食蟹猴Toll样受体3的制作方法

专利名称：食蟹猴Toll样受体3的制作方法
技术领域：
本发明涉及食蟹猴Toll样受体3(Cyn0TLR;3)及其用途。
背景技术：
宿主免疫系统对微生物抗原的识别是通过先天免疫受体介导的，先天免疫受体的 活化代表炎症反应的引发的重要步骤。Toll样受体(TLR)属于先天免疫受体家族，其在介 导对外来抗原的免疫反应方面具有重要的作用。TLR3为病原体相关分子模式识别受体， 其可以识别双链RNA(dsRNA)以及合成的dsRNA类似物聚-核糖肌苷酸-核糖胞苷酸(聚 (I:C))。参见(例如)Alexopoulou et al. ,413 Nature 732 Q001) (Alexopoulou 等人， 《自然》，第413卷第732页，2001年)。此外，已证实TLR3可识别内源性配体(例如坏死细 胞释放的mRNA)，表明炎症部位处的坏死细胞死亡可能有助于TLR3的活化。参见(例如) Kariko et al. ,26 T. Biol. Chem. 12542 (2004) (Kariko 等人，《生物化学杂志》，第洸卷第 12542 页，2004 年)。dsRNA或聚(I:C)配体对TLR3的活化可引起促炎细胞因子和趋化因子的分泌，并 可以调节感染相关炎症期间的疾病转归。重要的是，TLR3体内活化在病毒感染或与炎症相 关的坏死的情况下发生。参见 Tabeta et al.，101 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 3516(2004) (Tabeta等人，《美国国家科学院院刊》，第101卷第3516页，2004年)；还可参见Kariko etal. ,26 T. Biol. Chem. 12542 (2004) (Kariko 等人，《生物化学杂志》，第洸卷第 12542 页， 2004年)。例如，人TLR3肽链在需要控制HSV-I病毒感染的中枢神经系统(CNQ中表达，该 病毒通过颅神经从上皮扩散至中枢神经系统，在TLR3缺陷患者中引起单纯疱疹性脑炎。参 见(例如)Zhang et al.，317 Science 1522(2007) (Zhang 等人，《科学》，第 317 卷第 1522 页，2007年)。此外，人TLR3肽链活化可导致与诸如肝脏组织的原发性胆汁性肝硬化的病 理状况相关的炎症反应。参见(例如)Takii et al. ,85 Lab. Invest. 836(2005) (Takii等 人，《实验室研究》，第85卷第836页，2005年)。总的来说，这些资料证明TLR3的活化可引发磷酸化和转录活化事件的级联，进 而导致有助于先天免疫的多种炎性细胞因子的生成(参见Takeda and Akira, J. Derm. Sci. 34 :73-82(2004) (Takeda 和 Akira，《皮肤病学》，第 34 卷第 73-82 页，2004 年)的综 述)。另外，这些资料表明持续的TLR3活化是感染相关炎症疾病的调控中的关键部分。 公布的资料为这个假说提供了进一步支持，研究结果显示，促炎细胞因子的过量生产与全 身炎症反应综合征、感染相关急性细胞因子风暴(参见Van Amersfoort et al. , Clin. Microbiol. Rev. 16 :379-414(2003) (Van Amersfoort 等人，《临床微生物学评论》，第 16 卷 第379-414页，2003年)的综述)和免疫介导的慢性病(如类风湿性关节炎)(参见Miossec et al.，Curr. Opin. Rheumatol. 16 :218-222(2004) (Miossec 等人，《风湿病学近期评述》， 第16卷第218-222页，2004年)的综述)以及炎性肠疾病(参见Ogata and Hibi，Curr. Pharm. Des. 9 1107-1113 (2003) (Ogata 和 Hibi，《当今制药》，第 9 卷第 1107-1113 页，2003 年)的综述)有关。
目前，已采取以TLR3活化为目标的多种不同治疗方法来治疗不同的适应症。这些 TLR3治疗剂包括基于人肽链的TLR3治疗剂、TLR3的单克隆抗体拮抗剂和TLR3配体激动剂 (如dsRNA、聚(I:C))以及以TLR3活性为目标的这些治疗剂的功能类似物。基于单克隆抗 体拮抗剂的TLR3治疗剂的可能适应症包括炎性病症、败血病、炎性肠疾病、炎性肺部疾病 以及自身免疫疾病。作为激动剂的TLR3治疗剂的可能适应症和用途包括病毒感染后疲劳 综合征、神经胶质瘤、前列腺癌、抗病毒疫苗、膀胱癌、宫颈不典型增生、人乳头状瘤病毒感 染、乳腺癌、病毒感染预防、组织再生以及禽流感疫苗。任何供人类使用的TLR3治疗剂在投入市场之前都需要进行大量的安全性测试。 此类安全性测试将涉及TLR3治疗剂的动物模型体内安全性测试以及体外测试。例如，基于 抗体的TLR3治疗剂可能需要生成由特定模型动物表达的抗TLR3肽的替代抗体，以及对这 种替代抗体进行有效的体外表征。这种替代品生成和体外表征将需要使用来自合适的模型 动物的TLR3多核苷酸和肽链。重要的是，鉴定用于这种安全性测试的合适动物模型需要鉴 定能够表达与人TLR3 (序列标识号1 有高度同一性和同源性的TLR3的动物种类。因此，需要鉴定编码能够在适于进行TLR3治疗剂安全性测试的动物模型中表达 TLR3s和TLR3肽链的多核苷酸。还需要相关的方法，例如表达肽链的方法以及在被确定为 适合进行TLR3治疗剂安全性评估的动物模型中测试TLR3治疗剂的安全性的方法。


图1示出了编码全长cyn0TLR3肽链的多核苷酸(序列标识号21)编码序列的特 征图。图2示出了全长cyn0TLR3肽链(序列标识号2)的特征图。

发明内容
本发明的一个方面是包含具有序列标识号1中所示序列或其互补序列的多核苷 酸的分离多核苷酸。本发明的另一个方面是包含具有序列标识号2中所示序列或其互补序列的多核 苷酸的分离多核苷酸。本发明的另一个方面是包含具有序列标识号3中所示序列或其互补序列的多核 苷酸的分离多核苷酸。本发明的另一个方面是包含具有序列标识号4中所示序列或其互补序列的多核 苷酸的分离多核苷酸。本发明的另一个方面是包含具有序列标识号5中所示序列或其互补序列的多核 苷酸的分离多核苷酸。本发明的另一个方面是包含分离多核苷酸的载体，其中分离多核苷酸具有选自序 列标识号1、2、3、4、5、6和7中所示的序列的序列。本发明的另一个方面是包含具有序列标识号8中所示序列的肽链的分离肽链。本发明的另一个方面是包含具有序列标识号9中所示序列的肽链的分离肽链。本发明的另一个方面是包含具有序列标识号10中所示序列的肽链的分离肽链。本发明的另一个方面是包含具有序列标识号11中所示序列的肽链的分离肽链。
本发明的另一个方面是表达肽链的方法，所述方法包括以下步骤提供编码包含 序列标识号8、序列标识号9、序列标识号10或序列标识号11中所示序列的至少一条多肽 的RNA ；提供无细胞表达系统的组分；由提供的RNA启动无细胞表达；以及确认包含序列标 识号8、序列标识号9、序列标识号10或序列标识号11中所示序列的至少一条肽链的表达。本发明的另一个方面是确定TLR3治疗剂是否会引起不良事件的方法，所述方法 包括提供TLR3治疗剂、第一食蟹猴和第二食蟹猴；给第一食蟹猴施用TLR3治疗剂；以及对 比第二食蟹猴确定第一食蟹猴是否呈现有害症状，如果第一食蟹猴呈现有害症状，则表明 TLR3治疗剂是不安全的，如果第一食蟹猴没有呈现有害症状，则表明TLR3治疗剂是安全 的。
具体实施例方式本说明书中所引用的所有出版物(包括但不限于专利和专利申请)均以引用方式 并入本文，如同在本文中完整呈现。说明书和权利要求书中所用的“一”、“该”和“所述”等单数形式包括复数指代，除 非上下文清楚表明并非如此。因此，例如提及“一条肽链”是指一条或多条肽链并包括本领 域技术人员已知的其等同物。除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语的含义与本发明所属领域的 普通技术人员通常所理解的含义相同。本文描述了示例性的组合物和方法，不过类似或等 同于本文所述的组合物和方法的任何组合物和方法都可用于本发明实践或测试。本发明提供了分离的食蟹猴(Macacafascicularis)iToll 样受体 3 (cynoTLR3) 多核苷酸、包含这些多核苷酸的载体、离体的宿主细胞、可由这些多核苷酸的表达获得的肽 链、表达本发明肽链的方法，并公开了它们的用途。TLR3是病原体相关分子模式(PAMP)识别受体的Toll样受体家族的成员。 TLR3通过双链RNA的结合而被活化。双链RNA(dsRNA)在病毒感染、由其他生物体引起 和由细胞损伤或坏死引起的感染期间产生。参见(例如)Kariko et al. ,279 J. Biol. Chem. 12542 (2004) (Kariko等人，《生物化学杂志》，第279卷第12542页，2004年)；还可参 见 Alexopoulou et al. ,413 Nature 732 Q001) (Alexopoulou 等人，《自然》，第 413 卷第 732页，2001年)。TLR3响应病毒感染相关的dsRNA或其他来源产生的dsRNAs的探测而被 活化，会引起NF-kB的活化，从而提高具有抗病毒和免疫系统刺激功能的I型干扰素的生 产。参见(例如)Takeda and Akira,5 Cell. Micro. 143,144(2003) (Takeda 和 Akira，《细 胞微生物学》，第5卷第143-144页，2003年)。在病毒感染情况下TLR3活化的结果是刺激 先天和体液免疫系统的抗病毒防御。例如，人TLR3肽链在需要控制HSV-I病毒感染的中枢 神经系统(CNQ中表达，该病毒通过颅神经从上皮扩散至中枢神经系统，在TLR3缺陷患者 中引起单纯疱疹性脑炎。参见(例如)Zhang et al. ,317 Science 1522 (2007) (Zhang等 人，《科学》，第317卷第1522页，2007年)。然而，在其他情况下，人TLR3肽链活化可导致 与诸如肝脏组织的原发性胆汁性肝硬化的病理状况相关的炎症反应。参见(例如)Takii et al.，85Lab. Invest. 836(2005) (Takii 等人，《实验室研究》，第 85 卷第 836 页，2005 年)。 重要的是，全长cynoTLR3肽链序列(序列标识号10)与得到很好表征的人TLR3肽链(序 列标识号13)有95. 7%同一性和96. 8%相似性。
本发明的组合物和方法可用于多种具体应用。本发明的多核苷酸和载体是可用 的，因为它们编码食蟹猴(Macaca fascicularis) TLR3 (cynoTLR3)肽链，可以用来表达这些 肽链。继而这些CynoTLR3肽链也是可用的，因为当它们经重组法过量表达时或由其他方法 导入宿主动物或组织中时，它们可用于在暴露于dsRNA或其他TLR3配体后提高或控制抗病
毒反应。包含cyn0TLR3胞外域的肽链也可以用作配体接收型拮抗剂(ligandsink type antagonist)，其可以结合TLR3活化所需的可得到的TLR3配体或TLR3相关蛋白质，从而 控制TLR3活性。还可以用cyn0TLR3肽链产生治疗性抗体，以用于对CynoTLR3或来自其 他来源的TLR3的活性进行正调控或负调控。这是所期望的，因为激动型治疗性抗体可用 于提高cyn0TLR3或其他TLR3的活化，以帮助控制感染，而拮抗型治疗性抗体可用于降低 cynoTLR3或其他TLR3的活化，以帮助控制与TLR3受体活化所介导的炎症反应相关的病理 状况。cyn0TLR3肽链还可以用于体外或体内测定，以鉴定能够调控CyntoTLR3或其他TLR3 的活性的其他治疗剂(如小分子)。本发明所公开的表达方法是可用的，因为这些方法使得 可以表达cyn0TLR3肽。本发明所公开的其他方法也是可用的，因为它们使得可以对TLR3 治疗剂进行安全性评估。术语“多核苷酸”是指包含由糖-磷酸主链或其他等同的共价化学方式所共价连 接的核碱基链的分子。双链DNA和单链DNA以及双链RNA和单链RNA是多核苷酸的典型例子。术语“互补序列”是指反向平行于第一分离多核苷酸序列并包含与第一多核苷酸 序列中的核碱基互补的核碱基的第二分离多核苷酸序列。通常，当这种“互补序列”在适当 的条件下与第一分离多核苷酸序列结合时，能够形成双链多核苷酸分子，例如双链DNA或 双链RNA。术语“载体”是指能够在生物系统内复制或可以在此类系统间移动的多核苷酸。载 体多核苷酸通常含有诸如复制起点或选择标记之类的元件，其功能是促进这些多核苷酸在 生物系统中的复制或保持。此类生物系统的例子可包括细胞、病毒、动物、植物和用能够复 制载体的生物组分再造的生物系统。包含载体的多核苷酸可以是DNA或RNA分子或这些分 子的杂合体。术语“表达载体”是指可用于在生物系统或再造生物系统中指导由存在于表达载 体中的多核苷酸序列所编码的肽链的翻译的载体。术语“肽链”是指包含至少两个由肽键连接形成链的氨基酸残基的分子。超过50 个氨基酸的大肽链可以称为“多肽”或“蛋白质”。不到50个氨基酸的小肽链可以称为“肽”。术语“抗体”是指包含多克隆抗体、单克隆抗体的免疫球蛋白或抗体分子，包括鼠、 人、人源化和嵌合单克隆抗体以及抗体片段、部分或变体。抗体是由血浆细胞组成性表达和 分泌的分泌蛋白质。抗体可以为任何同种型，例如IgG、IgA或IgM，并可以包含抗体片段， 例如Fab片段。抗体也可以是特异性结合两个不同的肽链表位的双特异性抗体。可以用永生化的血浆细胞产生抗体，血浆细胞的永生化可通过标准方法(例如杂 交瘤生成)或通过将抗体重链和/或轻链基因转染到永生化B细胞(例如骨髓瘤细胞)或 其他细胞类型(例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、植物细胞和昆虫细胞)中来进行。本文所用的术语“单克隆抗体”(mAb)是指从基本上同种的抗体的群体所获得的抗体(或抗体片段)。单克隆抗体具有高度特异性，其通常针对单一抗原决定簇。修饰语 “单克隆”表示抗体的基本上同种的性质，并不要求用任何特定方法产生抗体。例如，鼠单 克隆抗体可以用Kohler的杂交瘤方法制备，参见Kohler et al. ,256 Nature 495(1975) (Kohler等人，《自然》，第256卷第495页，1975年)。可以用美国专利No. 4，816，567中所 公开的方法制备这样的嵌合单克隆抗体，其包含衍生自供体抗体(通常为鼠科动物)的轻 链和重链可变区和与之相结合的衍生自受体抗体(通常为另一种哺乳类物种，如人类)的 轻链和重链恒定区。