专利名称：一种从厚朴中制备高纯度厚朴酚和和厚朴酚的方法
技术领域：
本发明涉及一种从厚朴中制备高纯度厚朴酚和和厚朴酚的方法。
背景技术：
中药厚朴为木兰科落叶乔木植物(Magnolia officinalis Rehd. et Wils)、或凹叶厚朴(officinalis Rehd. Et Wils. Var. biloba Rehd. et Wils)的干皮、根皮及枝皮。厚朴主要分布于我国的湖北、陕西、甘肃、四川、贵州、浙江、湖南、广西等地，其中湖北五峰、鹤峰和恩施3个种源厚朴质量明显优于其他种源，厚朴酚类总量均值达7. 51 %，厚朴酚和和厚朴酚的含量均高于中国药典规定的2. 0%。目前，恩施州的厚朴种植面积达30万亩以上， 仅厚朴干皮就达到6万多吨，资源十分丰富。厚朴载于《别录》、《本草纲目》，苦燥辛散，长于行气、燥湿、消积，为消除胀满之要药，主要应用于治疗湿阻中焦、气滞不利所致的脘闷腹胀、腹痛或呕逆等证。国内已经用厚朴总提取物开发平胃散、藿香正气片。厚朴酚、和厚朴酚是厚朴中的主要成分它们具有类似的化学结构。随着厚朴中各有效成份不同药效的不断发现和深入应用，混合的厚朴酚已经不能满足市场的需求，经过分离的单一的酚类化合物单体的价格是混合物的8 10倍以上，从厚朴中分离纯化厚朴酚和和厚朴酚具有明显的经济效益，尤其是厚朴应用于抗肿瘤药物研制上有了新进展，厚朴的需求量不断地增加，具有广阔的发展前景。
发明内容
本发明要解决的问题是提供一种从厚朴中制备高纯度厚朴酚和和厚朴酚的方法。本发明一种从厚朴中制备高纯度厚朴酚和和厚朴酚的方法，其特征在于包括如下操作步骤(a)厚朴总酚的制备将厚朴干皮粉碎，用乙醇溶液提取3遍，过滤，合并滤液；将上述的乙醇提取液于 60°C以下进行真空浓缩，得粗提物浸膏；粗提物浸膏用60 90°C石油醚加热溶解，进行降温结晶；将晶体于60°C真空干燥，得黄色的厚朴总酚；(b)中压硅胶柱层析纯化厚朴总酚将300 400目的硅胶活化后湿法装入中压色谱柱中，然后用加压装置进行压缩， 使压缩后的硅胶柱在正常流速下的工作压力为5 20bar，石油醚-乙酸乙酯-甲醇混合体系作为流动相，用2 3BV流动相平衡层析柱，290 四4歷紫外检测器在线监测，色谱工作站进行数据处理，使色谱柱的基线平稳，然后将上述的厚朴总酚用流动相溶解后湿法上样， 用石油醚-乙酸乙酯-甲醇体系进行等梯度洗脱，用紫外检测器于四0 处在线监测，并用色谱工作站对图谱进行分析处理，分步收集色谱峰对应的流出液；流出液用TLC检测，合并具有相同成份的流出液，回收溶剂，干燥得纯度为90%以上的厚朴酚及98%以上的和厚朴酚；低纯度的厚朴酚和和厚朴酚回收，重新利用硅胶柱层析纯化；(c)甲醇重结晶纯化90%的厚朴酚
将90%以上的厚朴酚用甲醇重结晶，分离晶体和结晶母液，真空干燥得纯度为 98%以上的厚朴酚；结晶母液干燥，回收溶剂，低纯度的厚朴酚和和厚朴酚回收，重新利用硅胶柱层析纯化。本发明一种从厚朴中制备高纯度厚朴酚和和厚朴酚的方法，其特征在于包括如下操作步骤(a)厚朴总酚的制备将厚朴干皮粉碎，用乙醇溶液提取3遍，过滤，合并滤液；将上述的乙醇提取液于60°C以下进行真空浓缩，得粗提物浸膏；粗提物浸膏用60 90°C石油醚加热溶解，进行降温结晶；将晶体于60°C真空干燥，得黄色的厚朴总酚；所述的厚朴干皮粉碎粒径为10 目 20目；所述的乙醇提取溶液为浓度60% 85%的乙醇，用量为固液比厚朴干粉乙醇1 10 20，提取温度为50 70°C，提取时间为2 4h，提取次数为3遍；所述的结晶溶剂为60 90°C石油醚，60 90°C石油醚用量为固液比为粗提物浸膏60 90°C石油醚 1 8 10，加热溶解，室温结晶2 汕。(b)中压硅胶柱层析纯化厚朴总酚将300 400目的硅胶活化，活化温度为105 110°C，活化时间为1 浊；将
