皮下给予免疫球蛋白和透明质酸酶的组合和方法

专利名称：皮下给予免疫球蛋白和透明质酸酶的组合和方法
技术领域：
本发明提供了配制为皮下给予的含有免疫球蛋白(IG)成分和可溶性透明质酸酶 成分的组合、组合物以及试剂盒。这种产品可用于治疗IG可治疗的疾病或者病症的方法 中。本发明还提供了皮下给予免疫球蛋白的方法，从而其给药方案与用于治疗相同的IG可 治疗的疾病或者病症的通过静脉内给予相同剂量的方案基本相同。背景静脉内(IV)给予免疫球蛋白(IVIG)是免疫缺陷患者的主要治疗方法。尽管最初 的IVIG制备物导致严重副作用，但是目前可利用的IVIG制备物在大多数免疫缺陷患者中 耐受良好。虽然如此，一小部分患者仍有不适、甚至丧失能力的反应如头痛、疲乏和肌痛。发 热和寒战仍是问题，特别是当患者具有并发感染时。尽管尝试其它IVIG制备物或者提前给 予对乙酰氨基酚、苯海拉明和皮质类固醇，但是所述反应通常持续存在。进一步地，由于需 要静脉内给药而存在患者依从性的问题。皮下(SQ)给予免疫球蛋白可代替静脉内给予。与静脉内(IV)输注相比，SQ给予 免疫球蛋白具有许多优势。例如，其降低了全身反应的发生率，不需要有时较困难的IV通 道，改良了波谷血液浓度(trough level)，并且使得患者更独立。由于在一个部位难以给予 大量液体，因此需要一周SQ输注一或两次，一次使用两个或者多如五个部位。因此，与一个 月给予一次的IVIG不同皮下给予通常每周进行一次。由此需要另外的给予免疫球蛋白的 方法。概述本发明提供了皮下给予免疫球蛋白及治疗IG可治疗的疾病或者病症的方法、组 合物、组合以及试剂盒。本发明提供了治疗对象中IG可治疗的疾病或者病症的方法，通过 皮下给予该对象可溶性透明质酸酶和免疫球蛋白(IG)以治疗所述疾病或者病症。共同给 予IG和透明质酸酶增加了皮下给予IG的生物利用度，使得皮下给予IG可以使用与特定疾 病或者病症的静脉内给予IG(IVIG)基本相同的给药方案。给予IG的给予量和给予频率与 对于相同疾病或者病症通过IV (静脉内)给予的量和频率基本相同。通过IV给予的量对于 特定疾病或者病症可以预定或者是已知的。通常，在存在可溶性透明质酸酶的条件下，对于
10皮下给予而言，给予速度可以大于IV给予速度。因此，可以减少特定剂量的给予时间。给 药速度可以通过如泵控制，或者可以依赖于重力。因此，本发明提供了在需要治疗的对象中治疗IG可治疗的疾病或者病症的方法， 通过皮下给予该对象可溶性透明质酸酶和有效治疗所述疾病或者病症的量的免疫球蛋白 (IG)进行。所述给予利用这样的给药方案，其中为了连续给予对象IG，选择(a)IG的数量 以及(b)给药频率，使得皮下给予对象IG的治疗效力与使用相同给药方案通过静脉内给予 对象IG的治疗效力至少基本相等。在本发明提供的方法的一些实施例中，皮下给予的IG的生物利用度是通过IV给 予的相同剂量的IG的生物利用度的至少大约90%。给予的可溶性透明质酸酶的量是足以 实现以不超过每月一次皮下给予IG的量。在其它实施例中，IG的给予不超过每月一次。本发明提供的方法和应用中使用的可溶性透明质酸酶可以是PH20或者其截短形 式。例如，可溶性透明质酸酶可以是绵阳或者牛或者截短的人PH20。在其中截短的人PH20 用于本发明提供的方法和应用中的情况中，所述截短的人PH20可以选自具有SEQ ID NO 4-9之一所示的氨基酸序列的多肽或者其等位基因变体或者其其它变体。在一个实施例中， 可溶性透明质酸酶是rHuPH20。使用本发明的方法和应用给予的IG可以纯化自人血浆，如通过醇分馏方法纯化。 在一些实施例中，所述IG通过如下任何一种或多种方法进一步纯化化学修饰、在pH 4. 0 在有或者没有胃蛋白酶的条件下保温、聚乙二醇(PEG)沉淀、离子交换层析、酶裂解、溶剂 去污剂处理、渗滤或者超滤。本发明提供的方法和应用可以应用含有IgG、IgA和IgM的IG。 在一些实施例中，所述IG含有超过95%的IgG。进一步地，所示IG可以是单体。所述IG中也可以存在蛋白质稳定赋形剂，如甘氨 酸、麦芽糖、多元醇、人血清白蛋白、甘露醇以及非离子去污剂中的一或多种物质。在一些实 施例中，IG制备物的pH是或者是大约4. 2-5. 4,4. 6-5. 1或者4. 8-5. 0，蛋白质浓度是或者 是大约5-15% w/v,6-15% w/v或者8-12% w/v的IG组合物。在一个实施例中，IG的蛋白 质浓度是10% w/v。本发明提供了治疗IG可治疗的疾病或者病症的方法和应用，其中用于治疗疾病 或者病症的可溶性透明质酸酶和免疫球蛋白(IG)是皮下给予的，IG的输注速度是10ml/ 小时至300ml/小时，如是或是大约10ml/小时、20ml/小时、30ml/小时、40ml/小时、50ml/ 小时、60ml/小时、70ml/小时、80ml/小时、90ml/小时、100ml/小时、150ml/小时、200ml/小 时、250ml/小时以及300ml/小时。输注速度由泵或者重力控制。在一些实施例中，所述IG 和透明质酸酶是单独、同时或者交替给予的。例如，透明质酸酶可以在给予IG之前如0.5 分钟、1分钟、2分钟、3分钟、4分钟、5分钟、6分钟、7分钟、8分钟、9分钟、10分钟、20分钟 或者30分钟给予。在其它实施例中，所述IG和透明质酸酶在单一组合物中。在另外的实 施例中，给予大约或给予 5 克(g)、10g、15g、20g、21g、22g、23g、24g、25g、26g、27g、28g、29g、 30g、31g、32g、33g、34g、35g、36g、37g、38g、39g 或者 40g 的 IG,给予的透明质酸酶与 IG 的 比率(透明质酸酶单位/IG克数)是或者是大约10U/克(g)、20U/g、30U/g、35U/g、40U/g、 50U/g、60U/g、70U/g、80U/g、90U/g、100U/g、150U/g 或者 300U/g。可以使用本发明提供的方法和应用给予可溶性透明质酸酶和IG，用以治疗例 如免疫缺陷病、继发于恶性血液病的获得性低丙种球蛋白血症、川崎病、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病症(CIDP)、格林巴利综合症、特发性血小板减少性紫癜、炎性肌病、 Lambert-Eaton肌无力综合征、多灶性运动神经病、重症肌无力、Moersch-ffoltmann综合 征、继发低丙种球蛋白血症(包括医源性免疫缺陷病)、特异性抗体缺陷、急性播散性脑脊 髓炎、ANCA-阳性系统性坏死性血管炎、自身免疫性溶血性贫血、大疱性类天疱疮、疤痕性类 天疱疮、Evans综合征(包括具有免疫性血小板减少的自身免疫性溶血性贫血)、胎母/新 生儿同种异体免疫血小板减少症(FMAIT/NAIT)、噬血细胞综合征、高危同种异基因造血干 细胞移植、IgM副蛋白血症神经病、肾移植、多发性硬化症、眼阵挛-肌阵挛运动失调症、落 叶型天疱疮、寻常型天疱疮、输血后紫癜、中毒性表皮坏死/Steven Johnson综合征(TEN/ SJS)、中毒性休克综合征、阿尔茨海默病、系统性红斑狼疮、多发性骨髓瘤、败血症、B细胞 肿瘤、外伤，以及细菌、病毒或者真菌感染。在给予IG和透明质酸酶以治疗免疫缺陷病的 情况中，所述免疫缺陷病可选自常见变异型免疫缺陷病(CVID)、先天性免疫球蛋白缺乏症、 Wiskott-Aldrich综合征、重症联合免疫缺陷病(SCID)、原发性低丙种球蛋白血症、抗体缺 陷的原发性免疫缺陷病、X连锁无丙种球蛋白血症(XLA)、婴儿期低丙球蛋白血症以及无抗 体的副肿瘤性小脑变性。在所述IG可治疗的疾病或者病症是继发于恶性血液病的获得性低丙种球蛋白血 症情况中，所述恶性血液病可以是慢性淋巴细胞白血病(CLL)、多发性骨髓瘤(MM)或者非 霍奇金淋巴瘤(NHL)。在所述IG可治疗的疾病或者病症是炎症性肌病的情况中，所述炎症 性肌病可以是多肌炎、皮肌炎或者包涵体肌炎。在一些实施例中，皮下给予可溶性透明质酸酶和IG用以治疗细菌、病毒或者真菌 感染，所述细菌、病毒或者真菌例如是B型流感嗜血杆菌、A和B型铜绿假单胞菌、金黄色葡 萄球菌、B族链球菌、1、3、4、6、7、8、9、12、14、18、19和23型肺炎链球菌、2和5型腺病毒、巨 细胞病毒、EB病毒VCA、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、单纯疱疹病毒-1、单纯疱疹病毒_2、 甲型流感病毒、麻疹病毒、1、2和3型副流感病毒、小儿脊髓灰质炎病毒、水痘一带状疱疹病 毒、曲霉和白色念珠菌。本发明提供了含有第一种组合物与第二种组合物的组合，其中第一种含有配制为 不超过每月一次皮下单剂量给予的IG，第二种组合物含有配制为不超过每月一次单剂量给 予的可溶性透明质酸酶。所述组合物可以是双室容器内或者在一个容器内彼此分离。在一 些实施例中，所述透明质酸酶位于容器中在IG之前给予。所述容器可以是注射器、试管或 者小瓶，且可以进一步含有注射针头。本发明提供的组合物组合可以含有PH20或者其截短形式。例如，本发明提供的组 合物组合中可包含绵羊、牛或者截短的人PH20，如具有SEQID NO :4_9之一所示的氨基酸序 列的多肽或者其等位基因变体或者其它变体。在一些实施例中，所述组合中的可溶性透明 质酸酶是rHuPH20。此外，所述组合物组合中的IG可以纯化自人血浆，且可以是冻干或者液 体形式。在一些实施例中，本发明提供的所述组合物组合中液体的体积是或者是大约 100ml、150ml、200ml、300ml、400ml、500ml、600ml 或者 700ml。所述组合物组合中 IG 的蛋白 质浓度是或者是大约5-15% w/v,6-15% w/v或者8-12% w/v的IG组合物，例如10% w/v. 在一些实施例中，所述组合物中的IG是或者是大约5克(g)、10g、15g、20g、21g、22g、23g、 24g、25g、26g、27g、28g、29g、30g、31g、32g、33g、34g、35g、36g、37g、38g、39g 或者 40g。所述
