橙皮苷或其衍生物之一在制备刺激骨形成的药物中的用途的制作方法

专利名称：：橙皮苷或其衍生物之一在制备刺激骨形成的药物中的用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及有关保持或重建人或动物的骨代谢平衡的领域，特别涉及通过营养性摄入或治疗性施用可刺激骨形成和/或抑制骨吸收的组合物来预防或治疗与骨代谢失衡有关的疾病的领域。
背景技术：
：骨不是静态的组织。由于在一个复杂的过程中骨组织被破坏并重新合成，因此骨经历着不断的重建，所述的复杂过程主要涉及两种类型的细胞，分别为产生新的骨组织的成骨细胞和破坏骨的破骨细胞。这些细胞的活性由大量细胞因子和生长因子调节，所述的细胞因子和生长因子中的大部分已经被鉴定和克隆，如Mundy在一般性综述(Mundy，G.R.，1996,Clin.Orthop.，第324卷24-28；Mundy,G.R.,1993,J.BoneMinerRes，第8卷S505-S510)中所述。成骨细胞、即引起骨形成的细胞不同于前体细胞，其表达并分泌多种酶和多种骨基质结构蛋白，包括I型胶原蛋白、骨钙蛋白、骨桥蛋白和碱性磷酸酶(steinG等，1990，Curr.OpinCellBiol.第2卷1018_1027；HarrisS等，1994，J.BoneMinerRes第9卷:855-863)。成骨细胞还合成多种生长调节肽，包括BMP(“骨形态发生蛋白”)肽，该肽贮存于骨基质中并可能引起正常的骨形成。与碱性磷酸酶、骨钙蛋白和骨桥蛋白一样，当成骨细胞在培养基中增殖和分化时，BMP肽可由这些成骨细胞表达。破骨细胞是在通常称为骨吸收的过程中引起骨丢失的多核细胞。在健康的成年的人或动物中，成骨细胞和破骨细胞的联合作用使得随时间的流逝而保持骨量成为可能，同时还可确保通过骨的吸收和重新合成来重建骨组织。在健康成年个体中，破骨细胞和成骨细胞的形成速度使得骨形成和骨吸收之间达到平衡。然而，在骨质疏松个体中，骨重建过程发生失衡，结果导致骨丢失的进行速度高于骨形成的速度。虽然随着衰老在大多数个体中均在一定程度上存在这种失衡，但是在骨质疏松个体中，这种失衡要严重得多，并且发生在更年轻时。因此，在人类和其它哺乳动物中，多种病症与骨吸收和骨形成的代谢异常有关，该代谢异常导致代谢或骨重建失衡。特别地，观察到取决于个体的骨量峰值有很大差异，该差异的原因在于从非常年轻时起骨生长过程中有较大的变化。因此，在到达成年期后所达到的最大骨量被称为峰值骨量，其在个体间的差异非常大。当个体衰老时，骨量峰值低的个体和由于衰老而发生骨丢失的个体处于不利的情形。因此，无论任何个体，推荐对骨丢失进行早期预防性治疗，以便尽可能地减少随着衰老而以非病理方式产生的骨重建失衡，特别是降低过早骨折的危险。在与骨代谢失衡有关的病理学病症中，可特别提及的病症或疾病有例如骨质疏松症、佩吉特病、观察到的假体周围的骨丢失或骨质溶解、转移性骨病、癌症引起的高钙血症、多发性骨髓瘤和牙周疾病。一些骨代谢病症或疾病可由长期不运动、例如长期住院引起或者甚至在失重一段时期后发生。在与骨吸收异常有关的病症中，最常见的是骨质疏松症，据观察其最常出现在绝经期开始后的女性中。骨质疏松症是一种以骨量减少和骨组织显微结构变差为特征的全身性骨病，伴有骨的脆性及骨折危险性增加。还有其它因素可能增加骨丢失而导致骨质疏松症，例如吸烟、酗酒、久坐的生活方式、钙摄入量低、不均衡的饮食或维生素D缺乏。由于与其它与骨丢失有关的病症一样，骨质疏松症是一种慢性病，因此必须对其预防和治疗进行长期计划。目前被接受的是必须优选早期治疗，因为股骨头的两个关键期是-生长期，在此期间获得最大骨量(峰值骨量)；_衰老期，其决定骨量丢失的速度。因此，预防骨质疏松症必须不再局限于老年个体。此外，在人和动物中，有多种以需要增加骨形成为特征的情形。例如，在骨折情形下，必须刺激骨生长以便加速骨的完全修复。这种需要还存在于牙周疾病、转移性骨病、溶骨性疾病和需要修复结缔组织的情形中，例如为软骨缺损或创伤的愈合或再生而需要修复结缔组织的情形。在原发性和继发性甲状旁腺功能亢进的情形中以及在与糖尿病有关的骨质疏松症和与糖皮质激素有关的骨质疏松症中，也需要刺激骨生长。现今有多种化合物能够刺激骨形成或抑制骨吸收，其中可提及的是多膦酸盐化合物家族(欧洲专利NoEP210728)、硫代酰胺噁唑烷酮类(公开号为No2002/0010341的美国专利申请)、氨基双膦酸盐化合物(公开号为No2001/0046977的美国专利申请)或异黄酮类化合物(公开号为No2002/0035074的美国专利申请)。还已经提出使用番茄(Lycopersicon)属植物提取物(公开号为No2002/0009510的美国专利申请)。尽管现今已经存在大量用于刺激骨形成和/或抑制骨吸收的活性化合物，但是一直对新的活性化合物有需求，特别是由于现有治疗收效甚微。此外，鉴于骨代谢失衡所引起的一些疾病的慢性特点，因此需要可能长期用于人和动物和可以以食品添加剂的形式、例如以营养组合物的形式使用的新的活性化合物。