活化好的硅胶放入容器中，并加入适量的石油醚，顺着固定方向搅拌，待硅胶中没有气泡时，湿法装入中压色谱柱中；硅胶柱经压缩后在正常流速下的工作压力为5 20bar ；硅胶柱以石油醚-乙酸乙酯-甲醇混合体系作为流动相，其配比为体积比10 0.5 1 5 0. 5 0.5;装柱后，硅胶柱用2 3BV流动相平衡层析柱，290 ^4nm紫外检测器在线监测，色谱工作站进行数据处理，使色谱柱的基线平稳；硅胶柱的上样量为1 4g粗品/500g硅胶，用石油醚-乙酸乙酯-甲醇体系为洗脱剂进行等梯度洗脱，用紫外检测器于 290 ^Mnm处在线监测，并用色谱工作站对图谱进行分析处理，分步收集色谱峰对应的流出液；硅胶柱的洗脱速度为2 4BV/h，用量为3 5BV可以将厚朴酚和和厚朴酚全部洗脱出来；流出液用TLC检测，合并具有相同成份的流出液，回收溶剂，干燥得纯度为90%以上的厚朴酚及98%以上的和厚朴酚。低纯度的厚朴酚和和厚朴酚回收，重新利用硅胶柱层析纯化。(c)甲醇重结晶纯化90%的厚朴酚将90%以上的厚朴酚用甲醇重结晶，甲醇浓度为80% 85%，溶解温度为45 600C ；甲醇溶液的用量为2 5mL/g ；结晶温度为0 4°C，结晶时间为Mh ；分离晶体和结晶母液，用0 4°C甲醇溶液洗涤晶体，真空干燥得纯度为98%以上的厚朴酚；结晶母液干燥，回收溶剂，低纯度的厚朴酚和和厚朴酚回收，重新利用硅胶柱层析纯化。本发明涉及一种从厚朴中制备高纯度厚朴酚和和厚朴酚的方法，采用乙醇和水的混合溶剂提取，同时利用石油醚重结晶工艺得到纯度大于95%的厚朴总酚，再通过中压硅胶层析技术耦联甲醇重结晶工艺可以制备纯度为98%的厚朴酚和和厚朴酚单体。本发明涉及一种从厚朴中制备高纯度厚朴酚和和厚朴酚的方法；a、厚朴总酚的制备(1)厚朴干皮的粉碎药材的粉碎程度越小，越有利于有效成分的浸出，提取时间相对缩短，提取效率高。但是粒径越小，耗费的工时越长，而且在大生产中容易堵塞过滤装置，过滤困难，导致生产效率降低。因此，粒径粗细应当适宜，一般在10目 20目即可；(2)提取条件将厚朴干皮粉碎，用10 20倍的60% 85%的乙醇在50 70°C的温度下提取 2 4h，提取次数为3遍，过滤，合并滤液；(3)浓缩将上述的乙醇提取液于60°C以下进行真空浓缩，得粗提物浸膏；(4)结晶将上述的粗提物浸膏用60 90°C石油醚于60 80°C温度下溶解，料液比为8 10倍，然后冷却至室温进行结晶2 池；(5)干燥将晶体于60°C真空干燥，得黄色的粗品，HPLC测定厚朴总酚的含量为95%以上， 提取率达90%。所得的总酚收率为3. 0^-4.0 ^b、中压硅胶柱层析纯化厚朴总酚(1)硅胶的活化称取300 400目的硅胶于105 110°C活化1 2h。(2)湿法装柱将活化好的硅胶放入容器中，并加入适量的石油醚，顺着固定方向搅拌，待硅胶中没有气泡时，湿法装入中压色谱柱中(50*600mm)。然后用加压装置进行压缩，使压缩后的硅胶柱在正常流速下的工作压力为5 20bar，石油醚-乙酸乙酯-甲醇混合体系 (10 0. 5 1 5 0. 5 0.5，ν/ν)作为流动相，用2 3BV流动相平衡层析柱，290 294nm紫外检测器在线监测，色谱工作站进行数据处理，使色谱柱的基线平稳。(3)湿法上样和洗脱将上述的厚朴总酚用流动相溶解后湿法上样，上样量为1 4g粗品/500g硅胶。 