专利名称：一种6-羟基硫双萍蓬草定碱的制备方法
技术领域：
本发明属于天然药物提取技术领域，涉及一种6-羟基硫双萍蓬草定碱的制备方法。
背景技术：
6-羟基硫双萍蓬草定碱(Hydroxythiobinupharidine)分子式为 C3tlH42RO3S,分子量为510. 74。CAS登录号为50478-55-2。是从睡莲科(Nymphaeaceae)植物黄萍蓬草 luteum {L·)}. Ε. Smith根茎、萍蓬草pumilum{Tima.)V>C.根莲中分离得到的一种萜类生物碱。萍蓬草根茎甘平无毒，具有清热滋补、补虚健胃、止血通经等功效，用于治疗病后体弱、神经衰弱、消化不良、月经不调、刀伤等症。其主要化学成分为生物碱。药理研究表明， 6-羟基硫双萍蓬草定碱具有较强的免疫抑制活性，在浓度为1 μ M时，对小鼠脾细胞的斑块形成细胞(plaque forming cell)有显著的抑制活性，而在此浓度下对小鼠脾细胞无细胞毒性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种操作简便、分离量大、样品损失少、产品含量高的快速制备6-羟基硫双萍蓬草定碱的方法。本发明的目的是通过以下技术方案实现的
一种6-羟基硫双萍蓬草定碱的制备方法，其特征在于包括以下步骤将干燥的萍蓬草根茎粉碎后用质量分数1-5%的酸性水溶液室温浸泡提取，浸提液过滤上强酸性阳离子交换树脂，待饱和吸附后，用碱性甲醇溶液洗脱，合并洗脱液，浓缩得浸膏，所得浸膏经高速逆流色谱法分离得到纯度98%以上的6-羟基硫双萍蓬草定碱。所述酸性水溶液为盐酸水溶液、硫酸水溶液或磷酸水溶液。所述强酸性阳离子交换树脂为732型阳离子交换树脂、DOOl型阳离子交换树脂、 HZ002型阳离子交换树脂或JK006型阳离子交换树脂。所述碱性甲醇溶液为70-85%甲醇水溶液(含氨水0. 4-0. 7%)。所述高速逆流色谱纯化以乙醚-二氯甲烷-磷酸盐缓冲液为溶剂系统，体积比为 (15-20) :(18-25) (5-10)，以上相为固定相，下相为流动相。本发明的优势在于本发明避免了使用大量有机溶剂，酸水溶液可循环使用，大大降低了提取成本，浸提液通过离子交换树脂，用碱性醇溶液洗脱，降低了有机溶剂的使用量和损耗；采用高速逆流色谱法分离纯化，分离效果好，产品无损失、纯度高。
具体实施例方式下面结合实施例详细说明本发明的技术方案，但保护范围不被此限制。实施例1:
将IOOOg萍蓬草根茎粉碎成粗粉投入提取罐中，加入12倍药材量的质量分数为m的盐酸水溶液，室温浸泡提取2小时，将浸提液过滤上HZ002型阳离子交换树脂柱，下柱液用于继续浸泡萍蓬草根茎粗粉，浸提液再上阳离子交换树脂柱，至浸出液生物碱呈阴性反应， 待阳离子交换树脂柱饱和吸附后，用6BV70%的甲醇水溶液(含氨水0. 6%)洗脱，收集洗脱液，减压浓缩成浸膏。采用乙醚-二氯甲烷-磷酸盐缓冲液溶剂系统分离纯化萍蓬草浸膏，体积比为 17. 5:23:6，以上相为固定相，下相为流动相，根据色谱图收集相应组分，调pH至8. 5，用二氯甲烷萃取，回收二氯甲烷，得到纯度98%以上的6-羟基硫双萍蓬草定碱。实施例2:
将IOOOg萍蓬草根茎粉碎成粗粉投入提取罐中，加入15倍药材量的质量分数为1%的磷酸水溶液，室温浸泡提取3小时，将浸提液过滤上DOOl型阳离子交换树脂柱，下柱液用于继续浸泡萍蓬草根茎粗粉，浸提液再上阳离子交换树脂柱，至浸出液生物碱呈阴性反应，待阳离子交换树脂柱饱和吸附后，用6BV75%的甲醇水溶液(含氨水0. 4%)洗脱，收集洗脱液， 减压浓缩成浸膏。采用乙醚-二氯甲烷-磷酸盐缓冲液溶剂系统分离纯化萍蓬草浸膏，体积比为 15:24:8，以上相为固定相，下相为流动相，根据色谱图收集相应组分，调pH至8.0，用二氯甲烷萃取，回收二氯甲烷，得到纯度98%以上的6-羟基硫双萍蓬草定碱。实施例3:
