抗神经毡蛋白抗体及使用方法

专利名称：抗神经毡蛋白抗体及使用方法
技术领域：
本发明涉及抗神经毡蛋白抗体及其使用方法。
背景技术：
神经毡蛋白I(NRPl)是一种有助于神经和血管系统发育的多功能受体。NRPl最初描述为结合脑信号蛋白3A配体的受体，与丛蛋白共同受体一起起作用来调节轴突导向(He and Tessier-Lavigne, Cell (1997) 90:739-51)。后来显示了 NRPl 还结合血管内皮生长因子(VEGF)配体家族的成员来介导血管发育(Soker et al., Cell (1998)92:735-45; Kawasaki et al.，Development (1999) 126:4895-902)。另外，数项研究提出 NRPl 通过调节血管和/或肿瘤细胞功能在肿瘤生物学中的作用(Bielenberg et al.，Exp CellRes (2006)312:584-93)。Pan et al., J Biol Chem(2007) 282:24049-56 显示了一种结合 NRPl 的单克隆抗体在体外降低VEGF介导的内皮细胞迁移(还可参见PCT公开文本N0.W02007/056470)。在体内阻断VEGF与NRPl的相互作用降低血管发生和血管重构。该抗NRPl抗体作为单一药剂减缓肿瘤生长；提出这是由于抗NRPl抗体介导的对经由一种VEGF依赖性过程的血管萌芽的降低。该抗NRPl抗体增强用抗VEGF抗体进行的VEGF阻断的抗血管发生和抗肿瘤效果。数据提示通过用抗NRPl降低血管重构， 脉管有可能保留更加未成熟的表型。因为认为未成熟脉管是更加VEGF依赖性的，所以抗NRPl处理的肿瘤中的血管可变得对抗VEGF疗法更加易感，如此在组合这两种疗法时在肿瘤模型中导致组合功效(Pan et al.，CancerCell (2007) 11:53-67)。鉴于NRPl在血管发生中的作用，需要其它的检测NRPl的存在的工具。发明概述本发明提供抗NRPl抗体及其使用方法。在一个实施方案中，本发明提供一种结合神经毡蛋白-1(NRPl)的分离的抗体，其中该抗体包含:(a)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQID N0:3 ;(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:4 ;和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQID N0:5。在某些实施方案中，该抗体，进一步包含:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ IDN0:8 ;(b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:9 ;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:10。还提供一种分离的结合神经毡蛋白-1(NRPl)的抗体，其中该抗体包含:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:8 ; (b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:9 -M(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 10。在另一个实施方案中，本发明提供一种结合神经毡蛋白-1(NRPl)的分离的抗体，其中该抗体包含:(a) VH序列，其与氨基酸序列SEQ ID NO: 2具有至少95%序列同一性；(b)VL序列，其与氨基酸序列SEQ ID N0:7具有至少95%序列同一性；或(c) (a)中的VH序列和(b)中的VL序列。在一些实施方案中，该抗体包含VH序列SEQ ID N0:2。在某些实施方案中，该抗体包含VL序列SEQ ID NO: 7。还提供一种结合神经毡蛋白-1 (NRPl)的分离的抗体，其中该抗体包含VH序列SEQ ID NO: 2和VL序列SEQ ID NO: 7。在某些实施方案中，本发明的抗体为IgGl抗体。在一些实施方案中，该抗体为结合神经毡蛋白的抗体片段，例如缺少Fe部分的抗体、F(ab’)2、Fab、或Fv结构。另一方面，本发明提供包含任何本发明抗体的免疫偶联物。本发明还提供编码任何本发明抗NRPl抗体的分离的核酸。在一个实施方案中，提供包含该核酸的载体。在一个实施方案中，提供包含该载体或包含该核酸的宿主细胞。在一个实施方案中，该宿主细胞为真核的。在一个实施方案中，该宿主细胞为CHO细胞。在一个实施方案中，提供一种生成抗NRPl抗体的方法,其中该方法包括在适合于表达编码该抗体的核酸的条件下培养该宿主细胞从而生成抗体。在一些实施方案中，该方法进一步包括分离通过该方法生成的抗体。一方面，提供一种检测生物学样品中NRPl的存在的方法，该方法包括在允许抗体结合NRPl的条件下使生物学样品与本发明抗体接触并检测结合的抗体的存在，例如通过检测抗体和NRPl之间是否形成复合物来进行。如此，本文中提供本发明的抗体，其用于检测生物学样品中NRPl的存在。在一些实施方案中，检测NRPl的存在通过免疫组织化学来进行。附图简述

