专利名称：从油橄榄叶中提取分离高含量橄榄苦甙的方法
技术领域：
本发明涉及本发明涉及从油橄榄叶中提取分离高含量橄榄苦甙的方法。
技术背景
油橄榄属木犀科木犀榄属常绿乔木，是世界著名的木本油料兼果用树种，栽培品种有较高食用价值，含丰富优质食用植物油——油橄榄油，为著名亚热带果树和重要经济林木。主要分布在欧洲地中海沿岸国家和美国加州地区，希腊、意大利、突尼斯、西班牙为集中产地。我国西部和西北地区甘肃、陕西、四川、重庆、福建、广西、广东、湖南等省市有引种栽培。全国现有油橄榄超过1600万株。甘肃省陇南市武都区是目前全国最大油橄榄基地。
橄榄叶中主要含有裂环烯醚萜及其苷、黄酮及其苷、双黄酮及其苷、低分子单宁等成分，裂环烯醚萜类为主要活性成分。橄榄叶提取物中主要成分为环烯醚萜类苦涩物质，其活性最高的为橄榄苦甙。
橄榄苦甙是一种双分子结构酚类和黄酮类物质，具有天然的抗氧化、抗肿瘤、延缓衰老、增强心血管功能、治疗慢性前列腺炎、增强免疫力、调解内分泌系统、护肝、抗炎等重要的保健功能，同时还有降血脂、降血糠的药理作用，广泛用于食品、化妆和生物制药等领域。
高含量的橄榄苦甙主要用于护肤品，可以保护皮肤细胞不受紫外线的伤害，有效维持肌肤柔嫩与弹性，达到扶肤、嫩肤的功效。Microherb高含量橄榄苦甙80%专门为护肤品设计，其有效成分高，颜色浅，非常适合化妆品配方设计。
橄榄叶提取技术主要包括有机溶剂提取技术、超临界C02萃取技术、超声波萃取技术及微波萃取技术等。有机溶剂提取具有杂质含量高、溶剂消耗大、成本高、污染大等缺点。超临界C02萃取具有提取含量高、无污染等优点，但投入大、成本高。超声波及微波萃取虽然具有节能、高效等优点，但在生产上难以实现大规模化应用。
目前文献报道或专利公开的橄榄苦甙提取分离技术较多，但橄榄苦甙含量达到 80%以上的分离纯化技术少有报道。杨寅珂申请的专利《一种橄榄叶提取物提取方法》(CN 1583052A)和孙浩渊申请的专利《橄榄叶提取物的提取方法及工艺》(CN 1827127A)，两种专利所分离的产品橄榄苦甙低，且都添加了外源性物质；王成章、高彩霞申请的专利《富含高纯度橄榄苦甙的油橄榄叶提取的制备方法》(CN 101003557A)，该专利制备的产品，含量高于50 %，但远低于80 % ；姚自奇等申请的专利《油橄榄叶提取物生产工艺》(CN101049328A)， 该专利分离的产品，含量为2% 6% ；姚自奇等申请的专利《油橄榄叶提取物及制备方法》 (CN 101084945A)，虽然含量最高的达95%，但产品收率低、生产周期长，需静置对 36小时；另外，王成章等《引种阿斯油橄榄叶中橄榄苦苷提取分离及结构鉴定》中采用多次有机溶剂萃取、硅胶柱层析以及HPLC制备色谱，分离出了含量为95%的橄榄苦甙，但该法尽限于少量样品制备。美国专利US5714150及US98101563所分离的样品中橄榄苦甙含量都比较低，不超过40%。发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一条收率高，绿色环保的一种从油橄榄叶中提取分离高含量橄榄苦甙的方法。
从油橄榄叶中提取分离高含量橄榄苦甙的方法，具体步骤如下
(1)将油橄榄叶切碎，为切至1 2cm ；
(2)将切碎的油橄榄叶加入纯化水或乙醇水溶液，低温提取；所述中低温提取温度为20 70°C;所述提取溶剂为纯化水，体积为12 16倍；所述提取溶剂或为40 80% 乙醇，体积为10 12倍；