12透明质酸酶可以是液体。在一些实施例中，所述透明质酸酶液体的体积是或者是大约1ml、 2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、7ml、8ml、9ml、10ml、20ml 或者 30ml，所述透明质酸酶是或者是大约 10 单位-500，000 单位、100 单位-100，000 单位、500 单位-50，000 单位、1000 单位-10，000 单位、5000单位-7500单位、5000单位-50，000单位，或者1，000单位-10，000单位。本发明提供了这样的组合物，其包含配制为每月一次单剂量给予的免疫球蛋白 (IG)和可溶性透明质酸酶。所述组合物中包含的可溶性透明质酸酶可以是PH20或者其截 短形式。例如，本发明提供的配制为单剂量给予的组合物中可包含绵羊、牛或者截短的人 PH20，如具有SEQ ID NO :4-9之一所示的氨基酸序列的多肽或者其等位基因变体或者其它 变体。在一些实施例中，所述组合物中可溶性透明质酸酶是rHuPH20。所述组合物中的IG 可以纯化自人血浆，且可以是液体。在举例的实施方案中，本发明提供的配制为单剂量给予的所述组合物中IG的蛋 白质浓度是或者是大约5-15% w/v,6-15% w/v或者8-12% w/v的IG组合物，例如10% w/ v。所述组合物中的 IG 是或者是大约 5 克(g)、10g、15g、20g、21g、22g、23g、24g、25g、26g、 27g、28g、29g、30g、31g、32g、33g、34g、35g、36g、37g、38g、39g 或者 40g，透明质酸酶是或者 是大约10单位-500，000单位、100单位-100，000单位、500单位-50，000单位、1000单 位-10，000单位、5000单位-7500单位、5000单位-50，000单位，或者1，000单位-10，000单 位。所述组合物中液体的体积可以是大约100ml、150ml、200ml、300ml、400ml、500ml、600ml 或者700ml。本发明提供了试剂盒，其包含第一种组合物和第二种组合物的组合，其中第一种 组合物包含配制为不超过每月一次皮下单剂量给予的IG，第二种组合物包含配制为不超过 每月一次单剂量给予的可溶性透明质酸酶。本发明还提供了含有免疫球蛋白(IG)和可溶 性透明质酸酶的组合物，其配制为每月一次单剂量给予。任选地，所述试剂盒中可包含说明 书。详细描述大纲A.定义B.免疫球蛋白(IG)的皮下给予C.免疫球蛋白D.透明质酸酶可溶性透明质酸酶可溶性人PH20可溶性重组人PH20 (rHuPH20)E.产生编码可溶性透明质酸酶的核酸及其多肽的方法1.载体和细胞2.表达a.原核细胞b.酵母细胞c.昆虫细胞d.哺乳动物细胞
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e.植物3.纯化技术E免疫球蛋白和可溶性透明质酸酶多肽的制备、配制和给予1.配制冻干的粉末2.剂量和给予G.评估活性、生物利用度和药动学的方法1.药动学和耐受性2.生物学活性a.免疫球蛋白b.透明质酸酶H.治疗应用1.抗体缺陷的原发性免疫缺陷病2.继发于恶性血液病的获得性低丙种球蛋白血症3.川崎病4.慢性炎性脱髓鞘性多发神经病5.格林巴利综合症6.特发性血小板减少性紫癜7.炎性肌病多肌炎、皮肌炎以及包涵体肌炎8. Lambert-Eaton 肌无力综合征9.多灶性运动神经病10.重症肌无力11. Moersch-Woltmann 综合征12.阿尔茨海默病13.其它疾病和病症I.产品和试剂盒J.实施例A.定义除非特别指出，则本文所用所有技术和学术用语均具有本发明所属领域技术人 员通常理解的含义。除非特别指出，则本文中所有专利、专利申请、公开的应用和申请、 Genbank序列、数据库、网站以及其它公开材料均以其全部内容并入作参考。在术语具有多 个定义的情况中，以在本章节中所述含义为主。参考URL或其他这样的标示符或地址时，应 理解所述的标示符可改变而且网上的具体信息时有时无，但通过在网上搜索应当能获得相 当的信息。参考上述内容可证明所述信息的可用性以及公众传播。如本文所用，“免疫球蛋白”、“Y球蛋白”是指得自集合的成熟供体血浆的 血浆蛋白。IgG抗体位置，但是也存在其它抗体亚类如IgA和IgM。治疗性免疫球蛋 白通过增加受体的血清循环抗体水平而可以提供被动免疫。例如，IgG抗体可以结合 并中和细菌毒素；调理病原体；激活补体；以及抑制病原性细胞因子和噬菌细胞，通 过与细胞因子及其受体相互作用而进行，如CD5、白细胞介素-la(IL-la)、白细胞介素6(IL_6)、肿瘤坏死因子-a (TNF-a)以及T_细胞受体。治疗性免疫球蛋白可以抑 制自体抗体的活性。免疫球蛋白制备物还包括但不限于静脉内的免疫球蛋白(IGIV)、 免疫球蛋白IV、治疗性免疫球蛋白。免疫球蛋白为本领域熟知，且包括许多品牌，如 BayGam 、Gamimune Gammagard S/D、Gammar -P、Iveegam EN、Panglobulin 、Polygam S/D、Sandoglobulin 、Venoglobulin -I、
Venoglobulin -S、WinRho SDF等。免疫球蛋白制备物也可以得自人血浆，或者重组产生。如本文所用，IG-可治疗的疾病或者病症是指使用免疫球蛋白制备物治疗的任 何疾病或者病症。这种疾病和病症包括但不限于其中增加循环抗体是有益的任何疾病， 例如免疫缺陷病、继发于恶性血液病的获得性低丙种球蛋白血症、川崎病、慢性炎症性脱 髓鞘性多发性神经病症(CIDP)、格林巴利综合症、特发性血小板减少性紫癜、炎性肌病、 Lambert-Eaton肌无力综合征、多灶性运动神经病、重症肌无力、Moersch-ffoltmann综合 征、继发低丙种球蛋白血症(包括医源性免疫缺陷病)、特异性抗体缺陷、急性播散性脑脊 髓炎、ANCA-阳性系统性坏死性血管炎、自身免疫性溶血性贫血、大疱性类天疱疮、疤痕性类 天疱疮、Evans综合征(包括具有免疫性血小板减少的自身免疫性溶血性贫血)、胎母/新 生儿同种异体免疫血小板减少症(FMAIT/NAIT)、噬血细胞综合征、高危同种异基因造血干 细胞移植、IgM副蛋白血症神经病、肾移植、多发性硬化症、眼阵挛-肌阵挛运动失调症、落 叶型天疱疮、寻常型天疱疮、输血后紫癜、中毒性表皮坏死/Steven Johnson综合征(TEN/ SJS)、中毒性休克综合征、阿尔茨海默病、系统性红斑狼疮、多发性骨髓瘤、败血症、B细胞肿 瘤、外伤，以及细菌、病毒或者真菌感染。如本文所用，给药方案是指给予的免疫球蛋白的量和给予频率。所述给药方案与 所治疗的疾病或者病症相关，因此是可变的。如本文所用，“与静脉内给予IG(IVIG)的给药方案基本相同”是指这样的方案， 其中所述剂量和/或频率在治疗特定疾病或者病症的有效量内，典型是或者大约是静脉内 (IV)剂量或者频率的10 %。本领域技术人员已知治疗特定疾病或者病症的IVIG的有效量， 或者可以根据经验确定。例如在下文举例说明，300mg/kg(即如果平均成年人体重70kg，则 使用21克)至600mg/kg(即42克)是典型的给予患有原发性免疫缺陷疾病的患者每月一 次IVIG的剂量。因此，当IG组合透明质酸酶给予治疗原发性免疫缺陷疾病时，皮下给予IG 的剂量是或者是大约300mg/kg至600mg/kg。如本文所用，给予频率是指连续给予免疫球蛋白之间的时间。例如，给予频率可以 是一周、两周、三周、四周一次，且与治疗的特定疾病或者病症相关。通常地，所述频率是至 少每两周或者三周给予一次，典型为一个月不超过一次。如本文所用，透明质酸酶是指降解透明质酸的酶。透明质酸酶包括细菌透明质酸 酶(EC 4. 2.99. 1)，来自水蛭、其它寄生虫和甲壳动物的透明质酸酶(EC 3. 2. 1. 36)，以及 哺乳动物型透明质酸酶(EC 3. 2. 1. 35)。透明质酸酶也包括任何非人源以及来自水蛭、其它 寄生虫和甲壳动物的酶，所述非人源包括但不限于鼠、犬、猫、野兔、鸟类、牛、绵羊、猪、马、 鱼类、蛙科动物、细菌。举例的非人透明质酸酶包括来自如下动物的透明质酸酶牛(SEQ ID NO :10 禾口 11)、黄蜂(SEQ ID N0:12 和 13)、蜜蜂(SEQ ID N0:14)、白脸马蜂(SEQ ID NO:15)、胡蜂(SEQ ID NO :16)、小鼠(SEQ ID NO 17_19、32)、猪(SEQ ID NO :20_21)、大鼠(SEQ ID NO :22-24、31)、兔(SEQ ID N0:25)、羊(SEQ ID NO:26 和 27)、猩猩(SEQ ID NO :28)、称 猴(SEQ ID NO:29)、豚鼠(SEQ ID NO :30)、金黄色葡萄球菌(SEQ ID NO :33)、化脓链球菌 (SEQ IDN0:34)，以及产气荚膜梭菌(SEQ ID NO :35)。透明质酸酶也包括那些人源透明质 酸酶。举例的人透明质酸酶包括 HYAL1 (SEQ ID NO :36)、HYAL2 (SEQ ID NO :37)、HYAL3 (SEQ ID NO :38)、HYAL4(SEQ ID NO 39)和PH20 (SEQ ID N0:1)。透明质酸酶还包括可溶性透明 质酸酶，包括绵羊和牛PH20、可溶性人PH20和可溶性人rHuPH20。提及的透明质酸酶包括前体透明质酸酶多肽和成熟透明质酸酶多肽(如其中已 经除去信号序列的那些多肽)、其具有活性的截短形式，以及包括等位基因变体和种变体， 由剪接变体编码的变体，以及其它变体，包括与SEQ ID NO :1和10-39所示前体多肽具有 40%,45%,50%,55%,60%,65%,70%,75%,80%,85%,90%,95%,96%,97%,98%, 99%或者更多序列先天性的多肽，或者其成熟形式。例如，提及的透明质酸酶也包括SEQ ID N0:50-51所示PH20前体多肽。透明质酸酶也包括含有化学或者翻译后修饰的那些酶， 以及不含有化学或者翻译后修饰的那些酶。这种修饰包括但不限于聚乙二醇化、白蛋白化 (albumination)、糖基化、法尼基化(farnesylation)、羧化、羟基化、磷酸化及本领域已知 的其它多肽修饰。如本文所用，可溶性透明质酸酶是指特征在于其在生理条件下的可溶性的多肽。 例如，通过其在加热至37°C的Triton X-114溶液中分配至水相而可以区分可溶性透明质 酸酶(Bordier et al.，(1981) J. Biol. Chem.，256 1604-7)。膜锚定的如脂质锚定的透明质 酸酶将分配在去污剂富集相，但是在用磷脂酶-C处理后将分配至去污剂不足或者水相中。 可溶性透明质酸酶包括膜锚定的透明质酸酶，其中透明质酸酶与膜锚定相关的一或多个区 域已经被除去或者修饰，其中所述可溶形式保留透明质酸酶活性。可溶性透明质酸酶包括 重组可溶性透明质酸酶以及包含于或者纯化自天然来源的那些酶，例如羊或者牛睾丸提取 物。举例的这种可溶性透明质酸酶是可溶人PH20。其它可溶性透明质酸酶包括绵羊(SEQ ID NO 27)和牛(SEQ IDN0 :11)PH20。