专利名称:抗结核化合物帕格甾醇的合成方法
技术领域:
本发明涉及高效合成抗结核杆菌化合物帕格甾醇A和帕格留醇B的方法, 具体地说,是一种从猪去氧胆酸高效合成帕格甾醇A和帕格甾醇B的方法。
背景技术:
天然产物是一直是结构多样性和高生物活性化合物的不竭源泉。在寻找新 的抗结核杆菌化合物的过程中,两个具有新颖结构的结核杆菌抑制剂一帕格甾 醇A和B引起我们的关注。2007年Xiamei Wei报道以抗结核杆菌活性为导向,从 50Kg加勒比海波多黎各岛(Puerto Rico)的拉帕格尔拉海湾(La Parguera)海绵体 OSW"zm ze一的甲醇一氯仿提取液中,分离纯化得到3.5mg帕格甾醇 A(Parguesterol A, 0.007% yieW)和4.5mg帕格甾醇B (Parguesterol B, 0.009% yield),经2D NMR、 IR、 UV和MS波谱分析,确定其结构分别为B-失碳-24-高 一A柳,24,-6P一 甲 醛 基 _3|3- 羟 基 胆 甾 烷 (B-
nor-24-homo-A5(6),24(2S-6P-formyl-3p-hydroxylcholestane)和B-失碳-24-高 -△24(28)-6P-甲醛基二羟基胆甾烷(B-n0r-24-h0m0-A24(28)-6|3-formyl-3p,5p:dihydroxylcholestane)。由于它们来源于波多黎各岛(Puerto Rico)的拉帕格 尔拉海湾(La Parguera)的海绵体(Sve"zea zed)中,命名为帕格甾醇A和B (Parguesterol A and B)。
帕格甾醇A和帕格甾醇B是具有罕见5(6—7)abeo-AB环的全新结构甾体化 合物。独特的结构决定其独特的生物学活性,帕格甾醇A和帕格甾醇B对结核 杆菌具有抑制作用,其最小抑制浓度MIC分别为7.8ug/ml和11.2ug/ml (Xiamei Wei; Abimael D. Rodriguez; Yuehong Wang. Novel ring B abeo-sterols as growth inhibitors of聊co6"c/eh画/wZ^cw/oy/>s isolated from a Caribbean Sea sponge, Sve認az柳'.refra/zecf醒丄成2007, 48, 8851-8854.)。Parguesterol A Parguesterol B
Fig. 1帕格甾醇A和帕格甾醇B的结构
由于帕格甾醇在天然海绵中含量极微,不可能通过提取大量获得,不能得 到足够量的样品来进行抗结核杆菌体内活性实验和新药研究。迄今为止,帕格
甾醇A和帕格甾醇B的合成未见报道。帕格甾醇A和帕格甾醇B罕见的化学结 构和抗结核杆菌特性,引起我们的研究兴趣。我们的研究目标是建立帕格甾醇A 和帕格甾醇B的原子经济的、高效的合成方法,为合成不同侧链的帕格甾醇类 似物提供方法学和物质基础,建立帕格甾醇的构效关系,最终研发出具有新颖 的5(6—7)abeo—AB环甾体结构的抗结核病新药。
具有5(6—7)abeo—AB环甾体结构的化合物在自然界中极为罕见。文献中仅 有几例报道。1998年,Lin首次从台湾杉(Taiwaniacryptomerioides)叶中提取分离 得到4个具有5(6—7)abeo—AB环甾体结构的新化合物一台湾甾醇A—D(见Fig. 2) (Taiwaniasterols A-D),其生物活性和合成未见报道(Lin W.; Fang, J.; Cheng, Y. /^ytoc^m〖sf^;. 1998,48,1391—1398.) 。 2001年Miyamoto从2.0kg日本福冈县 奥鲁海湾海绵OSte〃^to 的丙酮提取液中分离得到3.6mg又一个具有 5(6—7)abeo—AB环甾体结构的奥鲁甾醇(见Fig,2) (Orostanal, 1.8x10—4% yield), 具有诱导人急性前髓白细胞(H L-60)凋亡的活性(Tomoftimi Miyamoto; Ryuichi Higuchi. Orostanal, a novel abeo-sterol inducing apoptosis in leukemia cell from a marine sponge, Stelletta hiwasaensis. re/ra^^/rw2丄e"., 2001, 42, 6349-6351.) 。 2002 年刘波报道了奥鲁甾醇的合成(Bo Liu, Wei-Shan Zhou. The first stereoselective synthesis of orostanal, a novel abeo-sterol inducing apoptosis in leukemia cells. Tetrahedron Letters, 2002,43, 4187—4189)。Taiwaniasterol D Orostanal
Fig. 2. 5(6—7)abeo—AB环甾体结构化合物
5(6—7)abeo—AB环甾体结构的构建是合成的关键之一 。 2001年Miyamoto报道以胆固醇为原料,通过臭氧化反应和醇醛縮合反应构 建5(6—7)abeo—AB环甾体结构。其方法是胆固醇在一78。C下,经臭氧化A^ 双键开环得到5,6-断-3p-羟基-5-酮-6-醛胆固醇,然后在LDA作用下,进行分子 内醇醛縮合得具有5(6—7)abeo—AB环甾体结构的化合物KPN-2001,两步反应 的收率为 32.9% (Tomofumi Miyamoto; Ryuichi Higuchi. Orostanal,a novel abeo-sterol inducing apoptosis in leukemia cell from a marine sponge, Stelletta hiwasaensis. r欲a/z^ira"Z饥,2001, 42, 6349-6351.)。
KPN-2001
