,SEQIDNO.108,SEQIDNO.:109，SEQIDNO.110,SEQIDNO.:111，SEQIDNO.:112，SEQIDNO.:113，SEQIDNO.:114，SEQIDNO.115,SEQIDNO.116,SEQIDNO.:117，SEQIDNO.118,SEQIDNO.:119，SEQIDNO.120，SEQIDNO.:194，SEQIDNO.:195和SEQIDNO.:196或者它们的互补序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；b)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失0至5个核苷酸SEQIDN0.121,SEQIDNO.-.122,SEQIDNO.123,SEQIDNO.-.124,SEQIDNO.:125,SEQIDNO.-.126,SEQIDNO.-.127,SEQIDNO.-.197,SEQIDNO.:198，SEQIDNO.199和SEQIDNO.200或者它们的互补序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；c)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失0至`5个核苷酸SEQIDNO.128,SEQIDNO.129,SEQIDNO.130,SEQIDNO.131,SEQIDNO.:132和SEQIDNO.:133或者它们的互补序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；d)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失O至5个核苷酸SEQIDNO.134,SEQIDNO.135,SEQIDNO.`136,SEQIDNO.:137，SEQIDNO.:138,SEQIDNO.:139，SEQIDNO.:140，SEQIDNO.:141，SEQIDNO.-.142,SEQIDNO.`143,SEQIDNO.144,SEQIDNO.:145，SEQIDNO.146,SEQIDNO.147,SEQIDNO.148，SEQIDNO.:149，SEQIDNO.:150，SEQIDNO.:151，SEQIDNO.-.152,SEQIDNO.201，SEQIDNO.-.202,SEQIDNO.-.203,SEQIDNO.-.204,SEQIDNO.-.205,SEQIDNO.206，SEQIDNO.:207和SEQIDNO.:208或者它们的互补序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或`3’端；e)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失0至5个核苷酸SEQIDNO.:153和SEQIDNO.:154或者它们的互补序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；f)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失0至5个核苷酸SEQIDNO.155,SEQIDNO.:156和SEQ`IDNO.:157或者它们的互补序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；g)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失0至5个核苷酸SEQIDNO.:158，SEQIDNO.209和SEQ`IDNO.:225，SEQIDNO.:226，SEQIDNO.227,SEQIDNO.228和SEQIDNO.:229或者它们的互补序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；h)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失0至5个核苷酸SEQIDNO.:159和SEQIDNO.:160或者它们的互补序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；i)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失0至5个核苷酸SEQIDNO.:161或者其互补序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；j)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失0至5个核苷酸SEQIDNO.:162或者其互补序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；k)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失0至5个核苷酸SEQIDNO.:163和SEQIDNO.:164或者它们的互补序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；1)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失0至5个核苷酸SEQIDNO.165,SEQIDNO.:166，SEQIDNO.`167,SEQIDNO.168,SEQIDNO.:169,SEQIDNO.-.170,SEQIDNO.:171，SEQIDNO.-.172,SEQIDNO.-.173,SEQIDNO.174,SEQIDNO.175,SEQIDNO.176,SEQIDNO.:177和SEQIDNO.:178或者它们的互补序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；m)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失0至`5个核苷酸SEQIDNO.179,SEQIDNO.180,SEQIDNO.181,SEQIDNO.182,SEQIDNO.:183,SEQIDNO.:210，SEQIDNO.:211，SEQIDNO.-.212,SEQIDNO.:213禾口SEQIDNO.214或者它们的互补序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；η)至少一种选自寡核苷酸的元件，所述寡核苷酸包含将以下序列添加和/或缺失O至5个核苷酸SEQIDNO.:184，SEQIDNO.:185，SEQIDNO.:186，SEQIDNO.:187和SEQIDNO.:188或者它们的互补序列，并且其中所述的添加和/或缺失位于核酸序列的5’端和/或3’端；其中所述各寡核苷酸附着于固相载体，并且其中所述各寡核苷酸位于可寻址的位置。68.一种用于诊断有需要的个体呼吸道感染的方法，所述方法包括用能够与呼吸道病毒种类的遗传材料特异性结合的寡核苷酸检测从个体获得的样品中病原体的存在或不存在，所述呼吸道病毒种类选自(i)A型流感病毒，(ii)B型流感病毒，(iii)人类呼吸道合胞病毒，(iv)人类偏肺病毒，(ν)人类肠道病毒，(vi)鼻病毒，(vii)副流感病毒1型，(viii)副流感病毒2型，(ix)副流感病毒3型，(χ)副流感病毒4型，(xi)冠状病毒0C43，(xii)冠状病毒NL，(xiii)冠状病毒229E，(xiv)冠状病毒SARS-CoV和(xv)与呼吸道感染相关的腺病毒血清型，其中所述病原体的存在是与病原体相关的呼吸道感染的指征。69.权利要求68所述的方法，其中所述病原体的存在或不存在通过检测来自呼吸道病毒种类的遗传材料确定，其中所述遗传材料选自(i)A型流感病毒的基质基因，(ii)B型流感病毒的基质基因，(iii)人类呼吸道合胞病毒的核衣壳基因，(iv)人类偏肺病毒的核衣壳基因，(ν)人类肠道病毒的5’-非编码区，(vi)鼻病毒的5’-非编码区，(vii)副流感病毒1型的融合基因，(viii)副流感病毒2型的融合基因，(ix)副流感病毒3型的融合基因，(χ)副流感病毒4型的融合基因，(xi)冠状病毒0C43的基质基因，(xii)冠状病毒NL的聚合酶基因，(xiii)冠状病毒229E的聚合酶基因，(xiv)冠状病毒SARS-CoV的聚合酶基因和(xv)腺病毒的六邻体区以及它们的组合。70.一种用于检测和/或鉴别呼吸道病毒的方法，包括将包含或被怀疑包含源自呼吸道病毒的遗传材料的样品与权利要求24至58中任一项所限定的寡核苷酸或寡核苷酸混合物在杂交、扩增和/或检测的合适条件下相接触。71.权利要求70所述的方法，其中所述扩增是在相似的扩增条件下进行的。72.权利要求70所述的方法，其中所述检测是在相似的检测条件下进行的。全文摘要本发明涉及检测的方法，以及用于15种临床重要的呼吸道病毒的特异性检测的化验、试剂和试剂盒，所述呼吸道病毒包括A型和B型流感病毒、人类呼吸道合胞病毒、人类偏肺病毒、人类肠道病毒、鼻病毒的全部血清型、腺病毒的7种血清型、副流感病毒1、2、3和4型，以及冠状病毒NL、229E、OC43和SARS-CoV。本发明使得在单次化验中检测这些各种呼吸道病毒。文档编号C07H21/04GK101801993SQ200880107417公开日2010年8月11日申请日期2008年7月17日优先权日2007年7月17日发明者E·勒布朗,G·博伊文,J·弗雷奈特,M·G·伯杰龙,M·伯西诺特,N·迪翁申请人:拉瓦勒大学