专利名称：一种埃博霉素d-内酰胺衍生物化学合成方法
技术领域：
本发明提供了一种埃博霉素D-内酰胺衍生物化学合成方法。
背景技术：
埃博霉素(印othilone)是一类大环内酯类化合物，由德国国家生物技术中心 (GBF)的G.Hö ;fle等人于1993年首次报道。从粘细菌亚目的纤维堆囊菌菌株发酵液 中可以分离埃博霉素，其主要组分为Epothilone A和B。目前还没有出现埃博霉素D-内酰 胺衍生物的合成方法，这样使得埃博霉素得不到充分的利用。
发明内容
本发明提供了一种埃博霉素D-内酰胺衍生物化学合成方法，它有效地从埃博霉 素中合成埃博霉素D-内酰胺衍生物。本发明采用了以下技术方案一种埃博霉素D-内酰胺衍生物化学合成方法，它 包括以下步骤步骤一，开环氮化反应在氮气保护下，反应釜中投入四氢呋喃和水的混合 液、埃博霉素B和催化剂，然后投入叠氮钠，在搅拌下，慢慢升温、搅拌，使得溶液变成黄色， 再用乙酸乙酯进行萃取，利用有机相用饱和盐水进行洗涤，用无水硫酸钠进行干燥，真空浓 缩，得到氮酸；步骤二，水解反应在氩气保护下，反应釜中投入四氢呋喃、步骤一中得到的 氮酸和三苯膦进行第一次搅拌升温，再进行第一次冷却，滴加25%氢氧化铵溶液，滴加完毕 后进行第二次升温和搅拌，进行第二次冷却至室温，最后采用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和 盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得到氨基酸；步骤三，环合反应在氩气保护下，反 应釜中投入四氢呋喃和步骤二中得到的氨基酸进行搅拌，再投入碳酸钠进行降温，降温后 缓慢滴加二苯基磷酰基叠氮化物后进行保温搅拌，然后将配制的25%磷酸二氢钠溶液冷 却后加入到反应釜中，继续搅拌，最后再加入乙酸乙酯进行萃取，采用有机相无水硫酸钠干 燥，减压浓缩，得埃博霉素B内酰胺衍生物；步骤四，还原反应在氩气保护下，在反应釜中 投入四氢呋喃和埃博霉素B内酰胺进行搅拌冷却，再缓慢滴加四氢化铝锂和四氢呋喃的混 合溶液进行反应，滴加完毕后继续搅拌，再自然升温至常温，投入10%氯化钾溶液搅拌，最 后再采用乙酸乙酯进行萃取，有机相无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到埃博霉素D内酰胺衍 生物；步骤五，纯化在反应釜中投入第四步得到的埃博霉素D内酰胺衍生物溶解在四氢呋 喃中，用饱和盐水清洗搅拌，再依次采用乙酸乙酯萃取进行萃取、采用无水硫酸钠干燥和采 用减压浓缩，最后经过两次纯化后得到纯埃博霉素D内酰胺衍生物。所述的步骤一中四氢呋喃和水的混合液为800ml，四氢呋喃与水的体积比为 9 1，埃博霉素B为25g，催化剂为四(三苯基膦)合钯，四(三苯基膦)合钯为3. 5g，叠 氮钠为4. 76g，投入叠氮钠后搅拌升温至60°C，搅拌的时间为7小时，在搅拌的过程中跟踪 TLC EtOAc/MSO = 1 2，在萃取时进行三次萃取，每次采用250ml的乙酸乙酯进行萃取； 在洗涤时进行2次洗涤，每次采用200ml的有机相用饱和盐水进行洗涤，最后得到的氮酸为 17. Igo所述的步骤二中四氢呋喃为500ml，氮酸为17. lg，三苯膦为16. 3g，第一次搅拌升温至50°C，搅拌的时间为18小时，第一次冷却至10°C以下，滴加25%氢氧化铵溶液为150ml， 滴加时的温度控制在10°C以下，第二次升温至50°C，搅拌的时间为6小时，在萃取时进行 三次萃取，每次采用IOOml的乙酸乙酯进行萃取；在洗涤时进行2次洗涤，每次采用200ml 的有机相用饱和盐水进行洗涤，最后得到的氨基酸为12. 5g。所述的步骤三中四氢呋喃为 500ml，氨基酸为12. 