如本文所用，可溶性人PH20或者sHuPH20包括缺少所有或者部分C末端糖基磷 脂酰肌醇(GPI)附着位点的成熟多肽，由此在表达时所述多肽是可溶的。举例的sHuPH20 多肽包括具有SEQ ID NO :4-9和47-48之一所示的氨基酸序列的成熟多肽。这种举例的 sHuPH20多肽的前体多肽包括信号序列。举例的前体如SEQ ID NO :3和40-46所示，其在 第1-35位氨基酸均含有一个具有35个氨基酸的信号序列。可溶性HuPH20多肽还包括在 本文所述生产和纯化期间或者之后降解的那些序列。如本文所用，可溶性重组人PH20(rHuPH20)是指在中国仓鼠卵巢(CH0)细胞中重 组表达的可溶形式的人PH20。可溶性rHuPH20由包含信号序列及由SEQ ID N0:49所示的 核酸编码。还包括是其等位基因变体及其它可溶变体的DNA分子。编码可溶rHuPH20的核 酸在CH0细胞中表达，其分泌成熟多肽。如在培养基中产生，在C末端具有异质性，由此产 物是混合物，其可以包括不同丰度的任一或多个SEQ ID NO :4-9。也包括相应的等位基因变 体及其它变体，包括相应于SEQ ID NO :50-51所示前体人PH20多肽的那些变体。其它变体 与 SEQ ID NO :4-9 和 47-48 所示任何序列可具有 60%、70%、80%、85%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或者更高的序列相同性，只要其保留透明质酸酶活性且是可溶的即可。如本文所用，活性是指与全长(完整)蛋白质相关的多肽或者其一部分的功能活 性。功能活性包括但不限于生物活性、催化或者酶活性、抗原性(结合或者竞争多肽结合抗 多肽抗体的能力)、免疫原性、形成多聚体的能力以及特异性结合所述多肽的受体或者配体 的能力。如本文所用，透明质酸酶活性是指透明质酸酶裂解透明质酸的能力。本领域已知 且在本文中描述了确定透明质酸酶如可溶性rHuPH20的透明质酸酶活性的体外测定。举例 的测定包括下文描述(见实施例3)的微浊度(microturbidity)测定，其通过检测当未裂 解的透明质酸结合血清白蛋白时形成的不溶沉淀而间接测量由透明质酸酶对透明质酸的 裂解。如本文所用，天然发生的a-氨基酸的残基是在自然届中发现的20个a-氨基酸 的残基，它们通过在人体中的其关联mRNA密码子对负载的tRNA分子的特异性识别而被掺 入蛋白质中。如本文所用，核酸包括DNA、RNA及其类似物，包括肽核酸(PNA)及其混合物。核酸 可以是单链或者双链核酸。当提及探针或者引物时，包括单链分子，其任选被标记，如用检 测标记标记，例如荧光或者放射标记。这种分子典型是这样的长度，由此其靶对于探查或者 引导(priming)文库是统计学独特的或者是低拷贝数(典型少于5个，通常少于3个)。通 常地，探针或者引物包含与感兴趣的基因互补或者相同的序列的至少14、16或者30个连续 核苷酸。探针和引物的长度可以是10、20、30、50、100或者更多个核酸。如本文所用，肽是指长度为2-40个氨基酸的多肽。如本文所用，在本发明提供的各个氨基酸序列中存在的氨基酸是根据其已知的三 字母或者单字母缩写词识别的(表1)。在各个核酸片段中存在的核苷酸根据本领域常用的 标准一个字母命名法命名。如本文所用，“氨基酸”是含有氨基基团和羧基基团的有机化合物。多肽含有两或 多个氨基酸。对于本发明，氨基酸包括20个天然发生的氨基酸、非天然氨基酸以及氨基酸 类似物(即其中a"碳具有侧链的氨基酸)。如本文所用，“氨基酸残基”是指对多肽在其肽键处进行化学消化(水解)而形 成的氨基酸。本文所述氨基酸残基假定是“L”异构体形式。也如此命名的“D”异构体形 式中的残基可以由任何L-氨基酸残基取代，只要多肽保留希望的功能性质即可。NH2是 指在多肽的氨基末端存在的游离氨基基团。C00H是指在多肽的羧基末端存在的游离羧基 基团。与J. Biol. Chem.，243 =3557-3559 (1968)所述标准多肽命名法一致，以及采用37C. F.R.. § § 1.821-1. 822，氨基酸残基的缩写在表1中示出。表1 对照表
符号一个字母三个字母氨基酸YTyr酪氨酸GGly甘氨酸FPhe苯丙氨酸MMet甲硫氨酸AAla丙氨酸SSer丝氨酸Ilie异亮氨酸
符号一个字母三个字母氨基酸LLeu亮氨酸TThr苏氨酸VVal缬氨酸PPro脯氨酸KLys赖氨酸HHis组氨酸QGin谷氨酰胺EGlu谷氨酸ZGlxGlu 和/或 GinWTrp色氨酸RArg精氨酸DAsp天冬氨酸NAsn天冬酰胺BAsxAsn 禾口/或 AspCCys半胱氨酸XXaa未知或者其它应注意本文由公式表示的所有氨基酸残基序列从左至右方向是从氨基末端至羧 基末端的常规方向。此外，短语“氨基酸残基”广义是指包括对照表(表1)中列举的氨基 酸以及修饰的和独特的氨基酸，如在37C.F.R. § § 1.821-1.822中提及的那些氨基酸，在 此并入作参考。另外，应注意在氨基酸序列的起始或者末尾的破折号表示与一或多个氨基 酸残基的其它序列、氨基末端基团如NH2或者羧基末端基团如C00H的肽键。如本文所用，“天然发生的氨基酸”是指在多肽中存在的20个L-氨基酸。如本文所用，“非天然氨基酸”是指具有与天然氨基酸相似的结构但是在结构上被 修饰以模拟天然氨基酸的结构和反应性的有机化合物。非天然发生的氨基酸因此包括例如 除了所述20个天然发生的氨基酸之外的氨基酸或者氨基酸类似物，包括但不限于氨基酸 的D-立体异构体(isostereomers)。举例的非天然氨基酸在本文描述且为本领域技术人员 已知。如本文所用，DNA构建体是单链或者双链的、线性或者环状DNA分子，其含有以在 自然中未发现的方式组合和并列的DNA节段。DNA构建体以人工操纵的结果存在，包括操纵
18的分子的克隆及其它拷贝。如本文所用，DNA节段是具有特定属性的较大的DNA分子的一部分。例如，编码特 定多肽的DNA节段是较长的DNA分子的一部分，如质粒或者质粒片段，当从5’至3’方向读 取时，编码该特定多肽的氨基酸序列。如本文所用，术语“多核苷酸”是指从5’至3’末端读取的脱氧核糖核苷酸或者 核糖核苷酸的单链或者双链聚合物。多核苷酸包括RNA和DNA，可以分离自天然来源、在体 外合成，或者从天然分子与合成分子的组合中制备。在本文多核苷酸分子的长度以核苷酸 (缩写为nt)或者碱基对(缩写为bp)表示。术语“核苷酸”在上下文允许的情况下用于 单链和双链分子。当该术语用于双链分子时，其用于描述全长，且应理解为等同于术语碱基 对。本领域技术人员意识到双链多核苷酸的两条链的长度可以略有不同，因此其末端可以 错列；因此双链多核苷酸分子内的所有核苷酸均不可配对。这种未配对的末端的长度通常 不超过20个核苷酸。如本文所用，两个蛋白质或者核酸之间的“相似性”是指蛋白质的氨基酸序列或者 核酸的核苷酸序列之间的关系。相似性可基于残基序列及其中包含的残基的相同性和/或 同源性程度。评估蛋白质或者核酸之间相似性程度的方法为本领域技术人员已知。例如， 在评估序列相似性的一个方法中，以产生序列之间最大水平相同性的方式排列两个氨基酸 或者核苷酸序列。“相同性”是指氨基酸或者核苷酸序列保持不变的程度。氨基酸序列以及 某种程度上的核苷酸序列的排列对比也可考虑氨基酸(或者核苷酸)中的保守差异和/或 常见取代。保守差异是保持所包含的残基的物理-化学性质的那些差异。序列对比可以是 整体对比(对比序列的全长序列及包含所有残基的对比)或者局部对比(仅包括最相似区 域的序列部分的对比)。“相同性”具有本领域公认的含义，可以使用公开的技术计算(见例如 Computational Molecular Biology, Lesk，Α. Μ.，ed.，Oxford University Press， New York，1988 ；Biocomputing :Informatics and Genome Projects，Smith，D. W.，ed.， Academic Press，New York，1993 ；Computer Analysis of Sequence Data，Part I， Griffin，A. M.，and Griffin，H. G.，eds.，Humana Press，New Jersey,1994 ；Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje，G.，Academic Press，1987 ；以及 Sequence Analysis Primer，Gribskov，M. and Devereux, J.，eds.，MStockton Press，New York， 1991)。虽然有许多方法测量两个多核苷酸或者多肽之间的相同性，术语“相同性”仍为本 领域技术人员熟知(Carillo，H. &Lipton，D.，SIAMJ Applied Math 48 1073 (1988)) 如本文所用，同源(关于核酸和/或氨基酸序列)是指大于或者等于25%的序 列同源性，典型为大于或者等于25%、40%、50%、60%、70%、80%、85%、90%或者95%的 序列同源性；如果需要则可以指定精确的百分比。对于本发明，除非特别指出，则术语“同 源性”与“相同性”通常可互换使用。通常地，为了确定同源性或者相同性百分比，对比序 列由此获得最高级别的匹配(见例如Computational Molecular Biology, Lesk, A.M.， ed. , Oxford University Press, New York,1988 ；Biocomputing Informatics andGenome Projects, Smith, D. W., ed. , Academic Press, New York, 1993 ；Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M. , and Griffin, H. G. , eds. , Humana Press, New Jersey, 1994 ；Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G. , AcademicPress, 1987 ；以及 Sequence Analysis Primer, Gribskov, Μ. and Devereux, J. , eds. , M Stockton Press,New York, 1991 ；Carilloet al. (1988)SIAMJAppliedMath 48 :1073)。