专利名称：一种沙苑子苷a的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种从中药材沙苑子中制备沙苑子苷A(COmplanatuside A)的方法， 属于天然药的有效成分提取分离领域。
背景技术：
沙苑子是豆科黄芪属植物扁茎黄芪(Astragalus complanatus R.Brown)的种子。 沙苑子苷Akomplanatuside A)是沙苑子中主要的活性成分，属于黄酮类化合物，其结构为 鼠李柠檬素_3，4’ -O-0-D-双葡萄糖甙，淡黄色结晶，其结构如图 根据文献报道，沙苑子中的黄酮类化合物具有较好的保肝、抗纤维化、降血脂等药 理作用，并具有显著的抗肿瘤作用。有人研究了从沙苑子中提取总黄酮的工艺，但是我们从 总黄酮中进一步纯化分离，得到沙苑子苷A的纯品，含量在98%以上。
发明内容
1、发明目的本发明的目的是提供一种获得沙苑子苷A的确实可行的制备方法。2、技术方案本发明所述的沙苑子苷A的制备方法，其特征在于该方法包括以下 步骤(1)将沙苑子用80%乙醇水的溶剂加热到80°C回流提取。(2)将(1)乙醇水提取的提取液浓缩蒸至无醇味后，用乙酸乙酯萃取后，水溶液用 水饱和的正丁醇萃取。(3)将(2)水饱和的正丁醇萃取液浓缩后用水溶解。(4)将(3)的水溶液过大孔树脂柱，用10_30%、50% -70%甲醇水以此洗脱。(5)将(4) 50%-70%甲醇水洗脱液浓缩至干，用少量甲醇溶解后过反相C18柱，用 30% -50%甲醇水洗脱。收集(5)30% -50%甲醇水洗脱液中含有沙苑子苷A的馏分，浓缩后，重结晶即可 得到高纯度的目标化合物沙苑子苷A。在步骤(1)中，所用的80%乙醇水溶液，其用量是药材重量的10-15倍，药材热回 流提取的时间是6-12小时，热回流次数是3-5次。在步骤(2)中，所用乙酸乙酯用量是被萃取液体积的1-3倍，所用水饱和的正丁醇 用量是被萃取液体积的1-4倍。萃取2-4遍。在步骤(3)中，正丁醇萃取液浓缩至固态，加入水的量为药材重量0. 4-0. 8倍。
在步骤⑷中，所用的吸附树脂是D101和AB-8大孔树脂，所用的溶液是 50% -70%甲醇水。在步骤(5)中，所用的反相柱是C18柱，所用的溶液是30%-50%甲醇水，所用的 溶剂是水和有机溶剂，有机溶剂可以是甲醇或乙醇溶剂；重结晶的次数可以是1-3次。3、有益效果采用本发明的沙苑子苷A提取纯化方法，(1)从沙苑子中分离得到 的沙苑子苷A得率在48%以上，纯度在99%以上。(2)根据文献报道的高效液相检测条件 (《HPLC测定沙苑子中沙苑子苷A的含量》(中国中药杂志，2005，30 600-602))进行测定， 结果表明，所得的沙苑子苷A含量在98%以上，表明本工艺可行。
具体实施例方式下面是本发明的实施例，但本发明不仅限于所述实施例。实施例1 将沙苑子用药材重量10倍的80%乙醇水的溶剂加热到50°C回流提取 8小时，将提取液浓缩蒸至无醇味后，用被萃取液体积1倍的乙酸乙酯萃取3遍，水溶液再 用被萃取液体积1倍的正丁醇萃取3遍，正丁醇萃取液浓缩后用水溶解后过大孔树脂柱用 50%甲醇水洗脱，将50%甲醇水洗脱液浓缩后用水溶解后过反相C18柱，用30%甲醇水洗 脱，合并含有沙苑子苷A的馏分，浓缩后，用60%甲醇水重结晶即可得到高纯度的目标化合 物沙苑子苷A，得率为51. 1%，纯度为98. 7%。实施例2 将沙苑子用药材重量15倍的80%乙醇水的溶剂加热到50°C回流提取 9小时，将提取液浓缩蒸至无醇味后，用被萃取液体积2倍的乙酸乙酯萃取2遍，水溶液再 用被萃取液体积3倍的正丁醇萃取3遍，正丁醇萃取液浓缩后用水溶解后过大孔树脂柱用 60%甲醇水洗脱，将60%甲醇水洗脱液浓缩后用少量甲醇溶解后过反相C18柱，用40%甲 醇水洗脱，合并含有沙苑子苷A的馏分，浓缩后用80%乙醇水重结晶即可得到高纯度的目 标化合物沙苑子苷A，得率为49. 6 %，纯度为98. 1 %。实施例3 将沙苑子用药材重量13倍的80%乙醇水的溶剂加热到50°C回流提取 10小时，将提取液浓缩蒸至无醇味后，用被萃取液体积3倍的乙酸乙酯萃取2遍，水溶液再 用被萃取液体积3倍的水饱和正丁醇萃取3遍，正丁醇萃取液浓缩后用水溶解后过大孔树 脂柱用70%甲醇水洗脱，将70%甲醇水洗脱液浓缩后用少量甲醇溶解后过反相C18柱，用 50%甲醇水洗脱，50%甲醇水洗脱液浓缩后，用90%甲醇水重结晶即可得到高纯度的目标 化合物沙苑子苷A，得率为55.6%，纯度为98. 5 %。沙苑子苷A的纯度检测取上述方法制备得到的沙苑子苷A单体适量，甲醇溶于容量瓶中，微孔滤膜过滤 后，采用如下条件进行检测。色谱条件Agileng 1100高效液相色谱仪器，Agilengt G1314A紫外检测 器；色谱柱Welch Materials XB-C18, 5 u m, 250 X 4. 6mm ；流动相乙腈-水-磷酸 (20 80 0. 2)，检测波长291nm，流速lml/min ；进样量20iil。对照品沙苑子苷A自制，经1H_NMR、MS、IR和UV等测定，其数据与文献一致，鉴定 为沙苑子苷A。TLC图谱为一个斑点，HPLC检测为单峰，归一化含量在98%以上，理论塔板 数在5000以上。以上描述了本发明中的沙苑子苷A的提取方法，但需要理解其中包含了本领域技术人员所理解的变化和改变。这些变化和改变也包含在权利要求所限定的本发明的范围 内。附图