图1A-D显示使用单克隆抗NRPl抗体7130进行的免疫组织化学的结果。(1A:经全长人NRPl转染的HEK-293细胞(阳性对照)；1B:经空载体转染的HEK-293细胞(阴性对照)；1C:来自肾的组织切片；1 D:来自胎盘的组织切片)。图2A-C显示使用单克隆抗NRPl抗体7130进行的免疫组织化学的结果。(2A:来自结肠直肠癌(CRC)患者的组织切片；2B:来自乳腺癌(BC)患者的组织切片；2C:来自非小细胞肺癌(NSCLC)患者的组织切片)。发明详述1.定义出于本文中的目的，“受体人框架”指包含自人免疫球蛋白框架或如下文定义的人共有框架衍生的轻链可变域(VL)框架或重链可变域(VH)框架的氨基酸序列的框架。自人免疫球蛋白框架或人共有框架“衍生”的受体人框架可以包含其相同的氨基酸序列，或者它可以含有氨基酸序列变化。在一些实施方案中，氨基酸变化的数目是10或更少、9或更少、8或更少、7或更少、6或更少、5或更少、4或更少、3或更少、或2或更少。在一些实施方案中，VL受体人框架与VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列在序列上相同。“亲和力”指分子(例如抗体)的单一结合位点与其结合配偶体(例如抗原)之间全部非共价相互作用总和的强度。除非另有指示，如本文中使用的，“结合亲和力”指反映结合对的成员(例如抗体和抗原)之间1:1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可以用解离常数(Kd)来表述。亲和力可以通过本领域知道的常用方法来测量，包括本文中所描述的方法。下文描述了用于测量结合亲和力的具体的说明性和例示性的实施方案。
“亲和力成熟的”抗体指在一个或多个高变区(HVR)中具有一处或多处改变的抗体，与不拥有此类改变的亲本抗体相比，此类改变导致该抗体对抗原的亲和力改善。术语“抗神经毡蛋白抗体”、“抗NRPl抗体”和“结合NRPl的抗体”指能够以足够亲和力结合NRP1，使得该抗体可作为诊断剂和/或治疗剂用于靶向NRPl的抗体。在一个实施方案中，根据例如通过放射免疫测定法(RIA)的测量，抗NRPl抗体结合无关的、非NRPl的蛋白质的程度小于该抗体对NRPl的结合的约10%。在某些实施方案中，结合NRPl的抗体具有彡 ΙμΜ、彡 ΙΟΟηΜ、彡 ΙΟηΜ、彡 InM、彡 0.1nM、彡 0.0lnM、或彡 0.0OlnM(例如 1(Γ8Μ 或更少，例如10_8M到10_13M，例如10_9M到I(T13M)的解离常数(Kd)。在某些实施方案中，抗NRPl抗体结合在来自不同物种的NRPl中保守的NRPl表位。本文中的术语“抗体”以最广义使用，并且涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、和抗体片段，只要它们展现出期望的抗原结合活性。“抗体片段”指与完整抗体不同的分子，其包含完整抗体中结合完整抗体结合的抗原的部分。抗体片段的例子包括但不限于Fv、Fab、Fab’、Fab’ _SH、F(ab’ )2 ;双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scFv);和由抗体片段形成的多特异性抗体。与参照抗体“结合相同表位的抗体”指在竞争测定法中将参照抗体对其抗原的结合阻断50%或更多的抗体，且相反，参照抗体在竞争测定法中将该抗体对其抗原的结合阻断50%或更多。本文中提供了例示性的竞争测定法。术语“嵌合”抗体指其中的重和/或轻链的一部分自特定的来源或物种衍生，而重和/或轻链的剩余部分自不同来源或物种衍生的抗体。抗体的“类”指其重链拥有的恒定域或恒定区的类型。抗体有5大类:IgA、IgD、IgE、IgGjP IgM，并且 这些中的几种可以进一步分成亚类(同种型)，例如，IgG1, IgG2, IgG3、IgG4 JgA1、和IgA2。与不同类免疫球蛋白对应的重链恒定域分别称作α、δ、ε、Y、和μ。在用于本文时，术语“细胞毒剂”指抑制或阻止细胞功能和/或引起细胞死亡或破坏的物质。细胞毒剂包括但不限于:放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y9°、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素);化学治疗剂或药物(例如甲氨蝶呤(methotrexate)、阿霉素(adriamycin)、长春花生物碱类(vinca alkaloids)(长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、依托泊苷(etoposide))、多柔比星(doxorubicin)、美法仑(melphalan)、丝裂霉素(mitomycin)C、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、柔红霉素(daunorubicin)或其它嵌入剂)；生长抑制剂；酶及其片段，诸如溶核酶；抗生素；毒素，诸如小分子毒素或者细菌、真菌、植物或动物起源的酶活性毒素，包括其片段和/或变体；及下文公开的各种抗肿瘤或抗癌剂。“效应器功能”指那些可归于抗体Fe区且随抗体同种型而变化的生物学活性。抗体效应器功能的例子包括:Clq结合和补体依赖性细胞毒性(CDC) ；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC);吞噬作用；细胞表面受体(例如B细胞受体)下调；和B细胞活化。药剂(例如药物配制剂)的“有效量”指在必需的剂量和时段上有效实现期望的治疗或预防结果的量。本文中的术语“Fe区”用于定义免疫球蛋白重链中至少含有恒定区一部分的C端区。该术语包括天然序列Fe区和变体Fe区。在一个实施方案中，人IgG重链Fe区自Cys226，或自Pro230延伸至重链的羧基端。然而，Fe区的C端赖氨酸(Lys447)可以存在或不存在。