可通过Queen等人所公开的技术获得这样的人源化单克隆抗体，其具 有衍生自非人类供体免疫球蛋白(通常为鼠科动物)的CDR，且其分子的剩余免疫球蛋白衍 生部分衍生自一种或多种人免疫球蛋白，并任选地具有经改变的骨架支撑残基以保持结合 亲和力，参见 Queen et al. ,86 Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 10029 (1989) (Queen 等人，《美 国国家科学院院刊》，第86卷第100 页，1989年)和Hodgson et al. ,9Bio/Technology 421 (1991) (Hodgson等人，《生物技术》，第9卷第421页，1991年)中所公开的技术获得。可用于人源化的示例性人抗体骨架序列在(例如)以下网址和文献中公开書 ncbi. nlm. nih. gov/ent rez/query, fcgi ；www. ncbi. nih. gov/igblast ；www. atcc. org/ phage/hdb. html ；www. mrc-cpe. cam. ac. uk/ALIGNMENTS. php ；www.kabatdatabase. com/ top.html ；ftp.ncbi.nih. gov/repository/kabat ；www.sciquest. com ；www.abeam, com ； www.antibodyresource, com/onlinecomp. html ；www. public, iastate. edu/ pedro/ research_tools. html ；www. whfreeman. com/immunology/CH05/kuby05. htm ；www. hhmi. org/grants/lectures/1996/vlab ；www. path. cam. ac. uk/ mrc7/mikeimages. html ； mcb.harvard.edu/BioLinks/Immunology, html ；www. immunologylink. com ；pathbox. wustl. edu/ hcenter/index, html ；www. appliedbiosystems, com ；www. nal. usda. gov/ awic/pubs/antibody ；www.m. ehime-u. ac. jp/ yasuhito/Elisa. html ；www. biodesign. com ；www. cancerresearchuk. org ；www. biotech. uf 1. edu ；www. isac-net. org ；baserv. uci. kun. nl/ jraats/linksl. html ；www. recab. uni-hd. de/immuno. bme. nwu. edu ；www. mrc-cpe. cam. ac. uk ； www. ibt. unam. mx/vir/V—mice, html ；http: //www. bio inf. org. uk/ abs ；antibody, bath. ac. uk ；www. unizh. ch ；www. cryst. bbk. ac. uk/ ubcg07s ；www. nimr. mrc. ac. uk/CC/ccaewg/ccaewg. html ；www. path. cam. ac. uk/ mrc7/humanisation/ TAHHP. html ；www. ibt. unam. mx/vir/structure/stat_aim. html ；www. biosci. missouri. edu/smithgp/index, html ；www. jerini. de ；以及 Kabat et al Sequences of Proteins of Immunological Interest^. S. Dept. Health (1987) (Kabat 等人，《免疫学相关蛋白质序 列》，美国卫生部，1987年)，以上网址公幵内容和文献全文均以引用方式并入本文中。缺乏任何非人序列的完全人单克隆抗体可以通过(例如)以下文献中提及的技术 从人免疫球蛋白转基因小鼠制备Lonberg et al.，368Nature 856 (1994) (Lonberg等人， 《自然》，第 368 卷第 856 页，1994 年)；Fishwild et al.，14 Nature Biotech. 845(1996) (Fishwild等人，《自然生物技术》，第14卷第845页，1996年)和Mendez et al.，15 Nature Genetics 146 (1997) (Mendez等人，《自然遗传学》，第15卷第146页，1997年)。人单克隆抗 体也可以通过(例如)以下文献中提及的技术从噬菌体展示文库制备和优化Knappik et al.，296 .丁. Mol. Biol. 57 (2000) (Knappik 等人，《分子生物学杂志》，第 296 卷第 57 页，2000 年)和 Krebs et al. ,254 J. Immunol. Meth. 67 (2001) (Krebs 等人，《免疫学方法杂志》，第254卷第67页，2001年)。抗体分子或制品当相对于结合第二非相同抗原而言以更高的亲和力和以特异性 方式而不是非特异性方式结合给定抗原时，则它“特异性结合”这个给定抗原。换句话说， 抗体分子或制品的“特异性结合”可用于区分两种不同的肽链。“片段”是具有包含本发明任何肽链的任何氨基酸序列的一部分(而不是全部)的 氨基酸序列的肽链。片段可以包括(例如)具有与信号肽、胞外域、跨膜域或胞质域对应 的一部分氨基酸序列的截短肽链，或它们的变体，例如包括异源氨基和/或羧基末端氨基 酸序列的连续一系列残基。还包括由宿主细胞产生或在宿主细胞中产生的本发明肽链的降 解形式。其他示例性片段可通过结构或功能特性来表征，例如包含α-螺旋或α-螺旋形 成区、折叠或折叠形成区、转角或转角形成区、卷曲或卷曲形成区、亲水区、疏水区、 α -两亲区、β -两亲区、柔性区、表面形成区、底物结合区、胞外区和高抗原指数区的片段。 重要的是，本发明的肽链可以以片断的形式使用或提供。“变体肽链”是其中已经相对于第一肽链作出了氨基酸置换、插入、缺失或其组合 的第二肽链。天然存在的、修饰的或非典型的氨基酸可用于置换和插入。相对于具有序列 标识号11中所示氨基酸序列的肽链，序列标识号8和序列标识号9所描述的肽链是示例性 变体肽链。“变体多核苷酸”是其中已相对于第一多核苷酸序列作出了核酸残基置换、插入、 缺失或其组合的第二多核苷酸。天然存在的或修饰的核碱基可用于置换和缺失。相对于具 有序列标识号4中所示氨基酸序列的多核苷酸，序列标识号1、序列标识号2、序列标识号3 和序列标识号5所描述的多核苷酸是示例性变体多核苷酸。术语“TLR3治疗剂”是指据信可提供治疗效果和据信部分地通过TLR3的活性提供 该治疗效果的分子或制品。此类TLR3可以包含本发明的肽链。TLR3治疗剂的例子包括已 知的TLR3配体(例如dsRNA或聚(I C))，其可结合并活化TLR3，以产生提高的抗病毒活性 和免疫系统刺激的治疗效果。术语“有害症状”是指动物所呈现的任何表明发生了对该动物的伤害的症状。本发明的一个方面是包含具有序列标识号1中所示序列或其互补序列的多核苷 酸的分离多核苷酸。序列标识号1中所示的多核苷酸序列编码包含cynoTLR3胞外域预测 成熟形式的肽链。本发明的多核苷酸可以通过化学合成产生，例如在自动化多核苷酸合成仪上进行 的固相多核苷酸合成。作为另外一种选择，本发明的多核苷酸可以通过其他技术产生，如基 于PCR的复制、基于载体的复制或基于限制性内切酶的DNA操作技术。产生或获得具有给 定的已知序列的多核苷酸的技术是本领域熟知的。本发明的多核苷酸还可以包含至少一个非编码序列，例如转录但不翻译的序列、 终止信号、核糖体结合位点、mRNA稳定序列、内含子和聚腺苷酸化信号。多核苷酸序列还可 以包含编码另外氨基酸的另外序列。这些另外的多核苷酸序列可以(例如)编码标记或 标签序列(例如六组氨酸肽)，如 Gentz et al. ,86 Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 821 (1989) (Gentz等人，《美国国家科学院院刊》，第86卷第821页，1989年)中所述，或编码HA肽标 签，如 Wilson et al. ,37 Cell 767 (1984) (Wilson 等人，《细胞》，第 37 卷第 767 页，1984 年)中所述，这些标签有利于融合多肽的纯化。
本发明的另一个方面是包含具有序列标识号2中所示序列或其互补序列的多核 苷酸的分离多核苷酸。序列标识号2中所示的多核苷酸序列编码包含不带氨基末端甲硫氨 酸残基的预测CynoTLR3信号肽以及胞外域的肽链。本发明的另一个方面是包含具有序列标识号3中所示序列或其互补序列的多核 苷酸的分离多核苷酸。序列标识号3中所示的多核苷酸序列编码包含cyn0TLR3胞外域预 测成熟形式、跨膜域和胞质域的肽链。本发明的另一个方面是包含具有序列标识号4中所示序列或其互补序列的多核 苷酸的分离多核苷酸。序列标识号4中所示的多核苷酸序列编码包含不带氨基末端甲硫氨 酸残基的预测CynoTLR3信号肽、胞外域、跨膜域和胞质域的肽链。本发明的另一个方面是包含具有序列标识号5中所示序列或其互补序列的多核 苷酸的分离多核苷酸。序列标识号5中所示的多核苷酸序列是在开放读框两侧具有5’和 3’序列的核酸，其编码包含全长CynoTLR3的肽链。本发明的另一个方面是包含分离多核苷酸的载体，其中分离多核苷酸具有选自序 列标识号1、2、3、4、5、6和7中所示的序列的序列。序列标识号6中所示的多核苷酸序列为 标号为P4078的多核苷酸(DNA)表达载体，其编码包含全长cyn0TLR3的肽链。序列标识号 7中所示的多核苷酸序列为标号为P4037的多核苷酸(DNA)表达载体，其编码这样的肽链， 该肽链包含带氨基末端甲硫氨酸残基的预测CynoTLR3信号序列以及通过柔性甘氨酸和丝 氨酸接头与六个氨基末端组氨酸氨基酸残基标签融合的胞外域。序列标识号1、2、3、4和5 中所示的多核苷酸在上文描述了。本发明的载体可用于保持多核苷酸、复制多核苷酸或驱动本发明载体编码的肽链 在生物系统(包括再造生物系统)中的表达。载体可以为染色体载体、附加型载体和病毒衍生载体，例如衍生自细菌质粒、噬菌 体、转座子、酵母附加体、插入元件、酵母染色体元件、杆状病毒、乳多空病毒(例如SV40)、 牛痘病毒、腺病毒、鸡痘病毒、伪狂犬病病毒、小核糖核酸病毒和逆转录酶病毒的载体，以及 衍生自它们的组合的载体，例如粘粒和噬菌粒。可以用佐剂、脂质、缓冲剂或其他适用于具体应用的赋形剂将本发明的载体配制 在微粒中。在本发明的一个实施例中，载体是表达载体。表达载体通常包含可控制、调节、引起或允许由这种载体编码的肽链的表达的核 酸序列元件。此类元件可包含转录增强子结合位点、RNA聚合酶起始位点、核糖体结合位点 以及有利于被编码肽链在给定表达系统中的表达的其他位点。此类表达系统可以是本领域 熟知的基于细胞的系统或无细胞系统。适用于被编码肽链的表达的核酸序列元件和亲本载 体序列也是本领域熟知的。本发明的另一个实施例是包含本发明载体的分离宿主细胞。可用于本发明多肽的表达的示例性质粒衍生表达载体包含大肠杆菌(E. coli)复 制起点、aph(3’)-la卡那霉素抗性基因、带内含子A的HCMV立即早期启动子、合成的polyA 序列和牛生长激素终止子。另一种示例性质粒衍生表达载体包含大肠杆菌(E.coli)复制 起点、ant(4’)-Ia卡那霉素抗性基因、Rous肉瘤病毒长末端重复序列、HCMV立即早期启动 子和SV40晚期polyA序列。
代表性的宿主细胞例子包括古细菌细胞；细菌细胞，例如链球菌(Streptococci)、 葡萄球菌(Staphylococci)、肠球菌(Enterococci)、大肠杆菌(E. coli)、链霉菌
印tomyces)、蓝细菌(cyancAacteria)、枯草芽孢杆菌(B. subtilis)和金黄色葡萄球 菌(S. aureus)；真菌细胞，例如克鲁弗氏酵母(Kluveromyces)、酵母菌(Saccharomyces)、 担子菌(Basidomycete)、白色念珠菌(Candida albicans)或曲霉菌(Aspergillus)；昆虫 细胞，例如果蝇(Drosophila) S2和草地贪夜蛾(Spodoptera) Sf9 ；动物细胞，例如CH0、C0S、 HeLa、C127、3T3、BHK、293、CV-l、BOWes黑素瘤和骨髓瘤；以及植物细胞，例如裸子植物或被 子植物细胞。本发明方法中的宿主细胞可以单个细胞或细胞群体的形式提供。细胞群体可 以包括分离的或培养的细胞群体或存在于基质(例如组织)中的细胞群体。多核苷酸(例如载体)向宿主细胞中的导入可以通过本领域技术人员熟知的方 法来实现，这些方法可从以下实验室手册中找到，例如Davis et al. , Basic Methods in Molecular Biology, 2- ed. , Appleton &Lange, Norwalk, CT (1994) (Davis 等人，《分子生 物学基本方法(第二版)》，Appleton & Lange (Norwalk，CT)，1994 年)和 Sambrook et al. ,Molecular CloninR :A Laboratory Manual,3rd ed. ,Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY(2001) (Sambrook等人，《分子克隆实验指南(第三版)，Cold Spring HarborLaboratory 出版社(Cold Spring Harbor, NY)，2001 年》)。这些方法包括 磷酸钙转染、DEAE葡聚糖介导的转染、显微注射、阳离子脂质介导的转染、电穿孔、转导、刮 擦荷载(scrape loading)、基因枪法导入(ballistic introduction)和感染。本发明的另一个方面是包含具有序列标识号8中所示序列的肽链的分离肽链。序 列标识号8为包含cyn0TLR3胞外域预测成熟形式的肽链。