发明内容申请人:以令人惊奇的方式证明类黄酮家族的一种化合物、即橙皮苷能够通过刺激骨形成和抑制骨吸收作用于骨代谢。因此，根据本发明，提供了人用或兽用的营养组合物和药物组合物，所述的组合物包含化合物橙皮苷或其衍生物之一作为活性成分。本发明还涉及化合物橙皮苷或其衍生物之一在制备组合物中的用途，所述的组合物用于在人和动物、特别是犬、猫或马中刺激骨形成和/或抑制骨吸收。根据第一个特征，上述用途的特征在于所述组合物是适于口服施用的营养组合物。根据第二个特征，上述用途的特征在于所述组合物是用于口服、胃肠外或静脉内施用的药物组合物。根据本发明，提供了人用或兽用的营养组合物和药物组合物，所述的组合物用于在人或动物中刺激骨形成和/或抑制骨吸收，并且其包含化合物橙皮苷或其衍生物之一作为活性成分。橙皮苷是主要在柑桔类水果、即柑桔(Citrus)属水果中发现的天然存在的葡糖苷化合物。大多数橙皮苷存在于柑桔类水果的果皮中，但是在柑桔类水果的果肉中和由此得到的汁液中也发现了大量的橙皮苷，所述的柑桔类水果包括橙、柑、橘和柠檬。橙皮苷是含橙皮素黄烷酮核(3’，5’，5-三羟基-4’-甲氧基黄烷酮)的葡糖基化化合物，芸香糖(L-鼠李糖基—6)-葡萄糖)的葡糖苷部分通过橙皮素7位碳上的羟基而与其共价结合。化合物橙皮苷是类黄酮家族的一种化合物，其目前与维生素C组合使用以增强维生素C的生物活性，特别是通过减少维生素C由于氧化而导致的变性来增强其生物活性。在本申请中，提出将橙皮苷在治疗心血管疾病、特别是高血压和出血中作为辅助药物。由于橙皮苷能够抑制源自软骨的软骨细胞基质的破坏，因此其还被描述为软骨保护药(专利申请NoEP633022)。现有技术中还提出将橙皮苷作为预防皮肤色素沉着的药物(德国专利申请NoDE19742025)、作为HMG-CoA还原酶抑制剂(美国专利Νο5，763，414)或酰基CoA-胆固醇-0-酰基转移酶抑制剂(PCT申请NoW099/21.549)或血小板凝集抑制剂(韩国专利申请NoKR276979)。根据本发明，已经以令人惊奇的方式证明橙皮苷可刺激骨形成和抑制骨吸收。如实施例中所说明的那样，橙皮苷使干骺端骨组织(骨小梁)的密度和骨干骨(骨密质)的密度增加，因此使骨质矿化改善。橙皮苷还刺激骨增长，如通过在接受补充有该化合物的食物的动物中观察到骨钙蛋白血浆水平显著增加所证明的那样。还已经证明橙皮苷引起成骨前体细胞停止增殖并导致其分化为成熟的成骨细胞，如通过诱导碱性磷酸酶的活性增加所预见到的那样。类似地，橙皮苷引起成骨细胞中钙蓄积增加。另外，在卵巢切除大鼠中橙皮苷抑制骨吸收，所述卵巢切除大鼠是模拟人骨质疏松症的参考实验动物模型。特别地，根据本发明还已经证明橙皮苷使得在已经停止生长的个体、特别是处于激素缺乏状态的个体的衰老过程中保持股骨头成为可能，如在卵巢切除的6月龄大鼠中所观察到的那样，该大鼠是模拟绝经期生理状态的模型。橙皮苷对骨形成和骨吸收抑制的这两种相关活性分别使其具有在人或动物中作为保持或重建骨代谢平衡的活性化合物的巨大效用，即-通过保持成骨细胞和破骨细胞的活性不随时间流逝、衰老而改变并因此预防骨代谢病症而使其具有所述效用；-或者，通过矫正例如病症如骨质疏松症中的骨代谢失衡或者还通过例如在不全骨折或骨折情形下刺激骨再生而使其具有所述效用。因此，本发明的目的是化合物橙皮苷或其衍生物之一在制备组合物中的用途，所述的组合物能够通过刺激骨形成和/或通过抑制骨吸收而保持或重建人或动物的骨代谢平衡。橙皮苷是指化合物⑶-7-[[6-0-(6-脱氧-α-L-吡喃甘露糖基)_β_D_吡喃葡萄糖基]氧]_2，3-二氢-5-羟基-2-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-4H-1-苯并吡喃_4_酮。根据本发明，橙皮苷的“衍生物”是指下列化合物-化合物橙皮素，由橙皮苷的非糖基化黄烷酮核构成，其具有下述结构(S)-2，3-二氢-5，7-二羟基-2-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-4H-1-苯并吡喃_4_酮；3，，5，7-三羟基-4’-甲氧基黄烷酮；-α-葡糖基-橙皮苷，其具有含1至20个通过1，4_键合连接在一起的葡萄糖残基的链，该葡萄糖残基链本身通过1，4型键合连接在橙皮苷葡萄糖残基的4位上；这些橙皮苷衍生物及其制备方法在专利申请NoEP082519和美国专利No6，048，712中有具体描述；-甲基-橙皮苷化合物，特别是化合物31-甲基_7-(鼠李糖基-2-甲基-葡糖基)橙皮苷和化合物31-甲基橙皮苷，这些化合物及其制备方法在美国专利Νο858，784中有描述。