2002年,刘波对构建5(6—7)abeo—AB环甾体结构进行了改进A5_3p — 羟基胆垸酸甲酯在一78t:下,以甲醇一二氯甲烷混合溶液为溶剂,臭氧化开环 得5,6-断-3p-羟基-5-酮-6-醛胆烷酸甲酯,在室温下,经中性三氧化二铝催化,分 子内醇醛缩合得具有5(6—7)abeo—AB环甾体结构的化合物B-失碳-3(3,5p-二羟 基-6|3-甲醛基胆烷酸甲酯,两步反应的收率为72%,收率大大提高。其特点是以 中性三氧化二铝代替强碱LDA,反应条件更为温和,试剂价格降低,便于操作, 收率提高。
7.COOMe \^COOMe r 、7
03'CH2GI2-MeOH(4:1) f^t^> AI203,benZena
合成帕格甾醇的另一关键问题是^4(28)—甾体侧链的构建,而^24(28)—甾体
化合物(24 —亚甲基甾体化合物)的合成文献上仅见几例。1956年,Idler以^5-3卩-乙酰基胆烷酸酰氯为原料,与二异丙基镉试剂亲核加成以46%的收率得关键中 间体24 —酮胆甾烷,再与溴化甲基三苯基膦反应得^24(28)_胆甾烷,最后脱去 乙酰基以32%的总收率合成24 —亚甲基胆固醇,总收率低,而且二异丙基镉不 仅毒性大还污染环境,不能大量合成(D. R. Idler, U. H. M. Fagerlund. Marine Sterols. III. The Synthesis of 24-Me- thylene cholesterol and 25-Dehydrocholesterol. J.Am.Chem.Soc, 1956, 79, 1988-1991.)。 2000年,Kozue Nasu报道以3卩一羟基 TBS保护的链甾斷/\24(25)—胆固醇)为原料,经BH3、碱性过氧化氢对A,"一烯 加成得24—羟基化合物,经PCC氧化得24—酮化合物,再与溴化甲基三苯基膦 进行Wittig反应得A24,—化合物,脱去TBS保护基得24—亚甲基胆固醇,整 条路线从3(3—叔丁基二甲基硅基链甾醇出发,共经四步反应,以37%的总收率 合成24—亚甲基胆固醇,收率低,而且作为原料的链甾醇不易获得(KozueNasu, Kyoko Takahashi, Masuo Morisaki, Yoshinori Fujimoto. Stereochemical fate of C-26 and C-27 during the conversion of isofucosterol to sitosterol and of 24-methylenecholesterol to campesterol and dihydrobrassica- sterol in Oryza sativa cell cultures.尸/^toc/zem^w 2000, 54, 381-385.)。 2004年曾陇梅报道以大豆固醇 (A22(23)—2邻—乙基胆固醇)为原料,先用THP保护3卩—羟基,再经臭氧化反应
降解大豆固醇侧链得22 —醛化合物,再用Wittig试剂延长侧链得^22(23)—24_ 酮化合物,催化氢化还原^22(23)-烯,与碘化甲基三苯基膦反应得24—亚甲基胆 固醇。从大豆固醇出发,共经7步反应,以24%的总收率合成24 —亚甲基胆固 醇,此路线没有完整利用大豆固醇侧链,极不符合原子经济性(Jian Guo Cui, Cui Wu Lin, Long Mei Zeng, et al. Synthesis of polyhydroxysterols(III): synthesis and structural elucidation of 24-methylenechoiest-4-en扁3卩,6a-dio1. 5feraf<is. 2002, 67, 1015-1019; Wei Gang Lu, Cui Xian Zhang, Long Mei Zeng, et al. Synthesis ofpolyhydroxylsterols( V): efficient and stereospecific synthesis of 24-methylenecholest-5-ene-3(3,7a-diol and its C画7 epimer. tStero/<iy, 2004, 69, 803-808.)。
2008年,我们以AS-3(3-四氢吡喃氧基胆烷酸甲酯为前体,经两步反应,以 72.3%的总收率合成28-高^5(6)'24(28)邻-四氢吡喃氧基胆甾烷。(岳娟娟,周向东。 高效合成海洋天然产物一24 —亚甲基胆甾醇.第三军医大学学报,2008, 30(7): 621-624;) 。 2009年我们以各种胆垸酸甲酯为前体,经胺络合的Grignard试剂 异丙基化, 一步生成胆甾—24酮,再经Lombardo,s试剂烯化得各种A24,-甾 体化合物,其特点是^24(28)-甾体侧链的构建,只需胆垸酸甲酯直接选择性异丙 基化和烯化两步反应。此方法充分利用胆烷酸甲酯侧链的完整性,具有简洁、 高效和原子经济性(周向东,张琪,岳娟娟,徐长荣。中国专利厶24(28)—胆甾 类化合物的合成,中国专利申请号ZL200910103385.3)。
2008年,Xiamd Wd又由天然的不同侧链的^5-3^羟基海洋甾醇经臭氧化、 环合、脱水三步合成了六个不同侧链的、有抑制结核杆菌作用帕格甾醇A的类 似物。抗结核杆菌活性测试表明,化合物I、 II、 III、 IV、 V的
帕格甾醇A的一些类似物最小抑菌浓度MIC分别为13.6、 3.S、 15、 12.7和3.9 ug/ml。但其所用原料均为 天然提取,不易获得,且总收率低,不易大量合成,不适合于工业化生产。(Xiamei Wei; Abimael D. Rodriguez; Yuehong Wang; Scott G. Franzblau. Synthesis and in vitro biological evaluation of ring B abeo-sterols as novel inhibitors of Mycobacterium tuberculosis. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 2008, 18, 5448-5450)。