本发明的肽链可以通过化学合成法产生，例如在自动肽合成仪上进行的固相肽合 成。作为另外一种选择，本发明的肽链可以通过使用无细胞表达系统从编码这些肽链的多 核苷酸获得，无细胞表达系统的例子有基于网织红细胞裂解物的表达系统、基于麦胚提取 物的表达系统以及基于大肠杆菌(Escherichia coli)提取物的表达系统。本发明的肽链 还可以用本领域熟知的技术通过从含有本发明核酸序列的细胞的表达和分离来获得，所述 技术例如易分离的亲和标记肽链的重组表达。本领域的技术人员会认识到其他用于获得本 发明肽链的技术。本发明的肽链可以包括包含与第二肽链融合的本发明肽链的融合肽链。此类第二 肽链可以是前导序列或分泌信号序列、前体蛋白序列或蛋白原序列或前蛋白原序列、以及 天然存在的序列、或部分衍生自天然存在的序列的部分合成序列、或全合成序列。可选择分 泌信号或前导肽链序列来引导本发明肽链分泌到内质网的内腔中或细胞外环境中；此类肽 链序列可以是任何来自食蟹猴的肽链的异源序列或内源序列，或包含这些序列的杂合体。本发明的肽链还可配制在可药用载体或稀释剂中。可以使用多种含水载体，如 0.4%盐水、0.3%甘氨酸等。这些溶液是无菌的，通常不含颗粒物质。这些溶液可通过常规 的、熟知的除菌技术(如过滤)进行除菌。组合物可以包含模拟生理条件所需的可药用辅 助物质，例如PH调节剂和缓冲剂。本发明的肽链在这种药物制剂中的浓度可以差别很大， 即从小于约0. 5重量％ (通常为或至少约1重量％ )至高达15或20重量％，要根据所选 的具体给药方式主要依据流体体积、粘度和其他因素进行选择。本发明的肽链和核酸还可以以能以单位剂型提供的药物制剂的形式提供，例如用于引发免疫反应的疫苗。本领域的技术人员可以很容易地确定适当的治疗有效剂量。如果 必要，可将确定的剂量在治疗期间以适当的时间间隔加以重复，所述时间间隔是由医生或 相关领域的其他技术人员(如护士、兽医或兽医技师)适当选择的。本发明的肽链可以冻干以便于储存，使用之前可以在合适的载体中复原。该技术 已证实对常规的蛋白质制品是有效的。冻干和复原技术是本领域所熟知的。本发明的另一个方面是包含具有序列标识号9中所示序列的肽链的分离肽链。序 列标识号9是包含不带氨基末端甲硫氨酸残基的预测cyn0TLR3信号肽以及胞外域的肽链。本发明的另一个方面是包含具有序列标识号10中所示序列的肽链的分离肽链。 序列标识号10是包含CynoTLR3胞外域预测成熟形式、跨膜域和胞质域的肽链。本发明的另一个方面是包含具有序列标识号11中所示序列的肽链的分离肽链。 序列标识号11是包含不带氨基末端甲硫氨酸残基的预测cynoTLR3信号肽、胞外域、跨膜域 和胞质域的肽链。本发明的另一个实施例是表达肽链的方法，所述方法包括以下步骤提供本发明 的宿主细胞；在足以表达包含序列标识号8、序列标识号9、序列标识号10或序列标识号11 中所示序列的至少一条肽链的条件下培养宿主细胞；以及确认包含序列标识号8、序列标 识号9、序列标识号10或序列标识号11中所示序列的至少一条肽链的表达。宿主细胞可以在任何适合保持或增殖给定类型的宿主细胞并足以表达肽链的条 件下培养。足以表达肽链的培养条件、培养基和相关方法是本领域熟知的。例如，许多哺乳 类细胞类型可以在37°C下用适当缓冲的DMEM培养基进行有氧培养，而细菌、酵母和其他细 胞类型可以在37°C和适当的大气条件下在LB培养基中进行培养。在本发明的方法中，可以用本领域熟知的多种不同技术确认肽链的表达。例如，可 以用对所表达的肽链有特异性的检测试剂(例如抗体或受体配体)确认肽链的表达。特 异性结合本发明cynoTLR3肽链的抗体是此类试剂的一个例子。此类试剂的另一个例子是 TLR3受体配体，例如结合TLR3的dsRNA或聚(I:C)。可以通过将放射标记物、荧光团、发色 团或其他可检测分子结合到检测试剂或掺入到检测试剂中来对检测试剂进行标记以便可 检测。作为另外一种选择，可以通过分析与TLR3活化有关的生物活性(例如NF-kB的活 化或I型干扰素产量增加)来确认本发明cyn0TLR3肽链的表达。此类分析还可以使用可 响应TLR3活化的报告基因构建物。还可以通过在肽链制品中鉴定具有本发明肽链的物理特性的肽链来确认肽链表 达。例如，采用诸如蛋白质分子量或等电点等标准的SDS-PAGE技术和其他熟知的蛋白质表 征技术可以用于确认本发明肽链的表达。也可以使用蛋白质纯化技术(例如硫酸铵或乙醇 沉淀、酸萃取、高效液相色谱、阴离子或阳离子交换色谱、磷酸纤维素色谱、疏水作用色谱、 亲和色谱、羟基磷灰石色谱和凝集素色谱)确认本发明肽链的表达。重要的是，在本发明方法中，所表达的肽链不需要分离。因此，可确认肽链的表达 已在(例如)细胞上或细胞中或肽链混合物中发生。适当时，也可以使用基于流式细胞术 的技术(例如荧光激活细胞分选术(FACS))来确认细胞的肽链表达。如上文所述，可以用 本领域已知的任何合适技术来确认肽链表达。本发明的另一个实施例是表达肽链的方法，所述方法包括以下步骤提供能够被转录成编码包含序列标识号8、序列标识号9、序列标识号10或序列标识号11中所示序列 的至少一条肽链的RNA的本发明多核苷酸；提供无细胞表达系统的组分；从所提供的多核 苷酸启动无细胞表达；以及确认包含序列标识号8、序列标识号9、序列标识号10或序列标 识号11中所示序列的至少一条肽链的表达。将多核苷酸转录成RNA的技术、获得编码肽链的RNA的技术或启动无细胞表达的 技术是本领域所熟知的，完成这些步骤的试剂盒可从多个来源商购获得。在本发明方法的另一个实施例中，无细胞表达系统选自基于网织红细胞裂解物的 表达系统、基于麦胚提取物的表达系统和基于大肠杆菌提取物的表达系统。本发明的另一个实施例是表达肽链的方法，所述方法包括以下步骤提供编码包 含序列标识号8、序列标识号9、序列标识号10或序列标识号11中所示序列的至少一条肽 链的RNA ；提供无细胞表达系统的组分；从所提供的RNA启动无细胞表达；确认包含序列标 识号8、序列标识号9、序列标识号10或序列标识号11中所示序列的至少一条肽链的表达。在本发明方法的另一个实施例中，无细胞表达系统选自基于网织红细胞裂解物的 表达系统、基于麦胚提取物的表达系统和基于大肠杆菌提取物的表达系统。本发明的另一个实施例是由本发明方法产生的肽链。此类肽链可以包括翻译后修 饰，例如包括糖基化或磷酸化。此类肽链还可以包括选择性肽链形式(例如剪接变体)、截 短形式或蛋白水解修饰形式。本发明的另一个实施例是特异性结合本发明肽链的抗体。可以用本发明的肽链产 生抗cyn0TLR3的多克隆或单克隆抗体。使用蛋白或核酸免疫制备鼠、嵌合、人源化和完全 人单克隆抗体的技术是常规技术并为本领域技术人员所熟知。从上文可以找到此类技术的 另外的讨论和描述。本发明的另一个实施例是特异性结合本发明肽链的单克隆抗体。本发明的另一个方面是确定TLR3治疗剂是否安全的方法，所述方法包括提供LR3 治疗剂、第一食蟹猴和第二食蟹猴；给第一食蟹猴施用TLR3治疗剂；以及对比第二食蟹猴 确定第一食蟹猴是否呈现有害症状，如果第一食蟹猴呈现有害症状，则表明TLR3治疗剂是 不安全的，如果第一食蟹猴没有呈现有害症状，则表明TLR3治疗剂是安全的。在本发明方法中，所提供的第一和第二食蟹猴在有害症状的呈现方面应是等同 的。换句话说，两个动物在供试时应该都不呈现有害症状或都呈现相同的有害症状。在本发明方法中，可以通过任何合适的途径(例如胃肠外、皮下、静脉内等)施用 TLR3治疗剂。适用于本发明方法的TLR3治疗剂的例子包括(例如)已知的TLR3配体(例 如dsRNA或聚(1:0)和肽链(例如包含TLR3胞外域的肽链)。在本发明方法中，对比第二食蟹猴确定第一食蟹猴是否呈现有害症状是很容易实 现的。例如，本领域的普通技术人员(例如兽医、兽医助理、动物技师或研究科学家)可以 确定动物所呈现的症状是否为有害症状。有害症状的例子包括死亡、昏迷、癫痫、发烧、器官 衰竭、组织畸形、器官功能受损、组织功能受损、癌症、肿瘤、溃疡、出血、感染等。在本发明方法的一个实施例中，TLR3治疗剂是抗体。本发明现结合以下具体的、非限制性实例进行描述。实例1编码全长食蟹猴Toll样受体3(Cyn0TLR3)的多核苷酸的分离、克隆以及测序
使用TRIZOL 试剂(nvitrogen，Carload，CA)根据制造说明书从食蟹猴外周血单 核细胞(PBMC)纯化 RNA。反转录反应是用 SUPERSCRIPT 11 REVERSE TRANSCRIPTASE 试剂 盒进行，用oligo-dT引物起动。用于初始PCR克隆的引物根据编码人TLR3肽链的多核苷 酸的序列进行设计。然后利用2535引物(序列标识号14)和沈64引物(序列标识号15) 进行PCR以克隆编码全长cyn0TLR3肽链(序列标识号11)的多核苷酸(序列标识号5)。 每条引物取用lOOng，cDNA模板取用lOOng，按以下条件进行PCR -MV 30秒，60°C 1分钟， 680C 1分钟，循环30次，然后68°C 5分钟，循环1次。PCR反应产物在琼脂糖凝胶上进行分 析，显示获得了与PCR克隆的多核苷酸相应的大约2700bp的多核苷酸条带。克隆的PCR 产物用 QIAQUICK PCR 纯化仪(Qiagen，Valencia，CA))进行纯化。将 PCR产物克隆到pCR4 Τ0Ρ0 ΤΑ 载体中，以获得该大约2700bp PCR产物的2535引物(序列 标识号14)和2664引物(序列标识号15)之间的序列。该大约2700bp PCR产物的被2535引物(序列标识号14)和沈64引物(序列标 识号15)覆盖的序列通过5’和3’ RACE (cDNA末端的快速扩增)方法进行克隆。这是如下 完成的首先用如上所述获得的cynoTLR3序列设计cyn0TL3 cDNA特异性2589引物(序列 标识号17) ,2590引物(序列标识号18)以及沈25引物(序列标识号19)。3’引物(定位 于起始位点下游约150至250bp处)是设计用来与5，GENERACER 引物形成引物对，从而用 于编码cyn0TLR3的全长多核苷酸cDNA的5’端的扩增、克隆和测序。5’引物(定位于终止 位点上游约150至250bp处)是设计用来与3，GENERACER 引物形成引物对，从而用于编 码cyn0TLR3的全长多核苷酸cDNA的3’端的扩增、克隆和测序。然后将从这些扩增中获得 的PCR产物克隆到pCR4 Τ0Ρ0 ΤΑ 载体中，从这些多核苷酸获得5’非翻译序列、氨基末端 编码序列、羧基末端编码序列以及3’非翻译序列。用于获得附加序列的引物具有序列标识 号17、序列标识号18和序列标识号19中所示的序列。然后对所获得的序列进行多序列对 比，得到包含5’非翻译序列、编码全长cynoTLR肽链(序列标识号20)的编码序列以及3’ 非翻译序列的多核苷酸(序列标识号5)。随后使用 Vector NTI v9. 0. 0 软件 Qnvitrogen Corp.，Carlsbad, CA)进行序列 分析。在全长CynoTLR3肽链中鉴定的结构域由图1和图2中所示的克隆的多核苷酸(序 列标识号幻编码。氨基末端甲硫氨酸由序列标识号21的第1-3位核苷酸残基编码，并对 应于序列标识号20的第1位氨基酸残基。信号肽由序列标识号21的第1-69位核苷酸残 基编码，并对应于序列标识号20的第1-23位氨基酸残基。胞外域由序列标识号21的第 70-2112位核苷酸残基编码，并对应于序列标识号20的第M-704位氨基酸残基。跨膜域由 序列标识号21的第2113-2175位核苷酸残基编码，并对应于序列标识号20的第705-725 位氨基酸残基。胞质域由序列标识号21的第2176-2712位核苷酸残基编码，并对应于序列 标识号20的第7沈-904位氨基酸残基。终止密码子由序列标识号21的第2713-2715位核 苷酸残基编码。使用Vector NTI v9. 0. 0软件的AlignX模块所采用的CLUSTALW算法的默认设置 进行多序列比对分析。发现编码cynoTLR3的全长多核苷酸编码序列(序列标识号21的第 1-2712位核苷酸残基)与编码得到很好表征的全长人TLR3肽链的全长多核苷酸编码序列 (序列标识号12的第1-2715位核苷酸残基)有96. 8%同一性。发现全长cyn0TLR3肽链 (序列标识号20)与得到很好表征的全长人TLR3肽链(序列标识号13)有95. 7%同一性。发现cyn0TLR3胞外域肽链的成熟形式(序列标识号1)与人TLR3肽链的胞外域(序列标 识号13的第M至704位氨基酸残基)有95. 4%同一性。发现编码cyn0TLR3的全长多核苷酸编码序列(序列标识号21的第1-2712位核苷 酸残基)与编码恒河猴TLR3肽链的全长多核苷酸编码序列(序列标识号22的第1-2712位 核苷酸残基)有99. 3%同一性。发现全长CynoTLR3肽链(序列标识号20)与恒河猴TLR3 肽链(序列标识号23)有98. 5%同一性。发现cyn0TLR3胞外域肽链的成熟形式(序列标 识号1)与人TLR3肽链的胞外域(序列标识号23的第M至704位氨基酸残基)有98. 2% 同一性。Sanghavi和Reinhart报道过编码恒河猴TLR3的多核苷酸(序列标识号22)的 克隆° 参见 Sanghavi and Reinhart, 175 J. Immunol. 5314 (2005) (SanRhavi 禾口 Reinhart, 《免疫学杂志》，第175卷第5314页，2005年)。实例2包含Cyn0TLR3胞外域的肽链的表汰和纯化构建编码N末端甲硫氨酸、cyn0TLR3信号肽链以及通过柔性甘氨酸和丝氨酸接头 与六氨基末端组氨酸氨基残基标签融合的CynoTLR3胞外域的多核苷酸，并将其克隆到哺 乳动物表达载体中，以产生P4037表达载体构建物(序列标识号7)。引物2523(序列标识 号16)用来帮助p4037的产生。使用标准方法将p4037瞬时转染HEK293细胞。该HEK293 细胞系来源于人胚肾细胞。随后将这些HEK293细胞培养六天，并收集细胞培养基。然后按 照制造商(Clontech Laboratories Inc. ,Mountain View,CA)的说明，进行TALON 树脂纯 化，将由P4037编码的组氨酸标记cyn0TLR3胞外域融合肽链从收集的培养基中分离出来。 然后对得自TAL0N 树脂的洗脱液进行SDS-PAGE分析，该分析是在非还原样品和经历还原 条件的样品上进行。SDS-PAGE之后进行蛋白质印迹分析。蛋白质印迹用组氨酸标签特异性 探针进行探测。对还原和非还原样品的蛋白质印迹分析均显示有分子量约为98kDal的明 显单体蛋白得到表达并分离。由p4037编码的cyn0TLR3组氨酸标记cyn0TLR3胞外域融合 肽链的分子量计算值为约80kDal，比蛋白质印迹中检测到的98kDal组氨酸标记肽链要小。 然而，由P4037编码的肽链包含15个N-连接糖基化位点，并且据信翻译后的糖基化很大程 度上是造成所表达的组氨酸标记蛋白的分子量增加的原因。本发明现已完整描述，但对于本领域的普通技术人员而言将显而易见的是，在不 脱离本发明所附权利要求的精神和范围的前提下，可对本发明进行多种修改和变型。序列表表解序列标识号1来源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述核酸序列，编码包含CynoTLR3胞外域的预测成熟形式的肽链。tccaccaacaaatgcactgttagccaagaagttgctgactgcagccacctgaagttaactcaggtacccgatgatctccccacaaacataacagtgttgaatcttacccataatcaactcagaagattaccagctgccaattttacaagatatagccaactaactatcttggatgtaggatttaactccatctcaaaactggagccagaattgtgccaaaaacttcccatgttaaaagttttgaacctccagcacaatgagctatctcaactttctgataaaacttttgccttctgcacgaatttgacggaactccatctcatgtccaactcaatccagaaaattaaaaataatccctttgtaaagcagaagaatttaatcacattagatctgtctcataatggcttgtcatctacaaaattaggaactcaggttcagctggaaaatc