然后用石油醚-乙酸乙酯-甲醇(v/v)为洗脱剂进行等梯度洗脱，用紫外检测器于290 294nm处在线监测，并用色谱工作站对图谱进行分析处理。分步收集色谱峰对应的流出液。 柱层析的洗脱速度为2 4BV/h，流动相3 5BV可以将厚朴酚和和厚朴酚全部洗脱出来。 流出液用TLC检测，合并具有相同成份的流出液，回收溶剂，干燥得纯度为90%以上的厚朴酚及98%以上的和厚朴酚。低纯度的厚朴酚和和厚朴酚回收，重新利用硅胶柱层析纯化。C、甲醇重结晶纯化90%的厚朴酚通过硅胶柱层析分离后的厚朴酚的纯度为90%以上，为了能够提高厚朴酚的纯度，需要进一步对厚朴酚样品进行重结晶纯化，以期达到98%以上的纯度。将90 %以上的厚朴酚用80 % 85 %的甲醇在45 60 V溶解，加入的甲醇溶液的量为2 5mL/g，然后把溶解液放入0 4°C冰箱中冷藏Mh，分离晶体和结晶母液，用0 40C甲醇溶液进行洗涤，真空干燥得纯度为98%以上的厚朴酚。结晶母液干燥，回收溶剂，低纯度的厚朴酚和和厚朴酚回收，重新利用硅胶柱层析纯化。综上，本方法中厚朴总酚的含量为95%以上，提取率达90%，所得的总酚收率为 3. 0% 4. 0%。通过中压硅胶层析柱耦合重结晶工艺可以制备98%纯度的厚朴酚以及和厚朴酚单体，高纯度厚朴酚的收率为1.0%，和厚朴酚的收率为0.8%左右，甲醇重结晶厚朴酚的收率为80% 85%。
d、检测本发明中主要使用TLC法定性和HPLC法定量分析检测厚朴酚和和厚朴酚。TLC定性方法称取IOmg厚朴酚和和厚朴酚混合物，用甲醇溶解并定容至10mL，作为供试溶液； 另取厚朴酚、和厚朴酚对照品配制成lmg/mL的甲醇溶液，作为对照品溶液；分别取上述的供试溶液和对照品溶液5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以展层剂展开，取出，晾干，然后喷以香草醛硫酸溶液，在100°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色的斑点。HPLC 定量法色谱柱Kromasil 100-5C18(250mm*4. 6mm)；流动相乙腈-水(75 35)；流速lmL/min；检测波长294nm；柱温30°C。标准曲线的绘制用甲醇配制厚朴酚和和厚朴酚浓度均约为0. 2mg/mL的标准混合溶液。进样量分别为0、4、8、10、12、16、20μ L，用HPLC进行分析，以厚朴酚和和厚朴酚对照品质量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归。厚朴酚的回归方程:y= 1241261. 99x_104234. 57，R2 = 1. 00 ；和厚朴酚的回归方程:y= 1553096. 8χ-26011, R2 = 1· 00。其中，χ-厚朴酚或和厚朴酚的质量，μ g ；y-厚朴酚或和厚朴酚的色谱峰面积。样品溶液经0. 45 μ m微孔过滤器过滤，定量进样10 μ L。本发明与现有技术比较，采用乙醇和水的混合溶剂提取，同时利用石油醚重结晶工艺得到纯度大于95%的厚朴总酚，再通过中压硅胶层析技术耦联甲醇重结晶工艺可以制备纯度为98%的厚朴酚及98%的和厚朴酚单体。该工艺生产成本低，适合工业化生产。