迄今为止,帕格甾醇A和帕格甾醇B的合成未见报道。鉴于帕格甾醇结构 的新颖性和显著的抗结核杆菌活性,我们拟建立帕格甾醇A和帕格甾醇B原子 经济的、高效合成方法,为研究具有新颖结构的5(6—7)abeo—AB环甾体抗结 核病新药打下基础。
因此,高效合成帕格甾醇成为发展新型抗结核新药的前提。
发明内容
本发明的目的是提供一种高效合成帕格甾醇A和帕格甾醇B的方法。
本发明帕格甾醇A和B的合成路线如下:
其中,步骤(a):式(l)所示猪去氧胆酸经甲酯化、对甲苯磺酸酯化、SN2亲 核取代-El消除反应三步一锅得式(2)所示么5-3(3-羟基胆烷酸甲酯;
10步骤(b):在有机溶剂中,式(2)所示AS-3(3-羟基胆烷酸甲酯先在臭氧作用下 氧化开环,再在还原剂作用下转变成式(3)所示5,6-断-3P-羟基-5-酮-6-醛基胆烷 酸甲酯;
步骤(c):在有机溶剂中,式(3)所示5,6-断-3P-羟基-5-酮-6-醛胆垸酸甲酯与 中性氧化铝反应,经过分子内醇醛縮合,转变成式(4)所示B-失碳-3p,5(3-二羟基 -6^甲醛基胆烷酸甲酯;
步骤(d):在有机溶剂中,式(4)所示B-失碳-3卩,5p二羟基-6卩-甲醛基胆垸酸 甲酯在酸性催化剂、脱水剂作用下,转变成式(5)所示B-失碳-3p,5P-二羟基-6(3-
二甲氧基甲基胆垸酸甲酯;
步骤(e):在有机溶剂中,式(5)所示B-失碳-3P,5(3-二羟基-6p-二甲氧基甲基 胆烷酸甲酯,在咪唑、叔丁基二甲基氯硅垸的作用下,经硅基化得式(6)所示B-失碳-邓-叔丁基二甲基硅氧基-5(3-羟基-6p-二甲氧基甲基胆垸酸甲酯;
步骤(f):在有机溶剂中,式(6)所示B-失碳-3(3-叔丁基二甲基硅氧基-5P-羟基 -6卩-二甲氧基甲基胆烷酸甲酯与异丙基溴化镁和胺络合剂混合溶液作用,经异丙 基化得式(7)所示B-失碳-3p-叔丁基二甲基硅氧基-5|3-羟基-6|3-二甲氧基甲基胆甾 -24-酮;
步骤(g):在有机溶剂中,式(7)所示B-失碳-3(3-叔丁基二甲基硅氧基-5p-羟 基-6(3-二甲氧基甲基胆甾-24-酮,与Lombardo's试剂或者在碱作用下与Wittig试 剂反应得式(8)所示B-失碳-24-高-A"^-3p-叔丁基二甲基硅氧基-5卩-羟基邻-二
甲氧基甲基胆甾烷;
步骤(h):在丙酮-水溶剂中,式(8)所示B-失碳-24-高-A"^-3p-叔丁基二甲
基硅氧基邻-羟基-6p-二甲氧基甲基胆甾垸经有机酸催化,脱去保护基后得式(9) 所示帕格甾醇B;
步骤(i):在有机溶剂中,式(9)所示帕格甾醇B在碱的作用下,经分子内脱 水得式(10)所示帕格甾醇A。
其中,上述步骤(a)中所述的猪去氧胆酸溶于甲醇,在浓硫酸催化下,于室温下,反应生成猪去氧胆酸甲酯;猪去氧胆酸甲酯溶于吡啶,于0。C 室温下,
与对甲苯磺酰氯作用,生成3a,6a-二对甲苯磺酰氧基猪去氧胆酸甲酯;3a,6a-二对甲苯磺酰氧基猪去氧胆酸甲酯溶于DMF和水的混合溶液,于105°C下与醋 酸钠反应,三步一锅得式(2)所示^5-3卩-羟基胆烷酸甲酯;
上述步骤(b)中所述的AS-3p-羟基胆烷酸甲酯与臭氧的摩尔比为1: 1.5~2; 反应条件为无水反应;反应温度为-70 -78"C,么5-3|3-羟基胆烷酸甲酯与还原剂 的摩尔比为l: 10~100。所述的有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、甲醇、乙醇、 异丙醇或其中任意两者的混合溶剂;所述还原剂为二甲硫醚。
上述歩骤(c)中所述的5,6-断-3p-羟基-5-酮-6-醛胆垸酸甲酯与中性氧化铝的 摩尔比为l: 30 60,反应温度为室温。所述的有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、 苯、甲苯、氯仿、二氯甲烷或四氢呋喃。
上述步骤(d)中所述的B-失碳-3(3,5P-二羟基-6P-甲醛基胆烷酸甲酯与酸性催 化剂的质量比(g/g)为1: 0.5 5; B-失碳-6(3-甲醛基-3(3,5p-二羟基胆垸酸甲酯
与脱水剂的摩尔比为1: 5~15;反应温度为室温。所述的有机溶剂为无水甲醇或
甲醇;所述的酸性催化剂为对甲苯磺酸、氯化铵或732#酸性树脂;所述的脱水 剂为原甲酸三甲酯。
上述步骤(e)中所述的B-失碳-3p,5p-二羟基-6P-二甲氧基甲基胆烷酸甲酯在 0 25"C下,溶于DMF中,在咪唑作用下,与叔丁基二甲基氯硅烷反应,即得 B-失碳-3 P-叔丁基二甲基硅氧基-5p-羟基-邻-二甲氧基甲基胆烷酸甲酯;
上述步骤(f)中所述的B-失碳-3P-叔丁基二甲基硅氧基-5p-羟基-邻-二甲氧基
甲基胆烷酸甲酯与异丙基溴化镁、胺络合剂的摩尔比为1: 2 5: 6 20;反应条
件为0 25°C、无水条件。所述的有机溶剂为四氢呋喃、乙醚或叔丁醇甲醚; 所述的胺络合剂为三乙胺、N, N, N, N-四甲基乙二胺或三乙胺和N, N, N, N-四甲 基乙二胺的混合溶液。
上述步骤(g)中所述的B-失碳-3p-叔丁基二甲基氯硅基邻-羟基-6(3-二甲氧基 甲基胆甾-24-酮与Lombardo,s试齐!j(Zn-TiCLrCH2Br2)的摩尔比为1: 1~20;反应
条件为0。C至室温、无水条件;所述的有机溶剂为二氯甲烷或四氢呋喃。或者B-失碳-3(3-叔丁基二甲基氯硅基-5p-羟基-6P-二甲氧基甲基胆甾-24-酮与碱、
Wittig试齐l」(碘化甲基三苯膦怖摩尔比为h 3~5: 3 6;反应条件为室温、无
水条件。所述的有机溶剂为苯、甲苯或四氢呋喃;所述的碱为叔丁醇钾或氢化 钠。
上述步骤(h)中所述的B-失碳-24-高-A^,3卩-叔丁基二甲基硅氧基-5(3-羟基 -6^-二甲氧基甲基胆甾垸与有机酸的摩尔比为1: 0.1~2;反应温度为室温。所述 的有机酸为对甲苯磺酸或樟脑磺酸。
上述步骤(i)中所述的帕格甾醇B与碱的摩尔比为1: 1~100;所述的含碱为 氢氧化钾、氢氧化纳、碳酸钾、碳酸钠;所述有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇 或四氢呋喃。
