专利名称：一种特女贞苷的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种从中药材女贞子中制备特女贞苷(nuezhenoside)的方法，属于天然药的有效成分提取分离领域。
背景技术：
女贞子为木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果实，为常用中药材。特女贞苷(nuezhenoside)是女贞子中主要的活性成分，属于裂环环烯醚萜苷类成分，
其结构如图根据文献报道，女贞子中的环烯醚萜苷具有较好的保肝利胆、抗肝纤维化、抗菌消炎、抗肿瘤、降血脂、降血糖、降低血液粘度、增强机体免疫调节等多种药理作用。我们从女贞子中经过一系列的分离纯化，得到特女贞苷的纯品，含量在98%以上。
发明内容
1、发明目的本发明的目的是提供一种获得特女贞苷的切实可行的制备方法。2、技术方案本发明所述的特女贞苷的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤(1)将女贞子用80%乙醇水的溶剂加热到85°C回流提取。(2)将(1)乙醇水提取的提取液浓缩蒸至无醇味后，用乙酸乙酯萃取后，水溶液用水饱和的正丁醇萃取。(3)将( 水饱和的正丁醇萃取液浓缩后用水溶解。(4)将(3)的水溶液过大孔树脂柱，用10-30^^50% -70%甲醇水以此洗脱。(5)将(4)50%-70%甲醇水洗脱液浓缩至干，用少量甲醇溶解后过凝胶柱，用 30% -50%甲醇水洗脱。(6)收集(5)30% -50%甲醇水洗脱液中含有特女贞苷的馏分，浓缩后，重结晶即可得到高纯度的目标化合物特女贞苷。在步骤(1)中，所用的80%乙醇水溶液，其用量是药材重量的10-15倍，药材热回流提取的时间是6-8小时，热回流次数是3-5次。在步骤( 中，所用乙酸乙酯用量是被萃取液体积的1-3倍，所用水饱和的正丁醇用量是被萃取液体积的1-4倍。萃取2-4遍。在步骤(3)中，正丁醇萃取液浓缩至固体状态，水的用量为药材重量的0.5-1.0倍。在步骤(4)中，所用的吸附树脂是DlOl和AB-8大孔树脂，所用的溶液时 50% -70%甲醇水。在步骤(5)中，所用的是凝胶柱，所用的溶液时30% -50%重量甲醇水，所用的溶剂是水和有机溶剂，有机溶剂可以是甲醇或乙醇溶剂；重结晶的次数可以是1-3次。3、有益效果采用本发明的特女贞苷提取纯化方法，(1)从女贞子中分离得到的特女贞苷得率在以上，纯度在95%以上。(2)根据文献报道的高效液相检测条件(《HPLC 法测定女贞子药材中女贞苷的含量》(药物分析杂志，2009，四:824-826))进行测定，结果表明，所得的特女贞苷含量在98%以上，表明本工艺可行。
四
附图是利用该方法制备出的特女贞苷的HPLC检测图谱。
五具体实施例方式下面是本发明的实施例，但本发明不仅限于所述实施例。实施例1 将女贞子用药材重量10倍的80%乙醇水的溶剂加热到85°C回流提取 8小时，将提取液浓缩蒸至无醇味后，用药材重量1倍的乙酸乙酯萃取3遍，水溶液再用药材重量1倍的正丁醇萃取3遍，正丁醇萃取液浓缩后用水溶解后过大孔树脂柱用50%重量甲醇水洗脱，将50%重量甲醇水洗脱液浓缩后用水溶解后过凝胶柱，用30%重量甲醇水洗脱，30%重量甲醇水洗脱液浓缩后，用60%甲醇水重结晶即可得到高纯度的目标化合物特女贞苷，得率为0. 90%，纯度为98. 1%。实施例2 将女贞子用药材重量15倍的80%乙醇水的溶剂加热到85°C回流提取 7小时，将提取液浓缩蒸至无醇味后，用药材重量2倍的乙酸乙酯萃取2遍，水溶液再用药材重量3倍的正丁醇萃取3遍，正丁醇萃取液浓缩后用水溶解后过大孔树脂柱用60%重量甲醇水洗脱，将60%重量甲醇水洗脱液浓缩后用水溶解后过凝胶柱，用40%重量甲醇水洗脱，40%重量甲醇水洗脱液浓缩后，用80%乙醇水重结晶即可得到高纯度的目标化合物特女贞苷，得率为0. 95%，纯度为99.0%。实施例3 将女贞子用药材重量13倍的80%乙醇水的溶剂加热到85°C回流提取7 小时，将提取液浓缩蒸至无醇味后，用药材重量3倍的乙酸乙酯萃取2遍，水溶液再用药材重量3倍的正丁醇萃取3遍，正丁醇萃取液浓缩后用水溶解后过大孔树脂柱用60%重量甲醇水洗脱，将60%重量甲醇水洗脱液浓缩后用水溶解后过凝胶柱，用50%重量甲醇水洗脱，50%重量甲醇水洗脱液浓缩后，用90%甲醇水重结晶即可得到高纯度的目标化合物特女贞苷，得率为0. 93%，纯度为98. 1%。特女贞苷的纯度检测取上述方法制备得到的特女贞苷单体适量，甲醇溶于容量瓶中，微孔滤膜过滤后， 待进样分析。色谱条件=Agilent 1200高效液相色谱仪器，Agilent G1314A紫外检测器；色谱柱Welch Materials XB-C18，5 μ m，250*4. 6mm ；流动相甲醇(A)-水(B)，梯度洗脱
