专利名称：一种人白蛋白的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种生物制剂，尤其是一种人白蛋白的制备方法。
背景技术：
人血白蛋白是血液制品的一种，俗称“生命制品”、“救命药”。它是从健康人的血 液中提炼加工而成，直接静脉注射到病人体内，其主要功能是增强人的免疫力和抵抗力。市 场价300到400元一瓶。临床上主要用于失血创伤和烧伤等引起的休克、脑水肿，以及肝硬 化、肾病引起的水肿或腹水等危重病症的治疗，以及低蛋白血症病人。但自从2006年开始，由于国家对单采血浆站进行转制改造，一些管理不善的血站 被关闭，全国采血浆量一路下滑。由于血浆原料紧缺，全国不少地方出现了人血白蛋白用药 紧张的情况。就在这种“救命药”供应紧张的情况下，一些地方先后出现了假冒的人血白蛋 白。脐带血是胎儿娩出、脐带结扎并离断后残留在胎盘和脐带中的血液通常是废弃不 用的。脐带血作为造血干细胞的重要来源，在婴儿出生时即采集并从中分离提取造血干细 胞以供临床移植所需。而含有大量蛋白的血浆成分则废弃不用。我国是人口大国，每年出 生的婴儿达4000多万，如果这些血浆全部用于生产提取人血白蛋白的话，则可有效缓解由 于血浆原料不足造成的白蛋白供应短缺，从而也可防止假冒白蛋白进入市场。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，提供一种从脐带血血浆以及分离提取过造血干细 胞的脐带血血浆中制备人白蛋白的方法。为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是一种人白蛋白的制备方法，以 脐带血或经分离过脐带血单个核细胞后的脐带血血浆为原料，进行分离提取。所述脐带血是采用足月剖宫产健康胎儿脐带血，并且采集之后经过艾滋病病毒抗 体、乙型肝炎病毒抗体、丙型肝炎病毒抗体、梅毒螺旋体抗体、谷丙转氨酶、支原体、厌氧菌 检测全部合格的脐带血血浆。具体地说，所述的人白蛋白的制备方法，包括如下步骤A、将脐带血分离后剩余的血浆在无菌条件下混合，待用；B、采用低温乙醇分离法分步提取Fi、n、m、iv、v等组分；C、取组分V与95%无水乙醇、蒸馏水配置成水溶液，其中蛋白质质量百分比浓度 为10-20%，乙醇质量百分比浓度为20-25% ；D、用盐酸调节步骤C所得水溶液至PH值至5. 4-5. 6，过滤，取上清；E、将步骤D所得上清液超滤脱醇，按质量0. 2 0. 3%的比例加入辛酸钠，60°C、10 小时巴氏消毒法灭火病毒，0. 22 μ m滤器过滤，分装。本发明的有益效果是采用废弃不用的脐带血作为造血干细胞的重要来源，用于 生产提取人血白蛋白，可有效缓解由于血浆原料不足造成的白蛋白供应短缺，从而也可防止假冒白蛋白进入市场。
具体实施例方式下面结合具体实施方式
对本发明作进一步详细说明实施例1 (1)采集足月分娩婴儿废弃的胎盘脐带的脐带血50kg，在无菌条件下混合；(2)经艾滋病病毒抗体、乙型肝炎病毒抗体、丙型肝炎病毒抗体、梅毒螺旋体抗体、 谷丙转氨酶、支原体、厌氧菌检测合格；(3)加入乙酸钠-乙酸缓冲液调整PH至5. 5，缓慢加入95%无水乙醇14升，边加 边缓慢搅拌，并降温至_5°C，压滤机进行压滤，得上清65升；(4)在步骤(3)中得到的65升上清液中加入乙酸钠-乙酸缓冲液调整PH值至 5. 5，再加入95%的无水乙醇沈升，并降温至_5°C，压滤机进行压滤，得上清80升；(5)在步骤中得到的80升上清液中加入乙酸钠-乙酸缓冲液调整PH值至