tccaagagcttctattatcaaacaataaaatccaagcgctaaaaagtgaagaacttggtatccttgccaattcatctttaaaaaagttagagttgtcatcgaatcaaattaaagagttttctccagggtgttttcacgcaattggaagattattgggcctctttctgaacaatgtccagctgggtccccgcctcacagagaagctatgtttggaattagcaaacacaagcgttcggaatctgtctctgagtaacagccagctgtccaccaccagcaatacaactttcttgggactaaagtggacaaacctcactatgctcgatctttcccacaacaacttaaatgtgattggtaacgattcctttgtttggcttccacatctagaatatttcttcctggagtataataatatacagcatttgctctctcactctttgcacgggcttttcaatgtgcggtacctgaatttgaaacggtcttttactaaacaaagtatttcccttgcttcgctccccaagattgatgatttttcttttcggtggctaacatgtttggagcaccttaacatggaagataatgatatttcaggcataaaaagcaatatgttcacaggattgataaacctgaaatacttaagtctatccaactcctttacaagtttgcaaactttgacaaatgaaacatttgtatcacttgctcattctcccttacacatactcaacctaaccaagaataaaatctcaaaaatagagagtggtgccttctcttggttgggccacctagaagtacttgacttgggccttaatgaaattgggcaagaactcacaggccaggaatggagtggtctagaaaatattttcgaaatctatctttcctacaacaagtacctgcaactgactaagaactcctttgccttggtccgaagccttcaacgactgatgctccgaagggtggcccttaaaaatgtggattgctctccttcaccattccagcctcttggtaacctgaccattctggatctaagcaacaacaacatagccaacataaatgatgacatgttggaaggtcttgagaaactagaaattctggatttgcagcataacaacttagcacggctctggaaacacgcaaaccctggtggtcctgtttatttcctaaagggtctgtctcacctccacatccttaacttggagtctaatggctttgacgagatcccagttgaggtcttcaaggatttatctgaactaaagatcattgatttaggattgaataatttaaacacacttccagcgtctgtctttgataatcaggtgtctctaaagtcattgaaccttcagaagaatctcataacatcagttgagaagaaggttttcgggccagctttcaggaacctgagtaacttagatatgcgctttaatccctttgattgcacatgtgaaagtattgcctggtttgttaattggattaacaagacccacgccaacatccctgagctgtcaagccactacctttgcaacactccaccccactatcatgggttcccagtgagactttttgatacatcatcctgcaaagacagtgccccctttgaactc序列标识号2来源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述核酸序列，编码包含不带氨基末端甲硫氨酸残基的预测cyn0TLR3信号 肽以及胞外域的肽链。tccaccaacaaatgcactgttagccaagaagttgctgactgcagccacctgaagttaactcaggtacccgatgatctccccacaaacataacagtgttgaatcttacccataatcaactcagaagattaccagctgccaattttacaagatatagccaactaactatcttggatgtaggatttaactccatctcaaaactggagccagaattgtgccaaaaacttcccatgttaaaagttttgaacctccagcacaatgagctatctcaactttctgataaaacttttgccttctgcacgaatttgacggaactccatctcatgtccaactcaatccagaaaattaaaaataatccctttgtaaagcagaagaatttaatcacattagatctgtctcataatggcttgtcatctacaaaattaggaactcaggttcagctggaaaatctccaagagcttctattatcaaacaataaaatccaagcgctaaaaagtgaagaacttggtatccttgccaattcatctttaaaaaagttagagttgtcatcgaatcaaattaaagagttttctccagggtgttttcacgcaattggaagattattgggcctctttctgaacaatgtccagctgggtccccgcc
tcacagagaagctatgtttggaattagcaaacacaagcgttcggaatctgtctctgagtaacagccagctgtccaccaccagcaatacaactttcttgggactaaagtggacaaacctcactatgctcgatctttcccacaacaacttaaatgtgattggtaacgattcctttgtttggcttccacatctagaatatttcttcctggagtataataatatacagcatttgctctctcactctttgcacgggcttttcaatgtgcggtacctgaatttgaaacggtcttttactaaacaaagtatttcccttgcttcgctccccaagattgatgatttttcttttcggtggctaacatgtttggagcaccttaacatggaagataatgatatttcaggcataaaaagcaatatgttcacaggattgataaacctgaaatacttaagtctatccaactcctttacaagtttgcaaactttgacaaatgaaacatttgtatcacttgctcattctcccttacacatactcaacctaaccaagaataaaatctcaaaaatagagagtggtgccttctcttggttgggccacctagaagtacttgacttgggccttaatgaaattgggcaagaactcacaggccaggaatggagtggtctagaaaatattttcgaaatctatctttcctacaacaagtacctgcaactgactaagaactcctttgccttggtccgaagccttcaacgactgatgctccgaagggtggcccttaaaaatgtggattgctctccttcaccattccagcctcttggtaacctgaccattctggatctaagcaacaacaacatagccaacataaatgatgacatgttggaaggtcttgagaaactagaaattctggatttgcagcataacaacttagcacggctctggaaacacgcaaaccctggtggtcctgtttatttcctaaagggtctgtctcacctccacatccttaacttggagtctaatggctttgacgagatcccagttgaggtcttcaaggatttatctgaactaaagatcattgatttaggattgaataatttaaacacacttccagcgtctgtctttgataatcaggtgtctctaaagtcattgaaccttcagaagaatctcataacatcagttgagaagaaggttttcgggccagctttcaggaacctgagtaacttagatatgcgctttaatccctttgattgcacatgtgaaagtattgcctggtttgttaattggattaacaagacccacgccaacatccctgagctgtcaagccactacctttgcaacactccaccccactatcatgggttcccagtgagactttttgatacatcatcctgcaaagacagtgccccctttgaactctttttcatgatcaataccagtatcctgttgatttttatctttgttgtacttctcatccactttgagggctggaggatatctttttactggaatgtttcagtacatcgagttcttggtttcaaagaaatagacagacagacagaacagtttgaatatgcagcatatataattcacgcccataaagataaggattgggtctgggaacatttctcttcaatggaaaaggaagaccaatctctcaaattttgtctggaagaaagggactttgaggcaggtgtttttgaactggaagcaattgttaacagcatcaaaagaagcagaaaaattatttttattataacacaccatctattaaaagacccattatgcaaaagattcaaggtacatcatgccgttcaacaagctattgaacaaaatctggattccattatattgattttccttgaggagattccagattataaactgaaccatgcactctgtttgcgaagaggaatgtttaaatctcactgcatcttgaactggccagttcagaaagaacggataggtgcctttcatcataaactgcaagtagcacttggatccaaaaactcagtacat序列标识号3来源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述核酸序列，编码包含CynoTLR3胞外域预测成熟形式、跨膜域以及胞质 域的肽链。tccaccaacaaatgcactgttagccaagaagttgctgactgcagccacctgaagttaactcaggtacccgatgatctccccacaaacataacagtgttgaatcttacccataatcaactcagaagattaccagctgccaattttacaagatatagccaactaactatcttggatgtaggatttaactccatctcaaaactggagccagaattgtgccaaaaacttcccatgttaaaagttttgaacctccagcaca atgagctatctcaactttctgataaaacttttgccttctgcacgaatttgacggaactccatct catgtccaactcaatccagaaaattaaaaataatccctttgtaaagcagaagaatttaatcaca ttagatctgtctcataatggcttgtcatctacaaaattaggaactcaggttcagctggaaaatc tccaagagcttctattatcaaacaataaaatccaagcgctaaaaagtgaagaacttggtatcct tgccaattcatctttaaaaaagttagagttgtcatcgaatcaaattaaagagttttctccaggg tgttttcacgcaattggaagattattgggcctctttctgaacaatgtccagctgggtccccgcc tcacagagaagctatgtttggaattagcaaacacaagcgttcggaatctgtctctgagtaacag ccagctgtccaccaccagcaatacaactttcttgggactaaagtggacaaacctcactatgctc gatctttcccacaacaacttaaatgtgattggtaacgattcctttgtttggcttccacatctag aatatttcttcctggagtataataatatacagcatttgctctctcactctttgcacgggctttt caatgtgcggtacctgaatttgaaacggtcttttactaaacaaagtatttcccttgcttcgctc cccaagattgatgatttttcttttcggtggctaacatgtttggagcaccttaacatggaagata