专利名称：三聚氰胺半抗原及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种三聚氰胺半抗原及其制备方法和应用。
背景技术：
三聚氰胺学名1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺，是一种重要的氮杂环有机化工原料，是尿素的后加工品。主要用途是与醛缩合，生成三聚氰胺-甲醛树脂，生产塑料，部分亚洲国家也用来制造化肥。由于三聚氰胺含氮量为66.6%，是蛋白质平均含量的4.16倍，牛奶的151倍，奶粉的23倍。每IOOg牛奶中添加0.1g三聚氰胺，就能提高0.4%蛋白质。食品工业历来通用的蛋白质测试方法为凯氏定氮法，通过测定总氮来估算蛋白质含量。这种方法只能知道氮的总量，不能识别氮的来源和氮源的种类，正是由于食品和饲料工业蛋白质含量测定方法存在缺陷，给不法商人留下制造伪劣食品的机会，他们将三聚氰胺作为食品添加剂，以冒充食品 中的蛋 白质，因此三聚氰胺也被叫做“蛋白精”。2008年9月，中国爆发的三鹿婴幼儿问题奶粉事件，导致食用受污染奶粉的婴幼儿患肾结石病症，其原因是奶粉中含有三聚氰胺。国家质检总局紧急在全国开展婴幼儿奶粉三聚氰胺含量专项检查，对其余109家乳品企业进行了排查，共检验了这些企业的491批次产品。检查结果显示，有22家婴幼儿奶粉生产企业的69批次产品检出了含量不同的三聚氰胺。此次爆发的事件涉及面之广，危害之大，给人们日常生活造成了巨大的负面影响。我国卫生部等五部门联合发布公告，规定了我国婴儿配方食品中三聚氰胺限量值为lmg/kg，其他食品中三聚氰胺的限量值为 2.5mg/kg。
目前用来检测三聚氰胺的最常用方法是仪器法，包括气相色谱-质谱法、液相色谱-串联质谱法、超高相液相色谱-电喷雾串联质谱法、反相高效液相色谱法、高效液相色谱-四级杆质谱联用法等。仪器法检测成本高，仪器价格昂贵，前处理方法繁琐，检测时间长，并且需要专业技术人员才可操作仪器，不适合现场监控和大量样品的筛查。与之相比，酶联免疫方法具有高精确度和灵敏度、检测成本低、较低的操作技术要求、短暂的检测时间、较大的检测样本量等特点，能够更好地满足我国畜禽养殖户、屠宰场、食品企业、政府职能监管部门等开展检测工作。发明内容
本发明的目的是提供一种三聚氰胺半抗原及其制备方法
技术领域：
本发明提供的三聚氰胺半抗原的化合物，分子结构式为式I所示:
权利要求
1.一种化合物，其分子结构式为式I所示:
2.一种制备权利要求1中式I所示的化合物的方法，包括如下步骤:将三聚氰酸二酰胺与琥珀酸酐混合，加入吡啶在室温下搅拌12_24h，除去溶剂后在乙醇-水中重结晶得三聚氰酸胺的半琥珀酸酯，即为式I所示的化合物。
3.一种化合物，是由权利要求1所述的化合物与载体蛋白偶联得到的，其特征在于分子结构式为式II所示:
4.如权利要求3所述的化合物，其特征是其制备方法包括如下步骤: 取三聚氰胺半抗原溶解于的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，得到溶液I ;将碳化二亚胺(EDC)用水充分溶解后，加入溶液I中，室温下搅拌12-24h，得到溶液II ;取偶联的载体蛋白使之充分溶解在磷酸盐缓冲液(PBS)中，并将溶液II滴加到蛋白溶液中，并与室温下搅拌12-24h，得到溶液III ;用PBS溶液于4°C透析，得到三聚氰胺抗原，分装，并低温保存备用。
5.权利要求3所述的化合物，其特征在于所述载体蛋白为牛血清白蛋白、鼠血清蛋白、兔血清蛋白、甲状腺蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或人血清白蛋白。
6.一种三聚氰胺单克隆抗体，是由权利要求3所述化合物免疫动物制备得到。
7.权利要求1、3或5所述化合物制备三聚氰胺酶联免疫试剂盒。
8.一种检测动物性食品中三聚氰胺残留的检测方法，其特征在于利用权利要求7所述试剂盒进 行检测。
全文摘要
本发明提供一种三聚氰胺半抗原及其制备方法和应用。本发明所提供的三聚氰胺半抗原合成方法将三聚氰酸二酰胺与琥珀酸酐混合，加入吡啶在室温下搅拌12-24h，除去溶剂后在乙醇-水中重结晶得三聚氰酸胺的半琥珀酸酯，即为三聚氰胺半抗原。实验结果表明，本发明合成的三聚氰胺半抗原的方法简单，所得到的三聚氰胺半抗原产率和纯度都较高，利用本发明合成的三聚氰胺半抗原制备得到的抗原对实验动物进行免疫，得到特异性好，灵敏度高的单克隆抗体，用该抗体建立的酶联免疫试剂盒使用方便、价格便宜、携带便利、检测方法高效、准确、简便、可同时检测大批量的样本，适于动物源性食品中三聚氰胺残留的现场监控和大量样本的筛查。
文档编号C07K14/77GK103102319SQ20111035677
公开日2013年5月15日 申请日期2011年11月11日 优先权日2011年11月11日
发明者冯才伟, 万宇平, 李勇, 扶胜, 冯才茂, 崔海峰, 聂雯莹, 彭鸽, 王姣, 崔彦虎 申请人:北京勤邦生物技术有限公司