-橙皮素与硫酸根或葡糖苷酸的共轭物，发现其和橙皮素是橙皮苷在体循环中的代谢产物。根据本发明，“刺激骨形成”是指橙皮苷或其衍生物之一能刺激成骨细胞的活性并由此促进骨蛋白质网络的合成及矿物质、特别是钙在该蛋白质网络中的沉积，即能刺激骨矿化，也称为骨增长。为了证明对人或动物、特别是哺乳动物补充橙皮苷可刺激骨形成，本领域的熟练技术人员能够特别借助于常规的密度测定法并且能够证明以给定剂量补充橙皮苷或其衍生物之一可引起骨密度增加。本领域的熟练技术人员还可借助于同样在实施例中描述的任何其它试验如骨抗断裂性的测定，或者还可借助于碱性磷酸酶活性的测定和成骨细胞中钙蓄积的测定。根据本发明，“抑制骨吸收”是指抑制破骨细胞对骨组织的破坏活性。为了证明对人或动物补充橙皮苷或其衍生物之一可抑制骨吸收，本领域的熟练技术人员可以如实施例中所述测定尿中排泄的脱氧吡啶啉，脱氧吡啶啉的排出减少反映对骨吸收的抑制。对动物有机体补充橙皮苷或其衍生物之一可同时刺激骨形成和抑制骨吸收，这两种机制导致骨矿化全面增加并由此导致骨密度全面增加。为了确定个体是否出现骨量减少的情形并因此需要补充橙皮苷或其衍生物之一，本领域的熟练技术人员可具体参考1994年世界卫生组织(WHO)题为“骨折危险性评估及其在绝经期后骨质疏松症筛选中的应用”的报告(WHO技术系列-843)。含有橙皮苷或其衍生物之一作为活性成分的营养组合物或治疗性组合物首要用于在人或动物、特别是在非人类哺乳动物、特别是驯养哺乳动物如犬或猫或甚至是马、特别是纯种动物中预防因骨组织重建失衡引起的骨丢失。所述组合物例如以上所定义的组合物还可用于促进年轻个体的骨生长，以使个体具有高的骨密度，并且如果可能，还具有高的峰值骨量。特别地，本发明的组合物可用于人以及其它哺乳动物、特别是纯种犬和赛马的生长期。含有橙皮苷或其衍生物之一的组合物还可用于出现骨缺损症状或可能患有骨缺损的个体，所述的骨缺损即由骨形成和骨吸收关系失衡造成的骨缺损，该失衡如果继续可导致骨量减少。本发明的组合物还可用于出现因骨折、手术或牙疾病引起的骨缺损症状的个体。特别地，本发明的用于人或兽医学的营养组合物或药物组合物可用于治疗疾病如骨质疏松症、佩吉特病、观察到的假体周围的骨丢失或骨质溶解、转移性骨病、癌症引起的高钙血症、多发性骨髓瘤、牙周疾病或骨关节炎。如下文所述，本发明的组合物可以以营养组合物的形式使用，或者还可以以药物组合物的形式使用。根据本发明，还已经证明与现有技术中所述的许多抗骨质疏松化合物不同，橙皮苷不需要辅助药物例如成骨细胞分化因子如维生素D3和地塞米松的存在即可使增殖停止并引起成骨细胞分化。该实验观察强调了橙皮苷及其衍生物在刺激骨形成或抑制骨吸收中的价值，因为这些化合物单独使用时即具有生物活性，因此不需要以橙皮苷或其衍生物之一与另一种化合物如维生素的组合形式提供给有机体。另外，橙皮苷不仅增加骨小梁密度而且还增加骨密质密度的事实证明该分子具有高水平的生物活性。实际上，形成骨的头端且血管极其丰富的骨小梁是骨和体循环之间的钙交换的优选部位，而形成骨的直干部分且仅有少量血管分布的骨密质迅速受其矿化改变影响的可能性小得多。^m^^m^m^-^mm^如上述已经提及的，多种与骨代谢失衡有关的疾病如骨质疏松症可长期逐渐发展，需要长期治疗。因此，它们的预防或治疗可通过有规律地补充橙皮苷或其衍生物之一来进行，优选以营养组合物的形式补充。类似地，对正在生长的年轻个体，即人或动物，有规律地营养性补充橙皮苷是为了通过刺激骨形成使这些个体在成年后可能产生高的骨密度和升高的峰值骨量。有规律地营养性补充橙皮苷还可用于预防随衰老出现的骨丢失。另外，本发明的目的是用于刺激骨形成和/或抑制骨吸收的营养组合物，其特征在于该组合物含有化合物橙皮苷或其衍生物之一作为活性营养化合物。根据本发明，“营养组合物”是指含有橙皮苷或其衍生物之一且构成食品组合物或甚至是食品补充剂但不具有药物特征的组合物。下文将结合所述营养组合物的技术特征来定义化合物橙皮苷或其衍生物之一在制备营养组合物中的不同用途。本发明的营养组合物优选适于口服施用。根据第一个特征，本发明的营养组合物是用于保持摄入该组合物的人或动物的健康良好的饮食品。该营养组合物通常也称为“功能性食品”，其可作为食物的组成部分或作为食品补充剂被食用，但是其中橙皮苷或其衍生物之一的含量意味着超过补充基本营养需要的生理作用。根据第一个特征，所述营养组合物用于在处于生长期的年轻个体中刺激骨形成。根据第二个特征，所述营养组合物用于预防随衰老出现的骨丢失。