除非本文中另有规定，Fe区或恒定区中的氨基酸残基的编号方式依照EU编号系统，又称作EU 索弓 I,如记载于 Kabat 等，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991。“框架”或“FR”指除高变区(HVR)残基外的可变域残基。一般地，可变域的FR由4个？1 域组成疋1 1、？1 2、？1 3、和？1 4。因而，HVR和FR序列在VH (或VL)中一般以如下的顺序出现:FR1-H1 (LI) -FR2-H2 (L2) -FR3-H3 (L3) -FR4。术语“全长抗体”、“完整抗体”、和“全抗体”在本文中可互换使用，指与天然抗体结构具有基本上类似的结构或者具有含有如本文中所限定的Fe区的重链的抗体。术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”、和“宿主细胞培养物”可互换使用，并且指已经导入外源核酸的细胞，包括此类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“经转化的细胞”，其包括原代的经转化的细胞及自其衍生的后代而不考虑传代的次数。后代在核酸内容物上可以与亲本细胞不完全相同，而是可以含有突变。本文中包括具有与在初始转化细胞中筛选或选择的相同功能或生物学活性的突变体后代。“人抗体”指拥有与由人或人细胞生成的或利用人抗体全集或其它人抗体编码序列自非人来源衍生的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列的抗体。人抗体的此定义明确排除包含非人抗原结合残基 的人源化抗体。“人共有框架”指代表人免疫球蛋白VL或VH框架序列选集中最常存在的氨基酸残基的框架。通常，人免疫球蛋白VL或VH序列选集来自可变域序列亚组。通常，序列亚组是如 Kabat 等，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第五版，NIHPublication91-3242, Bethesda MD (1991),第1-3卷中的亚组。在一个实施方案中，对于VL，亚组是如Kabat等，见上文中的亚组κ I。在一个实施方案中，对于VH，亚组是如Kabat等，见上文中的亚组III。“人源化”抗体指包含来自非人HVR的氨基酸残基和来自人FR的氨基酸残基的嵌合抗体。在某些实施方案中，人源化抗体会包含至少一个，通常两个基本上整个可变域，其中所有或基本上所有HVR (例如，CDR)对应于非人抗体的那些，且所有或基本上所有FR对应于人抗体的那些。任选地，人源化抗体可以至少包含自人抗体衍生的抗体恒定区的一部分。抗体，例如非人抗体的“人源化形式”指已经经历人源化的抗体。在用于本文时，术语“高变区”或“HVR”指抗体可变域中在序列上高变的和/或形成结构上限定的环(“高变环”)的每个区。一般地，天然的4链抗体包含6个HVR ;三个在VH中(Hl、Η2、Η3)，且三个在VL中(L1、L2、L3)。HVR —般包含来自高变环和/或来自“互补决定区”(CDR)的氨基酸残基，后一种是最高序列变异性的和/或牵涉抗原识别。如本文中使用的，HVR区包含任何数目位于位置24-36 (对于Ll)、46-56 (对于L2)、89_97 (对于L3)、26-35B (对于Hl)、47-65 (对于H2)、和93-102 (对于H3)内的残基。因此，HVR包括先前所述位置中的残基:A)26-32(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(Η1)、53-55(H2)、和 96-101 (H3)(Chothia 和 Lesk, J.Mol.Biol.196:901-917(1987))；B)L1 的 24-34、L2 的 50-56、L3 的 89-97、Hl 的 31-35B、H2 的 50-65、和 H3 的95-102 (Kabat 等，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5 版PublicHealth Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD(1991))。C)除了 VH中的⑶Rl外，⑶R—般包含形成高变环的氨基酸残基。⑶R还包含“特异性决定残基”，或“SDR”，其是接触抗原的残基。SDR包含在称作缩短的-⑶R，或a-⑶R的⑶R区内。例示性的 a-CDR(a-CDR-Ll、a_CDR_L2、a_CDR_L3、a-CDR-Hl、a_CDR-H2、和 a_CDR-H3)存在于 LI 的氨基酸残基 31-34、L2 的 50-55、L3 的 89-96、Hl 的 31_35B、H2 的 50-58、和 H3的 95-102 (见 Almagro 和 Fransson, Front.Biosc1.13:1619-1633 (2008))。除非另有指示，可变域中的HVR残基和其它残基(例如，FR残基)在本文中依照Kabat等，见上文编号。“免疫缀合物”指与一种或多种异源分子，包括但不限于细胞毒剂缀合的抗体。“个体”或“受试者”是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于驯养的动物(例如，牛、绵羊、猫、犬、和马)、灵长类(例如，人和非人灵长类诸如猴)、家兔、和啮齿类(例如，小鼠和大鼠)。在某些实施方案中，个体或受试者是人。“分离的”抗体指已经与其天然环境的组分分开的抗体。在一些实施方案中，抗体纯化至大于95%或99%的纯度，如通过例如电泳(例如，SDS-PAGE、等电聚焦(IEF)、毛细管电泳)或层析(例如，离子交换或反相HPLC)测定的。关于用于评估抗体纯度的方法的综述，见例如 Flatman 等,J.Chromatogr.B848:79-87 (2007)。