atgatatttcaggcataaaaagcaatatgttcacaggattgataaacctgaaatacttaagtct atccaactcctttacaagtttgcaaactttgacaaatgaaacatttgtatcacttgctcattct cccttacacatactcaacctaaccaagaataaaatctcaaaaatagagagtggtgccttctctt ggttgggccacctagaagtacttgacttgggccttaatgaaattgggcaagaactcacaggcca ggaatggagtggtctagaaaatattttcgaaatctatctttcctacaacaagtacctgcaactg actaagaactcctttgccttggtccgaagccttcaacgactgatgctccgaagggtggccctta aaaatgtggattgctctccttcaccattccagcctcttggtaacctgaccattctggatctaag caacaacaacatagccaacataaatgatgacatgttggaaggtcttgagaaactagaaattctg gatttgcagcataacaacttagcacggctctggaaacacgcaaaccctggtggtcctgtttatt tcctaaagggtctgtctcacctccacatccttaacttggagtctaatggctttgacgagatccc agttgaggtcttcaaggatttatctgaactaaagatcattgatttaggattgaataatttaaac acacttccagcgtctgtctttgataatcaggtgtctctaaagtcattgaaccttcagaagaatc tcataacatcagttgagaagaaggttttcgggccagctttcaggaacctgagtaacttagatat gcgctttaatccctttgattgcacatgtgaaagtattgcctggtttgttaattggattaacaag acccacgccaacatccctgagctgtcaagccactacctttgcaacactccaccccactatcatg ggttcccagtgagactttttgatacatcatcctgcaaagacagtgccccctttgaactcttttt catgatcaataccagtatcctgttgatttttatctttgttgtacttctcatccactttgagggc tggaggatatctttttactggaatgtttcagtacatcgagttcttggtttcaaagaaatagaca gacagacagaacagtttgaatatgcagcatatataattcacgcccataaagataaggattgggt ctgggaacatttctcttcaatggaaaaggaagaccaatctctcaaattttgtctggaagaaagg gactttgaggcaggtgtttttgaactggaagcaattgttaacagcatcaaaagaagcagaaaaa ttatttttattataacacaccatctattaaaagacccattatgcaaaagattcaaggtacatca tgccgttcaacaagctattgaacaaaatctggattccattatattgattttccttgaggagatt ccagattataaactgaaccatgcactctgtttgcgaagaggaatgtttaaatctcactgcatct tgaactggccagttcagaaagaacggataggtgcctttcatcataaactgcaagtagcacttgg atccaaaaactcagtacat
序列标识号4来源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述核酸序列，编码包含不带氨基末端甲硫氨酸残基的预测cyn0TLR3信号 肽、胞外域、跨膜域以及胞质域的多肽。agacagactttgccttatacctacttttggtggggacttttgccctttgggatgctgtgtgcatcctccaccaacaaatgcactgttagccaagaagttgctgactgcagccacctgaagttaactcaggtacccgatgatctccccacaaacataacagtgttgaatcttacccataatcaactcagaagattaccagctgccaattttacaagatatagccaactaactatcttggatgtaggatttaactccatctcaaaactggagccagaattgtgccaaaaacttcccatgttaaaagttttgaacctccagcacaatgagctatctcaactttctgataaaacttttgccttctgcacgaatttgacggaactccatctcatgtccaactcaatccagaaaattaaaaataatccctttgtaaagcagaagaatttaatcacattagatctgtctcataatggcttgtcatctacaaaattaggaactcaggttcagctggaaaatctccaagagcttctattatcaaacaataaaatccaagcgctaaaaagtgaagaacttggtatccttgccaattcatctttaaaaaagttagagttgtcatcgaatcaaattaaagagttttctccagggtgttttcacgcaattggaagattattgggcctctttctgaacaatgtccagctgggtccccgcctcacagagaagctatgtttggaattagcaaacacaagcgttcggaatctgtctctgagtaacagccagctgtccaccaccagcaatacaactttcttgggactaaagtggacaaacctcactatgctcgatctttcccacaacaacttaaatgtgattggtaacgattcctttgtttggcttccacatctagaatatttcttcctggagtataataatatacagcatttgctctctcactctttgcacgggcttttcaatgtgcggtacctgaatttgaaacggtcttttactaaacaaagtatttcccttgcttcgctccccaagattgatgatttttcttttcggtggctaacatgtttggagcaccttaacatggaagataatgatatttcaggcataaaaagcaatatgttcacaggattgataaacctgaaatacttaagtctatccaactcctttacaagtttgcaaactttgacaaatgaaacatttgtatcacttgctcattctcccttacacatactcaacctaaccaagaataaaatctcaaaaatagagagtggtgccttctcttggttgggccacctagaagtacttgacttgggccttaatgaaattgggcaagaactcacaggccaggaatggagtggtctagaaaatattttcgaaatctatctttcctacaacaagtacctgcaactgactaagaactcctttgccttggtccgaagccttcaacgactgatgctccgaagggtggcccttaaaaatgtggattgctctccttcaccattccagcctcttggtaacctgaccattctggatctaagcaacaacaacatagccaacataaatgatgacatgttggaaggtcttgagaaactagaaattctggatttgcagcataacaacttagcacggctctggaaacacgcaaaccctggtggtcctgtttatttcctaaagggtctgtctcacctccacatccttaacttggagtctaatggctttgacgagatcccagttgaggtcttcaaggatttatctgaactaaagatcattgatttaggattgaataatttaaacacacttccagcgtctgtctttgataatcaggtgtctctaaagtcattgaaccttcagaagaatctcataacatcagttgagaagaaggttttcgggccagctttcaggaacctgagtaacttagatatgcgctttaatccctttgattgcacatgtgaaagtattgcctggtttgttaattggattaacaagacccacgccaacatccctgagctgtcaagccactacctttgcaacactccaccccactatcatgggttcccagtgagactttttgatacatcatcctgcaaagacagtgccccctttgaactctttttcatgatcaataccagtatcctgttgatttttatctttgttgtacttctcatccactttgagggctggaggatatctttttactggaatgtttcagtacatcgagttcttggtttcaaagaaataga
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aatcccttcagttggttggtacaacttgccaactgggccctgttccacatgtgacacggggggggaccaaacacaaaggggttctctgactgtagttgacatccttataaatggatgtgcacatttgccaacactgagtggctttcatcctggagcagactttgcagtctgtggactgcaacacaacattgcctttatgtgtaactcttggctgaagctcttacaccaatgctgggggacatgtacctcccaggggcccaggaagactacgggaggctacaccaacgtcaatcagaggggcctgtgtagctaccgataagcggaccctcaagagggcattagcaatagtgtttataaggcccccttgttaaccctaaacgggtagcatatgcttcccgggtagtagtatatactatccagactaaccctaattcaatagcatatgttacccaacgggaagcatatgctatcgaattagggttagtaaaagggtcctaaggaacagcgatatctcccaccccatgagetgtcacggttttatttacatggggtcaggattccacgagggtagtgaaccattttagtcacaagggcagtggctgaagatcaaggagcgggcagtgaactctcctgaatcttcgcctgcttcttcattctccttcgtttagctaatagaataactgctgagttgtgaacagtaaggtgtatgtgaggtgctcgaaaacaaggtttcaggtgacgcccccagaataaaatttggacggggggttcagtggtggcattgtgctatgacaccaatataaccctcacaaaccccttgggcaataaatactagtgtaggaatgaaacattctgaatatctttaacaatagaaatccatggggtggggacaagccgtaaagactggatgtccatctcacacgaatttatggctatgggcaacacataatcctagtgcaatatgatactggggttattaagatgtgtcccaggcagggaccaagacaggtgaaccatgttgttacactctatttgtaacaaggggaaagagagtggacgccgacagcagcggactccactggttgtctctaacacccccgaaaattaaacggggctccacgccaatggggcccataaacaaagacaagtggccactcttttttttgaaattgtggagtgggggcacgcgtcagcccccacacgccgccctgcggttttggactgtaaaataagggtgtaataacttggctgattgtaaccccgctaaccactgcggtcaaaccacttgcccacaaaaccactaatggcaccccggggaatacctgcataagtaggtgggcgggccaagataggggcgcgattgctgcgatctggaggacaaattacacacacttgcgcctgagcgccaagcacagggttgttggtcctcatattcacgaggtcgctgagagcacggtgggctaatgttgccatgggtagcatatactacccaaatatctggatagcatatgctatcctaatctatatctgggtagcataggctatcctaatctatatctgggtagcatatgctatcctaatctatatctgggtagtatatgctatcctaatttatatctgggtagcataggctatcctaatctatatctgggtagcatatgctatcctaatctatatctgggtagtatatgctatcctaatctgtatccgggtagcatatgctatcctaatagagattagggtagtatatgctatcctaatttatatctgggtagcatatactacccaaatatctggatagcatatgctatcctaatctatatctgggtagcatatgctatcctaatctatatctgggtagcataggctatcctaatctatatctgggtagcatatgctatcctaatctatatctgggtagtatatgctatcctaatttatatctgggtagcataggctatcctaatctatatctgggtagcatatgctatcctaatctatatctgggtagtatatgctatcctaatctgtatccgggtagcatatgctatcctcatgcatatacagtcagcatatgatacccagtagtagagtgggagtgctatcctttgcatatgccgccacctcccaagggggcgtgaattttcgctgcttgtccttttcctgctggttgctcccattcttaggtgaatttaaggaggccaggctaaagccgtcgcatgtctgattgctcaccaggtaaatgtcgctaatgttttccaacgcgagaaggtgttgagcgcggagctgagtgacgtgacaacatgggtatgcccaattgccccatgttgggaggacgaaaatggtgacaagacagatggccagaaatacaccaacagcacgcatgatgtctactggggatttattctttagtgcgggggaatacacggcttttaatacgattgagggcgtctcctaacaagttacatcactcctgcccttcctcaccctcatctccatcacctcctteatctccgtcatctccgtcatcaccctccgcggcagccccttccaccatagg