图1厚朴酚和和厚朴酚化学结构式。图2厚朴酚甲醇溶液紫外扫描图。图3中压硅胶柱层析纯化厚朴总酚色谱图。图4高纯度厚朴酚和和厚朴酚制备工艺流程图。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但发明的实施方式不限于此。实施例1(1)厚朴总酚的制备将厚朴干皮用粉碎机粉碎，过10 20目筛子，得厚朴原料。称取厚朴原料100g，于三口平底烧瓶中，加入IOOOmL 60%乙醇溶液，连接好冷凝管，磁力搅拌提取池，同时用电接点温度计控制温度为50士 1°C，提取完毕，过滤，收集滤液，残渣按上述步骤再提取2遍， 合并滤液。将乙醇提取液于60°C以下进行真空浓缩，得粗提物浸膏5. lg。将粗提物浸膏转移至干净的烧杯中，用48. SmL的60 90°C石油醚于60°C下溶解，密封，然后冷却至室温进行结晶池。分离晶体和结晶母液，将晶体于60°C真空干燥，得黄色的厚朴总酚粗品3. Ig, HPLC检测，厚朴总酚含量为90. 1% (其中厚朴酚纯度48. 1 %，和厚朴酚纯度为47. 0% )。(2)中压硅胶柱层析纯化厚朴总酚取300 400目硅胶500g于105 °C活化lh，将活化好的硅胶放入容器中，并加入适量的石油醚，顺着固定方向搅拌，待硅胶中没有气泡时，湿法装入中压色谱柱中 (50*600mm)。然后用加压装置进行压缩，使压缩后的硅胶柱在正常流速下的工作压力为 5bar，石油醚-乙酸乙酯-甲醇混合体系(10 0. 5 1，ν/ν)作为流动相，用2BV流动相平衡层析柱，290nm紫外检测器在线监测，色谱工作站进行数据处理，使色谱柱的基线平稳。取厚朴总酚粗品1. 00g，用流动相溶解后湿法上样。用石油醚-乙酸乙酯-甲醇混合体系(10 0.5 l，v/v)作为流动相进行等梯度洗脱，用紫外检测器于^K)nm处在线监测，并用色谱工作站对图谱进行分析处理。分步收集色谱峰对应的流出液。柱层析的洗脱速度为2BV/h，流动相3BV可以将厚朴酚和和厚朴酚全部洗脱出来。用TLC法检测流出液， 合并具有相同成份的流出液，回收溶剂，干燥得纯度为90%以上的厚朴酚0. 40g以及98% 以上的和厚朴酚0. 26go低纯度的厚朴酚和和厚朴酚回收，重新利用硅胶柱层析纯化。(3)甲醇重结晶纯化90%的厚朴酚取上述90%以上的厚朴酚0. 2g放入IOmL烧杯中，用80%甲醇OjmL于45°C溶解，密封，然后把溶解液放入0 4°C冰箱中冷藏Mh，分离晶体和结晶母液，用0 4°C的 80%甲醇0. 2mL洗涤，真空干燥得纯度为98%以上的厚朴酚0. 16g。结晶母液干燥，回收溶剂，低纯度的厚朴酚和和厚朴酚回收，重新利用硅胶柱层析纯化。实施例2(1)厚朴总酚的制备将厚朴干皮用粉碎机粉碎，过10 20目筛子，得厚朴原料。称取厚朴原料100g，于三口平底烧瓶中，加入1500mL 70%乙醇溶液，连接好冷凝管，磁力搅拌提取池，同时用电接点温度计控制温度为60士 1°C，提取完毕，过滤，收集滤液，残渣按上述步骤再提取2遍， 合并滤液。将乙醇提取液于60°C以下进行真空浓缩，得粗提物浸膏5. 4g。将粗提物浸膏转移至干净的烧杯中，用57. 6mL的60 90°C石油醚于70°C下溶解，密封，然后冷却至室温进行结晶池。分离晶体和结晶母液，将晶体于60°C真空干燥，得黄色的厚朴总酚粗品3. 4g， HPLC检测，厚朴总酚含量为90. 2% (其中厚朴酚纯度47. 6%，和厚朴酚纯度为47. 4% )。(2)中压硅胶柱层析纯化厚朴总酚取300 400目硅胶500g于110°C活化lh，将活化好的硅胶放入容器中，并加入适量的石油醚，顺着固定方向搅拌，待硅胶中没有气泡时，湿法装入中压色谱柱中 (50*600mm)。