“分离的”核酸指已经与其天然环境的组分分开的核酸分子。分离的核酸包括通常含有核酸分子的细胞中含有的核酸分子，但是核酸分子在染色体外或在与其天然染色体位置不同的染色体位置处存在。“编码抗NRPl抗体 的分离的核酸”指编码抗体重和轻链(或其片段)的一种或多种核酸分子，包括单一载体或不同载体中的此类核酸分子，和存在于宿主细胞中的一个或多个位置的此类核酸分子。在用于本文时，术语“单克隆抗体”指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即构成群体的各个抗体是相同的和/或结合相同表位，除了例如含有天然存在的突变或在单克隆抗体制备物的生成期间发生的可能的变体抗体外，此类变体一般以极小量存在。与通常包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物不同，单克隆抗体制备物的每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。如此，修饰语“单克隆”指示抗体自一群基本上同质的抗体获得的特性，而不应解释为要求通过任何特定方法来生成抗体。例如，可以通过多种技术来生成要依照本发明使用的单克隆抗体，包括但不限于杂交瘤方法、重组DNA方法、噬菌体展示方法、和利用含有所有或部分人免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法，本文中描述了用于生成单克隆抗体的此类方法和其它例示性方法。“裸抗体”指未与异源模块(例如细胞毒性模块)或放射性标记物缀合的抗体。裸抗体可以存在于药物配制剂中。“天然抗体”指具有不同结构的天然存在的免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗体是约150，000道尔顿的异四聚糖蛋白，由二硫化物键合的两条相同轻链和两条相同重链构成。从N至C端，每条重链具有一个可变区(VH)，又称作可变重域或重链可变域，接着是三个恒定域(CH1、CH2、和CH3)。类似地，从N至C端，每条轻链具有一个可变区(VL)，又称作可变轻域或轻链可变域，接着是一个恒定轻(CL)域。根据其恒定域氨基酸序列，抗体轻链可归入两种类型中的一种，称作卡帕(κ)和拉姆达(λ)。
术语“包装插页”用于指治疗产品的商业包装中通常包含的用法说明书，其含有关于涉及此类治疗产品应用的适应症、用法、剂量、施用、联合疗法、禁忌症和/或警告的信肩、O关于参照多肽序列的“百分比(%)氨基酸序列同一性”定义为比对序列并在必要时引入缺口以获取最大百分比序列同一性后，且不将任何保守替代视为序列同一性的一部分时，候选序列中与参照多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分率。为测定百分比氨基酸序列同一性目的的对比可以以本领域技术范围内的多种方式进行，例如使用公众可得到的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign (DNASTAR)软件。本领域技术人员可以决定用于比对序列的合适参数，包括对所比较序列全长获得最大对比所需的任何算法。然而，为了本发明的目的，％氨基酸序列同一性值是使用序列比较计算机程序ALIGN-2产生的。ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech, Inc.编写，并且源代码已经连同用户文档一起提交给美国版权局(US Copyright Office, WashingtonD.C.，20559)，其中其以美国版权注册号TXU510087注册。公众自Genentech, Inc.，SouthSan Francisco, California可获得ALIGN-2程序,或者可以从源代码编译。ALIGN2程序应当编译成在UNIX操作系统，包括数码UNIX V4.0D上使用。所有序列比较参数由ALIGN-2程序设定且不变。在采用ALIGN-2来比较氨基酸序列的情况中，给定氨基酸序列A相对于(to)、与(with)、或针对(against)给定氨基酸序列B的％氨基酸序列同一性(或者可表述为具有或包含相对于、与、或针对给定氨基酸序列B的某一％氨基酸序列同一性的给定氨基酸序列A)如下计算:分数X/Y 乘 100其中X是由序列比对程序ALIGN-2在该程序的A和B比对中评分为相同匹配的氨基酸残基数，且其中Y是B中的氨基酸残基总数。应当领会，若氨基酸序列A的长度与氨基酸序列B的长度不相等，则A相对于B的％氨基酸序列同一性将不等于B相对于A的％氨基酸序列同一性。除非另有 明确说明，本文中所使用的所有％氨基酸序列同一性值都是依照上一段所述，使用ALIGN-2计算机程序获得的。术语“药物配制剂”指处于如下的形式，使得容许其中含有的活性成分的生物学活性是有效的，且不含对会接受配制剂施用的受试者具有不可接受的毒性的别的组分的制剂。“药学可接受载体”指药物配制剂中与活性成分不同的，且对受试者无毒的成分。药学可接受载体包括但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂、或防腐剂。如本文中使用的，术语“神经毡蛋白(neuropilin) -1”或“NRP1”指来自任何脊椎动物来源，包括哺乳类诸如灵长类(例如人)和啮齿类(例如小鼠和大鼠)的任何天然NRPl，除非另外指明。该术语涵盖“全长”、未加工NRPl以及源自细胞中加工的任何形式NRP1。该术语还涵盖NRPl的天然发生变体，例如剪接变体或等位变体。神经毡蛋白的基本结构包含五个结构域:三个胞外结构域(ala2、blb2和C)、一个跨膜结构域、和一个胞质结构域。