tggaaaccagggaggcaaatctactccatcgtcaaagctgcacacagtcaccctgatattgcag gtaggagcgggctttgtcataacaaggtccttaatcgcatccttcaaaacctcagcaaatatat gagtttgtaaaaagaccatgaaataacagacaatggactcccttagcgggccaggttgtgggcc gggtccaggggccattccaaaggggagacgactcaatggtgtaagacgacattgtggaatagca agggcagttcctcgccttaggttgtaaagggaggtcttactacctccatatacgaacacaccgg cgacccaagttccttcgtcggtagtcctttctacgtgactcctagccaggagagctcttaaacc ttctgcaatgttctcaaatttcgggttggaacctccttgaccacgatgcttttccaaaccaccc tccttttttgcgccctgcctccatcaccctgaccccggggtccagtgcttgggccttctcctgg gtcatctgcggggccctgctctatcgctcccgggggcacgtcaggctcaccatctgggccacct tcttggtggtattcaaaataatcggcttcccctacagggtggaaaaatggccttctacctggag ggggcctgcgcggtggagacccggatgatgatgactgactactgggactcctgggcctcttttc tccacgtccacgacctctccccctggctctttcacgacttccccccctggctctttcacgtcct ctaccccggcggcctccactacctcctcgaccccggcctccactacctcctcgaccccggcctc cactgcctcctcgaccccggcctccacctcctgctcctgcccctcctgctcctgcccctcctcc
gctcctgcccctcccgctcctgctcctgctcctgttccaccgtgggtccctttgcagccaatgc aacttggacgtttttggggtctccggacaccatctctatgtcttggccctgatcctgagccgcc cggggctcctggtcttccgcctcctcgtcctcgtcctcttccccgtcctcgtccatggttatca ccccctcttctttgaggtccactgccgccggagccttctggtccagatgtgtctcccttctctc ctaggccatttccaggtcctgtacctggcccctcgtcagacatgattcacactaaaagagatca atagacatctttattagacgacgctcagtgaatacagggagtgcagactcctgccccctccaac agcccccccaccctcatccccttcatggtcgctgtcagacagatccaggtctgaaaattcccca tcctccgaaccatcctcgtcctcatcaccaattactcgcagcccggaaaactcccgctgaacat cctcaagatttgcgtcctgagcctcaagccaggcctcaaattcctcgtccccctttttgctgga cggtagggatggggattctcgggacccctcctcttcctcttcaaggtcaccagacagagatgct actggggcaacggaagaaaagctgggtgcggcctgtgaggatcagcttatcgatgataagctgt caaacatgagaattcttgaagacgaaagggcctcgtgatacgcctatttttataggttaatgtc atgataataatggtttcttagacgtcaggtggcacttttcggggaaatgtgcgcggaaccccta tttgtttatttttctaaatacattcaaatatgtatccgctcatgagacaataaccctgataaat
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gcttgacattggggaattcagcgagagcctgacctattgcatctcccgccgtgcacagggtgtcacgttgcaagacctgcctgaaaccgaactgcccgctgttctgcagccggtcgcggaggccatggatgcgatcgctgcggccgatcttagccagacgagcgggttcggcccattcggaccgcaaggaatcggtcaatacactacatggcgtgatttcatatgcgcgattgetgatccccatgtgtatcactggcaaactgtgatggacgacaccgtcagtgcgtccgtcgcgcaggctctcgatgagctgatgctttgggccgaggactgccccgaagtccggcacctcgtgcacgcggatttcggctccaacaatgtcctgacggacaatggccgcataacagcggtcattgactggagcgaggcgatgttcggggattcccaatacgaggtcgccaacatcttcttctggaggccgtggttggcttgtatggagcagcagacgcgctacttcgagcggaggcatccggagcttgcaggatcgccgcggctccgggcgtatatgctccgcattggtcttgaccaactctatcagagcttggttgacggcaatttcgatgatgcagcttgggcgcagggtcgatgcgacgcaatcgtccgatccggagccgggactgtcgggcgtacacaaatcgcccgcagaagcgcggccgtctggaccgatggctgtgtagaagtactcgccgatagtggaaaccgacgccccagcactcgtccggatcgggagatgggggaggctaactgaaacacggaaggagacaataccggaaggaacccgcgctatgacggcaataaaaagacagaataaaacgcacgggtgttgggtcgtttgttcataaacgcggggttcggtcccagggctggcactctgtcgataccccaccgagaccccattggggccaatacgcccgcgtttcttccttttccccaccccaccccccaagttcgggtgaaggcccagggctcgcagccaacgtcggggcggcaggccctgccatagccactggccccgtgggttagggacggggtcccccatggggaatggtttatggttcgtgggggttattattttgggcgttgcgtggggtcaggtccacgactggactgagcagacagacccatggtttttggatggcctgggcatggaccgcatgtactggcgcgacacgaacaccgggcgtctgtggctgccaaacacccccgacccccaaaaaccaccgcgcggatttctggcgtgccaagctagtcgaccaattctcatgtttgacagcttatcatcgcagatccgggcaacgttgttgccattgctgcaggcgcagaactggtaggtatggaagatctatacattgaatcaatattggcaattagccatattagtcattggttatatagcataaatcaatattggctattggccattgcatacgttgtatctatatcataatatgtacatttatattggctcatgtccaatatgaccgccat序列标识号8来源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述肽链，包含cyn0TLR3胞外域预测成熟形式。STNKCTVSQEVADCSHLKLTQVPDDLPTNITVLNLTHNQLRRLPAANFTRYSQLTILDVGFNSISKLEPELCQKLPMLKVLNLQHNELSQLSDKTFAFCTNLTELHLMSNSIQKIKNNPFVKQKNLITLDLSHNGLSSTKLGTQVQLENLQELLLSNNKIQALKSEELGILANSSLKKLELSSNQIKEFSPGCFHAIGRLLGLFLNNVQLGPRLTEKLCLELANTSVRNLSLSNSQLSTTSNTTFLGLKWTNLTMLDLSHNNLNVIGNDSFVWLPHLEYFFLEYNNIQHLLSHSLHGLFNVRYLNLKRSFTKQSISLASLPKIDDFSFRWLTCLEHLNMEDNDISGIKSNMFTGLINLKYLSLSNSFTSLQTLTNETFVSLAHSPLHILNLTKNKISKIESGAFSWLGHLEVLDLGLNEIGQELTGQEWSGLENIFEIYLSYNKYLQLTKNSFALVRSLQRLMLRRVALKNVDCSPSPFQPLGNLTILDLSNNNIANINDDMLEGLEKLEILDLQHNNLARLWKHANPGGPVYFLKGLSHLHILNLESNGFDEIPVEVFKDLSELKIIDLGLNNLNTLPASVFDNQVSLKSLNLQKNLITSVEKKVFGPAFRNLSNLDMRFNPFDCTCESIAWFVNWINKTHANIPELSSHYLCNTPPHYHGFPVRLFDTSSCKDSAPFEL
序列标识号9来源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述肽链，包含不带氨基末端甲硫氨酸残基的预测cyn0TLR3信号肽以及胞 外域。RQTLPYTYFWWGLLPFGMLCASSTNKCTVSQEVADCSHLKLTQVPDDLPTNITVLNLTHNQLRRLPAANFTRYSQLTILDVGFNSISKLEPELCQKLPMLKVLNLQHNELSQLSDKTFAFCTNLTELHLMSNSIQKIKNNPFVKQKNLITLDLSHNGLSSTKLGTQVQLENLQELLLSNNKIQALKSEELGILANSSLKKLELSSNQIKEFSPGCFHAIGRLLGLFLNNVQLGPRLTEKLCLELANTSVRNLSLSNSQLSTTSNTTFLGLKWTNLTMLDLSHNNLNVIGNDSFVWLPHLEYFFLEYNNIQHLLSHSLHGLFNVRYLNLKRSFTKQSISLASLPKIDDFSFRWLTCLEHLNMEDNDISGIKSNMFTGLINLKYLSLSNSFTSLQTLTNETFVSLAHSPLHILNLTKNKISKIESGAFSWLGHLEVLDLGLNEIGQELTGQEWSGLENIFEIYLSYNKYLQLTKNSFALVRSLQRLMLRRVALKNVDCSPSPFQPLGNLTILDLSNNNIANINDDMLEGLEKLEILDLQHNNLARLffKHANPGGPVYFLKGLSHLHILNLESNGFDEIPVEVFKDLSELKIIDLGLNNLNTLPASVFDNQVSLKSLNLQKNLITSVEKKVFGPAFRNLSNLDMRFNPFDCTCESIAWFVNWINKTHANIPELSSHYLCNTPPHYHGFPVRLFDTSSCKDSAPFEL序列标识号10来源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述肽链，包含cyn0TLR3胞外域预测成熟形式、跨膜域以及胞质域。STNKCTVSQEVADCSHLKLTQVPDDLPTNITVLNLTHNQLRRLPAANFTRYSQLTILDVGFNSISKLEPELCQKLPMLKVLNLQHNELSQLSDKTFAFCTNLTELHLMSNSIQKIKNNPFVKQKNLITLDLSHNGLSSTKLGTQVQLENLQELLLSNNKIQALKSEELGILANSSLKKLELSSNQIKEFSPGCFHAIGRLLGLFLNNVQLGPRLTEKLCLELANTSVRNLSLSNSQLSTTSNTTFLGLKWTNLTMLDLSHNNLNVIGNDSFVWLPHLEYFFLEYNNIQHLLSHSLHGLFNVRYLNLKRSFTKQSISLASLPKIDDFSFRWLTCLEHLNMEDNDISGIKSNMFTGLINLKYLSLSNSFTSLQTLTNETFVSLAHSPLHILNLTKNKISKIESGAFSWLGHLEVLDLGLNEIGQELTGQEWSGLENIFEIYLSYNKYLQLTKNSFALVRSLQRLMLRRVALKNVDCSPSPFQPLGNLTILDLSNNNIANINDDMLEGLEKLEILDLQHNNLARLWKHANPGGPVYFLKGLSHLHILNLESNGFDEIPVEVFKDLSELKIIDLGLNNLNTLPASVFDNQVSLKSLNLQKNLITSVEKKVFGPAFRNLSNLDMRFNPFDCTCESIAWFVNWINKTHANIPELSSHYLCNTPPHYHGFPVRLFDTSSCKDSAPFELFFMINTSILLIFIFVVLLIHFEGWRISFYWNVSVHRVLGFKEIDRQTEQFEYAAYIIHAHKDKDffVffEHFSSMEKEDQSLKFCLEERDFEAGVFELEAIVNSIKRSRKIIFIITHHLLKDPLCKRFKVHHAVQQAIEQNLDSIILIFLEEI
