专利名称：一种利用食用菌副产物分离提取活性肽的方法
技术领域：
本发明属于活性肽的提取方法，具体涉及利用食用菌副产物提取活性肽的技术。
背景技术：
肽(Peptides)是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类生物活性化合物，研究表明它可调节和抑制生物体内的酶，具有免疫调节，抗血栓，抗高血压，降胆固醇，抑制细菌、病毒，抗癌作用和抗氧化、清除自由基作用等，因此，活性肽是筛选药物、制备疫苗和食品添加剂的天然资源宝库，近年来日益受到各国人们的重视。近年来研究发现，蛋白质消化道酶促水解后主要以小肽的形式吸收，比完全游离氨基酸更易、更快被机体吸收利用，在蛋白质的肽链内部可能存在着多功能区，这说明蛋白质是生物活性肽的前体，以为原料，选择合适的蛋白酶水解这些多肽链，把其有生物活性的链片段释放出来从而可制备出具有生理功能的食用菌活性肽。公开号为CN03157121.2，发明名称“大豆蛋白活性肽的制作方法”的发明专利， 公开了一种大豆活性肽的制作方法；公开号为CN00111376. 3，发明名称“营养活性肽添加剂的制作方法”的发明专利，公开了一种新的营养活性肽添加剂的制备方法；公开号为 CN200810051141.0，发明名称“一种玉米蛋白活性肽及其制备工艺”的发明专利，公开了一种玉米活性肽的制作方法；公开号为CN200710061492. 5，发明名称“香菇抽提物的生产工艺”的发明专利，公开了一种香菇抽提物的生产工艺；上述的分离方法价格昂贵，不适合工业化大生产。在活性多肽的工业生产中，目前的提取方法有很多种，如化学分离纯化法、化学合成法、水解法、超滤法、层析法、电泳法等，在实际应用中，常常采用上述几种方法的组合对特定多肽类物质进行分离纯化，一般采用化学法较多，主要是生产活性多肽的原料多种多样，现行的工艺还比较粗糙，缺乏针对性以及投入较大、成本偏高，纯度不高，分离困难等。采用传统的化学分离纯化法、化学合成法生产活性肽存在步骤繁琐，分离困难，产品质量和收率不稳定等弊端，同时对环境造成严重污染。现有技术未有采用复合酶酶解结合膜分离技术提取食用菌活性肽的报道。
发明内容
本发明目的是采用简单易行的方法，生产食用菌活性肽，克服现有工艺比较粗糙， 缺乏针对性以及投入较大、成本偏高，纯度不高，分离困难等技术的不足，采用双酶酶解结合膜分离技术制备活性肽，反应温和，工艺简单，产品肽含量丰富，质量显著优于同类产品。本发明的技术方案本发明采用食用菌副产物如金针菇、杏鲍菇、蘑菇等，经过预处理，采用复合酶解， 灭酶，并经过滤，离心，所得粗提物经膜分离，最后经真空浓缩、喷雾干燥制备食用提取活性肽。本发明包括以下步骤
(1)预处理用食用菌副产物如金针菇、杏鲍菇、蘑菇等，洗干净，捣碎，并碾磨呈糊状。(2)酶解使水与物料料液重量比为1 12 16，PH值调整为7 9，温度为35 55°C，添加碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶重量比1 1.2 1 1.2 1 1.2，底物物料与复合酶浓度重量比为3 5%，酶解时间3 5小时。(3)灭酶将酶解液升温到80 90°C，保持15 20min，灭酶，同时离心分离酶解液。(4)初滤取酶解液经板框过滤机初滤，滤材为尼龙滤布。(5)精滤粗滤液经截留粒径0. 1 0. 2μ m的醋酸纤维有机膜精滤，滤过压 0. 15 0. 2MPa。(6)超滤精滤液再经截留分子量小于SOOODa的芳香聚酰胺类有机复合膜超滤， 滤过压0. 15 0. 25MPa，截留收获分子量为小于8000Da的肽液。(7)真空浓缩、喷雾干燥在60 80°C情况下，减压浓缩至波美度25 30° Be的浸膏后进行喷雾干燥，喷雾干燥时，进品温度为130 138°C，出口温度70 75°C。