采用本发明的方法可以获得如式2所示结构的AS-3J3-羟基胆烷酸甲酯,如 式3所示结构的5,6-断-3(3-羟基-5-酮-6-醛基胆烷酸甲酯,如式4所示结构的B-失碳-3f3,5P-二羟基-6(3-甲醛基胆烷酸甲酯,如式5所示结构的B-失碳邻,5(3-二羟 基-6p-二甲氧基甲基胆烷酸甲酯,如式6所示结构的B-失碳-3(3-叔丁基二甲基硅 氧基-5p-羟基-6(3-二甲氧基甲基胆烷酸甲酯,如式7所示结构的B-失碳-3(3-叔丁 基二甲基硅氧基-5卩-羟基-6(3-二甲氧基甲基胆甾-24-酮,如式8所示结构的B-失 碳-24-高-^24(28)-3 (3-叔丁基二甲基硅氧基-5 (3-羟基-邻-二甲氧基甲基胆甾烷。B-失碳-3p,5p-二羟基-6(5-二甲氧基甲基 8-失碳-3卜叔丁基二甲基硅氧基邻-胆烷酸甲酯(5) 羟基-邻-二甲氧基甲基胆烷酸甲酯(6)
B-失碳-邓—叔丁基二甲基硅氧基-5p-, B-失碳-24-高-A^瑪-3(3-叔丁基二甲基硅氧基
羟基-6p-二甲氧基甲基胆甾-24-酮(7) -5|3-羟基-6|3-二甲氧基甲基胆甾烷(8)
采用本发明的方法可以获得如下结构的帕格甾醇A和帕格甾醇B。
parguesterol A parguesterol B
本发明所涉及的合成原料猪去氧胆酸是重要的化工原料,成本低廉,易于 获得。
本发明涉及帕格留醇的首次合成,它们可作为新型抗结核杆菌药物。
本方法是以廉价易得的猪去氧胆酸为原料,B-失碳-3p-叔丁基二甲基硅基 -5卩-羟基-6^-二甲氧基甲基胆垸酸甲酯(6)为关键中间体,经甲酯化、格氏异丙基 化、去保护等9步化学反应合成目标化合物,其中异丙基化为关键步骤。其特点 是完整利用猪去氧胆酸侧链,原子经济的合成目标分子,本方法中所得关键前 体和关键中间体易于衍生出各种帕格甾醇类似物,具有灵活性和通用性。
而Xiamei Wei的帕格甾醇类似物的合成原料来自天然的不同侧链的海洋甾 醇,不易获得且价格昂贵,侧链较为固定,不能产生侧链的多样性。本方法优 于Xiamei Wei的合成方法。
采用本发明的方法,本方法原料廉价易得、合成路线短、收率高、成本低、 反应条件温和,是一种适用于工业化生产的方法,本发明方法为帕格甾醇A和 帕格甾醇B的合成提供关键中间体和合成路线。
14通过以下实施例有助于进一步理解本发明,但并不用来限制本发明的内容。
具体实施例方式
所用材料、仪器和方法
本实施例中所用试剂均为化学纯,所有反应均以薄层层析跟踪,使用烟台
市芝罘黄务硅胶开发试验厂所生产的高效薄层层析硅胶板(型号CF-254),磷钼 酸显色。快速柱层析用同厂生产的层析硅胶(10—40p),层析用石油醚均为AR (60—90。C)。四氢呋喃在氮气保护下以钠和二苯甲酮回流至蓝色蒸出待用;苯 在氮气保护下以钠进行常压蒸馏;二氯甲烷、三乙胺以氢化钙回流数小时后蒸 出待用。
化合物熔点用上海精密科学仪器有限公司生产的WRR熔点仪测定,所有熔 点均为未校正。1HNMR和13CNMR由美国Vari肌公司生产的Mercury Plus-400 核磁共振谱仪测定,TMS作内标,未经特别说明,均用CDCl3作溶剂,化学位 移(3)单位为ppm。质谱由岛津QP5050A型质谱仪和HP5989A型质谱仪测定, 红外光谱由付立叶红外分光光度计FTIR-8700测定,用KBr压片。比旋光度由 Perkin画Eimer Moder 341 Polarimeter旋光《义领ij定。 实施例1
制备AS-3p-羟基胆垸酸甲酯
,「 O)MeOH, H2S04
L 丄 J (3)KOAc,DMF-H20 H^/^^ KOH-MeOH, 94%
1 2
以猪去氧胆酸l为原料,经甲酯化、对甲苯磺酰氯酯化、亲核取代-反式
消除3步一锅,以94%的收率合成化合物^-3(3-羟基胆烷酸甲酯。熔点 143.4°C-144.3°C。 [a]D20-42.3。。
产物经核磁共振检测,数据如下iHNMR(400MHz, CDC13) 5ppm: 0.679(s, 3H, 18-H3), 0-925(d, 3H, J=6.4Hz, 21-H3), l遍(s, 3H, 19-H3), 3.526(m, 1H, 3a-H),3.665(s, 3H, COOCH3), 5.359(d, 1H, J=3.6Hz, 6-H)。经质谱检测,数据如 下EI — MS (m/z): 388(M), 370(M-H20).经红外检测,数据如下IR(cm"): 3489(OH), 1716(COOCH3)。
实施例2
制备5,6-断-3p-羟基-5-酮-6-醛基胆垸酸甲酯(臭氧化反应)
250ml三口瓶中加入3.635g的A5-3P-羟基胆垸酸甲酯(9.368mmo1),氮气保 护下加入二氯甲垸和无水甲醇混合液150ml(CH2Cl2:MeOH=4:l),置于-78'C的低 温反应槽中。通入臭氧约30min,体系出现淡蓝色,停止通入臭氧,用氮气洗涤 反应系40min,滴加8ml二甲硫醚与10ml二氯甲烷的混合液。待滴加完毕,自 然升至室温,搅拌过夜。浓縮得粗品5.325g。快速柱层析(Pet:EtOAc^.75:l)得 无色油状物3.355g,收率85%。 [a]D2G: +82.3°(C, 0.53, CHC13)。
产物经核磁共振检测,数据如下'HNMR (400MHZ, CDC13) Sppm: 0.676(s, 3H, 18-H3), 0.918(d, 3H, J=6.4Hz, 21-H3), 1.002(s, 3H, 19-H3), 3.654(s,3H, COOCH3), 4.480(m, 1H, 3a-H), 9.610(s, 1H,-CHO);经质谱检测,数据如下 ESI-MS(m/z): 443(M+Na+);经红外检测,数据如下IR(cm"): 3443(OH), H40(CHO), 1713(C=Q)。
制备B-失碳-3(3,5(3 -二羟基-6(3-甲醛基胆烷酸甲酯(Add缩合反应)