PDYKLNHALCLRRGMFKSHCILNWPVQKERIGAFHHKLQVALGSKNSVH序列标识号11来源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述肽链，包含不带氨基末端甲硫氨酸残基的预测cyn0TLR3信号肽、胞外 域、跨膜域以及胞质域。RQTLPYTYFWWGLLPFGMLCASSTNKCTVSQEVADCSHLKLTQVPDDLPTNITVLNLTHNQLRRLPAANFTRYSQLTILDVGFNSISKLEPELCQKLPMLKVLNLQHNELSQLSDKTFAFCTNLTELHLMSNSIQKIKNNPFVKQKNLITLDLSHNGLSSTKLGTQVQLENLQELLLSNNKIQALKSEELGI
LANSSLKKLELSSNQIKEFSPGCFHAIGRLLGLFLNNVQLGPRLTEKLCLELANTSVRNLSLSNSQLSTTSNTTFLGLKWTNLTMLDLSHNNLNVIGNDSFVWLPHLEYFFLEYNNIQHLLSHSLHGLFNVRYLNLKRSFTKQSISLASLPKIDDFSFRWLTCLEHLNMEDNDISGIKSNMFTGLINLKYLS
LSNSFTSLQTLTNETFVSLAHSPLHILNLTKNKISKIESGAFSWLGHLEVLDLGLNEIGQELTGQEWSGLENIFEIYLSYNKYLQLTKNSFALVRSLQRLMLRRVALKNVDCSPSPFQPLGNLTILDLSNNNIANINDDMLEGLEKLEILDLQHNNLARLffKHANPGGPVYFLKGLSHLHILNLESNGFDEIPVEVFKDLSELKIIDLGLNNLNTLPASVFDNQVSLKSLNLQKNLITSVEKKVFGPAFRNLSNLDMRFNPFDCTCESIAWFVNWINKTHANIPELSSHYLCNTPPHYHGFPVRLFDTSSCKDSAPFELFFMINTSILLIFIFVVLLIHFEGWRISFYWNVSVHRVLGFKEIDRQTEQFEYAAYIIHAHKDKDffVWEHFSSMEKEDQSLKFCLEERDFEAGVFELEAIVNSIKRSRKIIFIITHHLLKDPLCKRFKVHHAVQQAIEQNLDSIILIFLEEIPDYKLNHALCLRRGMFKSHCILNWPVQKERIGAFHHKLQVALGSKNSVH序列标识号12来源智人序列描述多核苷酸，编码全长人TLR3肽链。atgagacagactttgccttgtatctacttttgggggggccttttgccctttgggatgctgtgtgcatcctccaccaccaagtgcactgttagccatgaagttgctgactgcagccacctgaagttgactcaggtacccgatgatctacccacaaacataacagtgttgaaccttacccataatcaactcagaagattaccagccgccaacttcacaaggtatagccagctaactagcttggatgtaggatttaacaccatctcaaaactggagccagaattgtgccagaaacttcccatgttaaaagttttgaacctccagcacaatgagctatctcaactttctgataaaacctttgccttctgcacgaatttgactgaactccatctcatgtccaactcaatccagaaaattaaaaataatccctttgtcaagcagaagaatttaatcacattagatctgtctcataatggcttgtcatctacaaaattaggaactcaggttcagctggaaaatctccaagagcttctattatcaaacaataaaattcaagcgctaaaaagtgaagaactggatatctttgccaattcatctttaaaaaaattagagttgtcatcgaatcaaattaaagagttttctccagggtgttttcacgcaattggaagattatttggcctctttctgaacaatgtccagctgggtcccagccttacagagaagctatgtttggaattagcaaacacaagcattcggaatctgtctctgagtaacagccagctgtccaccaccagcaatacaactttcttgggactaaagtggacaaatctcactatgctcgatctttcctacaacaacttaaatgtggttggtaacgattcctttgcttggcttccacaactagaatatttcttcctagagtataataatatacagcatttgttttctcactctttgcacgggcttttcaatgtgaggtacctgaatttgaaacggtcttttactaaacaaagtatttcccttgcctcactccccaagattgatgatttttcttttcagtggctaaaatgtttggagcaccttaacatggaagataatgatattccaggcataaaaagcaatatgttcacaggattgataaacctgaaatacttaagtctatccaactcctttacaagtttgcgaactttgacaaatgaaacatttgtatcacttgctcattctcccttacacatactcaacctaaccaagaataaaatctcaaaaatagagagtgatgctttctcttggttgggccacctagaagtacttgacctgggccttaatgaaattgggcaagaactcacaggccaggaatggagaggtctagaaaatattttcgaaatctatctttcctacaacaagtacctgcagctgactaggaactcctttgccttggtcccaagccttcaacgactgatgctccgaagggtggcccttaaaaatgtggatagctctccttcaccattccagcctcttcgtaacttgaccattctggat
ctaagcaacaacaacatagccaacataaatgatgacatgttggagggtcttgagaaactagaaattctcgatttgcagcataacaacttagcacggctctggaaacacgcaaaccctggtggtcccatttatttcctaaagggtctgtctcacctccacatccttaacttggagtccaacggctttgacgagatcccagttgaggtcttcaaggatttatttgaactaaagatcatcgatttaggattgaataatttaaacacacttccagcatctgtctttaataatcaggtgtctctaaagtcattgaaccttcagaagaatctcataacatccgttgagaagaaggttttcgggccagctttcaggaacctgactgagttagatatgcgctttaatccctttgattgcacgtgtgaaagtattgcctggtttgttaattggattaacgagacccataccaacatccctgagctgtcaagccactacctttgcaacactccacctcactatcatgggttcccagtgagactttttgatacatcatcttgcaaagacagtgccccctttgaactctttttcatgatcaataccagtatcctgttgatttttatctttattgtacttctcatccactttgagggctggaggatatctttttattggaatgtttcagtacatcgagttcttggtttcaaagaaatagacagacagacagaacagtttgaatatgcagcatatataattcatgcctataaagataaggattgggtctgggaacatttctcttcaatggaaaaggaagaccaatctctcaaattttgtctggaagaaagggactttgaggcgggtgtttttgaactagaagcaattgttaacagcatcaaaagaagcagaaaaattatttttgttataacacaccatctattaaaagacccattatgcaaaagattcaaggtacatcatgcagttcaacaagctattgaacaaaatctggattccattatattggttttccttgaggagattccagattataaactgaaccatgcactctgtttgcgaagaggaatgtttaaatctcactgcatcttgaactggccagttcagaaagaacggataggtgcctttcgtcataaattgcaagtagcacttggatccaaaaactctgtacat序列标识号13来源智人序列描述肽链，包含全长人TLR3肽链。MRQTLPCIYFWGGLLPFGMLCASSTTKCTVSHEVADCSHLKLTQVPDDLPTNITVLNLTHNQLRRLPAANFTRYSQLTSLDVGFNTISKLEPELCQKLPMLKVLNLQHNELSQLSDKTFAFCTNLTELHLMSNSIQKIKNNPFVKQKNLITLDLSHNGLSSTKLGTQVQLENLQELLLSNNKIQALKSEELDIFANSSLKKLELSSNQIKEFSPGCFHAIGRLFGLFLNNVQLGPSLTEKLCLELANTSIRNLSLSNSQLSTTSNTTFLGLKWTNLTMLDLSYNNLNVVGNDSFAWLPQLEYFFLEYNNIQHLFSHSLHGLFNVRYLNLKRSFTKQSISLASLPKIDDFSFQWLKCLEHLNMEDNDIPGIKSNMFTGLINLKYLSLSNSFTSLRTLTNETFVSLAHSPLHILNLTKNKISKIESDAFSWLGHLEVLDLGLNEIGQELTGQEWRGLENIFEIYLSYNKYLQLTRNSFALVPSLQRLMLRRVALKNVDSSPSPFQPLRNLTILDLSNNNIANINDDMLEGLEKLEILDLQHNNLARLffKHANPGGPIYFLKGLSHLHILNLESNGFDEIPVEVFKDLFELKIIDLGLNNLNTLPASVFNNQVSLKSLNLQKNLITSVEKKVFGPAFRNLTELDMRFNPFDCTCESIAWFVNWINETHTNIPELSSHYLCNTPPHYHGFPVRLFDTSSCKDSAPFELFFMINTSILLIFIFIVLLIHFEGWRISFYWNVSVHRVLGFKEIDRQTEQFEYAAYIIHAYKDKD
WVWEHFSSMEKEDQSLKFCLEERDFEAGVFELEAIVNSIKRSRKIIFVITHHLLKDPLCKRFKVHHAVQQAIEQNLDSIILVFLEEIPDYKLNHALCLRRGMFKSHCILNWPVQKERIGAFRHKLQVALGSKNSVH序列标识号14来源人工合成
序列描述化学合成的多核苷酸引物，用于编码cyn0TLR3肽链的多核苷酸的PCR 扩增。cccaagcttgccaccatgagacagactttgccttgtatctac序列标识号15来源人工合成序列描述化学合成的多核苷酸引物，用于编码cyn0TLR3肽链的多核苷酸的PCR 扩增。cccctcgagttaatgtacagagtttttggatccaagtgct序列标识号16来源人工合成序列描述化学合成的多核苷酸引物，用于编码cyn0TLR3肽链的多核苷酸的PCR 扩增。catggatccttcaaagggggcactgtctttgc序列标识号17来源人工合成序列描述化学合成的多核苷酸引物，用于编码cyn0TLR3肽链的多核苷酸的PCR 扩增。cactgttatgtttgtggggagatcatcgg序列标识号18来源人工合成序列描述化学合成的多核苷酸引物，用于编码cyn0TLR3肽链的多核苷酸的PCR 扩增。atcctacatccaagatagttagttggctat序列标识号19来源人工合成序列描述化学合成的多核苷酸引物，用于编码cyn0TLR3肽链的多核苷酸的PCR 扩增。caaggtacatcatgccgttcaac序列标识号20来源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述肽链，包含全长cyn0TLR3肽链。该肽链包含带氨基末端甲硫氨酸残基 的预测CynoTLR3信号肽、胞外域、跨膜域以及胞质域。MRQTLPYTYFWWGLLPFGMLCASSTNKCTVSQEVADCSHLKLTQVPDDLPTNITVLNLTHNQLRRLPAANFTRYSQLTILDVGFNSISKLEPELCQKLPMLKVLNLQHNELSQLSDKTFAFCTNLTELHLMSNSIQKIKNNPFVKQKNLITLDLSHNGLSSTKLGTQVQLENLQELLLSNNKIQALKSEELGILANSSLKKLELSSNQIKEFSPGCFHAIGRLLGLFLNNVQLGPRLTEKLCLELANTSVRNLSLSNSQLSTTSNTTFLGLKWTNLTMLDLSHNNLNVIGNDSFVWLPHLEYFFLEYNNIQHLLSHSLHGLFNVRYLNLKRSFTKQSISLASLPKIDDFSFRWLTCLEHLNMEDNDISGIKSNMFTGLINLKYLSLSNSFTSLQTLTNETFVSLAHSPLHILNLTKNKISKIESGAFSWLGHLEVLDLGLNEIGQELT