上述酶解步骤中优选料液重量比为1 16，PH值为9，温度为50°C，碱性蛋白酶、 木瓜蛋白酶、胰蛋白酶重量比为1 1 1，底物物料与复合酶浓度重量比为3%，酶解时间 3小时；灭酶酶解液升温优选到90°C，保持20min ；精滤优选0. 1 μ m的醋酸纤维有机膜、滤过压优选0. 15MPa ；；超滤滤过压优选0. 2MPa ；真空浓缩、喷雾干燥优选在60°C情况下，减压浓缩至波美度25° Be的浸膏后进行喷雾干燥，进品温度为138°C，出口温度75°C。上述方法提取的产品小肽(分子量SOOODa以下)含量大于80%。本发明利用食用菌提取活性肽，把酶解与膜分离技术结合在一起，利用膜分离产物，底物和酶被截留，不断添加底物，即可以反复利用酶并得到高产率多肽产品的目的，它不仅提高了水的利用率，而且有利用于产品的分离纯化。本发明采用双酶酶解提取食用菌活性肽，具有反应条件温和、水解程度高，水解时间短，提取率高、成本低，生产过程中活性肽不会受到破坏等的特点，并且可以生产大量的小肽，不会对反应环境造成危害。本发明采用双酶酶解技术与膜分离技术结合，反应条件温和，容易分离多肽，工艺简单，得率高，得率大于9%，活性肽80%以上分布在8000Da以下。本发明采用双酶酶解及膜分离工程技术，实现了生产的食用菌活性肽产品收率高、分子量小，保持其原有天然品质和性能，下表是本发明方法与现有技术相比在生产周期、产品纯度、产品产率方面的效果比较
现有技术本发明生产周期25 30小时18 20小时产品纯度30% 40%以上分布在 8000Da以下80%以上分布在8000Da以下产品产率5 6%9 10%本发明工艺提取的食用菌副产物分离提取的活性肽，经检测下列指标感官指标为淡黄色粉末，味微苦。
理化指标肽(8000Da以下)彡 80%砷(以As 计)彡 1. Omg/kg汞(以Hg 计)彡 0. 3mg/kg细菌指标大肠菌群;^90MPN/100g霉菌彡 25cfu/g
菌落总数< 10000cfu/g 酵母彡25cfu/g
水分< 9%
铅(以1 计)彡1. 5mg/kg致病菌(沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌)不得检出
具体实施例方式实施例1用金针菇洗干净，捣碎，并碾磨呈糊状，使水与物料重量比为1 15，PH值调整为 9，温度为50°C，添加碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶重量比1 1 1，底物物料与复合酶浓度重量比为3%，酶解时间3小时后，将酶解液升温到90°C，保持20min，灭酶，同时离心分离酶解液；取酶解液经板框过滤机初滤，滤材为尼龙滤布；粗滤液经截留粒径0. 1 μ m的醋酸纤维有机膜精滤，滤过压为0. 15MPa ；精滤液再经截留分子量小于SOOODa的芳香聚酰胺类有机复合膜超滤，滤过压0. 2MPa，截留收获分子量为小于SOOODa的肽液；肽液真空浓缩、喷雾干燥，在70°C情况下，减压浓缩至波美度Be的浸膏后进行喷雾干燥，喷雾干燥时，进品温度为138°C，出口温度75°C。实施例2用香菇洗干净，捣碎，并碾磨呈糊状，使水与物料重量比为1 12，PH值调整为7， 温度为35°C，添加碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶重量比1 1 1，底物物料与复合酶浓度重量比为3%，酶解时间4小时后，将酶解液升温到85°C，保持18min，灭酶，同时离心分离酶解液；取酶解液经板框过滤机初滤，滤材为尼龙滤布；粗滤液经截留粒径0. 2 μ m的醋酸纤维有机膜精滤，滤过压为0. 2MPa ；精滤液再经截留分子量6000Da的芳香聚酰胺类有机复合膜超滤，滤过压0. 25MPa，截留收获分子量为小于7000Da的肽液；肽液真空浓缩、喷雾干燥，在80°C情况下，减压浓缩至波美度30° Be的浸膏后进行喷雾干燥，喷雾干燥时，进品温度为i:35°C，出口温度72°C。