(3)将提取后的溶液浓缩后或直接通过由两种大孔吸附树脂串联的层析柱；或将提取后的溶液浓缩后或直接进行一次吸附，再将解析液浓缩后进行二次吸附；
(4)用纯化水将树脂清洗；所述用纯化水将树脂清洗，体积为树脂柱体积的8 20 倍；
(5)用5% 80%脂肪醇洗脱树脂，当流出液脂肪醇浓度达5%时，开始收集流出液；所述脂肪醇为C1-C3伯醇和仲醇，优选乙醇，所述脂肪醇洗脱体积为1-5倍柱体积；
(6)低温浓缩洗脱液；所述低温为30-60°C，所述浓缩液浓度为18 25% ；
(7)浓缩液冷冻或喷雾干燥；即可得到橄榄苦甙。
有益效果
本发明中化合物收率比现有技术高，本发明与现有技术相比，其优势在于
1.采用低温提取技术，大大降低了提取所需的能耗，减少了橄榄苦甙的氧化，提高了收率，同时也确保了产品的质量；
2.采用串联的柱层析或二次层析的分离方式，无需使用有毒溶剂(如乙酸乙酯、 氯仿、石油醚等)，确保了产品的质量安全，大大简化了工艺流程，操作简单方便，同时生产成本低，利于工业化生产；
3.按照本发明提供的生产工艺生产出来的橄榄苦甙含量经HPLC检测可达到 80-90%，可以满足现代功能食品、保健品等领域的市场需求，具有很好的市场优势。
具体实施方式
为了使本发明的技术手段、创作特征、工作流程、使用方法达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
实施例1
将油橄榄叶原料切成1 2cm ；置于14倍于其重量的纯化水中，60°C提取，过滤， 滤液以0. 8倍柱体积/小时的流速通过型号为HP-20的大孔树脂，吸附完毕，纯净水赶 5mins，关闭15mins。然后用10倍于柱体积的纯化水清洗树脂；再将树脂LSA-8或LSA-10 串联，用2倍于柱体积的30%乙醇以1倍柱体积/小时的流速解析，待流出液乙醇浓度为 5 %时开始收集解析液，低于60°C浓缩至浓度为20 %，浓缩液采用冷冻干燥的方法进行干燥，得到油橄榄叶提取物。经HPLC检测橄榄苦甙含量达85.。
实施例2
将油橄榄叶原料切成1 2cm;置于12倍于其重量的40%乙醇中，50°C提取，过滤，低于60°C浓缩至无醇味，浓缩液以0. 8倍柱体积/小时的流速通过型号为HP-20的大孔树脂，吸附完毕，纯净水赶5mins，关闭15mins。然后用12倍于柱体积的纯化水清洗树脂； 再将树脂LSA-8或LSA-10串联，用3倍于柱体积的40%乙醇以1倍柱体积/小时的流速解析，待流出液乙醇浓度为5%时开始收集解析液，低于60°C浓缩至浓度为18%，浓缩液采用喷雾干燥的方法进行干燥，得到油橄榄叶提取物。经HPLC检测橄榄苦甙含量达82. 19%。
实施例3
将油橄榄叶原料切成1 2cm;置于10倍于其重量的60%乙醇中，45°C提取，过滤，低于60°C浓缩至无醇味，浓缩液以0. 8倍柱体积/小时的流速通过型号为HP-20的大孔树脂，吸附完毕，纯净水赶5mins，关闭15mins。然后用10倍于柱体积的纯化水清洗树脂； 再用2. 5倍于柱体积的25%乙醇以1倍柱体积/小时的流速解析，待流出液乙醇浓度为5% 时开始收集解析液，低于60°C浓缩至无醇味；然后再以0. 8倍柱体积/小时的流速通过型号为XAD-16的大孔树脂，吸附完毕，纯净水赶5mins，关闭15mins。然后用10倍于柱体积的纯化水清洗树脂；再用2倍于柱体积的60%乙醇以1倍柱体积/小时的流速解析，待流出液乙醇浓度为5%时开始收集解析液，解析液低于60°C浓缩至浓度为22%，浓缩液采用冷冻干燥的方法进行干燥，得到油橄榄叶提取物。经HPLC检测橄榄苦甙含量达88. 72%。