5g，碳酸钠为15g，投入碳酸钠后降温至0°C，滴加的二苯基磷酰基叠氮 化物为20ml，滴加时的温度控制在0°C以下，在滴加后搅拌的时间为24小时，配制的25%磷 酸二氢钠溶液为200ml，磷酸二氢钠溶液冷却到0-3°C后加入到反应釜中继续搅拌的时间 为2小时，乙酸乙酯的温度为0-3°C，在萃取时进行三次萃取，每次采用500ml的乙酸乙酯进 行萃取，最后得到的埃博霉素B内酰胺衍生物为5. 6g。所述的步骤四中四氢呋喃为300ml， 埃博霉素B内酰胺衍生物为5. 6g，搅拌冷却至5°C以下，滴加四氢化铝锂和四氢呋喃的混合 溶液为50ml，其中四氢化铝锂为6. 3g，在滴加时的温度控制在5°C以下，滴加完毕后继续搅 拌12小时，氯化钾溶液为200ml，投入氯化钾溶液后搅拌的时间为半小时，在萃取时进行三 次萃取，每次采用500ml的乙酸乙酯进行萃取，还原反应后得到的埃博霉素B内酰胺衍生 物为4. 2g。所述的步骤五中埃博霉素D内酰胺衍生物为4. 2g，四氢呋喃为200ml，饱和盐 水为200ml，清洗搅拌的时间为20分钟，在萃取时进行三次萃取，每次采用250ml的乙酸乙 酯进行萃取，两次纯化的过程为第一次色谱纯化，色谱纯化在10*80cm的二氧化硅上采用 2-5%甲醇-氯仿进行梯度洗脱，第二次为制备型HPLC纯化，它采用6-55%甲醇-氯仿梯度 洗脱，最后得到纯埃博霉素D内酰胺衍生物3. 6g。本发明具有以下有益效果本发明不但可以采用生化的方法合成埃博霉素D-内 酰胺衍生物，制备过程简单，成本低，而且制备的埃博霉素D-内酰胺衍生物对于人体肿瘤 的异种移植有效，当每天给正常裸鼠腹膜内注射埃坡西龙BO. 6mg/kg，小鼠7天内全部死 亡，然而，腹膜内注射埃博霉素D 25mg/kg，小鼠全部存活，且埃博霉素D可导致肿瘤非常明 显地减少，6个小鼠中有1个在35天后已查不到肿瘤，另外埃博霉素D在治疗的过程中毒性 低，裸鼠试验再次证明，埃博霉素D对人肿瘤异种移植有效，这些肿瘤用紫杉醇是难以治疗 的。
具体实施例方式本发明提供了一种埃博霉素D-内酰胺衍生物化学合成方法，它包括以下步骤步 骤一为开环氮化反应在氮气保护下，反应釜中投入800ml混合液，四氢呋喃与水的体积比 为9 1)、埃博霉素B25g(5. 76mmol)和3. 5g (0. 35mmol)四(三苯基膦)合钯，分批投入 4. 76g(8. 64mmol)叠氮钠，在搅拌下，慢慢升温至60°C，搅拌7个小时，在搅拌过程中跟踪 TLC EtOAc/MSO = 1 2，使得反应状态为溶液变成黄色，再用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯分 3次，每次250ml进行萃取，有机相用饱和盐水洗涤，洗涤时进行2次洗涤，每次采用200ml 的有机相用饱和盐水进行洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得到氮酸17. Ig ；步骤二为水 解反应在氩气保护下，反应釜中投入四氢呋喃500ml、步骤一得到的氮酸17. Ig和三苯膦 16. 3g，搅拌升温至50°C，搅拌18小时。再冷却至10°C以下，滴加25%氢氧化铵溶液150ml， 温度控制在10°C以下，滴加完毕，再升温至50°C，搅拌6个小时后，冷却至室温，再用乙酸乙 酯分3次，每次IOOml进行萃取，有机相用饱和盐水洗涤，洗涤时进行2次洗涤，每次采用 200ml的有机相用饱和盐水进行洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得到氨基酸12. 5g ；步骤三，环合反应在氩气保护下，反应釜中投入四氢呋喃500ml、步骤二得到的氨基酸12. 