通 过序列同源性，保守氨基酸的数目通过标准对比算法程序确定，可以使用每个供应商确定 的默认空位罚分(default gap penalties).基本同源的核酸分子通常在中等严格或者高 严格条件下沿着感兴趣的核酸的长度杂交。也包含这样的核酸分子，其含有简并密码子代 替杂交核酸分子中的密码子。任两个分子是否具有至少60%、70%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或 者99 % “相同，，或者“同源”的核苷酸序列或者氨基酸序列，可以使用已知的计算机算法确 定，如“FASTA”程序，使用 Pearson et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85 :2444 中所 述默认参数(其它程序包括GCG程序包(Devereux，J.，et al, Nucleic Acids Research 12(1) :387(1984))、BLASTP、BLASTN、FASTA(Atschul, S. F.，et al.，JMolec Biol 215 403 (1990)) ；Guide toHuge Computers, Martin J. Bishop, ed. , Academic Press, San Diego，1994 以及 Carillo et al. 1988) SIAMJAppliedMath 48 :1073)。例如，美国国立生物 技术信息中心(NCBI)数据库的BLAST函数可用于确定相同性。其它商购或者公开的程序包 括DNAStar“MegAlign，，程序(Madison,WI)和University offfisconsin Genetics Computer Group (UffG) “Gap”程序(Madison WI)。蛋白质和/或核酸分子的同源性或者相同性百分 比可以通过例如使用GAP计算机程序对比序列信息确定(例如Needleman et al. (1970) J. Mol. Biol. 48 :443，由 Smith and Waterman ((1981) Adv. Appl. Math. 2 :482 改进)。简而 言之，GAP程序将相似性定义为相似的被比对标志(即核苷酸或氨基酸)的数量除以两条 序列中较短一条中所述标志的总数的结果。GAP程序的默认参数可包括(1) 一元比较矩阵 (包含1这个值表示恒等(identities)，O表示非恒等(non-identities))和加权比较矩阵 (Gribskov et al. (1986) Nucl. Acids Res. 14 :6745)，如 Schwartz 禾口 Dayhoff，eds.，ATLAS OF PROTEIN SEQUENCEAND STR UCTURE, National Biomedical Research Foundation, pp. 353-358(1979)所述；(2)每一缺口罚分3. 0，每一缺口中的每个符号额外罚分0. 10;以 及⑶末端缺口无罚分。因此，如本文所用，术语“相同性”或者“同源性”是指待检和参考多肽或者多核苷 酸之间的对比。如本文所用，术语至少“90%相同”是指相对于参考多肽的核酸或者氨基酸 序列从90至99. 99的相同性百分比。在90%或者更高水平的相同性表示这样的事实，即例 如假定对比长度为100个氨基酸的待检和参考多肽，待检多肽中不超过10% (即100个中 的10个)的氨基酸与参考多肽不同。在待检和参考多核苷酸之间可以进行相似对比。这 种差异可以表现为在多肽全长随机分布的点突变，或者其可以群集在不同长度直至最大允 许长度的一或多个位置，例如10/100氨基酸差异(大约90%相同性)。差异确定为核酸或 者氨基酸取代、插入或者缺失。在大约85-90%以上的特异性或者相同性水平，结果应与所 述程序和空位参数集无关；这种高水平相同性可易于评估，通常通过人工对比而不依赖于 软件进行。如本文所用，对比序列是指使用同源性(相似性和/或相同性)对比核苷酸或者 氨基酸序列种相应位置。通常，对比具有50%或者更高相同性的两或多个序列。对比的序 列是指在相应位置对比的两或多个序列，且可包括衍生自RNA的对比序列，如EST及其它 cDNA，以基因组DNA序列对比。
如本文所用，“引物”是指在适当条件下合适的缓冲液及在合适温度下，可作为模 板指导的DNA合成的起始点的核酸分子(例如存在四个不同的三磷酸核苷和聚合剂，如DNA 聚合酶、RNA聚合酶或者逆转录酶)。应意识到某些核酸分子可作为“探针”和作为“引物”。 然而，引物具有3’羟基基团以进行延伸。引物可用于各种方法中，包括例如聚合酶链反应 (PCR)、逆转录酶(RT)-PCR, RNA PCR、LCR、多重 PCR、锅柄式 PCR、捕获 PCR、表达 PCR、3'和 5' RACE、原位PCR、连接介导的PCR以及其它扩增方案。如本文所用，“引物对”是指一组引物，其包含与待扩增(例如通过PCR)的序列的 5’末端杂交的5’ (上游)引物以及与待扩增序列的3’末端的互补体杂交的3’ (下游)引 物。如本文所用，“特异性杂交”是指通过互补碱基配对，核酸分子(例如寡核苷酸) 与靶核酸分子退火。本领域技术人员熟知影响特异性杂交的体外和体内参数，如特定分子 的长度和成分。与体外杂交特别相关的参数进一步包括退火和洗涤温度、缓冲液成分以及 盐浓度。举例的除去非特异性结合的核酸分子的高严格洗涤条件是0. 1XSSPE、0. 1% SDS、 65°C，中等严格条件是0. 2XSSPE、0. SDS、50°C。本领域已知相等的严格条件。技术人 员可易于调节这些参数以实现核酸分子与适于特定应用的靶核酸分子的特异性杂交。当提 及两个核苷酸序列时，互补是指两个核苷酸序列能杂交，典型在相对的核苷酸之间具有低 于25%、15%或者5%的错配。如果需要，将指定互补性百分比。通常，选择两个分子，由此 其在高严格条件下杂交。如本文所用，与产物基本相同是指足够相似，由此感兴趣的性质未改变，由此所述 基本相同的产物可用于代替该产物。如本文所用，也应理解术语“基本相同”或者“相似”随着上下文的语境而有所变 化。如本文所用，等位基因变体或者等位基因变异是指基因的两或多种改变形式占据 相同染色体位置。等位基因变异是通过突变自然产生的，且可以导致群内表型多态性。基 因突变可以是沉默的(编码的多肽中无变化)，或者可以编码具有改变的氨基酸序列的多 肽。术语“等位基因变体”在本文也用于表示有基因的等位基因变体编码的蛋白质。通常， 基因的参考形式编码来自种群或者物种的单个参考成员的多肽的野生型形式和/或优势 型形式。通常，包括物种之间和之中的变体的等位基因变体与相同物种的野生型或者优势 型形式典型具有至少80%、90%或者更高的氨基酸相同性；相同性程度依赖于基因以及对 比是种间还是种内对比。通常地，种内等位基因变体与野生型和/或优势型形式具有至少 大约80%、85%、90%或95%或者更高的相同性，包括与多肽的野生型和/或优势型形式具 有96%、97%、98%、99%或者更高的相同性。本文提及的等位基因变体通常是指相同种的 成员之中的蛋白质变异。如本文所用，“等位基因”与“等位基因变体”在本文可互换使用，是指基因的另一 形式或者其一部分。等位基因占据同源染色体上的相同座或者位置。当一个对象具有基因 的两个相同的等位基因时，称该对象对于该基因或者等位基因是纯合的。当一个对象具有 基因的两个不同的等位基因时，称该对象对于该基因是杂合的。特定基因的等位基因在一 个核苷酸或者几个核苷酸上可以彼此不同，且可以包含核苷酸的取代、缺失和插入。基因的 等位基因也可以是含有突变的基因形式。
如本文所用，种变体是指不同种之中的多肽变体，包括不同的哺乳动物种，如小鼠 和人。如本文所用，剪接变体是指通过对基因组DNA的初级转录物进行不同处理而产生 的变体，产生一种以上类型的mRNA。如本文所用，修饰是指对多肽的氨基酸序列或者核酸分子的核苷酸序列的修饰， 分别包括氨基酸和核苷酸的缺失、插入和置换。修饰多肽的方法为本领域技术人员熟知，如 通过使用重组DNA技术进行修饰。如本文所用，术语“启动子”是指基因的一部分，其含有使得RNA聚合酶结合及转 录起始的DNA序列的。启动子序列通常但不总是在基因的5’非编码区发现。如本文所用，分离的或者纯化的多肽或者蛋白质或者其生物活性部分基本上没有 来自该蛋白质衍生自其中的细胞或者组织的细胞材料或者其它污染蛋白质，或者当其是化 学合成时基本上没有化学前体或者其它化合物。如果制备物看起来不存在通过本领域技 术人员用于评估这种纯度的标准分子方法确定可易于检测的杂质，则可以确定其是基本纯 的，所述标准分析方法薄层层析(TLC)、凝胶电泳和高效液相层析(HPLC)；或者是足够纯 的，由此进一步纯化不改变所述物质的物理和化学性质，如酶和生物活性。本领域技术人员 已知纯化化合物产生化学基本纯的化合物的方法。然而，化学基本纯的化合物可以是立体 异构体的混合物。在这种情况中，进一步纯化可增加化合物的特异性活性。术语基本上没有细胞材料包括这样的蛋白质制备物，其中所述蛋白质与其从中分 离或者重组产生的细胞的细胞成分分离。在一个实施方案中，术语基本没有细胞材料包括 酶蛋白质制备物，其具有低于大约30% (干重)的非酶蛋白质(在本文也称作污染蛋白 质)，通常低于大约20%的非酶蛋白质或者10%的非酶蛋白质，或者低于大约5%的非酶蛋 白质。当所述酶蛋白质是重组产生的，其也基本上没有培养基，即存在低于大约20%、10% 或者5%酶蛋白质制备物体积的培养基。如本文所用，术语基本没有化学前体或者其它化合物包括这样的酶蛋白质制备 物，其中所述蛋白质与参与其合成的化学前体或者其它化合物分离。该术语包括具有低于 大约30 % (干重)、20 %、10 %、5 %或者更低的化学前体或者非酶化合物或者成分的酶蛋白 质制备物。如本文所用，关于例如合成的核酸分子或者合成的基因或者合成的肽提及的术语 合成是指核酸分子或者多肽分子是通过重组方法和/或通过化学合成方法产生。如本文所用，通过使用重组DNA方法通过重组发生产生是指使用熟知的分子生物 学方法表达由克隆的DNA编码的蛋白质。如本文所用，载体(或者质粒)是指用于将异源核酸导入细胞以使其表达或者复 制的独立的元件。载体典型保留附加体，但是可以设计为实现基因或者其一部分整合进基 因组的染色体中。也包含这样的载体，其是人工染色体，如酵母人工染色体和哺乳动物人工 染色体。这种载体的选择和使用为本领域技术人员熟知。