ala2结构域与补体成分Clr和Cls(CUB)同源，其一般含有四个半胱氨酸残基，形成两个二硫桥。blb2结构域与凝结因子V和VIII同源。c结构域的中央部分称为MAM，因为它与跨膜肽酶(meprin)、A5和受体酪氨酸磷酸酶μ蛋白同源。ala2和blb2结构域负责配体结合，而C结构域对于同型二聚化或异型二聚化是至关重要的。Gu et al.(2002) J.Biol.Chem.277:18069-76;He and Tessier-Lavigne(1997)Cell90:739-51。术语“可变区”或“可变域”指抗体重或轻链中牵涉抗体结合抗原的域。天然抗体的重链和轻链可变域(分别为VH和VL) —般具有类似的结构,其中每个域包含4个保守的框架区(FR)和3个高变区(HVR) ο (见例如Kindt等KubyImmunology,第6版，W.H.Freeman and C0.,第91页(2007))。单个VH或VL域可以足以赋予抗原结合特异性。此外，可以分别使用来自结合抗原的抗体的VH或VL域筛选互补VL或VH域的文库来分离结合特定抗原的抗体。见例如，Portolano 等,J.1mmunol.150:880-887 (1993) ; Clarkson等，Nature352:624-628 (1991)。在用于本文时，术语“载体”指能够增殖与其连接的另一种核酸的核酸分子。该术语包括作为自身复制型核酸结构的载体及整合入接受其导入的宿主细胞的基因组中的载体。某些载体能够指导与其可操作连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。I1.组合物和方法本发明提供了结合NRPl的新颖抗体。本发明的抗体可用于例如检测(例如在生物学样品中)NRPl的存在。A.例示性抗NRPl抗体本发明提供可用于例如诊断应用的抗NRPl抗体。在一个实施方案中，本发明提供一种抗NRPl抗体，其具有下述重链和轻链序列:重链:QLVEESGGGLVTPGGTLTLTCTASGFTISNYHMSffVRQAPGKGLEfflGIIYAVSAATffSACDRlCDR2TffVKGRFTI SKTLTTVDLKMTSLTAADTATYFCARVRAPGDSTYYDLffGPGTLVTVSSGQCDR3PKAPSVFPLAPCC⑶TPSSTVTLGCLVKGYLPEPVTVTWNSGTLTNGVRTFPSVRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHPATNTKVDKTVAPSTCSKPTCPPPELLGGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQDDPEVQFTffYINNEQVRTARPPLREQQFNSTIRVVSTLPIAHQDffLRGKEFKCKVHNKALPAPIEKTISKARGQPLEPKVYTMGPPREELSSRSVSLTCMINGFYPSDISVEWEKNGKAEDNYKTTPAVLDSDGSYFLYSKLSVPTSEWQRGDVFTCSVMHEALHNHYTQKSISRSPGK(SEQ ID NO:1)重链可变区的氨基酸序列如下:QLVEESGGGLVTPGGTLTLTCTASGFTISNYHMSffVRQAPGKGLEffIGIIYAVSAATffSATffVKGRFTISKTLTTVDLKMTSLTAADTATYFCARVRAP⑶STYYDLWGPGTLVTVSS(SEQ ID NO:2)重链Kabat⑶R的氨基酸序列如下:CDRl: NYHMS (SEQ ID NO: 3) ；CDR2:11YAVSAATffSTffVKG (SEQ ID NO:4)；CDR3:VRAP⑶STYYDL(SEQ ID NO:5)。轻链:AVVMTQTASPVSAVVGGTVTINCQASQTISNNffLSffYQQKPGQPPKLLIYKASILASGVP
CDRlCDR2SRFSGSGSGTEFTLTISGVQCDDAATYYCLYGHYITTSAHNAFGGGTEVWKGDPVAPTVCDR3
LIFPPAADQVATGTVTIVCVANKYFPDVTVTWEVDGTTQTTGIENSKTPQNSADCTYNLSSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVTQGTTSVVQSFNRGDC(SEQ ID NO:6)轻链可变区的氨基酸序列如下:AVVMTQTASPVSAVVGGTVTINCQASQTISNNWLSWYQQKPGQPPKLLIYKASILASGVPSRFSGSGSGTEFTLTISGVQCDDAATYYCLYGHYITTSAHNAFGGGTEVVVKGD(SEQ ID NO:7)轻链Kabat⑶R的氨基酸序列如下:CDRl: QASQTISNNffLS (SEQ ID N0:8) ； CDR2: KASI LAS (SEQ ID N0:9)；CDR3:LYGHYITTSAHNA(SEQ ID NO:10)。一方面，本发明提供一种抗NRPl抗体，其包含至少一种、两种、三种、四种、五种、或六种选自下述的HVR: (a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 3 ； (b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:4 ;(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5 ; (d)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:8 ;(e)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:9 -M (f)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 10。