5g搅 拌，再投入15g碳酸钠，降温至0°C。缓慢滴加二苯基磷酰基叠氮化物20ml (8. 5mmol)，温度 控制在0°C以下，保温搅拌24小时。配制25%磷酸二氢钠溶液200ml，冷却至0_3°C，加入 到反应釜中，继续搅拌2小时，加入0-3°C乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯分3次，每次500ml 进行萃取，有机相无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到5. 6g埃博霉素B内酰胺衍生物；步骤四， 还原反应在氩气保护下，在反应釜中投入四氢呋喃300ml、埃博霉素B内酰胺5. 6g，搅拌 冷却至5°C以下，缓慢滴加四氢化铝锂和四氢呋喃溶液50ml (其中氢化铝锂6. 3g)，反应温 度控制在5°C以下，滴加完毕后继续搅拌12小时，再自然升温至常温，投入10%氯化钾溶 液200ml，搅拌半个小时，乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯分3次，每次500ml进行萃取，有机 相无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到4. 2g埃博霉素D内酰胺衍生物；步骤五，纯化在反应 釜中投入第四步得的4. 2g埃博霉素D内酰胺衍生物溶解在四氢呋喃200ml中，用饱和盐水 200ml清洗搅拌20分钟清洗，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯分3次，每次250ml进行萃取，无水 硫酸钠干燥，减压浓缩，第一次色谱纯化，色谱纯化在10*80cm的二氧化硅上采用2-5%甲 醇_氯仿进行梯度洗脱，第二次为制备型HPLC纯化，它采用6-55%甲醇-氯仿梯度洗脱，最 后得到纯埃博霉素D内酰胺衍生物3. 6g。
权利要求
一种埃博霉素D 内酰胺衍生物化学合成方法，它包括以下步骤步骤一，开环氮化反应在氮气保护下，反应釜中投入四氢呋喃和水的混合液、埃博霉素B和催化剂，然后投入叠氮钠，在搅拌下，慢慢升温、搅拌，使得溶液变成黄色，再用乙酸乙酯进行萃取，利用有机相用饱和盐水进行洗涤，用无水硫酸钠进行干燥，真空浓缩，得到氮酸；步骤二，水解反应在氩气保护下，反应釜中投入四氢呋喃、步骤一中得到的氮酸和三苯膦进行第一次搅拌升温，再进行第一次冷却，滴加25％氢氧化铵溶液，滴加完毕后进行第二次升温和搅拌，进行第二次冷却至室温，最后采用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得到氨基酸；步骤三，环合反应在氩气保护下，反应釜中投入四氢呋喃和步骤二中得到的氨基酸进行搅拌，再投入碳酸钠进行降温，降温后缓慢滴加二苯基磷酰基叠氮化物后进行保温搅拌，然后将配制的25％磷酸二氢钠溶液冷却后加入到反应釜中，继续搅拌，最后再加入乙酸乙酯进行萃取，采用有机相无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得埃博霉素B内酰胺衍生物；步骤四，还原反应在氩气保护下，在反应釜中投入四氢呋喃和埃博霉素B内酰胺进行搅拌冷却，再缓慢滴加四氢化铝锂和四氢呋喃的混合溶液进行反应，滴加完毕后继续搅拌，再自然升温至常温，投入10％氯化钾溶液搅拌，最后再采用乙酸乙酯进行萃取，有机相无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到埃博霉素D内酰胺衍生物；步骤五，纯化在反应釜中投入第四步得到的埃博霉素D内酰胺衍生物溶解在四氢呋喃中，用饱和盐水清洗搅拌，再依次采用乙酸乙酯萃取进行萃取、采用无水硫酸钠干燥和采用减压浓缩，最后经过两次纯化后得到纯埃博霉素D内酰胺衍生物。