实施例3用金针菇洗干净，捣碎，并碾磨呈糊状，使水与物料重量比为1 12，PH值调整为 8，温度为55°C，添加碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶重量比1 1 1，底物物料与复合酶重量比为3%，酶解时间5小时后，将酶解液升温到80°C，保持15min，灭酶，同时离心分离酶解液；取酶解液经板框过滤机初滤，滤材为尼龙滤布；粗滤液经截留粒径0. 15 μ m的醋酸纤维有机膜精滤，滤过压为0. 2MPa ；精滤液再经截留分子量6000Da的芳香聚酰胺类有机复合膜超滤，滤过压0. 15MPa，截留收获分子量为小于6000Da的肽液；肽液真空浓缩、喷雾干燥，在60°C情况下，减压浓缩至波美度25° Be的浸膏后进行喷雾干燥，喷雾干燥时，进品温度为130°C，出口温度70°C。
权利要求
1.一种食用菌活性肽的提取分离方法，食用菌洗净，捣碎，并碾磨呈糊状，其特征在于包括下列步骤(1)酶解水与物料料液重量比为1:12 16，PH值调整为7 9，温度为35 55°C， 添加碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶重量比1 1. 2:1 1. 2:1 1. 2，底物物料与复合酶浓度比为重量比3 5%，酶解时间3 5小时；(2)灭酶将酶解液升温到80 90°C，保持15 20min，灭酶，同时离心分离酶解液；(3)初滤取酶解液经板框过滤机初滤，滤材为尼龙滤布；(4)精滤粗滤液经截留粒径0.1 0. 2 μ m的醋酸纤维有机膜精滤，滤过压0. 15 0.20MPa ；(5)超滤精滤液再经截留分子量小于SOOODa的芳香聚酰胺类有机复合膜超滤，滤过压0. 15 0. 25MPa，截留收获分子量为小于8000Da的肽液；(6)真空浓缩、喷雾干燥在60 80°C情况下，减压浓缩至波美度25 30°Be的浸膏后进行喷雾干燥，喷雾干燥时，进品温度为130 138°C，出口温度70 75°C。
2.根据权利要求1所述的食用菌活性肽的提取分离方法，其特征在于包括下列步骤(1)酶解水与物料料液重量比为1:16，PH值调整为9，温度为50°C，添加碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶重量比1:1:1，底物物料与复合酶浓度比为3%，酶解时间3小时；(2)灭酶将酶解液升温到90°C，保持20min，灭酶，同时离心分离酶解液；(3)初滤取酶解液经板框过滤机初滤，滤材为尼龙滤布；(4)精滤粗滤液经截留粒径0.1 μ m的醋酸纤维有机膜精滤，滤过压0. 15MPa ；(5)超滤精滤液再经截留分子量小于SOOODa的芳香聚酰胺类有机复合膜超滤，滤过压0. 2MPa，截留收获分子量为小于SOOODa的肽液；(6)真空浓缩、喷雾干燥在60°C情况下，减压浓缩至波美度25°Be的浸膏后进行喷雾干燥，喷雾干燥时，进品温度为138°C，出口温度75°C。
全文摘要
本发明目的是采用双酶酶解结合膜分离技术制备食用菌活性肽，反应温和，工艺简单，产品肽含量丰富，用食用菌副产物如金针菇、杏鲍菇、蘑菇等,经过预处理，采用添加碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶重量比1～1.2:1～1.2:1～1.2，复合酶解3～5小时，灭酶，并经过滤，离心，所得粗提物经膜分离，截留粒径0.1～0.2μm的醋酸纤维有机膜精滤，滤过压0.15～0.2MPa；精滤液再经截留分子量小于8000Da的芳香聚酰胺类有机复合膜超滤，滤过压0.15～0.25MPa，截留收获分子量为小于8000Da的肽液，最后经真空浓缩、喷雾干燥制备食用提取活性肽。
文档编号C07K1/34GK102199647SQ20111007280
公开日2011年9月28日 申请日期2011年3月25日 优先权日2011年3月25日
发明者梅跃明 申请人:梅跃明