根据第三个特征，所述营养组合物用于预防或治疗与骨形成和骨吸收关系失衡有关的病症。根据第四个特征，所述营养组合物用于治疗骨折引起的骨缺损。根据另一特征，所述营养组合物用于预防或治疗选自骨质疏松症、佩吉特病、观察到的假体周围的骨丢失或骨质溶解、转移性骨病、癌症引起的高钙血症、多发性骨髓瘤、牙周疾病或骨关节炎的疾病。以包含化合物橙皮苷或其衍生物之一作为活性成分为特征的本发明的营养组合物可以以多种食品组合物和饮料形式使用，包括汁液，优选果汁、酸乳、冰激凌、奶酪、焙烤食品如面包、饼干和蛋糕、乳制品、甜点心、甜食制品、谷类食物棒、早餐谷物食品、食物调味品(特别是香料和调味汁)、水果色拉、炖煮水果等。以包含化合物橙皮苷或其衍生物之一作为活性成分为特征的本发明的营养组合物还可以以多种设计为动物食料的产品形式使用，特别是为犬或猫设计的食料，其可以是湿形式、半湿形式或干形式，特别是炸丸子形式。如上文已经描述的那样，橙皮苷是在柑桔属的柑桔类水果中、特别是在橙、柑、橘和柠檬中天然存在的化合物，该化合物的大多数包含在果皮中，但在果肉中也发现了大量橙皮苷，如特别是如MANSELL等(MANSELLR.L.等，1983，J.Agric.FoodChem.,%31卷156-162)、R0USEFF等(ROUSEFFR.L.等，1987，J.Agric.FoodChem.，第35卷1027-1030)或GIL-IZQUIERD0等(GIL-1ZQUIERDOA等，2001，J.Agric.FoodChem.，第49卷1035-1041)所述。根据第一个特征，本发明的营养组合物可以以柑桔汁、特别是橙汁、柑汁、橘汁或柠檬汁形式使用，适当时可以以柑桔汁浓缩物形式使用。根据第二个特征，本发明的营养组合物可以由富含柑桔类水果或其提取物的食品组合物构成，所述的柑桔类水果特别是橙、柑、橘或柠檬。根据第三个特征，本发明的营养组合物可以以任何用柑桔类水果的果皮、果汁、果肉或任何其它柑桔类提取物调味的产品形式、特别是任何饮料形式使用，所述的柑桔类水果包括橙、柑、橘和柠檬。因此，以液体或固体形式、特别是以粉末形式使用的本发明的营养组合物可以由得自柑桔类水果的果皮或果肉的提取产物构成，或者也可以含有得自柑桔类水果的果皮或果肉的提取产物。特别地，本发明的营养组合物可以以添加有柑桔类水果的果皮或果肉提取物的饮料形式、例如矿泉水形式使用，所述的柑桔类水果包括橙、柑、橘或柠檬。根据另一特征，如果为达到此目的而采用了专门改进的提取方法，例如日本专利申请NoJP8188593中所述的方法，在该方法中将压榨柑桔属水果后所得的产品调节pH至11.5-12.5，然后将压榨并调整pH后得到的液体离心，再次调节pH至5-5.5，随后加热并最后离心，然后回收富含橙皮苷的产物，则提取产物最初可富含橙皮苷。另一种可用于获得富含橙皮苷的提取物的提取方法是英国专利申请NoGB486.898中所述的方法。为了以柑桔类水果、更特别地以橙、柑、橘或柠檬为原料获得富含橙皮苷的提取产物，本领域的熟练技术人员还可方便地参考分别在美国专利No2，400,693和2，442，110中所述的方法。根据另一特征，在本发明的营养组合物中，橙皮苷或其衍生物之一通过化学合成来制备。优选地，本发明的营养组合物包含量为0.Olmg至500mg的适于每日口服施用的化合物橙皮苷或其衍生物之一。对于人消耗，本发明的营养组合物包含由所述组合物提供的一定量的活性成分，所述的量适于每日补充量为0.Olmg至500mg、优选0.Img至500mg、非常优选为Img至500mg的橙皮苷或其衍生物之一。对于动物、特别是包括犬、猫或马在内的非人类哺乳动物的消耗，本发明的营养组合物适于每日施用由所述组合物提供的活性成分，量为Img至500mg、优选IOmg至500mg的橙皮苷或其衍生物之一。作为举例说明，如果估计人平均每日消耗矿泉水约1升，则补充有橙皮苷或其衍生物之一的矿泉水每升含有0.Olmg至500mg的活性成分。根据另一特征，上述营养组合物可以包含与橙皮苷或其衍生物之一组合使用的其它营养化合物。因此，本发明的营养组合物还可以包含钙源，例如生理可接受的有机或无机化合物形式、例如无机钙盐(氯化钙、磷酸钙、硫酸钙、氧化钙、氢氧化钙或碳酸钙)或含钙有机成分如脱脂奶粉、酪蛋白钙或有机钙盐(柠檬酸钙、马来酸钙或它们的混合物)形式的钙源。本发明的营养组合物中所含的钙量适于每日施用，其由所述的组合物提供，钙量为IOOmg至lOOOmg，优选为200mg至700mg，非常优选为300mg至600mg。本发明的营养组合物还可以包含维生素，例如维生素Α、维生素D、维生素Ε、维生素K、维生素C、叶酸、硫胺素、核黄素、维生素B6、维生素B12、烟酸、生物素或泛酸。