，检测波长240nm，流速:lml/min ；进样量:10μ 1 ；具体分析谱图请见说明书附图。对照品特女贞苷自制，经1H-NMR、13C-NMR、MS等测定，其数据与文献一致，鉴定为特女贞苷。TLC图谱为一个斑点，HPLC检测为单峰，归一化含量在98%以上，理论塔板数在 8000以上。以上描述了本发明中的特女贞苷的提取方法，但需要理解其中包含了本领域技术人员所理解的变化和改变。这些变化和改变也包含在权利要求所限定的本发明的范围内。对照品的波谱数据以及解析IUVmax(Me0H/H20 1 1) :240，280nm。2IR(KRr) Vmax :3421,1707，1630，1516，1442cm_103ESIMS :[M+1] = 625。4 1H-WR(DMSO-Cl) δ 7. 49 (1Η, s, 3-H), 7. 01, 7. 00 (2H, d, J = 8. 4Hz), 6. 64 (2H, d, J = 8. 4Hz)，5. 95 (1H, q, 8_H)，4. 92 (1H, d, J = 7. 5Hz)，3. 64 (3H, s, -OCH3-)，1. 67 (3H, d, IO-CH3)。5 13C-NMR (DMSO-d) δ 92. 9 (C-I) , 153. 3 (C-3) , 107. 71 (C-4) , 30. 0 (C-5), 39. 5 (C-6) , 170. 6 (C_7) , 123. 0 (C_8) , 129. 6 (C_9) , 13. 0 (C-IO) , 166. 1 (C-Il)， 70. 0(a -CH2-)，34. 8 ( β -CH2-) ,51. 1 (-0CH3)，98. 9 (C-Γ )，73. 2 (C~2') , 76. 5 (C_3~)，
69.9 (C-4、)，76. 4 (C-5、),61. 0 (C_6、)，102. 8 (C-广)，73. 5 (C_2—)，77. 3 (C_3—)，
70.0 (C-4~ ~ )，73. 5 (C-5~ ~)，64. 0 (C_6~ ~)，128. 6 (C-1 …)，129. 6 (C~2''')，
114. 9(C-3~
)，155. 5 (C-4~
)，114. 9(C-5~
权利要求
1.一种特女贞苷的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤(1)将女贞子用80%乙醇水的溶剂加热到85°C回流提取。(2)将(1)乙醇水提取的提取液浓缩蒸至无醇味后，用乙酸乙酯萃取后，水溶液用水饱和的正丁醇溶液萃取。(3)将( 正丁醇提取的提取液浓缩后用水溶解。(4)将(3)的水溶液过大孔树脂柱用50%-70%甲醇水洗脱。(5)将(4)50%-70%甲醇水洗脱液浓缩至干，用少量甲醇溶解后过凝胶柱，用 30% -50%甲醇水洗脱。(6)将-50%甲醇水洗脱液中含有沙特女贞苷的馏分，浓缩后，重结晶即可得到高纯度的目标化合物特女贞苷，纯度在98%以上。
2.根据权利要求1所述的一种特女贞苷的制备方法，其特征在于在步骤(1)中，所用的乙醇水溶液中乙醇比可在40% -95%之间，其用量是药材的6-15倍；药材热回流提取的时间是6-12小时，热回流次数是3-5次。
3.根据权利要求1所述的一种特女贞苷的制备方法，其特征在于在步骤( 中，所用乙酸乙酯用量是被萃取液体积的1-3倍，萃取2-3遍；所用水饱和的正丁醇用量是被萃取液体积的1-4倍，萃取2-4遍。
4.根据权利要求1所述的一种特女贞苷的制备方法，其特征在于在步骤(3)中，浓缩至固体状态；水的用量为药材重量的0. 4-0. 8倍。
5.根据权利要求1所述的一种特女贞苷的制备方法，其特征在于在步骤(4)中，所用的吸附树脂是DlOl和AB-8的大孔树脂；所用的溶液是50% -70%甲醇水。
6.根据权利要求1所述的一种特女贞苷的制备方法，其特征在于在步骤( 中，所用的凝胶柱；所用的溶液是30% -50%甲醇水；所用的溶剂是水和有机溶剂。
7.根据权利要求1所述的一种特女贞苷的制备方法，其特征在于在步骤(6)中，有机溶剂可以是甲醇或乙醇溶剂；重结晶的次数可以是1-3次。
全文摘要
本文公开了一种从中药女贞子中提取分离特女贞苷的方法。该方法的步骤是从中药女贞子中用80％乙醇水提取，提取液浓缩后用乙酸乙酯萃取，再用水饱和的正丁醇萃取，正丁醇萃取液浓缩后用水溶解，经大孔树脂用10％-30％、50％-70％甲醇水洗脱，收集50％-70％甲醇水洗脱液，浓缩至干，用少量甲醇溶解，上凝胶柱，用30％-50％甲醇水洗脱后，收集含有特女贞苷洗脱液，挥干溶剂后，重结晶即可得到高纯度的目标化合物特女贞苷，纯度在98％以上。这种方法成功得到特女贞苷满足了市场上对中药对照品特女贞苷的需要，方法较为简单。
文档编号C07H17/04GK102260307SQ20101018686
公开日2011年11月30日 申请日期2010年5月28日 优先权日2010年5月28日
发明者何玉琴, 王新亮, 程萍, 许纪锋, 谢天培, 钱勇, 魏国志 申请人:上海特善食品科技有限公司