100ml茄形瓶中加入191mg 5,6-断-3^羟基-5-酮-6-甲醛基胆烷酸甲酯 (0.453mmol),用8ml干苯溶解,加入1.923g的中性氧化铝(18.85mmo1),室温搅 拌过夜,过滤,乙酸乙酯洗涤,浓縮得粗品203mg。快速柱层析(Pet:EtOAc-2.5;l)得无色晶体177mg,收率92%。熔点93.3-94.4。C(文献mp: 95-96°C); [a]D2Q: 十31.5。(C, 0.53, CHCl3)(文献[a]o2o:+34.6。(C, 1.0, CHC13))。
产物经核磁共振检测,数据如下iHNMR(400MHz, CDCl3)Sppm: 0.717(s, 3H, 18-H3), 0.925(d, 3H, J=6.4Hz, 21-H3), 0.93(s, 3H, 19-H3) , 3.636(s, lH,6-H),3.660(s,3H,COOCH3),4.119(m, 1H, 3a画H), 9,698(d, J=3.2Hz, 1H, -CHO)。经质谱检测,数据如下ESI-MS(m/z):449(M+Na+)。经红外检测, 数据如下IR(cm"): 3539(OH), 3493(OH), 1726(CHO)。 实施例4
制备B-失碳-3p,5p-二羟基-6p-二甲氧基甲基胆烷酸甲酯(縮醛化反应)
,COOCH3
zCOOCH3
732 resin, absolute MeOH
HC(OMe)3 rt, 92%
100ml茄形瓶,加入搅拌子,加入用40ml绝对甲醇溶解的1.023g的B-失碳 -33,5卩-二羟-6卩-甲醛基基胆烷酸甲酯(2.42411111101),再加入1.578g 732#树脂和 3.2ml原甲酸三甲酯(24.240mmo1),室温搅拌10小时。抽滤,乙酸乙酯洗涤732# 树脂3次,减压除去溶剂得油状物1.538g。快速柱层析(Pet:EtOAc =3:1)得无色 油状物L047g,收率92%。 [a]D20: +37.5。 (C, 0.4, CHC13)(文献[a]r)20:+41.5。(C, 1.05, CHC13))。
产品经核磁共振检测,数据如下'HNMR(400MHz, CDC13) Sppm: 0.681 (s, 1H, 18-H3), 0.924(s, 3H, 19-H3), O,(d, 3H, J=6.4Hz, 21-H3), 3.429(s, 3H, OCH3), 3.441(s, 3H, OCH3), 3.666(s, 3H, COOCH3), 4.286(d, J=6.0Hz, 1H, 6-H)。经质谱检测,数据如下ESI-MS(m/z):489(M+Na+);经红外检测,数 据如下IR(cm"): 3470(OH), 1738(COOCH3)。 实施例5
制备B-失碳-3(3-叔丁基二甲基硅氧基-5p-羟基-6p-二甲氧基甲基胆垸酸甲 酯(硅基化反应)
17cooch3
25ml茄形瓶,加入760mg的B-失碳-3p,5p-二羟基-6(3-二甲氧基甲基胆垸酸 甲酯(1.631mmol),用3mlN,N-二甲基甲酰胺溶解,加入955mg咪唑(14.044mmo1), 待溶解后,滴加3ml含733mg叔丁基二甲基氯硅垸的N,N-二甲基甲酰胺溶液 (4.863mmo1),室温搅拌过夜。30ml乙酸乙酯溶解,分别用3X30ml水,3X30ml 饱和碳酸氢钠溶液,3X30ml饱和氯化钠溶液洗至中性,无水硫酸钠干燥,减压 除去溶剂得粗品1.353g。快速柱层析(Pet:EtOAc^25:l)得无色针状晶体901mg, 收率95%熔点71.3-72.4°C (文献mp: 71-72°C)。 [a]D2°: +9.7。(C, 0.54, CHCl3)(文 献[(x]d2o:十9.3。(C, 1.30, CHC13))。
产品经核磁共振检测,数据如下iHNMR(400MHz, CDC13) Sppm: 0.050(s, 3H, SiCH3), 0.058(s, 3H, SiCH3), 0.679(s, 3H, 18-H3), 0.844(s, 3H, 19-H3), 0.905(s, 9H, (CH3)3), 0.921(d, 3H, J二6.4Hz, 21-H3), 3.394(s, 3H, OCH3), 3.438(s, 3H, OCH3), 3.661(s, 3H, COOCH3), 4.042(m, 1H, 3a-H), 4.415(d, J=6.0Hz, 1H, 6-H)。经质谱检测,数据如下ESI-MS(m/z): 603(M+Na+)。经红 外检测,数据如下IR(cm"): 3492(OH), 1744(COOCH3)。 实施例6
制备B-失碳,-叔丁基二甲基硅氧基邻-羟基邻-二甲氧基甲基胆甾-24-酮:
(格氏反应)
50ml三颈瓶,加入90mg镁屑(3.750mmo1),装入干燥的滴液漏斗和直型冷 凝管,真空火焰干燥,N2保护下,冷至室温。快速加入4mlTHF和一小粒碘。搅拌下,加入几滴异丙基溴,待反应液变为无色溶液后,滴加0.38ml异丙基溴 (4.125mmol)至微沸,5分钟内加完,保温回流1小时至镁屑基本消失,反应液 为灰褐色。冷至室温,加入2.8ml三乙胺(20.000mmo1),出现白色沉淀。将所得混 合物置于冰浴0"C-2'C中,滴加含725mg B-失碳-3(3-叔丁基二甲基硅氧基-5P-羟 基-6p-二甲氧基甲基胆垸酸甲酯(1.250mmol)的THF溶液9.0ml,自然升至室温。 冰浴下滴加2X的HC1,有大量气泡放出,滤去剩余的镁及镁盐,减压除去大部 分THF, 3X20mlEtOAc提取,3 X 60ml饱和NaHC03 , 3 X 60ml饱和NaCl洗至 中性,无水Na2S04干燥,减压除去溶剂得粗品0.925g。快速柱层析(Pet:EtOAc/35:l) 后得537mg无色针状晶体,收率71%。熔点63.5-64.8°C。 [a]D2Q:+23.8°(C, 0.56, CHC13)。