一方面，本发明提供一种抗体，其包含至少一种、至少两种、或所有三种选自下述的VH HVR序列:(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 3 ; (b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:4;和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:5。在一个实施方案中，该抗体包含HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5。在另一个实施方案中，该抗体包含HVR-H3和HVR-L3，该HVR-H3包含氨基酸序列SEQ ID NO:3，该HVR-L3包含氨基酸序列SEQ IDN0:10。在又一个实施方案中，该抗体包含:(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:3 ；(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:4 ;和(c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:5。

另一方面，本发明提供一种抗体，其包含至少一种、至少两种、或所有三种选自下述的VL HVR序列:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:8 ; (b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:9;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 10。在一个实施方案中，该抗体包含:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:8 ； (b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQID NO:9 -M (c)HVR-L3，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO:1O0另一方面，本发明的抗体包含:(a)VH结构域，其包含至少一种、至少两种、或所有三种选自下述的VH HVR序列:(i)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:3, (ii)HVR_H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:4，和(iii)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5 -M (b)VL结构域，其包含至少一种、至少两种、或所有三种选自下述的VL HVR序列:(i)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:8, (ii)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:9，和(c)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 10。另一方面，本发明提供一种抗体，其包含:(a)HVR-H1，其包含氨基酸序列SEQ IDNO: 3 ； (b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4 ； (c)HVR-H3，其包含氨基酸序列SEQ IDNO: 5 ;(d)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:8 ; (e)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:9 -M (f)HVR-L3，其包含氨基酸序列 SEQ ID N0:10o另一方面，抗NRPl抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO: 2具有至少90%，91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%,或100%序列同一性的重链可变域(VH)序列。在某些实施方案中，具有至少90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%,或99%同一性的VH序列相对于参照序列(SEQ ID N0:2)包含替代(例如保守替代)、插入、或删除，但是包含该序列的抗NRPI抗体保留结合NRPI的能力。在某些实施方案中，在SEQ ID NO: 2中替代、插入和/或删除了总共I至10个氨基酸。