然后用加压装置进行压缩，使压缩后的硅胶柱在正常流速下的工作压力为 lObar，石油醚-乙酸乙酯-甲醇混合体系(5 0.5 1，ν/ν)作为流动相，用3BV流动相平衡层析柱，294nm紫外检测器在线监测，色谱工作站进行数据处理，使色谱柱的基线平稳。取厚朴总酚粗品2. 00g，用流动相溶解后湿法上样。用石油醚-乙酸乙酯-甲醇混合体系(5 0.5 1，ν/ν)作为流动相进行等梯度洗脱，用紫外检测器于^Mnm处在线监测，并用色谱工作站对图谱进行分析处理。分步收集色谱峰对应的流出液。柱层析的洗脱速度为2. 5BV/h，流动相4BV可以将厚朴酚和和厚朴酚全部洗脱出来。用TLC法检测流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶剂，干燥得纯度为90%以上的厚朴酚0.81g以及 98%以上的和厚朴酚0. 54go低纯度的厚朴酚和和厚朴酚回收，重新利用硅胶柱层析纯化。(3)甲醇重结晶纯化90%的厚朴酚取上述90%以上的厚朴酚0. 5g放入IOmL烧杯中，用85%甲醇1. 5mL于50°C溶解，密封，然后把溶解液放入0 4°C冰箱中冷藏Mh，分离晶体和结晶母液，用0 4°C的 85%甲醇0. 5mL洗涤，真空干燥得纯度为98%以上的厚朴酚0. 41g。结晶母液干燥，回收溶剂，低纯度的厚朴酚和和厚朴酚回收，重新利用硅胶柱层析纯化。实施例3(1)厚朴总酚的制备将厚朴干皮用粉碎机粉碎，过10 20目筛子，得厚朴原料。称取厚朴原料100g，于三口平底烧瓶中，加入2000mL 80%乙醇溶液，连接好冷凝管，磁力搅拌提取4h，同时用电接点温度计控制温度为70士 1°C，提取完毕，过滤，收集滤液，残渣按上述步骤再提取2遍， 合并滤液。将乙醇提取液于60°C以下进行真空浓缩，得粗提物浸膏5. 5g。将粗提物浸膏转移至干净的烧杯中，用65. OmL的60 90°C石油醚于80°C下溶解，密封，然后冷却至室温进行结晶池。分离晶体和结晶母液，将晶体于60°C真空干燥，得黄色的厚朴总酚粗品3. 7g， HPLC检测，厚朴总酚含量为90. 1% (其中厚朴酚纯度48.0%，和厚朴酚纯度为47. 1% )0(2)中压硅胶柱层析纯化厚朴总酚取300 400目硅胶500g于105 °C活化2h，将活化好的硅胶放入容器中，并加入适量的石油醚，顺着固定方向搅拌，待硅胶中没有气泡时，湿法装入中压色谱柱中 (50*600mm)。然后用加压装置进行压缩，使压缩后的硅胶柱在正常流速下的工作压力为 15bar，石油醚-乙酸乙酯-甲醇混合体系(5 0. 5 0. 5，ν/ν)作为流动相，用2BV流动相平衡层析柱，294nm紫外检测器在线监测，色谱工作站进行数据处理，使色谱柱的基线平稳。取厚朴总酚粗品3. 00g，用流动相溶解后湿法上样。用石油醚-乙酸乙酯-甲醇混合体系(5 0.5 0.5，ν/ν)作为流动相进行等梯度洗脱，用紫外检测器于^Mnm处在线监测，并用色谱工作站对图谱进行分析处理。分步收集色谱峰对应的流出液。柱层析的洗脱速度为3BV/h，流动相4. 5BV可以将厚朴酚和和厚朴酚全部洗脱出来。用TLC法检测流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶剂，干燥得纯度为90%以上的厚朴酚1. 23g以及 98%以上的和厚朴酚0. 79g。低纯度的厚朴酚和和厚朴酚回收，重新利用硅胶柱层析纯化。(3)甲醇重结晶纯化90%的厚朴酚取上述90%以上的厚朴酚1. Og放入IOmL烧杯中，用80%甲醇4. OmL于55°C溶解，密封，然后把溶解液放入0 4°C冰箱中冷藏Mh，分离晶体和结晶母液，用0 4°C的 80%甲醇LOmL洗涤，真空干燥得纯度为98%以上的厚朴酚0. 