专利名称：一种杯苋甾酮的纯化方法
技术领域：
本发明涉及一种杯苋留酮的纯化方法，特别是涉及一种采用高速逆流色谱纯化杯苋甾酮的方法。
背景技术：
杯苋甾酮(Cyasterone)无色针状结晶(甲醇)，熔点164 166 V，CAS号 17086-76-9，分子式C29H44O8,分子量520，分子结构
杯苋甾酮是苋科植物川牛膝中的有效成分。川牛膝为苋科植物川牛膝众 officinalis Kuan的干燥根，传统医学认为川牛膝具有逐瘀通经，通利关节，利尿通淋作用。现代药效学研究表明，杯苋留酮对去势小鼠的体重和子宫系数有增加趋势，子宫湿重有显著增长，提示其为川牛膝的雌激素样活性的有效成分，杯苋留酮能增加提示其有蛋白质同化作去势大鼠提肛肌重量用，实验结果表明杯苋留酮的药理活性与川牛膝强筋健骨其滋补之功与中医临床用药功能主治基本吻合。 现有提取纯化杯苋甾酮的方法，多为硅胶柱分离法。如刘晶晶等采用的方法是以川牛膝为原料，经乙醇提取，大孔树脂纯化，硅胶柱分离、结晶得高纯度杯苋留酮。在高纯度的杯苋留酮分离多采用硅胶柱，洗脱试剂用量大、周期长、样品损失严重和重现性差是硅胶柱分离的短处，而且很难放大生产。本发明的目的是克服现有方法的不足和技术缺陷，提供一种杯苋留酮的纯化方法。本发明的目的是通过以下技术方案来实现的一种杯苋留酮的纯化方法，其特征在于以下步骤
a.川牛膝药材粉碎，加入3-7倍量丙酮溶液超声提取2-3次，提取液回收丙酮后用适量热水溶解过滤，滤液加入聚酰胺吸附，取40-60%甲醇溶液洗脱，收集高浓度流分，减压浓缩
得浸膏；
b.取氯仿、甲醇、水溶液混合充分分层后，取上相做流动相，下相做固定相，采用高速逆流色谱分离上述浸膏，紫外检测器在线监测，收集目标流分，减压浓缩结晶，干燥得高纯度
发明内容杯苋甾酮。所述步骤b中的氯仿、甲醇、水溶液混合比例为3-6:2-5:1-2。所述的步骤b中的高速逆流色谱分离主机转速600-1000rpm，流动相流速1_細1/
mirio本发明的优势是方法采用高逆流色谱方法纯化杯苋留酮，是一种液液分配色谱法，对分离样品无吸附，分离速度快，制备量大，溶剂用量小而可以循环利用，克服了硅胶柱分离方法的缺陷，降低了产品生产成本，减少了污染。
具体实施例方式下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明。实施例1
川牛膝药材粉碎，取10kg，加入5倍量80%丙酮溶液超声提取2次，每次30分钟，提取液回收丙酮后用适量热水溶解过滤，滤液加入聚酰胺柱吸附吸附，取60%甲醇溶液洗脱，收集高浓度流分，减压浓缩得浸膏。取氯仿、甲醇、水溶液按3:2:1比例混合，充分分层后，取下相注入高速逆流色谱柱做固定相，转动主机700rpm，泵入上相做流动相，动态平衡后，流动相流速调整为2ml/min，同时用流动相溶解浸膏，由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集目标流分，减压浓缩，结晶，干燥得杯苋留酮200mg，含量98. 8%。实施例2:
川牛膝药材粉碎，取10kg，加入4倍量70%丙酮溶液超声提取3次，每次30分钟，提取液回收丙酮后用适量热水溶解过滤，滤液加入聚酰胺柱吸附吸附，取40%甲醇溶液洗脱，收集高浓度流分，减压浓缩得浸膏。取氯仿、甲醇、水溶液按6:5:2比例混合，充分分层后，取下相注入高速逆流色谱柱做固定相，转动主机lOOOrpm，泵入上相做流动相，动态平衡后，流动相流速调整为3ml/min，同时用流动相溶解浸膏，由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集目标流分，减压浓缩，结晶，干燥得杯苋留酮230mg，含量98. 1%。
权利要求
1.一种杯苋留酮的纯化方法，其特征在于以下步骤a.川牛膝药材粉碎，加入3-7倍量丙酮溶液超声提取2-3次，提取液回收丙酮后用适量热水溶解过滤，滤液加入聚酰胺吸附，取40-60%甲醇溶液洗脱，收集高浓度流分，减压浓缩得浸膏；b.取氯仿、甲醇、水溶液混合充分分层后，取上相做流动相，下相做固定相，采用高速逆流色谱分离上述浸膏，紫外检测器在线监测，收集目标流分，减压浓缩结晶，干燥得高纯度杯苋甾酮。
2.如权利要求1所述的杯苋留酮的纯化方法，其特征在于所述步骤b中的氯仿、甲醇、 水溶液混合比例为3-6:2-5:1-2。
3.如权利要求1所述的杯苋留酮的纯化方法，其特征在于所述步骤b中的高速逆流色谱分离主机转速600-1000rpm，流动相流速Uml/min。
全文摘要
本发公开了一种杯苋甾酮的纯化方法。方法步骤如下a.川牛膝药材粉碎，加入3-7倍量丙酮溶液超声提取2-3次，提取液回收丙酮后用适量热水溶解过滤，滤液加入聚酰胺吸附，取40-60%甲醇溶液洗脱，收集高浓度流分，减压浓缩得浸膏；b.取氯仿、甲醇、水溶液混合充分分层后，取上相做流动相，下相做固定相，采用高速逆流色谱分离上述浸膏，紫外检测器在线监测，收集目标流分，减压浓缩结晶，干燥得高纯度杯苋甾酮。本发明的方法操作简单，生产周期短，效率高，所得产品含量不低于95%。
文档编号C07J17/00GK102276676SQ20111026413
公开日2011年12月14日 申请日期2011年9月8日 优先权日2011年9月8日
发明者刘东锋, 杨成东 申请人:南京泽朗医药科技有限公司