本发明的营养组合物还可以包含矿物元素和痕量元素例如钠、钾、磷、镁、铜、锌、铁、硒、铬和钼。其还可以包含可溶性纤维，例如琼脂、藻酸盐、角豆、角叉菜胶、阿拉伯树胶、瓜尔胶、刺梧桐树胶、果胶或黄原胶，这些可溶性纤维为水解或非水解形式。其还可以包含作为能量来源的化合物，特别是一种或多种选自麦芽糖糊精、淀粉、乳糖、葡萄糖、蔗糖、果糖、木糖醇和山梨醇的碳水化合物源。另外，本发明的营养组合物还可以包含天然或人工香料，例如水果香料如香蕉、橙、桃、菠萝或树莓香料或其它植物香料如香草、可可、咖啡香料等。如上文已经描述的那样，本发明的用于刺激骨形成或抑制骨吸收的组合物还可以以下文所述的药物组合物形式使用。本发明的人用药物组合物或兽用组合物另外，本发明的目的是刺激骨形成和/或抑制骨吸收的人用药物组合物或兽用组合物，其特征在于该组合物包含化合物橙皮苷或其衍生物之一作为活性成分。特别地，本发明涉及橙皮苷或其衍生物之一在制备用于预防或治疗与骨代谢失衡有关的疾病的人用药物组合物或兽用组合物、即能刺激骨形成和/或抑制骨吸收的药物组合物中的用途。下文将结合所述药物组合物的技术特征来描述橙皮苷在制备药物组合物中的用途。本发明的药物组合物包含橙皮苷或其衍生物之一作为活性成分，其含量适于在需要该治疗的个体中刺激骨形成或抑制骨吸收。根据第一个特征，本发明的药物组合物可用于在处于生长期的年轻个体、即人或动物中刺激骨形成，以增加在成年期开始时所达到的骨密度和增加在成年期开始时的最大骨量(峰值骨量)。根据第二个特征，本发明的人用药物组合物或兽用组合物可用于预防在衰老过程中随衰老出现的骨丢失。根据第三个特征，本发明的人用药物组合物或兽用组合物可用于预防或治疗与骨形成和骨吸收关系失衡有关的病症或疾病。根据第四个特征，本发明的人用药物组合物或兽用组合物可用于治疗因骨折导致的骨缺损。根据第五个特征，本发明的人用药物组合物或兽用组合物可用于治疗与骨重建失衡有关的疾病，例如骨质疏松症、佩吉特病、观察到的假体周围的骨丢失或骨质溶解、转移性骨病、癌症引起的高钙血症、多发性骨髓瘤、牙周疾病或骨关节炎。它可以是人用药物组合物或兽用组合物，特别是用于犬或猫或甚至是马、特别是纯种动物的兽用组合物。本发明的药物组合物可以以口服、胃肠外或静脉内施用形式使用。当为对人施用的形式时，本发明的药物组合物可有利地包含由所述组合物提供的量为0.Olmg至500mg的适于每日施用的活性成分、即橙皮苷或其衍生物之一。当为对动物、特别是驯养哺乳动物如犬或猫施用的形式时，本发明的药物组合物包含由所述组合物提供的量为Img至500mg的适于每日施用的活性成分、即橙皮苷或其衍生物之一。本发明的药物组合物包含橙皮苷或其衍生物之一以及与之组合使用的至少一种可药用的赋形剂。本领域的熟练技术人员可容易地找到用于制备本发明的药物组合物的方法，例如在手册Remington’sPharmaceuticalSciences，Mid.PublishingCo，伊斯顿，PA，USA中找到。生理可接受的赋形剂、载体和辅剂在名为“HandbookofPharmaceuticalExipients”，第二版，美国药学会，1994的手册中有描述。为了制备本发明的药物组合物，本领域的熟练技术人员可以方便地参考最新版的欧洲药典或美国药典(USP)。本领域的熟练技术人员可特别方便地参考欧洲药典第4版“2002”或美国药典的USP25-NF20版。有利地，药物组合物例如以上所定义的药物组合物适于口服、胃肠外或静脉内施用。当本发明的药物组合物包含至少一种可药用的或生理可接受的赋形剂时，其特别是适于通过口服途径施用组合物的赋形剂或适于通过胃肠外途径施用组合物的赋形剂。本发明还涉及预防或治疗与骨代谢失衡有关的病症、特别是与骨量丢失有关的病症的方法，所述方法包括其中将治疗有效量的橙皮苷或其衍生物之一或者含橙皮苷或其衍生物之一的药物组合物施用于患者的步骤。本发明的含橙皮苷或其衍生物之一的药物组合物可无关紧要地以固体或液体形式使用。对于口服施用，优选片剂、胶囊剂或明胶胶囊剂形式的固体药物组合物。在液体形式中，优选水性或非水性的混悬剂形式或者油包水型或水包油型乳剂形式的药物组合物。固体药物形式可以包含至少一种稀释剂、一种矫味剂、一种增溶剂、一种润滑剂、一种悬浮剂、一种粘合剂、一种崩解剂和一种包封剂作为载体、辅剂或赋形剂。所述化合物是例如碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、纤维素物质、可可脂等。液体形式的组合物还可以包含水，所述水可能是水与丙二醇或聚乙二醇的混合物，该组合物还可能包含着色剂、矫味剂、稳定剂和增稠剂。对于本发明的药物组合物的制备，可以按照说明书中上文所引用的不同专利文献的教导制备橙皮苷或其衍生物之一。