82g。结晶母液干燥，回收溶剂，低纯度的厚朴酚和和厚朴酚回收，重新利用硅胶柱层析纯化。实施例4(1)厚朴总酚的制备将厚朴干皮用粉碎机粉碎，过10 20目筛子，得厚朴原料。称取厚朴原料100g，于三口平底烧瓶中，加入ISOOmL 85%乙醇溶液，连接好冷凝管，磁力搅拌提取池，同时用电接点温度计控制温度为70士 1°C，提取完毕，过滤，收集滤液，残渣按上述步骤再提取2遍， 合并滤液。将乙醇提取液于60°C以下进行真空浓缩，得粗提物浸膏5. 3g。将粗提物浸膏转移至干净的烧杯中，用63. OmL的60 90°C石油醚于80°C下溶解，密封，然后冷却至室温进行结晶池。分离晶体和结晶母液，将晶体于60°C真空干燥，得黄色的厚朴总酚粗品3. 6g， HPLC检测，厚朴总酚含量为90.3% (其中厚朴酚纯度48. 1%，和厚朴酚纯度为47. 3% )0(2)中压硅胶柱层析纯化厚朴总酚取300 400目硅胶500g于110°C活化2h，将活化好的硅胶放入容器中，并加入适量的石油醚，顺着固定方向搅拌，待硅胶中没有气泡时，湿法装入中压色谱柱中 (50*600mm)。然后用加压装置进行压缩，使压缩后的硅胶柱在正常流速下的工作压力为 20bar，石油醚-乙酸乙酯-甲醇混合体系(7 0.5 1，ν/ν)作为流动相，用3BV流动相平衡层析柱，290nm紫外检测器在线监测，色谱工作站进行数据处理，使色谱柱的基线平稳。取厚朴总酚粗品4. 00g，用流动相溶解后湿法上样。用石油醚-乙酸乙酯-甲醇混合体系(7 0.5 1，ν/ν)作为流动相进行等梯度洗脱，用紫外检测器于^K)nm处在线监测，并用色谱工作站对图谱进行分析处理。分步收集色谱峰对应的流出液。柱层析的洗脱速度为4BV/h，流动相5BV可以将厚朴酚和和厚朴酚全部洗脱出来。用TLC法检测流出液， 合并具有相同成份的流出液，回收溶剂，干燥得纯度为90%以上的厚朴酚1. 58g以及98% 以上的和厚朴酚1. 05g。低纯度的厚朴酚和和厚朴酚回收，重新利用硅胶柱层析纯化。(3)甲醇重结晶纯化90%的厚朴酚取上述90%以上的厚朴酚1. 5g放入IOmL烧杯中，用85%甲醇6. OmL于60°C溶解，密封，然后把溶解液放入0 4°C冰箱中冷藏Mh，分离晶体和结晶母液，用0 4°C的 85%甲醇1. 5mL洗涤，真空干燥得纯度为98%以上的厚朴酚1. 23g。结晶母液干燥，回收溶剂，低纯度的厚朴酚和和厚朴酚回收，重新利用硅胶柱层析纯化。
权利要求
1.一种从厚朴中制备高纯度厚朴酚和和厚朴酚的方法，其特征在于包括如下操作步骤(a)厚朴总酚的制备将厚朴干皮粉碎，用乙醇溶液提取3遍，过滤，合并滤液；将上述的乙醇提取液于60°C 以下进行真空浓缩，得粗提物浸膏；粗提物浸膏用60 90°C石油醚加热溶解，进行降温结晶；将晶体于60°C真空干燥，得黄色的厚朴总酚；(b)中压硅胶柱层析纯化厚朴总酚将300 400目的硅胶活化后湿法装入中压色谱柱中，然后用加压装置进行压缩，使压缩后的硅胶柱在正常流速下的工作压力为5 20bar，石油醚-乙酸乙酯-甲醇混合体系作为流动相，用2 3BV流动相平衡层析柱，290 四4歷紫外检测器在线监测，色谱工作站进行数据处理，使色谱柱的基线平稳，然后将上述的厚朴总酚用流动相溶解后湿法上样，用石油醚-乙酸乙酯-甲醇体系进行等梯度洗脱，用紫外检测器于290 处在线监测，并用色谱工作站对图谱进行分析处理，分步收集色谱峰对应的流出液；流出液用TLC检测，合并具有相同成份的流出液，回收溶剂，干燥得纯度为90%以上的厚朴酚及98%以上的和厚朴酚；低纯度的厚朴酚和和厚朴酚回收，重新利用硅胶柱层析纯化；(c)甲醇重结晶纯化90%的厚朴酚将90%以上的厚朴酚用甲醇重结晶，分离晶体和结晶母液，真空干燥得纯度为98%以上的厚朴酚；结晶母液干燥，回收溶剂，低纯度的厚朴酚和和厚朴酚回收，重新利用硅胶柱层析纯化。