4.5，并降温至_8°C，压滤机进行压滤，得组分蛋白V粗制品6kg ；(6)取组分V 6kg加入18kg蒸馏水进行溶解，与蒸馏水配置成水溶液，加入95% 无水乙醇8. 5kg,搅拌，使沉淀悬浮于溶液中后，用盐酸调节PH至5. 5，降温至-2°C _3°C，超 滤，得到12. 5kg溶液；(7)在步骤(6)所得溶液中加入辛酸钠25克，调整PH值至7. 0，在60°C条件下保 持10小时进行巴氏消毒。0.22 μ m滤器过滤，分装。实施例2 (1)取经分离提取造血干细胞后的脐带血浆50升，在无菌条件下混合(病原微生 物在分离干细胞之前已经检测过，无需再次检测)；(2)加入乙酸钠-乙酸缓冲液调整PH至5. 5，缓慢加入95%无水乙醇14升，边加 边缓慢搅拌，并降温至_5°C，压滤机进行压滤，得上清65升；(3)在步骤⑵中得到的65升上清液中加入乙酸钠-乙酸缓冲液调整PH值至
5.5，再加入95%的无水乙醇沈升，并降温至并降温至-5°C，压滤机进行压滤，得上清80 升；(4)在步骤(3)中得到的80升上清液中加入乙酸钠-乙酸缓冲液调整PH值至 4. 5，并降温至并降温至_8°C，压滤机进行压滤，得组分蛋白V粗制品6kg ；(5)取组分V 6kg加入18kg蒸馏水进行溶解，与、蒸馏水配置成水溶液，加入95% 无水乙醇8. ^g，搅拌，使沉淀悬浮于溶液中后，用盐酸调节PH至5. 5，降温至-2°C-3°C，超 滤，得到12. 5kg溶液。(6)在步骤(5)所得溶液中加入辛酸钠25克，调整PH值至7. 0，在60°C条件下保 持10小时进行巴氏消毒。0.22 μ m滤器过滤，分装。综上所述，本发明的内容并不局限在上述的实施例中，相同领域内的有识之士可 以在本发明的技术指导思想之内可以轻易提出其他的实施例，但这种实施例都包括在本发 明的范围之内。
权利要求
1.一种人白蛋白的制备方法，其特征在于，以脐带血或经分离过脐带血单个核细胞后 的脐带血血浆为原料，进行分离提取。
2.根据权利要求1所述的人白蛋白的制备方法，其特征在于，所述脐带血是采用足月 剖宫产健康胎儿脐带血，并且采集之后经过艾滋病病毒抗体、乙型肝炎病毒抗体、丙型肝炎 病毒抗体、梅毒螺旋体抗体、谷丙转氨酶、支原体、厌氧菌检测全部合格的脐带血血浆。
3.根据权利要求1所述的人白蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤 A、将脐带血分离后剩余的血浆在无菌条件下混合，待用； 8、采用低温乙醇分离法分步提取？1、11、111、11￥等组分；C、取组分V与95%无水乙醇、蒸馏水配置成水溶液，其中蛋白质质量百分比浓度为 10-20%，乙醇质量百分比浓度为20-25% ；D、用盐酸调节步骤C所得水溶液至PH值至5.4-5. 6，过滤，取上清；E、将步骤D所得上清液超滤脱醇，按质量0.2 0. 3%的比例加入辛酸钠，60°C、10小 时巴氏消毒法灭火病毒，0. 22 μ m滤器过滤，分装。
全文摘要
本发明公开了一种人白蛋白的制备方法，以脐带血或经分离过脐带血单个核细胞后的脐带血血浆为原料，进行分离提取。包括如下步骤将脐带血分离后剩余的血浆在无菌条件下混合，待用；采用低温乙醇分离法分步提取FI、∏、Ш、IV、V等组分；取组分V与95％无水乙醇、蒸馏水配置成水溶液；用盐酸所得水溶液至pH值至5.4-5.6，过滤，取上清；按质量0.2～0.3％的比例加入辛酸钠，巴氏消毒法灭火病毒，0.22μm滤器过滤，分装。本发明采用废弃不用的脐带血作为造血干细胞的重要来源，用于生产提取人血白蛋白，可有效缓解由于血浆原料不足造成的白蛋白供应短缺，从而也可防止假冒白蛋白进入市场。
文档编号C07K1/34GK102146120SQ20101060639
公开日2011年8月10日 申请日期2010年12月27日 优先权日2010年12月27日
发明者侯士芳, 张宇光, 武文杰 申请人:协和干细胞基因工程有限公司