优选使用含有纯形式或几乎纯形式的橙皮苷的药用级产品作为橙皮苷源，例如由隶属于SANJIUENTERPRISEGROUP的公司NINGBOLIWAHPAHRMACEUTICALCoLtd.出售的橙皮苷，其包含在乙酸乙酯中的以重量计为95%的橙皮苷。图1说明了在不同动物组之间、即在正常动物(TSH)、卵巢切除动物(TOVX)、用橙皮苷处理的正常动物(HpSH)和用橙皮苷处理的卵巢切除动物(HpOVX)之间保持相同的机体组成(脂肪质量与体重相比的百分数)。脂肪质量百分数沿纵坐标表示。图2说明了与接受标准食物的完整大鼠或卵巢切除大鼠相比接受橙皮苷食物的完整大鼠或卵巢切除大鼠的干骺端股骨密度增加。骨密度沿纵坐标以g/cm3表示。图3说明了橙皮苷对卵巢切除引起的骨吸收增加的预防作用，其通过测定尿液中排泄的脱氧吡啶啉来评价。尿液中脱氧吡啶啉/肌酐摩尔比的测定值沿纵坐标表示。图4说明了与对照动物相比经处理的大鼠中成骨细胞活性的刺激作用(通过测定骨钙蛋白血浆水平来评价)。骨钙蛋白血浆水平沿纵坐标以ng/ml表示。图5说明了在第31代hPOB-tert细胞上被10μM和50μM橙皮素刺激的成骨细胞分化动力学(碱性磷酸酶活性增加)。碱性磷酸酶活性沿纵坐标以μM对硝基苯酚/小时/mg蛋白质表示。时间沿横坐标以天数表示。图6说明了培养21天后，在hPOB-tert细胞(第31代)中橙皮素(50μM)对钙蓄积的刺激作用。Ca++/蛋白质比例的测定值沿纵坐标以ygCa2+Aig蛋白质表示。图7说明了在未经处理的或经橙皮苷处理的卵巢切除大鼠(分别为OVX对照和OVXHesp)和未经处理的或经橙皮苷处理的正常大鼠(分别为SH对照和SHHesp)中随时间变化的食物摄入量控制。沿横坐标时间，时间间隔为两天；沿纵坐标消耗食料的克数。图8说明了在(SH)、(SHHesp),(OVX)和(OVXHesp)各组中大鼠体重的变化情况。沿横坐标天数；沿纵坐标动物平均体重+/_标准偏差。图9说明了(SH)、(SHHesp)、(OVX)和(OVXHesp)各批中大鼠的以脂肪质量百分数表示的机体组成。沿横坐标动物组；沿纵坐标以脂肪质量百分数表示的机体组成。图10说明了(SH)、(SHHesp)、(OVX)和(OVXHesp)各组中大鼠的子宫重量。沿横坐标动物组；沿纵坐标以克数表示的子宫平均重量。图11说明了(SH)、(SHHesp)、(OVX)和(OVXHesp)各组中大鼠的总股骨密度(T-BMD)。沿横坐标动物组；沿纵坐标以g/cm2表示的股骨矿物密度。图12说明了(SH)、(SHHesp)、(OVX)和(OVXHesp)各组中大鼠的股骨近侧干骺端矿物密度(M-BMDp)。沿横坐标动物组；沿纵坐标以g/cm2表示的股骨近侧干骺端矿物也/又。图13说明了(SH)、(SHHesp)、(OVX)和(OVXHesp)各组中大鼠的股骨骨干矿物密度(D-BMD)。沿横坐标动物组；沿纵坐标以g/cm2表示的股骨骨干矿物密度，。图14说明了(SH)、(SHHesp)、(OVX)和(OVXHesp)各组中大鼠的股骨断裂负荷。沿横坐标动物组；沿纵坐标以牛顿(N)表示的股骨断裂负荷。具体实施例方式另外，通过下述实施例非限制性地解释本发明。实施例1橙皮苷对卵巢切除大鼠骨代谢的影响此组实验的目的是与模拟手术对照大鼠(SH)相比较检验橙皮素对卵巢切除大鼠(OVX)骨代谢的影响。橙皮素是一种黄烷酮，其糖基化形式(橙皮苷)是柑桔类水果、更特别是橙、柑、橘所特有的。该类黄酮化合物在其它植物产品中不存在。本实验的食物中补充的是橙皮苷形式。A.材料和方法为了研究该分子对骨组织的可能影响，使用了40只3月龄的雌性Wistar大鼠(266士2g)。在实验期开始前使这些动物对基础半合成食物适应7天。在第0天，将20只大鼠进行模拟手术，另外20只大鼠切除卵巢。将它们以每组10只分组，以不同食物喂养3个月，最后处死。在处死前最后一周，即第85天至第90天，对大鼠进行检查并采集尿液(在24小时期间内)。类似地，测定大鼠的机体组成。处死后采集血浆和股骨用于不同的分析[股骨抗断裂性、密度测定；血浆骨钙蛋白血(osteocalcinemia)(成骨细胞活性的标记)、橙皮素水平；尿液脱氧吡啶啉(骨吸收的标记)]。在整个实验期间，将大鼠每周称重一次。每只动物每天分配的食物量为20g。ΜIOTSH和IOTOVX接受标准对照食物3个月的模拟手术大鼠和卵巢切除大鼠；IOHpSH和IOHpOVX接受补充有橙皮苷(0.5%)的标准对照食物3个月的模拟手术大鼠和卵巢切除大鼠。B.结果B.1体重和机体组成的变化结果见图1。数值用平均值士SD表示。大鼠在体重方面表现出标准的变化。