专利名称：制备普兰林肽的方法
技术领域：
本发明涉及制备普兰林肽的有效商业合成，普兰林肽是一种作为肽激素的人类支链淀粉合成类似物。普兰林肽适于治疗使用胰岛素的1型和2型糖尿病患者。制备普兰林肽的方法实质上包含合成所述多肽的不同片段和偶合所述片段以产生普兰林肽。
背景技术：
普兰林肽的制备和用途揭示于美国专利5，686，411中，所述专利以整体引用的方式并入本文中。已知通过固相合成，向增长的肽链中依次添加所需氨基酸来制备普兰林肽。 通常，受α -N-氨甲酰基保护的氨基酸和连接于树脂载体上的增长的肽链的氨基酸是在室温下，在惰性溶剂中，在例如二环己基碳化二亚胺ι-羟基苯并三唑等偶合剂存在下，在碱存在下反应。用例如三氟乙酸或哌啶等试剂从所得肽上去除α-N-氨甲酰基保护基，并且对下一所需N-保护的氨基酸重复偶合反应。合适的N-保护基为所属领域所已知，在本文中优选为叔丁氧羰基。美国专利5，424，394提供一种合成支链淀粉和支链淀粉类似物的典型分步方法。将单一氨基酸残基共价偶合于共价连接于固体树脂载体的增长的肽链。这一合成途径极其冗长且无效率，因为必须重复数个偶合和脱除保护基步骤。本发明提供一种普兰林肽的更有效合成并且鉴于现有技术，最终产物的产率和纯度将得到改良。
发明内容
本发明提供一种制备普兰林肽的有效方法，所述方法产率高并且可扩大规模供商业生产。所述方法包含分步合成氨基酸区段，和将这些区段偶合在一起以产生普兰林肽。 本发明提供用于制备普兰林肽的四种新颖中间物氨基酸区段。在本发明的一个优选实施例中，在固相合成中合成所述四种区段并且在液相下进行偶合反应。优选地，通过将受保护的指定氨基酸偶合于共价连接于不溶性固体树脂载体的增长的肽链来产生所述区段。“受保护的指定氨基酸”是指一般从羧基端进行到氨基端以产生指定序列的肽的单一氨基酸(具有受保护的侧链和氨基端)。“增长的肽链”是指一般合成循环，包含脱除结合树脂的氨基酸或肽的α-氨基的保护基，随后游离α-氨基与下一 α-氨基受保护的氨基酸的一些羧基活化形式反应(偶合)以形成肽键并且产生结合载体的肽。
具体实施例方式为帮助了解本发明，包括以下描述一系列实验结果的实例。当然，以下与本发明有关的实例不应视为特定地限制本发明。现在已知或稍后发展的本发明的所述变化将在所属领域的技术人员的权限内，其被视为在如下文所主张的本发明的范围内。
实例1 制备受保护的片段Sl (1-8)
权利要求
1. 一种制备式(I)的普兰林肽(pramlintide)的方法，
2.根据权利要求1所述的方法，其中Pl为Fmoc或Boc。
3.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(d)中的Pl为Boc。
4.根据权利要求1所述的方法，其中P2是选自tBu、Trt和mrf。
5.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(a)到(e)是在溶液状态下进行。
6.根据权利要求1所述的方法，其中步骤a)到d)的偶合反应中的至少一者是使用选自以下的试剂完成1-羟基-7-氮杂苯并三唑、1-甲基-2-吡咯烷酮、乙基(3- 二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐、N, N- 二异丙基碳化二亚胺和其组合。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述脱除保护基步骤是当所述保护基为Fmoc时使用哌啶进行，或当所述保护基为Boc时使用三氟乙酸进行。
8.一种式(III)的受保护的侧链肽，Pl-Thr(P2)-Asn(P2)-Val-Gly-Ser(P2)-Asn(P2)-Thr(P2)-Tyr (P2)-NH2 (III) 其中Pl和P2为保护基。
9.根据权利要求8所述的肽，其为Fmoc-Thr(tBu)Asn(Trt)ValGlySer(tBu)Asn(Trt)Thr(tBu)Tyr (tBu)-NH2。
10.一种制备 Fmoc-Thr(tBu)Asn(Trt)ValGlySer (tBu)Asn (Trt)Thr (tBu) Tyr (tBu)-NH2 的方法，所述方法是通过使 Fmoc-Thr (tBu) Asn (Trt) ValGlySer (tBu) Asn (Trt) Thr (tBu) -OH 与 H-Tyr (tBu) -NH2反应来进行。
11.根据权利要求10 所述的方法，其中 Fmoc-Thr(tBu)Asn(Trt)ValGlySer(tBu) Asn (Trt) Thr (tBu) -OH是通过固相合成来产生，所述合成包含将受保护的指定氨基酸偶合于共价连接于不溶性固体树脂载体的增长的肽链，产生Fmoc-Thr(tBu)Asn(Trt)ValGlySer(tBu)Asn(Trt)Thr(tBu)-0H。
12.—种式(IV)的受保护的侧链肽，Pl-Ser(P2)-Asn(P2)-Asn(P2)-Phe-Gly-Pro-Ile-Leu-Pro-Pro-OH (IV) 其中Pl和P2为保护基。
13.根据权利要求12所述的肽，其为Fmoc-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Gly-Pro-Ile-Leu-Pro-Pro-OH。
14.一种制备 Fmoc-Ser (tBu)-Asn(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Gly-Pro-Ile-Leu-Pro-Pro-O H的方法，其包含将受保护的指定氨基酸偶合于共价连接于不溶性固体树脂载体的增长的肽链，产生Fmoc-Ser(tBu) -Asn(Trt)-Asn(Trt)-Phe-Gly-Pro-Ile-Leu-Pro-Pro-OH。
15.一种式(VI)的受保护的侧链肽，Pl-Thr (P2) -Gln (P2) -Arg (P2) -Leu-Ala-Asn (P2) -Phe-Leu-Val-His (P2) -Ser (P2) -OH(VI)其中Pl和P2为保护基。
16.根据权利要求15所述的肽，其为Fmoc-Thr(tBu)-Gln(Trt)Arg(Pbf)-Leu-Ala-Asn(Trt)-Phe-Leu-Val-His(Trt)-Ser( tBu)-OH。
17.一种制备 Fmoc-Thr (tBu) -Gln (Trt) Arg (Pbf) -Leu-Ala-Asn (Trt) -Phe-Leu-Val-His (Trt) -Ser (tBu) -OH的方法，其包含将受保护的指定氨基酸偶合于共价连接于不溶性固体树脂载体的增长的肽链，产生 Fmoc-Thr (tBu) -Gln (Trt) Arg (Pbf) -Leu-Ala-Asn (Trt) -Ph e-Leu-Val-His (Trt) -Ser (tBu) -OH ；和脱除保护基步骤。
18. —种式(VIII)的受保护的侧链肽，
19.根据权利要求M所述的肽，其为
全文摘要
本发明提供一种制备普兰林肽(Pramlinitide)的有效方法，以及用于制备其的新颖中间物。
文档编号C07K1/00GK102164608SQ200980137895
公开日2011年8月24日 申请日期2009年9月3日 优先权日2008年9月3日
发明者丁金国, 萧宗育 申请人:台湾神隆股份有限公司