2.根据权利要求1所述的埃博霉素D-内酰胺衍生物化学合成方法，其特征是所述的 步骤一中四氢呋喃和水的混合液为800ml，四氢呋喃与水的体积比为9 1，埃博霉素B为 25g，催化剂为四(三苯基膦)合钯，四(三苯基膦)合钯为3. 5g，叠氮钠为4. 76g，投入叠 氮钠后搅拌升温至60°C，搅拌的时间为7小时，在搅拌的过程中跟踪TLC EtOAc/MSO = 1 2，在萃取时进行三次萃取，每次采用250ml的乙酸乙酯进行萃取；在洗涤时进行2次洗 涤，每次采用200ml的有机相用饱和盐水进行洗涤，最后得到的氮酸为17. lg。
3.根据权利要求1所述的埃博霉素D-内酰胺衍生物化学合成方法，其特征是所述的步 骤二中四氢呋喃为500ml，氮酸为17. lg，三苯膦为16. 3g，第一次搅拌升温至50°C，搅拌的 时间为18小时，第一次冷却至10°C以下，滴加25%氢氧化铵溶液为150ml，滴加时的温度控 制在10°C以下，第二次升温至50°C，搅拌的时间为6小时，在萃取时进行三次萃取，每次采 用IOOml的乙酸乙酯进行萃取；在洗涤时进行2次洗涤，每次采用200ml的有机相用饱和盐 水进行洗涤，最后得到的氨基酸为12. 5g。
4.根据权利要求1所述的埃博霉素D-内酰胺衍生物化学合成方法，其特征是所述的步 骤三中四氢呋喃为500ml，氨基酸为12. 5g，碳酸钠为15g，投入碳酸钠后降温至0°C，滴加的 二苯基磷酰基叠氮化物为20ml，滴加时的温度控制在0°C以下，在滴加后搅拌的时间为24 小时，配制的25%磷酸二氢钠溶液为200ml，磷酸二氢钠溶液冷却到0_3°C后加入到反应釜 中继续搅拌的时间为2小时，乙酸乙酯的温度为0-3°C，在萃取时进行三次萃取，每次采用 500ml的乙酸乙酯进行萃取，最后得到的埃博霉素B内酰胺衍生物为5. 6g。
5.根据权利要求1所述的埃博霉素D-内酰胺衍生物化学合成方法，其特征是所述的步骤四中四氢呋喃为300ml，埃博霉素B内酰胺衍生物为5. 6g，搅拌冷却至5°C以下，滴加 四氢化铝锂和四氢呋喃的混合溶液为50ml，其中四氢化铝锂为6. 3g，在滴加时的温度控制 在5°C以下，滴加完毕后继续搅拌12小时，氯化钾溶液为200ml，投入氯化钾溶液后搅拌的 时间为半小时，在萃取时进行三次萃取，每次采用500ml的乙酸乙酯进行萃取，还原反应后 得到的埃博霉素B内酰胺衍生物为4. 2g。
6.根据权利要求1所述的埃博霉素D-内酰胺衍生物化学合成方法，其特征是所述的步 骤五中埃博霉素D内酰胺衍生物为4. 2g，四氢呋喃为200ml，饱和盐水为200ml，清洗搅拌的 时间为20分钟，在萃取时进行三次萃取，每次采用250ml的乙酸乙酯进行萃取，两次纯化的 过程为第一次色谱纯化，色谱纯化在10*80cm的二氧化硅上采用2-5%甲醇-氯仿进行梯 度洗脱，第二次为制备型HPLC纯化，它采用6-55%甲醇-氯仿梯度洗脱，最后得到纯埃博霉 素D内酰胺衍生物3. 6g。
全文摘要
本发明公开了一种埃博霉素D-内酰胺衍生物化学合成方法，它包括以下步骤它采用埃博霉素B、叠氮钠作为起始原料，选择一种稀有金属化合物为催化剂，进行开环氮化反应生成氮酸，再进行水解反应，生成氨基酸，再进行环合反应生成埃博霉素B内酰胺衍生物，再进行还原反应，得到埃博霉素D-内酰胺衍生物。本发明可以有效地从埃博霉素中合成埃博霉素D-内酰胺衍生物。
文档编号C07D417/06GK101906099SQ20101022778
公开日2010年12月8日 申请日期2010年7月16日 优先权日2010年7月16日
发明者周彬, 高荣 申请人:泰州市今朝伟业精细化工有限公司