如本文所用，表达载体包括能表达与调节序列可操纵地连接的DNA的载体，所述 调节序列如启动子区域，其能实现这种DNA片段的表达。这种额外的节段可包括启动子和 终止子序列，任选可包含一或多个复制起源、一或多个选择标记、增强子、聚腺苷酸化信号 等。表达载体通常衍生自质粒或者病毒DNA，或者可以含有这两个元件。因此，表达载体是指重组DNA或者RNA构建体，如质粒、噬菌体、重组病毒或者其它载体，在导入合适的宿主细 胞中使得克隆的DNA表达。合适的表达载体为本领域技术人员熟知，包括在真核细胞和/ 或原核细胞中可复制的那些载体，以及保留附加体或者整合进宿主细胞基因组中的那些载 体。如本文所用，载体还包括“病毒载体”。病毒载体是工程化的病毒，其与外源基因可 操纵地连接以将该外源基因转移(作为运载体或者穿梭载体)进细胞中。如本文所用，当提及DNA节段时所用术语“可操纵地连接”是指排列该节段，由此 其发挥与指定目的一致的功能，例如转录在启动子中开始，并且通过编码节段行进至终止 子。如本文所用，术语“评估(assessing) ”是指包括在数量上和性质上确定获得的样 品中存在的蛋白酶或者其结构域的活性绝对值，以及获得的指数、比率、百分比、目测或者 其它表示活性水平的数值。评估可以是直接或者间接评估，实际检测的化学物种当然不需 要是蛋白酶解产物自身，但是可例如是其衍生物或者一些进一步的物质。例如，检测补体蛋 白质的裂解产物，如通过SDS-PAGE以及考马斯蓝染色蛋白质进行。如本文所用，生物活性是指化合物的体内活性或者当在体内给予化合物、组合物 或者其它混合物时获得的生理反应。因此，生物活性包括这种化合物、组合物和混合物的治 疗作用和药物活性。生物活性可以在设计为检测或者使用这种活性的体外系统中观测。因 此，对于本发明而言，蛋白酶的生物活性是其中多肽被水解的其催化活性。如本文所用，当提及两个核酸序列时所用术语“相等”是指这两个序列编码相同的 氨基酸序列或者相等的蛋白质。当相等用于描述两个蛋白质或者肽时，是指这两个蛋白质 或者肽具有基本相同的氨基酸序列，仅具有基本上不改变所述蛋白质或者肽的活性或者功 能的氨基酸取代。当相等是指性质时，所述性质不需要表现为相同程度(例如两个多肽可 以呈现不同速度的相同类型酶活性)，但是所述活性通常基本相同。如本文所用，“调节”或者“改变”是指分子如蛋白质的活性改变。举例的活性包括 但不限于生物活性，如信号转导。调节可包括增强活性(即正调节或者激动活性)、降低活 性(即负调节或者抑制)或者活性的任何其它改变(如周期性、频率、持续时间、动力学或 者其它参数的改变)。调节可以与背景相关，通常是与指定状态对比，例如野生型蛋白质、组 成型状态蛋白质，或者在指定细胞类型或者状况中表达的蛋白质。如本文所用，组合物是指任何混合物。其可以是溶液、悬浮液、液体、粉末、糊剂、水 溶液、非水溶液或者其任何组合。如本文所用，组合是指两或多个项目之间或者之中的任何关联。所述组合可以是 两或多个单独的项目，如两个组合物或者两个集合，可以是其混合物，如两或多个项目的单 混合物，或者其任何变化。所述组合的原件通常联合或者相关地起作用。如本文所用，试剂盒是经包装的组合，其任选包含其它元件，如另外的试剂以及所 述组合或者其元件的使用说明书。如本文所用，“疾病或者失调”是指由一些原因或者状况导致的生物体内的病理状 况，所述原因或状况包括但不限于感染、获得性状况、遗传状况，特征在于可鉴别的症状。本 发明感兴趣的疾病和失调是可通过免疫球蛋白治疗的那些疾病和失调。如本文所用，“治疗”患病对象是指所述对象的症状在治疗后部分或者全部减轻，或者保持稳定。因此，治疗包括预防、治疗和/或治愈。预防是指防止潜在的疾病和/或防 止疾病的症状恶化或者进展。治疗还包括本发明提供的免疫球蛋白制备物和组合物的任何 药物学应用。如本文所用，药物有效制剂包括任何治疗剂或者生物活性剂，包括但不限于例如 麻醉剂、血管收缩剂、分散剂、常规治疗药物，包括小分子药物和治疗性蛋白质。如本文所用，治疗是指使得病症、失调或者疾病的症状或者其它指征得以改善或 者另外有益地改变的任何方式。如本文所用，治疗作用是指治疗对象获得的结果，其改变、典型地改善或者减轻疾 病或者病症的症状或者治愈疾病或者病症。治疗有效量是指组合物、分子或者化合物在给 予对象后产生治疗作用的量。如本文所用，术语“对象”是指动物，包括哺乳动物如人。如本文所用，患者是指对象是人。如本文所用，通过治疗如通过给予药物组合物或者其它治疗剂使特定疾病或失调 的症状得以改善是指归因于给予所述组合物或者治疗剂或者与之相关的症状的任何减轻， 无论持久或是短暂、持续或者瞬时的减轻。如本文所用，防止或者预防是指降低疾病或者病症发生的危险的方法。如本文所用，“治疗有效量”或者“治疗有效剂量”是指含有化合物的制剂、化合物、 材料或者组合物至少足以产生治疗作用的数量。因此，治疗有效量是预防、治愈、改善、阻止 或者部分阻止疾病或者失调的症状必需的数量。如本文所用，单位剂量形式是指适于人和动物对象的物理分离的单位，且单独包装。如本文所用，单剂量配制物是指直接给予的配制物。如本文所用，“制品”是指生产和销售的产物。如本申请书中所用，该术语包括在包 装物品中包含的IG和透明质酸酶组合物。如本文所用，液体是指可以流动的任何组合物。因此液体包括半固体、糊剂、溶液、 水相混合物、凝胶、洗剂、乳液形式的组合物及其它这种组合物。如本文所用，“试剂盒”是指本发明提供的组合物以及另一物质的组合，用于包括 但不限于激活、给予、诊断和评估生物活性或者性质的目的。试剂盒任选包括使用说明书。如本文所用，细胞提取物或者裂解物是指从裂解或者破坏的细胞中制备的制备物 或者一部分。如本文所用，动物包括任何动物，例如但不限于灵长类动物，包括人、大猩猩和 猴；啮齿动物，如小鼠和大鼠；禽类，如鸡；反刍动物，如山羊、牛、鹿、绵羊(sheep)；绵羊 (ovine)，如猪及其它动物。非人动物是除了人之外的预期动物。本发明提供的酶来自任何 来源，动物、植物、原核生物和真菌。大多数酶源自动物，包括源自哺乳动物。如本文所用，对照物是指与检测样品基本相同的样品，不同之处是其未用检测参 数处理，或者如果是血浆样品，则其可以来自未受感兴趣的状况影响的正常志愿者。对照也 可以是内部对照。如本文所用，除非特别指出，则单数形式“一种”包括其复数形式。因此，例如提及 一种化合物包含“一种胞外结构域”是指具有一或多个胞外结构域的化合物。
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如本文所用，范围和量可以特定数值或范围的“大约值”表示。大约也包括精确量。 因此，“大约5个碱基”是指“大约5个碱基”以及“5个碱基”。如本文所用，“任选地”是指随后描述的事件或者情况发生或者不发生，且该描述 包括其中所述事件或者情况发生的实例以及其中所述事件或者情况不发生的事例。例如， 任选取代的基团是指该基团未被取代或者被取代。如本文所用，除非特别指出，则任何保护性基团、氨基端及其它化合物的缩写与 其通常用途、公认的缩写或者 IUPAC-IUB Commission onBiochemical Nomenclature (见 (1972)MochenLli 1726)所述一致。B.免疫球蛋白(IG)的皮下给予本发明提供了通过皮下给予免疫球蛋白(IG)组合可溶性透明质酸酶治疗IG可 治疗的疾病和病症的方法和应用。因此，本发明还提供了 IG与可溶性透明质酸酶的组合。 借助于透明质酸酶在胞外基质中分解透明质酸的能力，透明质酸酶便于治疗剂的皮下输 注。免疫球蛋白是一种治疗剂，主要通过静脉内给予以治疗患有免疫缺陷的个体，称作IVIG 疗法。IG在存在透明质酸酶的条件下的生物利用度高于IVIG治疗中IG的生物利用度的 90%。因此，在本发明提供的方法和应用中，透明质酸酶与IG的组合治疗使得可以皮下给 予免疫球蛋白，给予剂量和频率与IVIG相似。因此，例如在本发明提供的方法和应用中， 当IG在存在可溶性透明质酸酶的条件下皮下给予时，对于特定指征可以普遍的IVIG剂量 每月给予一次。此外，由于透明质酸酶作用是打开皮肤流动通道，其可以加快输注速度。因 此，皮下给予与透明质酸酶共同配制和/或共同给予的IG可以提高输注速度，从而减少IG 疗法的输送时间。缺陷的抗体形成在大多数原发性免疫缺陷病(PID)中是最常见的异常；其通常由 血清免疫球蛋白减少反映出来，由此导致尤其是窦肺呼吸道(sinopulmonary tract)对细 菌感染的易感性增加。在抗体缺陷的个体中发现免疫球蛋白水平降低，如χ-连锁的血丙 种球蛋白缺乏、免疫球蛋白重链缺失、选择性免疫球蛋白G(IgG)亚类缺陷、常见变异型免 疫缺陷病，或者X-连锁的高免疫球蛋白M综合征。降低的免疫球蛋白水平也见于由于T 细胞和B细胞缺陷儿具有联合的免疫缺陷的个体，例如但不限于重症联合免疫缺陷病或者 Wiskott Aldrich 综合征(IUIS Scientific Committee，1999)。患有这些疾病的个体需要使用免疫球蛋白产品进行替代治疗，以预防或者降低感 染的严重性。最初的免疫球蛋白替代治疗通过肌内途径给予，但是从1981年开始已经通过 静脉内(IV)途径治疗绝大多数患者。目前在美国大多数免疫球蛋白产品是通过IV给予。 然而，最近已经开发了通过皮下给予的免疫球蛋白制备物(Gardulf et al. (2006)Curr. Opin.Allergy Clin.Immunol. ,6434~42 ；Gardulf et al. (2006)J Clin.Immunol. , 26
177-85 ；Ochs etal. (2006) J Clin. Immunol.，26 :265_73)。至少一种产品 Vivaglobin 已