在某些实施方案中，替代、插入、或删除发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，抗NRPl抗体包含SEQ ID NO: 2中VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个特别的实施方案中，该VH包含一种、两种或三种选自下述的HVR:(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:3，(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:4，和(c)HVR_H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5。另一方面，提供一种抗NRPl抗体，其中该抗体包含与氨基酸序列SEQ ID N0:7具有至少 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%,或 100% 序列同一1性的轻链可变域(VL)。在某些实施方案中，具有至少 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%,或 99% 同一性的VL序列相对于参照序列(SEQ ID NO: 7)包含替代(例如保守替代)、插入、或删除，但是包含该序列的抗NRPl抗体保留结合NRPl的能力。在某些实施方案中，在SEQ ID N0:7中替代、插入和/或删除了总共I至10个氨基酸。在某些实施方案中，替代、插入、或删除发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地，抗NRPl抗体包含SEQ ID NO: 7中VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在一个特别的实施方案中，该VL包含一种、两种或三种选自下述的HVR: (a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:8 ； (b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQID NO:9 ;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 10。另一方面，提供一种抗NRPl抗体，其中该抗体包含上文提供的任何实施方案中的VH和上文提供的任何实施方案中的VL。在一个实施方案中，该抗体包含分别SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 7中的VH和VL序列，包括那些序列的翻译后修饰。又一方面，本发明提供与本文中提供的抗NRPl抗体结合相同表位的抗体。例如，在某些实施方案中，提供与包含VH序列SEQ ID NO: 2和VL序列SEQ ID NO: 7的抗NRPl抗体结合相同表位的抗体。 在本发明的又一个方面，依照任何上述实施方案的抗NRPl抗体是单克隆抗体，包括嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。在一个实施方案中，抗NRPl抗体是抗体片段，例如Fv、 &13、？&13’、8(^1双抗体、或？(&13’)2片段。在另一个实施方案中，抗体是全长抗体，例如完整IgGl抗体或其它抗体类或同种型，如本文中定义的。在又一个方面，依照任何上述实施方案的抗NRPl抗体可单一地或组合地掺入下文1-7节中描述的任何特征:1.抗体亲和力在某些实施方案中，本文中提供的抗体具有彡ΙμΜ、≤IOOnM, ^ 1OnM, ^ InM,(0.1nM、≤ 0.0lnM、或≤0.0OlnM (例如 1(Γ8Μ 或更少，例如 1(Γ8Μ 至 10_13M，例如，10_9M 至I(T13M)的解离常数(Kd)。在一个实施方案中，Kd是通过如下述测定法所述用Fab型式的感兴趣抗体及其抗原实施的放射性标记抗原结合测定法(RIA)来测量的。通过在存在未标记抗原的滴定系列的情况中用最小浓度的(125I)标记抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗体包被板捕捉结合的抗原来测量Fab对抗原的溶液结合亲和力(见例如Chen等，J.Mo 1.Biol.293:865-881 (1999))。为了建立测定法的条件，将[VnCROin LR^ 多孔板(ThermoScientific)用 50mM 碳酸钠(ρΗ9.6)中的 5 μ g/ml 捕捉用抗 Fab 抗体(Cappel Labs)包被过夜，随后用PBS中的2%(w/v)牛血清清蛋白于室温(约23° C)封闭2-5小时。在非吸附板(Nunc#269620)中，将IOOpM或26pM125I_抗原与连续稀释的感兴趣Fab (例如与 Presta 等，Cancer Res.57:4593-4599(1997)中抗 VEGF 抗体，Fab-12 的评估一致)混合。然后将感兴趣的Fab温育过夜；然而，温育可持续更长时间(例如约65小时)以确保达到平衡。此后，将混合物转移至捕捉板，于室温温育(例如I小时)。然后除去溶液，并用PBS中的0.1%聚山梨酯20 (TWEEN-20 )洗板8次。平板干燥后，加入150 μ I/孔闪烁液(MICR0SCINT-20 ; Packard)，然后在TOPCOUNT 伽马计数器(Packard)上对平板计数10分钟。选择各Fab给出小于或等于最大结合之20%的浓度用于竞争性结合测定法。依照另一个实施方案，Kd是使用表面等离振子共振测定法使用BIAcore -2000或 LMAcore -3000 (BIAcore, Inc.，Piscataway, NJ)于 25 ° C 使用固定化抗原 CM5芯片在约10个响应单位(RU)测量的。简言之，依照供应商的用法说明书用盐酸N-乙基-N’-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物传感器芯片(CM5，BIACORE, Inc.)