2.按照权利要求1所述的一种从厚朴中制备高纯度厚朴酚和和厚朴酚的方法，其特征在于所述的步骤(a)中所述的厚朴干皮粉碎粒径为10目 20目；所述的乙醇提取溶液为浓度60% 85%的乙醇，用量为固液比厚朴干粉乙醇 1 10 20，提取温度为50 70°C，提取时间为2 4h，提取次数为3遍；所述的结晶溶剂为60 90°C石油醚，60 90°C石油醚用量为固液比为粗提物浸膏 60 90°C石油醚1 8 10，加热溶解，室温结晶2 汕。
3.按照权利要求1所述的一种从厚朴中制备高纯度厚朴酚和和厚朴酚的方法，其特征在于所述的步骤(b)中将300 400目的硅胶活化，活化温度为105 110°C，活化时间为1 池；将活化好的硅胶放入容器中，并加入适量的石油醚，顺着固定方向搅拌，待硅胶中没有气泡时，湿法装入中压色谱柱中；硅胶柱经压缩后在正常流速下的工作压力为5 20bar ；硅胶柱以石油醚-乙酸乙酯-甲醇混合体系作为流动相，其配比为体积比10 0.5 1 5 0.5 0.5 ； 装柱后，硅胶柱用2 3BV流动相平衡层析柱，290 紫外检测器在线监测，色谱工作站进行数据处理，使色谱柱的基线平稳；硅胶柱的上样量为1 4g粗品/500g硅胶，用石油醚-乙酸乙酯-甲醇体系为洗脱剂进行等梯度洗脱，用紫外检测器于四0 ^Mnm处在线监测，并用色谱工作站对图谱进行分析处理，分步收集色谱峰对应的流出液；硅胶柱的洗脱速度为2 4BV/h，用量为3 5BV可以将厚朴酚和和厚朴酚全部洗脱出来；流出液用 TLC检测，合并具有相同成份的流出液，回收溶剂，干燥得纯度为90%以上的厚朴酚及98% 以上的和厚朴酚。低纯度的厚朴酚和和厚朴酚回收，重新利用硅胶柱层析纯化。
4.按照权利要求1所述的一种从厚朴中制备高纯度厚朴酚和和厚朴酚的方法，其特征在于所述的步骤(c)中将90%以上的厚朴酚用甲醇重结晶，甲醇浓度为80% 85%，溶解温度为45 60°C; 甲醇溶液的用量为2 5mL/g;结晶温度为0 4°C，结晶时间为Mh;分离晶体和结晶母液， 用0 4°C甲醇溶液洗涤晶体，真空干燥得纯度为98%以上的厚朴酚；结晶母液干燥，回收溶剂，低纯度的厚朴酚和和厚朴酚回收，重新利用硅胶柱层析纯化。
全文摘要
本发明涉及一种从厚朴中制备高纯度厚朴酚和和厚朴酚的方法，包括如下操作步骤(a)厚朴总酚的制备将厚朴粉碎，用乙醇溶液提取，将提取液于浓缩；(b)中压硅胶柱层析纯化厚朴总酚将硅胶湿法装柱，将厚朴总酚用流动相溶解后湿法上样，用石油醚-乙酸乙酯-甲醇体系进行等梯度洗脱，合并具有相同成份的流出液，回收溶剂，干燥得纯度为90％以上的厚朴酚及98％以上的和厚朴酚；低纯度的厚朴酚和和厚朴酚回收，重新利用硅胶柱层析纯化；(c)甲醇重结晶纯化90％的厚朴酚用甲醇结晶。本发明与现有技术比较，采用乙醇和水的混合溶剂提取，可以制备纯度为98％的厚朴酚及98％的和厚朴酚单体。该工艺生产成本低，适合工业化生产。
文档编号C07C37/82GK102351659SQ20111032803
公开日2012年2月15日 申请日期2011年10月22日 优先权日2011年10月22日
发明者向极钎, 吴昊, 张亮, 李亚杰, 杨永康, 殷红清, 程新华, 郭光耀, 龙澜 申请人:恩施清江生物工程有限公司