专利名称：一种从菘蓝中提取青黛酮的方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，涉及一种从菘蓝中提取青黛酮的方法。
背景技术：
菘蓝，拉丁植物名..Isatis indigotica 7^rto/ e，别名茶蓝、板蓝根、大青叶。性味味苦，性寒。归经归肝；胃经。功能清热解毒，凉血消斑。主治用于温病发热，发斑， 风热感冒，咽喉肿痛。丹毒，流行性乙型脑炎、肝炎和腮腺炎等症。主要分布于内蒙古、陕西、 甘肃、河北、山东、江苏、浙江、安徽、贵州等地。青黛酮，暗紫色细针晶，吲哚类生物碱，化学号97457-31_3，分子式=C23H13N3O2,分子量363. 38。来源于菘蓝的茎叶，具有抗肿瘤活性。对小鼠Lewis肺癌及黑色素瘤细胞株 B16均有抑制作用。目前，对青黛酮的研究较少，经检索，尚未发现适宜于大量制备青黛酮的工业化方法的公开报道。
发明内容
针对上述情况，本发明的目的是提供一种从菘蓝中提取青黛酮的方法，可有效解决从菘蓝中提取青黛酮的问题。本发明的技术构思是这样的将菘蓝叶粉碎，经60-95%乙醇或甲醇溶液浸泡 l_2h，加热至80-95°C索氏提取提取2-10h，提取液减压回收至无醇味，加水分散，上柱分离，洗脱液浓缩，用乙醚萃取至萃余液中无生物碱反应，萃取液浓缩干燥得青黛酮粗品，用制备型高效液相色谱精制得到青黛酮对照品，纯度达98%以上。所述上柱分离可采用大孔树脂柱分离或者离子树脂柱分离。所述大孔树脂型号可选AB-8、DlOl、HP20、HZ841、LDA-10等，洗脱溶剂为乙醇溶液，先用10-20%乙醇溶液洗脱，再用60-80%乙醇溶液洗脱，收集60-80%的乙醇洗脱液。所述离子树脂为羧甲基型弱酸性阳离子树脂，用体积百分比为1-5%的氨水洗脱， 洗脱液即为生物碱活性成分。所述制备型高效液相色谱色谱条件为流动相为乙腈-水，流速20-50ml/min。本发明的有益效果是采用索氏提取，可实现连续提取，同时浓缩提取液，既节约溶剂，又提高了萃取率；通过大孔树脂或离子树脂分离，初步提高了产品的纯度；采用制备型高效液相色谱精制纯化，纯度高达98%以上，所得产品可作为对照品使用，同时可进行大量制备；本发明工艺稳定，可用于工业化生产。
具体实施例方式下面结合具体实施方式
对本发明进行进一步说明。实施例1
将菘蓝茎叶粉碎，称取lOOOg，加入相当于原料量3倍的95%甲醇溶液浸泡池，然后加热至84°C索氏提取6h，收集提取液取液减压回收甲醇至无醇味，加水溶解分散，离心，上清液上HZ841大孔吸附树脂柱，先用20%乙醇溶液冲柱至洗脱液流出无色，再用60%乙醇溶液洗脱，收集60%乙醇洗脱液，减压浓缩，用乙醚反复萃取6次，萃取液浓缩干燥得青黛酮粗品。将青黛酮粗品用甲醇溶解，微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，色谱柱C18，流动相乙腈-水(68:32)，流速25ml/min，以紫外检测器检测指导产品收集，连续进样，收集含有青黛酮的高纯度流分，浓缩干燥得产品3aiig，含量为98. 1%。实施例2:
将菘蓝茎叶粉碎，称取lOOOg，加入相当于原料量5倍的75%乙醇溶液浸泡池，然后加热至93°C索氏提取8h，收集提取液取液减压回收乙醇至无醇味，加水溶解分散，离心，上清液上羧甲基型弱酸性阳离子树脂柱，先用水冲柱至洗脱液流出无色，再用体积百分比为5% 的氨水洗脱，收集氨水洗脱液，减压浓缩，用乙醚反复萃取5次，萃取液浓缩干燥得青黛酮粗品。将青黛酮粗品用甲醇溶解，微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，色谱柱C18，流动相乙腈-水(60:40)，流速20ml/min，以紫外检测器检测指导产品收集，连续进样，收集含有青黛酮的高纯度流分，浓缩干燥得产品^mg,含量为98. 5%。实施例3:
将菘蓝茎叶粉碎，称取lOOOg，加入相当于原料量4倍的60%甲醇溶液浸泡lh，然后加热至85°C索氏提取10h，收集提取液取液减压回收甲醇至无醇味，加水溶解分散，离心，上清液上DlOl大孔吸附树脂柱，先用10%乙醇溶液冲柱至洗脱液流出无色，再用80%乙醇溶液洗脱，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩，用乙醚反复萃取3次，萃取液浓缩干燥得青黛酮粗品。将青黛酮粗品用甲醇溶解，微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，色谱柱C18，流动相乙腈-水(62:38)，流速50ml/min，以紫外检测器检测指导产品收集，连续进样，收集含有青黛酮的高纯度流分，浓缩干燥得产品45mg，含量为98. 4%。实施例4:
将菘蓝茎叶粉碎，称取lOOOg，加入相当于原料量3倍的80%乙醇溶液浸泡lh，然后加热至80°C索氏提取2h，收集提取液取液减压回收乙醇至无醇味，加水溶解分散，离心，上清液上羧甲基型弱酸性阳离子树脂柱，先用水冲柱至洗脱液流出无色，再用体积百分比为1% 的氨水洗脱，收集氨水洗脱液，减压浓缩，用乙醚反复萃取4次，萃取液浓缩干燥得青黛酮粗品。将青黛酮粗品用甲醇溶解，微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，色谱柱C18，流动相乙腈-水(70:30)，流速40ml/min，以紫外检测器检测指导产品收集，连续进样，收集含有青黛酮的高纯度流分，浓缩干燥得产品62mg，含量为98. 1。实施例5:
将菘蓝茎叶粉碎，称取lOOOg，加入相当于原料量6倍的70%甲醇溶液浸泡池，然后加热至95°C索氏提取5h，收集提取液取液减压回收甲醇至无醇味，加水溶解分散，离心，上清液上LDA-10大孔吸附树脂柱，先用15%乙醇溶液冲柱至洗脱液流出无色，再用70%乙醇溶液洗脱，收集70%乙醇洗脱液，减压浓缩，用乙醚反复萃取5次，萃取液浓缩干燥得青黛酮粗品。将青黛酮粗品用甲醇溶解，微孔滤膜滤过，经制备高效液相色谱分离，色谱柱C18，流动相乙腈-水(65:35)，流速35ml/min，以紫外检测器检测指导产品收集，连续进样，收集含有青黛酮的高纯度流分，浓缩干燥得产品27mg，含量为98. 8%。
权利要求
1.一种从菘蓝中提取青黛酮的方法，其特征在于包括以下步骤将菘蓝叶粉碎，经 60-95%乙醇或甲醇溶液浸泡1-池，加热至80-95°C索氏提取提取2_10h，提取液减压回收至无醇味，加水分散，上柱分离，洗脱液浓缩，用乙醚萃取至萃余液中无生物碱反应，萃取液浓缩干燥得青黛酮粗品，用制备型高效液相色谱精制得到青黛酮对照品，纯度达98%以上。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述上柱分离可采用大孔树脂柱分离或者离子树脂柱分离。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述大孔树脂型号可选AB-8、D101、HP20、 LDA-10等，洗脱溶剂为乙醇溶液，先用10-20%乙醇溶液洗脱，再用60-80%乙醇溶液洗脱，收集60-80%的乙醇洗脱液。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述离子树脂为羧甲基型弱酸性阳离子树脂，用体积百分比为1-5%的氨水洗脱，洗脱液即为生物碱活性成分。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述制备型高效液相色谱色谱条件为流动相为乙腈-水，流速20-50ml/min。
全文摘要
本发明提供一种从菘蓝中提取青黛酮的方法，包括以下步骤将菘蓝叶粉碎，加入适量甲醇或乙醇溶液索氏提取，提取液浓缩至无醇味，上大孔吸附树脂柱或阳离子树脂柱初步分离，洗脱液浓缩，乙醚萃取，萃取液浓缩干燥得青黛酮粗品，再用制备高效液相分离得到青黛酮。本发明工艺简单，得率高，产品质量好、纯度高。
文档编号C07D487/04GK102351863SQ20111030360
公开日2012年2月15日 申请日期2011年10月10日 优先权日2011年10月10日
发明者刘东锋, 吴艳波 申请人:南京泽朗医药科技有限公司