GQEffSGLENIFEIYLSYNKYLQLTKNSFALVRSLQRLMLRRVALKNVDCSPSPFQPLGNLTILDLSNNNIANINDDMLEGLEKLEILDLQHNNLARLWKHANPGGPVYFLKGLSHLHILNLESNGFDEIPVEVFKDLSELKIIDLGLNNLNTLPASVFDNQVSLKSLNLQKNLITSVEKKVFGPAFRNLSNLDMRFNPFDCTCESIAWFVNWINKTHANIPELSSHYLCNTPPHYHGFPVRLFDTSSCKDSAPFELFFMINTSILLIFIFVVLLIHFEGWRISFYWNVSVHRVLGFKEIDRQTEQFEYAAYIIHAHKDKDWVWEHFSSMEKEDQSLKFCLEERDFEAGVFELEAIVNSIKRSRKIIFIITHHLLKDPLCKRFKVHHAVQQAIEQNLDSIILIFLEEIPDYKLNHALCLRRGMFKSHCILNWPVQKERIGAFHHKLQVALGSKNSVH序列标识号21来源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述多核苷酸，编码包含全长cyn0TLR3肽链的肽链。该肽链包含带氨基末 端甲硫氨酸残基的预测cynoTLR3信号肽、胞外域、跨膜域、胞质域。该多核苷酸序列中还包 含终止密码子。atgagacagactttgccttatacctacttttggtggggacttttgccctttgggatgctgtgtgcatcctccaccaacaaatgcactgttagccaagaagttgctgactgcagccacctgaagttaactcaggtacccgatgatctccccacaaacataacagtgttgaatcttacccataatcaactcagaagattaccagctgccaattttacaagatatagccaactaactatcttggatgtaggatttaactccatctcaaaactggagccagaattgtgccaaaaacttcccatgttaaaagttttgaacctccagcacaatgagctatctcaactttctgataaaacttttgccttctgcacgaatttgacggaactccatctcatgtccaactcaatccagaaaattaaaaataatccctttgtaaagcagaagaatttaatcacattagatctgtctcataatggcttgtcatctacaaaattaggaactcaggttcagctggaaaatctccaagagcttctattatcaaacaataaaatccaagcgctaaaaagtgaagaacttggtatccttgccaattcatctttaaaaaagttagagttgtcatcgaatcaaattaaagagttttctccagggtgttttcacgcaattggaagattattgggcctctttctgaacaatgtccagctgggtccccgcctcacagagaagctatgtttggaattagcaaacacaagcgttcggaatctgtctctgagtaacagccagctgtccaccaccagcaatacaactttcttgggactaaagtggacaaacctcactatgctcgatctttcccacaacaacttaaatgtgattggtaacgattcctttgtttggcttccacatctagaatatttcttcctggagtataataatatacagcatttgctctctcactctttgcacgggcttttcaatgtgcggtacctgaatttgaaacggtcttttactaaacaaagtatttcccttgcttcgctccccaagattgatgatttttcttttcggtggctaacatgtttggagcaccttaacatggaagataatgatatttcaggcataaaaagcaatatgttcacaggattgataaacctgaaatacttaagtctatccaactcctttacaagtttgcaaactttgacaaatgaaacatttgtatcacttgctcattctcccttacacatactcaacctaaccaagaataaaatctcaaaaatagagagtggtgccttctcttggttgggccacctagaagtacttgacttgggccttaatgaaattgggcaagaactcacaggccaggaatggagtggtctagaaaatattttcgaaatctatctttcctacaacaagtacctgcaactgactaagaactcctttgccttggtccgaagccttcaacgactgatgctccgaagggtggcccttaaaaatgtggattgctctccttcaccattccagcctcttggtaacctgaccattctggatctaagcaacaacaacatagccaacataaatgatgacatgttggaaggtcttgagaaactagaaattctggatttgcagcataacaacttagcacggctctggaaacacgcaaaccctggtggtcctgt
ttatttcctaaagggtctgtctcacctccacatccttaacttggagtctaatggctttgacgagatcccagttgaggtcttcaaggatttatctgaactaaagatcattgatttaggattgaataatttaaacacacttccagcgtctgtctttgataatcaggtgtctctaaagtcattgaaccttcagaagaatctcataacatcagttgagaagaaggttttcgggccagctttcaggaacctgagtaacttagatatgcgctttaatccctttgattgcacatgtgaaagtattgcctggtttgttaattggattaacaagacccacgccaacatccctgagctgtcaagccactacctttgcaacactccaccccactatcatgggttcccagtgagactttttgatacatcatcctgcaaagacagtgccccctttgaactctttttcatgatcaataccagtatcctgttgatttttatctttgttgtacttctcatccactttgagggctggaggatatctttttactggaatgtttcagtacatcgagttcttggtttcaaagaaatagacagacagacagaacagtttgaatatgcagcatatataattcacgcccataaagataaggattgggtctgggaacatttctcttcaatggaaaaggaagaccaatctctcaaattttgtctggaagaaagggactttgaggcaggtgtttttgaactggaagcaattgttaacagcatcaaaagaagcagaaaaattatttttattataacacaccatctattaaaagacccattatgcaaaagattcaaggtacatcatgccgttcaacaagctattgaacaaaatctggattccattatattgattttccttgaggagattccagattataaactgaaccatgcactctgtttgcgaagaggaatgtttaaatctcactgcatcttgaactggccagttcagaaagaacggataggtgcctttcatcataaactgcaagtagca
cttggatccaaaaactcagtacattaa序列标识号22来源食蟹猴(Macaca fascicularis)序列描述多核苷酸，编码全长恒河猴TLR3肽链。atgagacagactttgccttatacctacttttggtggggacttttgccctttgggatgctgtgtgcatcctccaccaacaaatgcactgttagccaagaagttgctgactgcagccacctgaagttaactcaggtacccgatgatctccccacaaacataacagtgttgaatcttacccataatcaactcagaagattaccagctgccaattttacaagatatagccaactaactatcttggatgtaggatttaactccatctcaaaaccggagccagaattgtgccaaaaacttcccatgttaaaagttttgaacctccagcacaatgagctatctcaactttccgataaaacttttgccttctgcatgaatttgacggaactccattccctgtcccactcaatccagaaaattaaaaataatccctttgtcaagcagaagaatttaatcacattagatctgtctcataatggcttgtcatctataaaattaggaactcaggttcagatggaaaatctccaagagcttctattatcaaacaataaaatccaagcgctaaaaagtgaagaacttggtatccttgccaattcatctttaaaaaagttagagttgtcatcgaatcaaattaaagagttttctccagggtgttttcacgcaattggaagatcattgggcctcttcctgaacaatgtccagctgggtccccgcctcacagagaagctatgtttggaattagcaaacacaagcgttcggaatctgtctctgagtaacagccagctgtctaccaccagcaatacaactttcttgggactaaagtggacaaacctcactatgcttgatctttcccacaacaacttaaatgtggttggtaacgattcctttgcttggcttccacaactagaatatttcttcctggagtataataatatacagcatttgctctctcactctttgcacgggcttttcaatgtgcggtacctgaatttgaaacggtcttttactaaacaaagtatttcccttgcttcgctccccaagattgatgatttttcttttcggtggctaacatgtttggagcaccttaacatggaagataatgatatttcaggcataaaaagcaatatgttcacaggattgataaacctgaaatacttaagtctatccaactcctttacaagtttgcaaactttgacaaatgaaacatttgtatcacttgctc
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权利要求
1.一种分离多核苷酸，其包含具有序列标识号1中所示序列或其互补序列的多核苷酸。
2.一种分离多核苷酸，其包含具有序列标识号2中所示序列或其互补序列的多核苷酸。
3.一种分离多核苷酸，其包含具有序列标识号3中所示序列或其互补序列的多核苷酸。
4.一种分离多核苷酸，其包含具有序列标识号4中所示序列或其互补序列的多核苷酸。
5.一种分离多核苷酸，其包含具有序列标识号5中所示序列或其互补序列的多核苷酸。
6.一种包含分离多核苷酸的载体，所述分离多核苷酸具有选自序列标识号1、2、3、4、 5、6和7中所示的序列的序列。
7.根据权利要求6所述的载体，其为表达载体。
8.一种分离宿主细胞，其包含权利要求6所述的载体。
9.一种分离宿主细胞，其包含权利要求7所述的载体。
10.一种分离肽链，其包含具有序列标识号8中所示序列的肽链。
11.一种分离肽链，其包含具有序列标识号9中所示序列的肽链。
12.—种分离肽链，其包含具有序列标识号10中所示序列的肽链。
13.一种分离肽链，其包含具有序列标识号11中所示序列的肽链。
14.一种表达肽链的方法，所述方法包括以下步骤a)提供权利要求9所述的宿主细胞；b)在足以表达包含序列标识号8、序列标识号9、序列标识号10或序列标识号11中所 示序列的至少一条肽链的条件下培养所述宿主细胞；以及c)确认包含序列标识号8、序列标识号9、序列标识号10或序列标识号11中所示序列 的至少一条肽链的表达。
15.一种表达肽链的方法，所述方法包括以下步骤a)提供权利要求1、2、3、4、5、6或7所述的，能够被转录为编码包含序列标识号8、序列 标识号9、序列标识号10或序列标识号11中所示序列的至少一条肽链的RNA的多核苷酸；b)提供无细胞表达系统的组分；c)从所提供的所述多核苷酸启动无细胞表达；和d)确认包含序列标识号8、序列标识号9、序列标识号10或序列标识号11中所示序列 的至少一条肽链的表达。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述无细胞表达系统选自基于网织红细胞裂解 物的表达系统、基于麦胚提取物的表达系统和基于大肠杆菌提取物的表达系统。
17.—种表达肽链的方法，所述方法包括以下步骤a)提供编码包含序列标识号8、序列标识号9、序列标识号10或序列标识号11中所示 序列的至少一条肽链的RNA ；b)提供无细胞表达系统的组分；c)从所提供的所述RNA启动无细胞表达；和d)确认包含序列标识号8、序列标识号9、序列标识号10或序列标识号11中所示序列 的至少一条肽链的表达。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述无细胞表达系统选自基于网织红细胞裂解 物的表达系统、基于麦胚提取物的表达系统和基于大肠杆菌提取物的表达系统。
19.一种肽链，其用权利要求14所述的方法产生。
20.一种肽链，其用权利要求15所述的方法产生。
21.一种肽链，其用权利要求17所述的方法产生。
22.—种分离抗体，其特异性结合权利要求10、11、12、13、19、20、21或22所述肽链。
23.一种单克隆抗体，其特异性结合权利要求10、11、12、13、19、20、21或22所述肽链。
24.一种评估TLR3治疗剂安全性的方法，所述方法包括a)提供TLR3治疗剂、第一食蟹猴和第二食蟹猴；b)给所述第一食蟹猴施用所述TLR3治疗剂；和c)对比第二食蟹猴确定第一食蟹猴是否呈现有害症状，如果第一食蟹猴呈现有害症 状，则表明TLR3治疗剂是不安全的，如果第一食蟹猴没有呈现有害症状，则表明TLR3治疗 剂是安全的。
25.根据权利要求M所述的方法，其中所述TLR3治疗剂是抗体。
全文摘要
本发明涉及食蟹猴Toll样受体3(cynoTLR3)及其用途。本发明公开了编码食蟹猴Toll样受体3(cynoTLR3)的分离多核苷酸、可从这些多核苷酸的表达获得的多肽、重组细胞、以及它们的方法和用途。
文档编号C07K14/705GK102083984SQ200880126883
公开日2011年6月1日 申请日期2008年12月23日 优先权日2007年12月26日
发明者H·贝克, J·卡顿 申请人:森托科尔奥索生物科技公司