为沙苑子苷A的HPLC分析谱图表1-1沙苑子苷A对照品纯度检查数据 对照品的波谱数据以及解析lUVmax (Me0H/H20 1 1) :267，319，342nm。2IR(KRr)V max :3380，1660，1600，1500，1080，1020cm_1o3ESIMS :[M+1] = 625。fH-WlUDMSO-d) 8 :5. 41 (1H，d，J = 7. 0Hz)，4. 88 (1H，d，J = 7. 0Hz)，6. 27 (1H， d, J = 1Hz, H-6)，6. 67 (1H, d, J = 1Hz, H_8)，7. 04 (2H, J = 9. 0Hz, H_l，，5，)，8. 04 (2H, J =9. 0Hz, H-2，，6，) ,3. 76 (3H, s，7_0CH3)。
权利要求
一种沙苑子苷A的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤(1)将沙苑子用80％乙醇水的溶剂加热到50℃回流提取.(2)将(1)乙醇水提取的提取液浓缩蒸至无醇味后，用乙酸乙酯萃取后，水溶液用水饱和的正丁醇溶液萃取。(3)将(2)正丁醇提取的提取液浓缩后用水溶解。(4)将(3)的水溶液过大孔树脂柱用50％-70％甲醇水洗脱(5)将(4)50％-70％甲醇水洗脱液浓缩至干，用少量甲醇溶解后过反相C18柱，用30％-50％甲醇水洗脱(6)将(5)30％-50％甲醇水洗脱液中含有沙苑子苷A的馏分，浓缩后，重结晶即可得到高纯度的目标化合物沙苑子苷A，纯度在98％以上。
2.根据权利要求1所述的一种沙苑子苷A的制备方法，其特征在于在步骤(1)中，所用 的乙醇水溶液中乙醇比可在30% -95%之间，其用量是药材的6-15倍。
3.根据权利要求1所述的一种沙苑子苷A的制备方法，其特征在于在步骤(1)中，药材 热回流提取的时间是6-12小时，热回流次数是3-5次。
4.根据权利要求1所述的一种沙苑子苷A的制备方法，其特征在于在步骤(2)中，所用 乙酸乙酯用量是被萃取液体积的1-3倍，萃取2-3遍。
5.根据权利要求1所述的一种沙苑子苷A的制备方法，其特征在于在步骤(2)中，所用 水饱和的正丁醇用量是被萃取液体积的1-4倍，萃取2-4遍。
6.根据权利要求1所述的一种沙苑子苷A的制备方法，其特征在于在步骤(3)中，浓缩 至固体状态。
7.根据权利要求1所述的一种沙苑子苷A的制备方法，其特征在于在步骤(3)中，水的 用量为药材重量的0. 4-0. 8倍。
8.根据权利要求1所述的一种沙苑子苷A的制备方法，其特征在于在步骤(4)中，所用 的吸附树脂是DlOl和AB-8的大孔树脂。
9.根据权利要求1所述的一种沙苑子苷A的制备方法，其特征在于在步骤(4)中，所用 的溶液是50% -70%甲醇水。
10.根据权利要求1所述的一种沙苑子苷A的制备方法，其特征在于在步骤(5)中，所 用的反相柱是C18柱。
11.根据权利要求1所述的一种沙苑子苷A的制备方法，其特征在于在步骤(5)中，所 用的溶液是30% -50%甲醇水。
12.根据权利要求1所述的一种沙苑子苷A的制备方法，其特征在于在步骤(5)中，所 用的溶剂是水和有机溶剂，有机溶剂可以是甲醇或乙醇溶剂；重结晶的次数可以是1-3次。
全文摘要
本文公开了一种从中药沙苑子中分离提取沙苑子苷A的方法。该方法的步骤是从中药沙苑子中用80％比的乙醇水提取液浓缩后经乙酸乙酯萃取后，再用水饱和的正丁醇萃取，正丁醇萃取液浓缩后用水溶解，经大孔树脂用10％-30％、50％-70％甲醇水洗脱，收集50％-70％甲醇水洗脱液，浓缩至干，用少量甲醇溶解，上反相C18柱，用30％-50％甲醇水洗脱后，收集含有沙苑子苷A洗脱液，挥干溶剂后，重结晶即可得到高纯度的目标化合物沙苑子苷A，纯度在98％以上。这种方法成功得到沙苑子苷A满足了市场上对中药对照品沙苑子苷A的需要，方法较为简单。
文档编号C07H17/07GK101863939SQ20091005707
公开日2010年10月20日 申请日期2009年4月15日 优先权日2009年4月15日
发明者何玉琴, 程萍, 谢天培, 费文静, 钱勇, 陈多加 申请人:上海诗丹德生物技术有限公司