尽管在实验期结束时OVX动物的体重(g)显著高于模拟手术动物的体重[TSH326.6士9.4；TOVX363.3士7；HpSH335.4士15.4；HpOVX406.3士12.7]，然而在机体组成(相对于总体重的脂肪质量百分数)方面没有观察到显著的组间差异。B.2子宫重量评估子宫重量以便确认被阉割。通过与SH大鼠相比较，卵巢切除可有效引起该器官萎缩(mg)(ρ<0.01)。由于该参数不因食用橙皮苷而改变，因此该分子似乎没有亲子宫作用。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>B.3股骨的生物力学该处理未导致股骨的直径和长度(mm)发生显著改变。表2:股骨的抗断裂性<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>尽管卵巢切除没有显著降低股骨的抗断裂性(N)，然而接受补充有橙皮苷的食物的卵巢切除大鼠仍表现出改善该参数的趋势。B.3密度测定密度以g/cm2表示。表3总股骨密度(T-BMD)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>与模拟手术动物相比较，卵巢切除导致接受对照食物的大鼠的总股骨密度显著降低。另一方面，食用橙皮苷可完全防止SH组中的这种脱矿质作用，并且还可显著改善该参数。干骺端股骨密度(M-BMD)(图2)有关整个股骨的结果还在基本由骨小梁构成的干骺端区被证实。还证明了在食用该分子的未阉割动物中矿化作用被改善(通过与TSH比较)。骨干股骨密度(M-BMD)骨干区由骨密质组成。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>在OVX和SH大鼠中，与接受标准食物的其它组相比较，食用橙皮苷可显著改善(P<0.05)该参数。B.4骨的生物标记脱氧吡啶啉的尿排泄(图3)卵巢切除导致骨吸收显著增加(与TSH相比较，ρ<0.01)。OVX大鼠通过食用橙皮苷能预防此现象。类似地，与TSH大鼠相比较，在HpSH大鼠中，DPD的尿排泄显著减少。骨钙蛋白的血浆水平(图4)食用橙皮苷可刺激骨增长(HpSH与TSH相比较；HpOVX与TOVX相比较；ρ<0.05)，骨钙蛋白是成骨细胞活性的标记。橙皮素的循环水平实际上，橙皮苷是橙皮素的糖苷(橙皮素-7-鼠李葡糖苷)。与SH—样，在接受补充有橙皮苷的食物的OVX大鼠中所发现的平均苷元血浆水平是12.53士2.48μΜ。另一方面，在接受对照食物的大鼠中没有检测到痕量的橙皮素。实施例1的结论此系列实验的这组结果表明橙皮苷能预防卵巢切除大鼠中雌激素缺乏后出现的骨丢失。该作用似乎归因于与成骨细胞活性增加并存的骨吸收减少。甚至在具有激素状态和正常骨代谢的完整(模拟手术)大鼠中也观察到了该黄烷酮的有益作用。实施例2橙皮素对hPOB-tert细胞(人骨膜成骨细胞的无限增殖系，Darimont等，2002)的影响我们已经在接种有hPOB并生长至汇合的培养基中试验了三种浓度的橙皮素1、10和50μΜ。此外，这些培养基中没有成骨细胞分化因子(维生素D3和地塞米松)。对照含0.1%DMSO(橙皮素溶于DMSO中)。细胞在这些培养基中培养35天。使用市售试剂盒(SigmaNo247)测定细胞裂解物中的碱性磷酸酶活性、即成骨细胞分化的标记。在培养的第0、4、8和12天收集细胞。在不同培养基中培养21天后，借助于市售试剂盒(SigmaNo587)对细胞裂解物中的细胞钙含量、即矿化作用的标记进行定量。结果ALP活性培养基中存在的橙皮素以剂量依赖性方式刺激碱性磷酸酶活性，由此以剂量依赖性方式刺激成骨细胞分化。从实验进行的第4天起剂量10和50μM促进此过程，在培养的第8天达到平台期。与未经处理的细胞相比，证明50μM的橙皮素最有效，而另一方面，1μM的浓度没有作用。细胞中的钙蓄积通过与对照细胞(0.1%DMS0)中的钙含量相比较，在培养21天后似乎只有50μM的橙皮素刺激钙沉积。t施彻丨3M^rnie月龄切除大鼠骨代i射的影口向A.材料和方法用48只6月龄的雌性Wistar大鼠进行实验24只卵巢切除(OVX)和24只模拟手术(SH)。按照12小时-12小时的昼夜循环，将动物在单独的笼子中圈养，控制温度为21士1°C。在第0天接受外科手术后，使动物适应环境7天。在该适应期结束时，将啮齿动物按照体重参数分为4个相似的组，每日接受22g下述食物达72天>SH组用对照食物喂养的12只模拟手术大鼠>OVX组接受对照食物的12只卵巢切除大鼠>SHHp组用橙皮苷食物喂养的12只模拟手术大鼠>OVXHp组接受橙皮苷食物的12只卵巢切除大鼠当处死时(第90天)，通过腹膜内注射氯醛(Fluka溶液；0.4ml/100g肝重)麻醉动物。从腹主动脉采集血液样本。