经被许可用于皮下给予。目前使用的所有免疫球蛋白制备物均配制浓度为16%，相比之下IVIG制备物配 制物浓度为5-12%。相对于IV制备物的更高的浓度允许更小的输注体积，这种制备物不 可以静脉内输注。这种皮下给予免疫球蛋白替代治疗方法被认为是有效、安全的且也为患 者高度接受，因为其具有较低的全身性不利反应的危险，且与每月静脉内输注一次相比导 致更高的波谷血清 IgG浓度(Gardulf et al. (1995) J Adv. Nurs. ,21 :917_27 ；Gardulf etal. (1993) Clin. Exp. Immunol. ,92 200-4 ；Gardulfet al. (1991) Lancet, 338 162—6)。皮下给予免疫球蛋白的生物利用度通常低于静脉内输注的生物利用度。免疫球蛋 白在血液中是可立即利用的，且在3-5天内缓慢与血管外区室平衡(Schiff et al. (1986) J.Clin. Immunol.，6 :256_64)。皮下给予的免疫球蛋白从皮下间隙缓慢吸收进血液中， 同时与血管外区室平衡；不存在高静脉内穿刺。生物利用度还未广泛研究，但是在近来 的ZLB-Behring制备(即Vivaglobin )试验中个，通过测量曲线下面积(AUC)确定，仅 67%的免疫球蛋白被吸收，因此推荐剂量为IV剂量的137% (Ochs et al. (2006) J Clin. Immunol. ,26 :265_73)。尽管存在对比两个不同途径和给予频率的AUC的技术难题，但是在 兔中经皮内给予免疫球蛋白的研究提示通过皮下给予途径的生物利用度降低。这也许是由 于大的蛋白质分子的吸收模式所致，其不易通过毛细血管壁扩散，必须通过淋巴系统吸收 (Supersaxo et al. (1990) Pharm. Res.，7 167-9)。除了与皮下给予IG相关的生物利用度的问题之外，SC给予的主要缺点是在每个 部位仅可以输注很小体积，迫使需要每周或者每两周使用多个部位。通常地，可以在每个部 位使用大约20ml的16%的溶液输注；成人患者接受400mg/kg体重(BW)因此需要每周至少 3个部位或者每月至少12个部位。即使每周或者每两周给予一次比每月静脉内给予一次对 于维持更好的波谷水平具有额外益处，但是需要多个针头刺入对于许多患者是个威慑。SC间隙由充填凝胶样物质_透明质酸_的胶原网形成。透明质酸半衰期为大约5 小时，与通过液体流经组织的抗性密切相关。透明质酸酶暂时地消化透明质酸，从而促进输 注进皮下间隙中。所述透明质酸在24小时内恢复，导致无可观测的改变。由于透明质酸酶 通过葡糖胺聚糖降解打开细胞间隙中的通道的能力，因此给予可溶性透明质酸酶使得分子 扩散，从而改善这种共配制或者共给予的分子的生物利用度、药动学和/或药效学特性。在一些实施例中，与透明质酸酶通过皮下共同给予的IG的生物利用度是IVIG 的生物度的 70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或者 100%。通常，所述生物利用度高于90%。进一步地，与可溶性透明质酸酶的共同给予使得 可以在一个皮下输注部位大体积输注。例如，直至600ml或者更大体积的IG可以在一个 部位给予，例如在一次给予时可以在一个部位给予200ml、300ml、400ml、500ml、600ml或者 更多。因此，配制为5-12%浓度的IG制备物可以与可溶性透明质酸酶在皮下共同给予， 剂量与每月给予一次IVIG的剂量相同，例如给予剂量是或者是大约100mg/kg、200mg/kg、 300mg/kg、400mg/kg、500mg/kg、600mg/kg或者更多。该剂量可以是一次给予，或者分成多 次每天或者每周给予，如一周一次或者每两周一次、三或四周给予一次或者组合这些给予 方式。因此，通过皮下给予存在可溶性透明质酸酶的IG，解决了与皮下给予IG相关的一或 全部问题。因此，利用透明质酸酶的扩散性质，在存在可溶性透明质酸酶的条件下皮下给予 IG使得可以每月给予一次IVIG的频率给予IVIG，同时保持IVIG的生物利用度。如下章节描述了举例的免疫球蛋白和可溶性透明质酸酶的组合，生产其的方法以 及使用其治疗IG可治疗的疾病和病症的方法。C.免疫球蛋白本发明提供了免疫球蛋白(IG，也称作、球蛋白或者IgG)，其可用于与可溶性透 明质酸酶组合皮下给予。IG通过调节补体活性、抑制自身抗体产生、使巨噬细胞和B淋巴细 胞上Fc受体饱和或者封闭以及抑制炎症介质如细胞因子、趋化因子和金属蛋白酶产生而强化免疫系统。 IG是在高等动物血浆中发现的一种蛋白质成分，其含有大量具有不同特异性的抗 体。通常地，IG含有血清免疫球蛋白，其可以是任何独特型，如IgG及各个亚类IgA、IgM、 IgD、IgE。不同的免疫球蛋白或者亚类可以不同浓度和特异性存在，根据例如血浆供体暴 露于抗原(例如通过接种)而可以在免疫球蛋白制备物中有所不同。通常免疫球蛋白以在 血清中正常发现的量存在(见表2)，但是可以应用纯化步骤以改变特定的免疫球蛋白类别 的比率。通常，IG制备物含有90%或者更多的IgG，如90%、91%、92%、93%、94%、95%、 96%、97%、98%、99%或者更多的IgG。所述免疫球蛋白可以是多克隆或者是单克隆。通 常，所述制备物包括高百分比的单体IgG和低含量的IgA。
权利要求
一种组合物，其包含免疫球蛋白(IG)和透明质酸酶，其中所述组合物配制为皮下给予形式；所述组合物中IG的量与以相同给药方案静脉内给予时的量基本相同；所述组合物中透明质酸酶的量足以使得该组合物在治疗上有效。
2.权利要求1的组合物，其中所述给药方案是不超过每月一次给予IG的给药频率。
3.权利要求1或者2任一项的组合物，其中所述组合物中透明质酸酶的量是以不超过 每月一次的给予剂量足以实现IG的皮下给予的量。
4.权利要求1-3任一项的组合物，其中所述组合物中的IG和透明质酸酶配制为多剂量 给予形式。
5.权利要求1-3任一项的组合物，其中所述组合物中的免疫球蛋白(IG)和透明质酸酶 配制为每月给予一次的单剂量形式。
6.权利要求5的组合物，其中所述组合物中IG的量是或者是大约5克(g)、10g、15g、 20g、21g、22g、23g、24g、25g、26g、27g、28g、29g、30g、31g、32g、33g、34g、35g、36g、37g、38g、 39g 或者 40g。
7.权利要求5或者6的组合物，其中所述组合物中透明质酸酶的量是或者是大约10单 位-500，000 单位、100 单位-100，000 单位、500 单位-50，000 单位、1000 单位-10，000 单 位、5000单位-7500单位、5000单位-50，000单位，或者1，000单位-10，000单位。
8.权利要求5-7任一项的组合物，其中所述组合物是液体，且所述液体体积是或者是 大约 100ml、150ml、200ml、300ml、400ml、500ml、600ml 或者 700ml。
9.权利要求5-8任一项的组合物，其中所述组合物中透明质酸酶的量是或者是大约 IOU/ 克(g)、20U/g、30U/g、35U/g、40U/g、50U/g、60U/g、70U/g、80U/g、90U/g、100U/g、150U/ g或者300U/g的比率(透明质酸酶单位/IG克数)。
10.权利要求9的组合物，其中所述组合物中的透明质酸酶是以或以大约50U/克IG的 比率给予。
11.权利要求1-10任一项的组合物，其中所述组合物中的透明质酸酶是PH20，或者是 其截短形式。
12.权利要求11的组合物，其中所述PH20选自绵羊、牛或者截短的人PH20。
13.权利要求12的组合物，其中所述截短的人PH20选自具有SEQIDNO :4_9之一所示 的氨基酸序列的多肽，或者其等位基因变体或者其它变体。
14.权利要求11-13任一项的组合物，其中所述透明质酸酶被称作rHuPH20。
15.权利要求1-14任一项的组合物，其中所述组合物中的IG是从人血浆中纯化的。
16.权利要求15的组合物，其中所述组合物中纯化自人血浆的IG是通过醇分馏纯化。
17.权利要求16的组合物，其中通过如下任何一种或者多种方法进一步纯化所述组合 物中的IG:化学修饰、在pH 4.0在有或者没有胃蛋白酶的条件下保温、聚乙二醇(PEG)沉 淀、离子交换层析、酶裂解、溶剂去污剂处理、渗滤或者超滤。
18.权利要求1-17任一项的组合物，其中所述组合物中的IG包含IgG、IgA和IgM。
19.权利要求1-18任一项的组合物，其中所述组合物中的IG包含超过95%的IgG。
20.权利要求19的组合物，其中所述IgG是单体。
21.权利要求1-20任一项的组合物，其中组合物中的IG进一步含有蛋白质稳定赋形剂。
22.权利要求21的组合物，其中所述蛋白质稳定赋形剂选自甘氨酸、麦芽糖、多元醇、 人血清白蛋白、甘露醇以及非离子去污剂中的一种或多种物质。
23.权利要求1-22任一项的组合物，其中所述组合物中IG制备物的pH是或者是大约 4. 2-5. 4,4. 6-5. 1 或者 4. 8-5. 0。
24.权利要求1-23任一项的组合物，其中所述组合物中的IG的蛋白质浓度是或者是大 约 5-15% w/v,6-15% w/v 或者 8-12% w/v 的 IG 组合物。
25.权利要求24的组合物，其中所述蛋白质浓度是10%w/v。
26.权利要求1-25任一项的组合物，其是液体。
27.权利要求1-26任一项的组合物，其中IG和透明质酸酶在单一组合物中。
28.权利要求1-26任一项的组合物，其中IG和透明质酸酶是分开配制的。
29.组合物，其包含免疫球蛋白(IG)和透明质酸酶，其中所述组合物配制为皮下给予形式；所述组合物中IG的量与当经静脉内给予用以治疗IG可治疗的疾病或者病症时的量基 本相同；所述组合物中透明质酸酶的量足以使得该组合物在治疗上有效。
30.权利要求29的组合物，其中所述IG可治疗的疾病或者病症选自免疫缺陷病、继发 于恶性血液病的获得性低丙种球蛋白血症、川崎病、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病症 (CIDP)、格林巴利综合症、特发性血小板减少性紫癜、炎性肌病、Lambert-Eaton肌无力综 合征、多灶性运动神经病、重症肌无力、Moersch-Woltmann综合征、继发低丙种球蛋白血症 (包括医源性免疫缺陷病)、特异性抗体缺陷、急性播散性脑脊髓炎、ANCA-阳性系统性坏死 性血管炎、自身免疫性溶血性贫血、大疱性类天疱疮、疤痕性类天疱疮、Evans综合征(包括 具有免疫性血小板减少的自身免疫性溶血性贫血)、胎母/新生儿同种异体免疫血小板减 少症(FMAIT/NAIT)、噬血细胞综合征、高危同种异基因造血干细胞移植、IgM副蛋白血症神 经病、肾移植、多发性硬化症、眼阵挛-肌阵挛运动失调症、落叶型天疱疮、寻常型天疱疮、 输血后紫癜、中毒性表皮坏死/Steven Johnson综合征(TEN/SJS)、中毒性休克综合征、阿 尔茨海默病、系统性红斑狼疮、多发性骨髓瘤、败血症、B细胞肿瘤、外伤，以及细菌、病毒或 者真菌感染。
31.权利要求29或者30的组合物，其中所述组合物中IG的量是或者是大约1克(g)、 5g、10g、20g、30g、40g、50g、60g、70g、80g、90g、100g 或者 200g。