实施例4
将油橄榄叶原料切成1 2cm ；置于15倍于其重量的纯化水中，55°C提取，过滤， 滤液以0. 8倍柱体积/小时的流速通过型号为XAD-16的大孔树脂，吸附完毕，纯净水赶 5mins,关闭15mins。然后用12倍于柱体积的纯化水清洗树脂；再用3倍于柱体积的80%乙醇以1倍柱体积/小时的流速解析，待流出液乙醇浓度为5%时开始收集解析液，低于60°C 浓缩至无醇味；然后再以0. 8倍柱体积/小时的流速通过型号为HP-20的大孔树脂，吸附完毕，纯净水赶5mins，关闭15mins。然后用10倍于柱体积的纯化水清洗树脂；再用2倍于柱体积的60%乙醇以1倍柱体积/小时的流速解析，待流出液乙醇浓度为5%时开始收集解析液，低于60°C浓缩至浓度为20 %，浓缩液采用喷雾干燥的方法进行干燥，得到油橄榄叶提取物。经HPLC检测橄榄苦甙含量达84. 60 %。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
权利要求
1.从油橄榄叶中提取分离高含量橄榄苦甙的方法，其特征在于，具体步骤如下(1)将油橄榄叶切碎；(2)将切碎的油橄榄叶加入纯化水或乙醇水溶液，低温提取；(3)将提取后的溶液浓缩后或直接通过由两种大孔吸附树脂串联的层析柱；或将提取后的溶液浓缩后或直接进行一次吸附，再将解析液浓缩后进行二次吸附；(4)用纯化水将树脂清洗；(5)用5% 80%脂肪醇洗脱树脂，当流出液脂肪醇浓度达5%时，开始收集流出液；(6)低温浓缩洗脱液；(7)浓缩液冷冻或喷雾干燥。
2.根据权利要求1所述的从油橄榄叶中提取分离高含量橄榄苦甙的方法，其特征在于所述步骤(1)中将油橄榄叶切碎，为切至1 2cm。
3.根据权利要求1所述的从油橄榄叶中提取分离高含量橄榄苦甙的方法，其特征在于所述步骤⑵中中低温提取温度为20 70°C;所述提取溶剂为纯化水，体积为12 16 倍；所述提取溶剂或为40 80%乙醇，体积为10 12倍。
4.根据权利要求1所述的从油橄榄叶中提取分离高含量橄榄苦甙的方法，其特征在于所述步骤(4)中用纯化水将树脂清洗，体积为树脂柱体积的8 20倍。
5.根据权利要求1所述的从油橄榄叶中提取分离高含量橄榄苦甙的方法，其特征在于所述步骤(5)中脂肪醇为C1-C3伯醇和仲醇，优选乙醇，所述脂肪醇洗脱体积为1-5倍柱体积。
6.根据权利要求1所述的从油橄榄叶中提取分离高含量橄榄苦甙的方法，其特征在于所述步骤(6)中低温为30-60°C，所述浓缩液浓度为18 25%。
全文摘要
本发明公开了从油橄榄叶中提取分离高含量橄榄苦甙的方法，包括以下步骤将橄榄叶切碎、低温提取、过滤、浓缩或直接层析、低温浓缩、干燥，最后得到含量大于80％的橄榄苦甙产品。本发明以一定浓度的乙醇或水为提取溶剂低温提取，利用树脂串联或二次吸附层析技术，提取分离纯化得到橄榄苦甙大于80％的产品。本发明具有节约能耗、生产周期短、经济环保、操作简单等优点，非常适合于大规模化工业生产。
文档编号C07H17/04GK102532217SQ20111043918
公开日2012年7月4日 申请日期2011年12月23日 优先权日2011年12月23日
发明者王刻铭, 黄勇 申请人:王刻铭