将IOOOg萍蓬草根茎粉碎成粗粉投入提取罐中，加入10倍药材量的质量分数为3%的硫酸水溶液，室温浸泡提取2. 5小时，将浸提液过滤上JK006型阳离子交换树脂柱，下柱液用于继续浸泡萍蓬草根茎粗粉，浸提液再上阳离子交换树脂柱，至浸出液生物碱呈阴性反应，待阳离子交换树脂柱饱和吸附后，用7BV80%的甲醇水溶液(含氨水0. 7%)洗脱，收集洗脱液，减压浓缩成浸膏。采用乙醚-二氯甲烷-磷酸盐缓冲液溶剂系统分离纯化萍蓬草浸膏，体积比为 20:18:5，以上相为固定相，下相为流动相，根据色谱图收集相应组分，调pH至9.0，用二氯甲烷萃取，回收二氯甲烷，得到纯度98%以上的6-羟基硫双萍蓬草定碱。实施例4:
将IOOOg萍蓬草根茎粉碎成粗粉投入提取罐中，加入8倍药材量的质量分数为4. 5%的盐酸水溶液，室温浸泡提取4小时，将浸提液过滤上732型阳离子交换树脂柱，下柱液用于继续浸泡萍蓬草根茎粗粉，浸提液再上阳离子交换树脂柱，至浸出液生物碱呈阴性反应，待阳离子交换树脂柱饱和吸附后，用5BV85%的甲醇水溶液(含氨水0. 5%)洗脱，收集洗脱液， 减压浓缩成浸膏。采用乙醚-二氯甲烷-磷酸盐缓冲液溶剂系统分离纯化萍蓬草浸膏，体积比为 16:25:10，以上相为固定相，下相为流动相，根据色谱图收集相应组分，调pH至8. 0，用二氯甲烷萃取，回收二氯甲烷，得到纯度98%以上的6-羟基硫双萍蓬草定碱。
权利要求
1.一种6-羟基硫双萍蓬草定碱的制备方法，其特征在于包括以下步骤将干燥的萍蓬草根茎粉碎后用质量分数1-5%的酸性水溶液室温浸泡提取，浸提液过滤上强酸性阳离子交换树脂，待饱和吸附后，用碱性甲醇溶液洗脱，合并洗脱液，浓缩得浸膏，所得浸膏经高速逆流色谱法分离得到纯度98%以上的6-羟基硫双萍蓬草定碱。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述酸性水溶液为盐酸水溶液、硫酸水溶液或磷酸水溶液。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述强酸性阳离子交换树脂为732型阳离子交换树脂、DOOl型阳离子交换树脂、HZ002型阳离子交换树脂或JK006型阳离子交换树脂。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述碱性甲醇溶液为70-85%甲醇水溶液(含氨水0. 4-0. 7%)。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述高速逆流色谱纯化以乙醚-二氯甲烷-磷酸盐缓冲液为溶剂系统，体积比为(15-20):( 18-25): (5-10)，以上相为固定相， 下相为流动相。
全文摘要
本发明属于天然药物提取技术领域，涉及一种6-羟基硫双萍蓬草定碱的制备方法，该方法通过酸水溶液浸提、离子树脂富集、有机溶剂萃取及高速逆流色谱分离纯化等步骤得到6-羟基硫双萍蓬草定碱。本方法毒性有机试剂用量小、制备量大，样品损失少，产品含量高。
文档编号C07D493/20GK102391281SQ201110303489
公开日2012年3月28日 申请日期2011年10月10日 优先权日2011年10月10日
发明者刘东锋, 郭琴 申请人:南京泽朗医药科技有限公司