将子宫称重。取出股骨并除去毗连的软组织，然后将股骨保存在80%乙醇中，用于测定骨密度。B.结果1.食料消耗量在实验前一周，基于最低平均消耗水平计算所分配的食料量(SH组)。结果见图7。图7中的结果表明在不同组动物的喂养水平之间未观察到显著差异。2.体重变化体重变化的结果见图8。所有组动物的体重曲线表现出相似的变化模式，即在实验开始和结束之间增加，而与所涉及的组无关。3.机体组成机体组成的测定结果见图9。不同组动物的机体组成没有显著变化，与个体接受的处理无关。4.子宫重量结果见图10。食用橙皮苷未防止卵巢切除后出现的子宫萎缩。因此，图10中的结果表明橙皮苷没有亲子宫作用。5.骨矿物密度骨矿物密度的测定结果见图11、12和13。总股骨矿物密度的测定结果见图11。股骨近侧干骺端矿物密度的测定结果见图12。股骨骨干矿物密度的测定结果见图13。总骨矿物密度(g/cm2)的降低证明阉割导致股骨脱矿质作用。该过程可通过食用橙皮苷而被预防(至少是部分预防)。在骨小梁水平上(图12)以及在骨密质区(图13)均表现出相似的情况。6.牛物力学件质分析了不同动物组个体的股骨的力学性质。结果见图14。由于雌激素缺乏，股骨的生物力学性质已经变差。食用橙皮苷(OVXHp)使得在完整动物中预防、甚至改善股骨生物力学性质成为可能。总之，实施例3的结果表明在与衰老有关的骨丢失模型中橙皮苷具有骨保护活性。权利要求化合物橙皮苷在制备用于在人或动物中刺激骨形成和/或抑制骨吸收的组合物中的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述组合物是适于口服施用的营养组合物。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于所述营养组合物用于在处于生长期的年轻个体中刺激骨形成。4.根据权利要求2所述的用途，其特征在于所述营养组合物用于预防随衰老而出现的骨丢失。5.根据权利要求2所述的用途，其特征在于所述营养组合物用于预防或治疗与骨形成和骨吸收关系失衡有关的病症。6.根据权利要求2所述的用途，其特征在于所述营养组合物用于治疗骨折导致的骨缺损。7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于所述营养组合物用于预防或治疗选自骨质疏松症、佩吉特病、观察到的假体周围的骨丢失或骨质溶解、转移性骨病、癌症引起的高钙血症、多发性骨髓瘤、牙周疾病或骨关节炎的疾病。8.根据权利要求2至7中任一项所述的用途，其特征在于所述营养组合物以饮料、酸乳、冰激凌、奶酪、焙烤食品、乳制品、甜点心、甜食制品、谷类食物棒、早餐谷物食品、食物调味品、水果色拉或炖煮水果的形式使用。9.根据权利要求2至7中任一项所述的用途，其特征在于所述营养组合物以用作动物食品的产品形式使用，其为湿形式、半湿形式或干形式。10.根据权利要求2至7中任一项所述的用途，其特征在于化合物橙皮苷以得自柑桔类水果的果皮或果肉的提取产物的形式使用。11.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述组合物是人用药物组合物或兽用组合物。12.根据权利要求11所述的用途，其特征在于所述药物组合物用于在处于生长期的年轻个体中刺激骨形成。13.根据权利要求11所述的用途，其特征在于所述药物组合物用于预防衰老过程中出现的骨丢失。14.根据权利要求11所述的用途，其特征在于所述药物组合物用于预防或治疗与骨形成和骨吸收关系失衡有关的疾病。15.根据权利要求11所述的用途，其特征在于所述药物组合物用于治疗骨折导致的骨缺损。16.根据权利要求11所述的用途，其特征在于所述组合物用于预防或治疗选自骨质疏松症、佩吉特病、观察到的假体周围的骨丢失或骨质溶解、转移性骨病、癌症引起的高钙血症、多发性骨髓瘤、牙周疾病或骨关节炎的疾病。17.根据权利要求11至16中任一项所述的用途，其特征在于所述药物组合物以口服、胃肠外或静脉内施用的形式使用。18.根据权利要求8所述的用途，其特征在于所述营养组合物以果汁的形式使用。19.根据权利要求8所述的用途，其特征在于所述营养组合物以选自面包、饼干和蛋糕的焙烤食品的形式使用。全文摘要本发明涉及橙皮苷或其衍生物之一在制备刺激骨形成的药物中的用途。具体而言，本发明涉及化合物橙皮苷或其衍生物之一在制备用于在人或动物中刺激骨形成和/或抑制骨钙吸收的组合物中的用途。文档编号C07H17/07GK101822687SQ20101015574公开日2010年9月8日申请日期2003年6月27日优先权日2002年6月28日发明者C·莫朗,M-J·达维科,M-N·奥卡亚达,V·考克斯埃姆申请人:国家农艺研究院