经核磁共振检测,数据如下'HNMR(400MHz, CDC13) 5ppm: 0.060(s, 3H, SiCH3), 0.071(s, 3H, SiCH3), 0.679(s, 3H, 18-H3), 0.860(s, 3H, 19-H3), 0.907(s, 9H, (CH3)3), 0.924(d, 3H, J=6.8Hz, 21-H3), L227(d, 6H, J=6.4Hz, 26-H3 and 27-H3), 3.394(s, 3H, OCH3), 3.439(s, 3H, OCH3), 4.044(m, 1H, 3a誦H), 4.415(d, J=4.4Hz, 1H, 6-H); 13CNMR(400MHz, CDC13) 5ppm: 173.805(C-24), 107.070(C-6), 80.780(C-5), 68.626(03), 67.226(C-7), 55.885(C-14), 55.664(C-17), 49.937(C-9), 45.566(C-10) , 44.621(C-4) , 43.276(C-13) , 40.391(C-8) , 39.290(C-12), 35.388(020), 35.289(C-22) , 31.737(C-25) , 31.116(C-23) , 28.277(C-16), 28.205(C-2), 26.715(C-1), 25.663(C-15), 21.826(C-26), 21.799(C-27), 18.755 and 18.488(Si-C(CH3)3), 18.682(C-21) , 18.332(C-19) , 12.760(018), -4.864 and -5.134(Si-CH3)。经质谱检测,数据如下;ESI-MS(m/z):631(M+K+)。经红外检测, 数据如下IR(cm"): 3508(OH), 1728(00)。 实施例7
制备B-失碳-24-高-A,^3P-叔丁基二甲基硅氧基邻-羟基邻-二甲氧基甲 基胆甾垸(还原反应)O
25ml茄形瓶,上接滴液漏斗,加入磁子,抽气,真空火焰干燥,氮气保护 下,加入64mg锌粉(0.988mmo1),加入1.5ml四氢呋喃浸没锌粉,冰浴下0.2ml 滴加含0.02ml二溴甲浣(0.329mmol)的四氢呋喃,滴加完毕后,(TC下滴加0.2ml 含0.03ml四氯化钛(0.285mmol)的二氯甲垸,(TC下搅拌45min。滴加5ml含130mg B-失碳-3(3-叔丁基二甲基硅基-5p-羟基-6(3-二甲氧基甲基胆甾-24-酮(0.220mmo1) 的四氢呋喃,自然升至室温。冰浴下,滴加2%稀盐酸,出现灰白色浑浊,抽滤, 乙酸乙酯洗涤,减压除去溶剂,30ml乙酸乙酯溶解后转移至分液漏斗中,3x30ml 水洗,3x30ml饱和氯化钠洗,无水硫酸钠干燥,减压除去溶剂的粗品145mg。 快速柱层析(Pet:EtOAc/44:l)后得无色油状物91mg,收率72%。 [a]D2Q: +15.4°(C, 0.46, CHC13)。
产品经核磁共振检测,数据如下'HNMR(400MHz, CDC13) Sppm: 0.063 (s, 3H, Si-CH3), 0.074(s, 3H, Si-CH3), 0.687(s, 3H, 18-H3), 0.866(s, 3H, 19-H3), O細(s, 9H, (CH3)3), 0.921(d, 3H, J=6.8Hz, 21-H3), 1.212(d, 6H, J=6.4Hz, 26-H3and27-H3), 3攀396(s, 3H, OCH3), 3.438(s, 3H, OCH3), 4.045(m, 1H, 3a-H), 4.410(d, J=4.4Hz, 1H, 6-H), 4.667(s, 1H, 28a画H), 4.654(s, 1H, 28p-H)。 13CNMR (400MHz, CDC13) 3,: 146細(C画24), 109.337(C-28), 107.169(06), 80.841(05), 63.451(07), 68.639(C-3), 55.972(C-17), 55.563(C-14), 49.971(C-9), 45.589(C-10) , 44.995(C曙13) , 44.667(C-4) , 40.445(08) , 39.347(C-12), 35.712(C-20) , 34.801(C-22) , 33駕(C画25) , 31.055(023), 29.691(C-11), 28.407(C-16) , 28.232(C-2) , 26.723(C-1) , 25.720(C曙15) , 21.997(C-26), 21.841(C-27), 18.785(C-21), 18.091(C-19), 12.779(C-18)。
经质谱检测,数据 如下ESI-MS(m/z):613(M+Na+)。经红外检测,数据如下IR(cm"): 3469.5(OH), 3082.6(OCH2)。 实施例8制备B-失碳-24-高-厶,^3(3-叔丁基二甲基硅氧基-5p-羟基-6p-二甲氧基甲基胆甾烷(Wittig反应)
<formula>formula see original document page 21</formula>
50ml茄型瓶,加入磁子,真空火焰干燥,N2保护下,冷至室温。快速加入346mgPh3PCH3I(0.823mmol), 83mgt-BuOK(0.741mmol),千苯3ml,室温搅拌1小时。加入含100mg B-失碳-3(3-叔丁基二甲基硅氧基-5p-羟基-6(3-二甲氧基甲基胆甾-24-酮(0.165mmo1)的干苯溶液5ml,室温搅拌过夜。30ml EtOAc溶解,3X 30mlH2O, 3 X 30ml饱和NH4C1, 3 X30ml饱和NaCl洗涤,无水Na2S04干燥,减压除去溶剂得粗品102mg。快速柱层析(Pet:EtOAc/44:l)后得无色油状物85mg,收率88%。
物理参数和波谱数据见实施例7。实施例9
制备帕格甾醇B (B-失碳-24-高-A^,3p,5p-二羟基-6p-甲醛基胆甾垸)
(去保护反应)