32.权利要求29-30任一项的组合物，其中所述组合物中透明质酸酶的量是或者是大 约500单位、1000单位、2000单位、5000单位、10，000单位、30，000单位、40，000单位，、 50，000单位、60，000单位、70，000单位、80，000单位、90，000单位、100，000单位或者更多。
33.权利要求29-32任一项的组合物，其中组合物中透明质酸酶的量是或者是大约 10U/g、20U/g、30U/g、40U/g、50U/g、60U/g、70U/g、80U/g、90U/g、100U/g、150U/g、200U/g、 300U/g、400U/g、500U/g或者更高的比率(透明质酸酶单位/IG克数)。
34.权利要求29-33任一项的组合物，其被配制为按照每日一次、每周一次、每两周一 次、每2-3周一次、每3-4周一次或者每月一次的给药频率给药。
35.权利要求29-34任一项的组合物，其是单剂量给予形式。
36.权利要求29-34任一项的组合物，其是多剂量给予形式。
37.组合物，其包含免疫球蛋白(IG)和透明质酸酶，其中所述组合物配制为皮下给予形式；所述组合物中IG的蛋白质浓度低于16% w/v IG ；所述组合物中透明质酸酶的量足以使得该组合物在治疗上有效。
38.权利要求37的组合物，其中IG的蛋白质浓度是或者是大约5-15%w/V、6-15%w/ ν,或者 8-12% w/v 的 IG0
39.权利要求37或者38的组合物，其中IG的蛋白质浓度是或者是大约10%w/v。
40.权利要求37-39任一项的组合物，其中组合物中透明质酸酶的量是或者是大约500 单位、1000单位、2000单位、5000单位、10，000单位、30，000单位、40，000单位、50，000单 位、60，000单位、70，000单位、80，000单位、90，000单位、100，000单位或者更多。
41.权利要求37-40任一项的组合物，其中IG和透明质酸酶配制为单一组合物。
42.权利要求37-40任一项的组合物，其中IG和透明质酸酶是分开配制的。
43.权利要求1-42任一项的组合物在配制治疗对象中IG可治疗的疾病或者病症的药 物中的应用。
44.权利要求43的应用，其中所述IG可治疗的疾病或者病症选自免疫缺陷病、继发 于恶性血液病的获得性低丙种球蛋白血症、川崎病、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病症 (CIDP)、格林巴利综合症、特发性血小板减少性紫癜、炎性肌病、Lambert-Eaton肌无力综 合征、多灶性运动神经病、重症肌无力、Moersch-Woltmann综合征、继发低丙种球蛋白血症 (包括医源性免疫缺陷病)、特异性抗体缺陷、急性播散性脑脊髓炎、ANCA-阳性系统性坏死 性血管炎、自身免疫性溶血性贫血、大疱性类天疱疮、疤痕性类天疱疮、Evans综合征(包括 具有免疫性血小板减少的自身免疫性溶血性贫血)、胎母/新生儿同种异体免疫血小板减 少症(FMAIT/NAIT)、噬血细胞综合征、高危同种异基因造血干细胞移植、IgM副蛋白血症神 经病、肾移植、多发性硬化症、眼阵挛-肌阵挛运动失调症、落叶型天疱疮、寻常型天疱疮、 输血后紫癜、中毒性表皮坏死/Steven Johnson综合征(TEN/SJS)、中毒性休克综合征、阿 尔茨海默病、系统性红斑狼疮、多发性骨髓瘤、败血症、B细胞肿瘤、外伤以及细菌、病毒或者 真菌感染。
45.权利要求44的应用，其中所述IG可治疗的疾病或者病症是免疫缺陷病，且所述免 疫缺陷病选自常见变异型免疫缺陷病(CVID)、先天性免疫球蛋白缺乏症、Wiskott-Aldrich 综合征、重症联合免疫缺陷病(SCID)、原发性低丙种球蛋白血症、抗体缺陷的原发性免疫缺 陷病、X连锁无丙种球蛋白血症(XLA)、婴儿期低丙球蛋白血症以及无抗体副肿瘤性小脑变 性。
46.权利要求44的应用，其中所述IG可治疗的疾病或者病症是继发于恶性血液病的 获得性低丙种球蛋白血症，所述恶性血液病选自慢性淋巴细胞白血病(CLL)、多发性骨髓瘤 (MM)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)。
47.权利要求44的应用，其中所述IG可治疗的疾病或者病症是炎症性肌病，所述炎症 性疾病选自多肌炎、皮肌炎和包涵体肌炎。
48.权利要求44的应用，其中所述IG可治疗的疾病或者病症是细菌、病毒或者真菌病 症，所述细菌、病毒或者真菌选自B型流感嗜血杆菌、A和B型铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、B族链球菌、1、3、4、6、7、8、9、12、14、18、19和23型肺炎链球菌、2和5型腺病毒、巨细胞 病毒、EB病毒VCA、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、单纯疱疹病毒-1、单纯疱疹病毒_2、甲型 流感病毒、麻疹病毒、1、2和3型副流感病毒、小儿脊髓灰质炎病毒、水痘-带状疱疹病毒、曲 霉和白色念珠菌。
49.权利要求1-42任一项的药物组合物，用于治疗对象中IG可治疗的疾病或者病症。
50.权利要求49的药物组合物，其中所述IG可治疗的疾病或病症选自免疫缺陷病、继 发于恶性血液病的获得性低丙种球蛋白血症、川崎病、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病 症(CIDP)、格林巴利综合症、特发性血小板减少性紫癜、炎性肌病、Lambert-Eaton肌无力 综合征、多灶性运动神经病、重症肌无力、Moersch-Woltmann综合征、继发低丙种球蛋白血 症(包括医源性免疫缺陷病)、特异性抗体缺陷、急性播散性脑脊髓炎、ANCA-阳性系统性坏 死性血管炎、自身免疫性溶血性贫血、大疱性类天疱疮、疤痕性类天疱疮、Evans综合征(包 括免疫性血小板减少的自身免疫性溶血性贫血)、胎母/新生儿同种异体免疫血小板减少 症(FMAIT/NAIT)、噬血细胞综合征、高危同种异基因造血干细胞移植、IgM副蛋白血症神经 病、肾移植、多发性硬化症、眼阵挛-肌阵挛运动失调症、落叶型天疱疮、寻常型天疱疮、输 血后紫癜、中毒性表皮坏死/Steven Johnson综合征(TEN/SJS)、中毒性休克综合征、阿尔 茨海默病、系统性红斑狼疮、多发性骨髓瘤、败血症、B细胞肿瘤、外伤，以及细菌、病毒或者 真菌感染。
51.权利要求50的药物组合物，其中所述IG可治疗的疾病或者病症是免疫缺陷 病，所述免疫缺陷病选自常见变异型免疫缺陷病(CVID)、先天性免疫球蛋白缺乏症、 Wiskott-Aldrich综合征、重症联合免疫缺陷病(SCID)、原发性低丙种球蛋白血症、抗体缺 陷的原发性免疫缺陷病、X连锁无丙种球蛋白血症(XLA)、婴儿期低丙球蛋白血症以及无抗 体的副肿瘤性小脑变性。
52.权利要求50的药物组合物，其中所述IG可治疗的疾病或者病症是继发于恶性血液 病的获得性低丙种球蛋白血症，所述恶性血液病选自慢性淋巴细胞白血病(CLL)、多发性骨 髓瘤(MM)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)。
53.权利要求50的药物组合物，其中所述IG可治疗的疾病或者病症是炎症性肌病，所 述炎症性肌病选自多肌炎、皮肌炎和包涵体肌炎。
54.权利要求50的药物组合物，其中所述IG可治疗的疾病或者病症是细菌、病毒或者 真菌病症，所述细菌、病毒或者真菌选自B型流感嗜血杆菌、A和B型铜绿假单胞菌、金黄 色葡萄球菌、8族链球菌、1、3、4、6、7、8、9、12、14、18、19和23型肺炎链球菌、2和5型腺病 毒、巨细胞病毒、EB病毒VCA、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、单纯疱疹病毒-1、单纯疱疹病 毒_2、甲型流感病毒、麻疹病毒、1、2和3型副流感病毒、小儿脊髓灰质炎病毒、水痘-带状 疱疹病毒、曲霉和白色念珠菌。
55.组合物的组合，其包含第一种组合物，其包含配制为皮下单剂量给予的IG，其量为用于以不超过每月一次治 疗IG可治疗的疾病的量；以及第二种组合物，其包含配制为单剂量给予的可溶性透明质酸酶，与以不超过每月一次 进行治疗的IG组合。
56.权利要求55的组合，其中所述组合物在双室容器中或者在单个容器中彼此分离。
57.权利要求56的组合，其中所述透明质酸酶位于容器中在IG之前给予。
58.权利要求56或者57的组合，其中所述容器是注射器、试管或者小瓶。
59.权利要求58的组合，其中所述容器进一步包含注射针头。
60.权利要求55-59任一项的组合，其中所述可溶性透明质酸酶是PH20或者其截短形式。
61.权利要求60的组合，其中所述PH20选自绵羊、牛或者截短的人PH20。
62.权利要求61的组合，其中所述截短的人PH20选自具有SEQIDNO :4_9之一所示氨 基酸序列的多肽或者其等位基因变体或者其它变体。
63.权利要求55-62任一项的组合，其中所述可溶性透明质酸酶被称作rHuPH20。
64.权利要求55-63任一项的组合，其中所述IG纯化自人血浆。
65.权利要求55-64任一项的组合，其中所述IG是冻干或者在液体中提供的形式。
66.权利要求65的组合，其中所述液体体积是或者是大约100ml、150ml、200ml、300ml、 400ml、500ml、600ml 或者 700ml。
67.权利要求55-66任一项的组合，其中所述IG的蛋白质浓度是或者是大约5-15%w/ v、6-15%w/v 或者 8-12% w/v IG 组合物。
68.权利要求67的组合，其中所述蛋白质浓度是10%w/Vo
69.权利要求55-68任一项的组合，其中组合物中的IG是或者是大约5克(g)、10g、 15g、20g、21g、22g、23g、24g、25g、26g、27g、28g、29g、30g、31g、32g、33g、34g、35g、36g、37g、 38g、39g 或者 40g。
70.权利要求55-69任一项的组合，其中所述透明质酸酶在液体中提供。
71.权利要求70的组合，其中所述液体体积是或者是大约1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、 7ml、8ml、9ml、10ml、20ml 或者 30ml。
72.权利要求55-71任一项的组合，其中所述透明质酸酶是或者是大约10单 位-500，000 单位、100 单位-100，000 单位、500 单位-50，000 单位、1000 单位-10，000 单 位、5000单位-7500单位、5000单位-50，000单位，或者1，000单位-10，000单位。