25ml茄形瓶,加入用3ml丙酮-水(5:l)溶解的53mg B-失碳-24-高-△24(28)-3p-叔丁基二甲基硅氧基-5(3-羟基-6(3-二甲氧基甲基胆甾垸(0.090mmol), 加入28mg对甲苯磺酸(0.144mmo1),室温搅拌过夜。减压除去丙酮,15ml乙酸乙酯溶解后转移至分液漏斗中,3 X 15ml饱和碳酸氢钠溶液,3 X 15ml饱和氯化钠溶液洗涤,无水硫酸钠干燥,减压除去溶剂得粗品51mg。快速柱层析(Pet:EtOAc/4.5:l)得无色油状物35mg,收率:92 %。 [a]D2Q:十8.6。(C, 0.76, <:1^13)(文献
025:十9.2。(C,1.0, CHC13》。
产品经核磁共振检测,数据如下^NMR(400MHz, CDC13) 5ppm: t).713(s,3H, 18-H3), 0.925(s, 3H, 19-H3), 0.938(d, 3H, J=6.8Hz, 21-H3), L022(d,6H, J=6.4Hz, 26-H3and27-H3), 4.123(brs, 1H, 3a-H), 4.705(s, 1H, 28a-H),4.666(s, 1H, 28卩-H), 9.703(d, 1H, J=2.8 Hz, CHO)。 13CNMR (400MHz, CDC13)Sppm: 04.511(06), 156.711(C-24), 106.071(C-28), 84.240(C-5), 67.424(C陽3),64.029(C-7) , 56.244(C-14) , 55.672(C-17) , 50.650(C-9) , 45.547(C-10),44.834(C-13) , 44.370(C-4) , 40.056(C-8) , 39.797(C-12) , 35.594(C-20),34.774(C-22) , 33.841(C-25) , 31.029(C-23) , 28,296(C-16) , 28.037(C-2),26.917(C匿l) , 24.600(C-15) , 21.986(C-26) , 21.860(C-27) , 21.597(C-11),18.762(C-21), 18.358(C-19), 12.539(C-18)。经质谱检测,数据如下EI-MS(m/z):412(M-H20)+;经红外检测,数据如下IR(cm"): 3465.8(OH), 3078.2(C=CH2),1714.6(CHO)。实施例10
制备帕格甾醇A (B-失碳-24-高-A,,",-3P,5p二羟基-6P-甲醛基胆甾垸)
(分子内脱水反应)
parguesterol B parguesterol A
25ml茄形瓶,加入原料50mg帕格甾醇B(0.116mmo1), lmol/L的氢氧化钾-甲醇溶液10ml溶解,室温搅拌3小时。加入饱和氯化铵水溶液淬灭反应,3X5ml乙酸乙酯提取,合并有机相,3X15ml饱和氯化钠溶液洗涤,无水硫酸钠干燥,减压除去溶剂得粗品64mg。快速柱层析(Pet:EtOAc/4.5:l)得无色油状物45mg,收率93%。 [ot]D20:-5.4。(C, 0.5, 0^13)(文献
025:画4.4。(C, 1.0, CHC13))。
产品经核磁共振检测,数据如下tHNM(400MHz, CDC13) Sppm: 0.722(s,3H, 18-H3), 0.928(s, 3H, 19-H3), 0.945(d, 3H, J=6.8Hz, 21-H3), 1.019(d,6H, J=6.4Hz, 26-H3 and 27-H3), 3.469(brd, 1H, J=14.4Hz), 3.695(m, 1H, 3a-H),
224攀647(s, 1H, 28a-H), 4.662(s, 1H, 28卩-H), 9.954(s, 1H, CHO); 13CNMR(400MHz,CDCl3)Sppm:189.585(C-6) , 168.939(C-5) , 156.791(C-24) , 139.285(C-7),106.003(C-28) , 70.850(C-3) , 60.146(C-9) , 55.241(C-17) , 54.464(C-14),46.302(C-8) , 46.142(C-10) , 45.254(C-13) , 39.812(C-12) , 36.165(C-1),35.525(C-20) , 34.725(C-22) , 33.868(C-4) , 33.776(C-25) , 31.242(C-2),31.086(C-23), 28.491(C-16), 26.540 (C-15), 21.978(C-26) , 21.841(C-27),20.694(C-11), 18.918(C-21), 15.661 (C-19), 12.478 (C-18);经质谱检测,数据如下ESI-MS(m/z)449(M+K+);经红外检测,数据如下:IR(cm"): 3392.6(OH),3074.3(C=CH2), 1766.7(CHO);经紫外检测,数据如下UV(MeOH):;狄:210nm。
应该理解,以上所述具体实施例仅用于对本发明进行示例性说明,而非用于对本发明进行任何性质的限定,其中所用材料、试剂、仪器及操作条件等仅为代表性的,其并不限于所列举的情况。所属技术领域的技术人员通过阅读以上说明可以对本发明做出不脱离本发明权利要求所限定的保护范围的改动和改进,这些改动和改进也处于本发明所要求保护的范围内。
权利要求
1. 一种帕格甾醇A和帕格甾醇B的合成方法,合成路线如下其中,步骤(a)式(1)所示猪去氧胆酸经甲酯化、对甲苯磺酸酯化、SN2亲核取代-E1消除反应三步一锅得式(2)所示△5-3β-羟基胆烷酸甲酯;步骤(b)在有机溶剂中,式(2)所示△5-3β-羟基胆烷酸甲酯先在臭氧作用下氧化开环,再在还原剂作用下转变成式(3)所示5,6-断-3β-羟基-5-酮-6-醛基胆烷酸甲酯;步骤(c)在有机溶剂中,式(3)所示5,6-断-3β-羟基-5-酮-6-醛基胆烷酸甲酯与中性氧化铝反应,经过分子内醇醛缩合,转变成式(4)所示B-失碳-3β,5β-二羟基-6β-甲醛基胆烷酸甲酯;步骤(d)在有机溶剂中,式(4)所示B-失碳-3β,5β-二羟基-6β-甲醛基胆烷酸甲酯在酸性催化剂、脱水剂作用下,转变成式(5)所示B-失碳-3β,5β-二羟基-6β-二甲氧基甲基胆烷酸甲酯;步骤(e)在有机溶剂中,式(5)所示B-失碳-3β,5β-二羟基-6β-二甲氧基甲基胆烷酸甲酯,在咪唑、叔丁基二甲基氯硅烷的作用下,经硅基化得式(6)所示B-失碳-3β-叔丁基二甲基硅氧基-5β-羟基-6β-二甲氧基甲基胆烷酸甲酯;步骤(f)在有机溶剂中,式(6)所示B-失碳-3β-叔丁基二甲基硅氧基-5β-羟基-6β-二甲氧基甲基胆烷酸甲酯与异丙基溴化镁和胺络合剂混合溶液作用下,经异丙基化得式(7)所示B-失碳-3β-叔丁基二甲基硅氧基-5β-羟基-6β-二甲氧基甲基胆甾-24-酮;步骤(g)在有机溶剂中,式(7)所示B-失碳-3β-叔丁基二甲基硅氧基-5β-羟基-6β-二甲氧基甲基胆甾-24-酮经Lombardo’s试剂作用,得式(8)所示B-失碳-24-高-△24(28)-3β-叔丁基二甲基硅氧基-5β-羟基-6β-二甲氧基甲基胆甾烷;或者在有机溶剂中,式(7)所示B-失碳-3β-叔丁基二甲基硅氧基-5β-羟基-6β-二甲氧基甲基胆甾-24-酮,与Wittig试剂反应在碱作用下得式(8)所示B-失碳-24-高-△24(28)-3β-叔丁基二甲基硅氧基-5β-羟基-6β-二甲氧基甲基胆甾烷;步骤(h)在丙酮-水溶剂中,式(8)所示B-失碳-24-高-△24(28)-3β-叔丁基二甲基硅氧基-5β-羟基-6β-二甲氧基甲基胆甾烷经有机酸催化,脱去保护基后得式(9)所示帕格甾醇B;步骤(i)在有机溶剂中,式(9)所示帕格甾醇B在碱的作用下,经分子内脱水得式(10)所示帕格甾醇A。
2. 根据权利要求l所述的帕格甾醇的合成方法,其特征是步骤(b)中所述的 AS-邓-羟基胆烷酸甲酯与臭氧的摩尔比为h 1.5 2;臭氧化反应的条件为无水 反应;反应温度为-70 -78。C, AS-3p-羟基胆垸酸甲酯与还原剂的摩尔比为1: 10~100。所述的有机溶剂为二氯甲垸、三氯甲烷、甲醇、乙醇、异丙醇或其中 任意两者的混合溶剂;所述还原剂为二甲硫醚。
3. 根据权利要求1所述的帕格甾醇的合成方法,其特征是步骤(c)中所述的 5,6-断-3(3-羟基-5-酮-6-醛基胆烷酸甲酯与中性氧化铝的摩尔比为1: 30 60,反应 温度为室温;所述的有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、苯、甲苯、氯仿、二氯甲 烷或四氢呋喃。
4. 根据权利要求l所述的帕格甾醇的合成方法,其特征是步骤(d)中所述的 B-失碳-3p,5p-二羟基-6(3-甲醛基胆烷酸甲酯与酸性催化剂的质量比(g/g)为l:,0.5 5,B-失碳-3p,5P-二羟基-6(3-甲醛基胆烷酸甲酯与脱水剂的摩尔比为1: 5 15; 反应温度为室温;所述的有机溶剂为无水甲醇或甲醇;所述的酸性催化剂为对 甲苯磺酸、氯化铵或732#酸性树脂;所述的脱水剂为原甲酸三甲酯。
5. 根据权利要求1所述的帕格甾醇的合成方法,其特征是步骤(f)中所述的 B-失碳-3P-叔丁基二甲基硅氧基-5(3-羟基-6(3-二甲氧基甲基胆烷酸甲酯与异丙基 溴化镁、胺络合剂的摩尔比为l: 2 5: 6~20;反应条件为0~25°C、无水条件;所述的有机溶剂为四氢呋喃或乙醚或叔丁醇甲醚;所述的胺络合剂为三乙胺或 N, N, N, N-四甲基乙二胺,或者三乙胺和N, N, N, N-四甲基乙二胺的混合溶液。
6. 根据权利要求l所述的帕格甾醇的合成方法,其特征是步骤(g)中所述的 B-失碳-3p-叔丁基二甲基硅氧基-5p-羟基-6p-二甲氧基甲基胆甾-24-酮与 Lombardo,s试剂(Zn-TiCLrCH2Br2)的摩尔比为1: 1~20;反应条件为0°至室温、 无水条件;所述的有机溶剂为二氯甲垸或四氢呋喃;或者B-失碳-3p-叔丁基二 甲基硅氧基-5(3-羟基-6P-二甲氧基甲基胆甾-24-酮与碱、Wittig试剂(碘化甲基三 苯磷)的摩尔比为l: 3~5: 3 6;反应条件为室温、无水条件;所述的有机溶 剂为苯、甲苯或四氢呋喃;所述的碱为叔丁醇钾或氢化钠。
7. 根据权利要求1所述的帕格甾醇的合成方法,其特征是步骤(h)中所述的 B-失碳-24-高-A"卿-3p-叔丁基二甲基硅氧基-5p-羟基-6p-二甲氧基甲基胆甾烷与有机酸的摩尔比为1: 0.1 2;反应温度为室温。所述的有机酸为对甲苯磺酸或樟脑磺酸。
8. 根据权利要求1所述的帕格甾醇的合成方法,其特征是步骤(i)中所述的帕格甾醇B与碱的摩尔比为1: 1 100;所述的含碱为氢氧化钾、氢氧化纳、碳 酸钾、碳酸钠;所述有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇或四氢呋喃。
9. 根据权利要求l所述的帕格甾醇的合成方法,其特征是步骤(f)-(i)中所述 产物分别是B-失碳-3p-叔丁基二甲基硅氧基-5p-羟基-6(3-二甲氧基甲基胆甾-24-酮、B-失碳-24-高-A,"-3P-叔丁基二甲基硅氧基-5 (3-羟基-6p-二甲氧基甲基胆甾 烷、B-失碳-24-高-A",-3p,5p二羟基邻-甲醛基胆甾垸(帕格甾醇B)和B-失碳 -24-高-^(6)'24(28)-3|3,5(3-二羟基-6卩-甲醛基胆甾垸(帕格甾醇A )。
全文摘要
本发明涉及帕格甾醇A和帕格甾醇B的合成方法。该方法包括猪去氧胆酸经甲酯化、对甲苯磺酸酯化和S<sub>N</sub>2亲核取代同时E1消除反应三步一锅、臭氧化、分子内醇醛缩合、甲缩醛保护、二甲基叔丁基硅基保护、异丙基化、烯化反应、脱保护、分子内脱水等反应合成帕格甾醇A和B。本方法原料廉价易得、合成路线短、收率高、成本低、反应条件温和,是一种适用于工业化生产的方法。帕格甾醇A和帕格甾醇B具有抑制结核杆菌的作用,可用于结核病的治疗。
文档编号C07J61/00GK101508717SQ20091010352
公开日2009年8月19日 申请日期2009年4月3日 优先权日2009年4月3日
发明者周向东, 徐长荣, 婷 马 申请人:中国人民解放军第三军医大学