73.组合物组合，其包含第一种组合物，其包含配制为皮下给予的IG，所述组合物中IG的蛋白质浓度低于16% w/v IG;以及第二种组合物，其包含与IG组合配制的可溶性透明质酸酶，其量为足以使得IG组合物 在治疗上有效。
74.权利要求73的组合，其中所述组合物配制为单剂量给予或者多剂量给予形式。
75.权利要求73或者74的组合，其中所述组合物中IG的量与当经静脉内给予用以治 疗IG可治疗的疾病或者病症时的单剂量给予的量基本相同。
76.权利要求73-75任一项的组合，其中第一种组合物和第二种组合物以每日一次、每 周一次、每两周一次、每2-3周一次、每3-4周一次或者每月一次的给予量的配制。
77.权利要求73-76任一项的组合，其中第一种组合物中IG的量是或者是大约1克 (g)、5g、10g、20g、30g、40g、50g、60g、70g、80g、90g、100g 或者 200g。
78.权利要求73-77任一项的组合，其中组合物中透明质酸酶的量是或者是大约500单 位、1000单位、2000单位、5000单位、10，000单位、30，000单位、40，000单位、50，000单位、，60，000单位、70，000单位、80，000单位、90，000单位、100，000单位或者更多。
79.权利要求73-78任一项的组合，其中组合物中透明质酸酶的量是或者是大约10U/ g、20U/g、30U/g、40U/g、50U/g、60U/g、70U/g、80U/g、90U/g、100U/g、150U/g、200U/g、300U/ g、400U/g、500U/g或者更多的比率(透明质酸酶单位/IG克数)。
80.试剂盒，其包含权利要求55-79任一项的组合或者权利要求1-42任一项的组合物， 以及任选治疗IG可治疗的疾病或者病症的使用说明。
81.治疗对象中IG可治疗的疾病或者病症的方法，包括皮下给予所述对象可溶性透明质酸酶和免疫球蛋白(IG)以治疗所述疾病或者病症， 其中给予IG的给予量和给予频率与通过静脉内给予相同量的IG以治疗相同疾病或病症的 IV(静脉内)给予的给予量和给予频率基本相同。
82.治疗需要这种治疗的对象中IG可治疗的疾病或者病症的方法，包括皮下给予该对象可溶性透明质酸酶和治疗所述疾病或者病症有效量的免疫球蛋白 (IG)，其中所述给予通过使用给药方案进行，其中选择(a)IG的数量；以及(b)给予该对象IG的连续给药频率使得皮下给予IG对于对象的治疗效力与使用相同给药方案经静脉内给予IG的治疗效 力至少基本相等。
83.权利要求81或者82的方法，其中皮下给予IG的生物利用度是通过静脉内给予相 同剂量IG的生物利用度的至少大约90%。
84.权利要求81或者82的方法，其中可溶性透明质酸酶的量足以使得给予的IG在治 疗上有效。
85.权利要求81或者82的方法，其中可溶性透明质酸酶的量足以实现以不超过每月一 次的剂量皮下给予IG。
86.权利要求81或者82的方法，其中所述给药方案的频率包括不超过每月一次给予IG。
87.权利要求81或者82的方法，其中所述给药方案的频率是每天一次、每周一次、每两 周一次、每2-3周一次、每3-4周一次或者每月一次。
88.权利要求81-87任一项的方法，其中可溶性透明质酸酶是PH20或者其截短形式。
89.权利要求88的方法，其中所述PH20选自绵羊、牛或者截短的人PH20。
90.权利要求89的方法，其中所述截短的人PH20选自具有SEQIDN0 :4_9之一所示的 氨基酸序列的多肽或者其等位基因变体或者其它变体。
91.权利要求81-90任一项的方法，其中所述可溶性透明质酸酶是rHuPH20。
92.权利要求81-91任一项的方法，其中所述IG纯化自人血浆。
93.权利要求92的方法，其中所述纯化自人血浆的IG通过醇分馏方法纯化。
94.权利要求93的方法，其中所述IG通过如下任何一种或多种方法进一步纯化化学 修饰、在pH 4.0有或者没有胃蛋白酶条件下保温、聚乙二醇(PEG)沉淀、离子交换层析、酶 裂解、溶剂去污剂处理、渗滤或者超滤。
95.权利要求81-94任一项的方法，其中所述IG包含IgG、IgA和IgM。
96.权利要求95的方法，其中所述IG包含超过95%的IgG。
97.权利要求96的方法，其中所述IgG是单体。
98.权利要求81-97任一项的方法，其中所述IG进一步含有蛋白质稳定赋形剂。
99.权利要求98的方法，其中所述蛋白质稳定赋形剂选自甘氨酸、麦芽糖、多元醇、人 血清白蛋白、甘露醇以及非离子去污剂中任一或多种物质。
100.权利要求81-99任一项的方法，其中所述IG制备物的pH是或者是大约4.2-5. 4、 4. 6-5. 1 或者 4. 8-5. 0。
101.权利要求81-100任一项的方法，其中所述IG的蛋白质浓度是或者是大约5-15% w/v,6-15% w/v 或者 8-12% w/v 的 IG 组合物。
102.权利要求101的方法，其中所述蛋白质浓度是10%w/v。
103.权利要求81-102任一项的方法，其中所述IG的输注速度是10ml/小时_300ml/ 小时。
104.权利要求103的方法，其中所述速度选自大约10ml/小时、20ml/小时、30ml/小 时、40ml/小时、50ml/小时、60ml/小时、70ml/小时、80ml/小时、90ml/小时、100ml/小时、 150ml/小时、200ml/小时、250ml/小时和300ml/小时。
105.权利要求103或者104的方法，其中所述速度由泵控制。
106.权利要求103或者104的方法，其中所述速度由重力控制。
107.权利要求81-106任一项的方法，其中单独给予所述IG和透明质酸酶。
108.权利要求107的方法，其中同时或者交替给予所述IG和透明质酸酶。
109.权利要求81-108任一项的方法，其中在给予IG之前给予透明质酸酶。
110.权利要求109的方法，其中在给予IG之前0.5分钟、1分钟、2分钟、3分钟、4分 钟、5分钟、6分钟、7分钟、8分钟、9分钟、10分钟、20分钟或者30分钟给予透明质酸酶。
111.权利要求81-110的方法，其中所述IG和透明质酸酶在单一组合物中。
112.权利要求81-111任一项的方法，其中给予大约或者5克(g)、10g、15g、20g、21g、 22g、23g、24g、25g、26g、27g、28g、29g、30g、31g、32g、33g、34g、35g、36g、37g、38g、39g 或者 40g 的 IG。
113.权利要求81-112任一项的方法，其中所述透明质酸酶以与IG大约10U/克(g)、 20U/g、30U/g、35U/g、40U/g、50U/g、60U/g、70U/g、80U/g、90U/g、100U/g、150U/g 或者 300U/ g的比率(透明质酸酶(单位)/IG(g))给予。
114.权利要求113的方法，其中所述透明质酸酶以大约50U/gIG的比率给予。
115.权利要求81-114任一项的方法，其中所述IG可治疗的疾病或病症选自免疫缺陷 病、继发于恶性血液病的获得性低丙种球蛋白血症、川崎病、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神 经病症(CIDP)、格林巴利综合症、特发性血小板减少性紫癜、炎性肌病、Lambert-Eaton肌 无力综合征、多灶性运动神经病、重症肌无力、Moersch-ffoltmann综合征、继发低丙种球蛋 白血症(包括医源性免疫缺陷病)、特异性抗体缺陷、急性播散性脑脊髓炎、ANCA-阳性系统 性坏死性血管炎、自身免疫性溶血性贫血、大疱性类天疱疮、疤痕性类天疱疮、Evans综合征 (包括具有免疫性血小板减少的自身免疫性溶血性贫血)、胎母/新生儿同种异体免疫血小 板减少症(FMAIT/NAIT)、噬血细胞综合征、高危同种异基因造血干细胞移植、IgM副蛋白血 症神经病、肾移植、多发性硬化症、眼阵挛-肌阵挛运动失调症、落叶型天疱疮、寻常型天疱 疮、输血后紫癜、中毒性表皮坏死/Steven Johnson综合征(TEN/SJS)、中毒性休克综合征、阿尔茨海默病、系统性红斑狼疮、多发性骨髓瘤、败血症、B细胞肿瘤、外伤，以及细菌、病毒 或者真菌感染。
116.权利要求115的方法，其中所述IG可治疗的疾病或者病症是免疫缺陷病，所述免 疫缺陷病选自常见变异型免疫缺陷病(CVID)、先天性免疫球蛋白缺乏症、Wiskott-Aldrich 综合征、重症联合免疫缺陷病(SCID)、原发性低丙种球蛋白血症、抗体缺陷的原发性免疫缺 陷病、X连锁无丙种球蛋白血症(XLA)、婴儿低丙种球蛋白血症以及无抗体的副肿瘤性小脑 变性。
117.权利要求115的方法，其中所述IG可治疗的疾病或者病症是继发于恶性血液病的 获得性低丙种球蛋白血症，所述恶性血液病选自慢性淋巴细胞白血病(CLL)、多发性骨髓瘤 (MM)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)。
118.权利要求115的方法，其中所述IG可治疗的疾病或者病症是炎症性肌病，所述炎 症性肌病选自多肌炎、皮肌炎和包涵体肌炎。
119.权利要求115的方法，其中所述IG可治疗的疾病或者病症是细菌、病毒或者真菌 病症，所述细菌、病毒或者真菌选自B型流感嗜血杆菌、A和B型铜绿假单胞菌、金黄色葡萄 球菌、B族链球菌、1、3、4、6、7、8、9、12、14、18、19和23型肺炎链球菌、2和5型腺病毒、巨细 胞病毒、EB病毒VCA、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、单纯疱疹病毒-1、单纯疱疹病毒_2、甲 型流感病毒、麻疹病毒、1、2和3型副流感病毒、小儿脊髓灰质炎病毒、水痘-带状疱疹病毒、 曲霉和白色念珠菌。
全文摘要
本发明提供了配制为皮下给予的含有免疫球蛋白(IG)成分及可溶性透明质酸酶成分的组合、组合物和试剂盒。这种产物可用于治疗IG可治疗的疾病或者病症的方法中。本发明还提供了皮下给予免疫球蛋白的方法，从而所述给药方案与静脉内给予相同剂量的方案基本相同，用于治疗相同的IG可治疗的疾病或者病症。
文档编号C07K16/06GK101977627SQ200980109505
公开日2011年2月16日 申请日期2009年3月16日 优先权日2008年3月17日
发明者G·I.·弗罗斯特, H·莱布尔, R·希夫 申请人:巴克斯特卫生保健有限公司;巴克斯特国际公司;哈洛齐梅公司