。将抗原用IOmM乙酸钠ρΗ4.8稀释至5 μ g/ml (约0.2 μ M)，然后以5 μ I/分钟的流速注射以获得约10个响应单位(RU)的偶联蛋白质。注入抗原后，注入IM乙醇胺以封闭未反应基团。为了进行动力学测量，于25° C以约25 μ I/分钟的流速注入在含0.05%聚山梨酯20 (TWEEN-20 )表面活性剂的PBS (PBST)中两倍连续稀释的Fab (0.78ηΜ至500ηΜ)。使用简单一对一朗格缪尔(Langmuir)结合模型(BIACORE Evaluation Software version3.2)通过同时拟合结合和解离传感图计算结合速率(kon)和解离速率U。平衡解离常数(Kd)以比率I^ffZXn计算。见例如Chen等，J.Mol.Biol.293:865-881 (1999)。如果根据上文表面等离振子共振测定法，结合速率超过IO6M-1S-1,那么结合速率可使用荧光淬灭技术来测定，即根据分光计诸如配备了断流装置的分光光度计(Aviv Instruments)或8000系列SLM-AMINC0 分光光度计(ThermoSpectronic) 中用搅拌比色杯的测量,在存在浓度渐增的抗原的情况中，测量PBSPH7.2中20nM抗抗原抗体(Fab形式)于25°C的荧光发射强度(激发=295nm ;发射=340nm，16nm带通)的升高或降低。2.抗体片段在某些实施方案中，本文中提供的抗体是抗体片段。抗体片段包括但不限于Fab、Fab’、Fab’ _SH、F(ab’)2、Fv、和scFv片段，及下文所描述的其它片段。关于某些抗体片段的综述，见Hudson等Nat.Med.9:129-134 (2003)。关于scFv片段的综述，见例如Pluckthiin,于 The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,第 113卷，Rosenburg和Moore 编，(Springer-Verlag, New York),第 269-315 页(1994);还可见 W093/16185;及美国专利N0.5，571，894和5，587，458。关于包含补救受体结合表位残基，并且具有延长的体内半衰期的Fab和F(ab’)2片段的讨论，见美国专利N0.5，869，046。双抗体是具有两个抗原结合位点的抗体片段，其可以是二价的或双特异性的。见例如 EP404, 097;W01993/01161;Hudson 等，Nat.Med.9:129-134(2003);及 Hollinger等,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA90:6444-6448 (1993)。三抗体和四抗体也记载于 Hudson等，Nat.Med.9:129-134 (2003)。单域抗体是包含抗体的整个或部分重链可变域或整个或部分轻链可变域的抗体片段。在某些实施方案中，单域抗体是人单域抗体(Domantis, Inc., Waltham, MA ;见例如美国专利 N0.6，248，516B1)。
可以通过多种技术，包括但不限于对完整抗体的蛋白水解消化及重组宿主细胞(例如大肠杆菌或噬菌体)的生成来生成抗体片段，如本文中所描述的。3.嵌合的和人源化的抗体在某些实施方案中，本文中提供的抗体是嵌合抗体。某些嵌合抗体记载于例如美国专利 N0.4，816，567;及 Morrison 等，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA, 81:6851-6855 (1984))。在一个例子中，嵌合抗体包含非人可变区(例如，自小鼠、大鼠、仓鼠、家兔、或非人灵长类，诸如猴衍生的可变区)和人恒定区。在又一个例子中，嵌合抗体是“类转换的”抗体，其中类或亚类已经自亲本抗体的类或亚类改变。嵌合抗体包括其抗原结合片段。在某些实施方案中，嵌合抗体是人源化抗体。通常，将非人抗体人源化以降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。一般地，人源化抗体包含一个或多个可变域，其中HVR，例如⑶R (或其部分)自非人抗体衍生，而FR (或其部分)自人抗体序列衍生。任选地，人源化抗体还会至少包含人恒定区的一部分。在一些实施方案中，将人源化抗体中的一些FR残基用来自非人抗体(例如衍生HVR残基的抗体)的相应残基替代，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。人源化抗体及其生成方法综述于例如Almagro和Fransson, Front.Biosc1.13:1619-1633 (2008),并且进一步记载于例如 Riechmann等，Nature332:323_329(1988);Queen 等，Proc.Nat’ I Acad.Sc1.USA86:10029-10033(1989);美国专利 N0.5，821，337，7，527，791，6，982，321 和
7,087, 409; Kashmiri 等，Methods36:25-34 (2005)(描述了 SDR(a-CDR)嫁接);Padlan, Mol.1mmunol.28:489-498 (1991)(描述了“重修表面”);Dall ’Acqua 等，Methods36:43-60 (2005)(描述了 “FR 改组”)；及 Osbourn 等,Methods36:61-68 (2005)和 Klimka 等,Br.J.Cancer,83:252-260(2000)(描述了 FR改组的“引导选择”方法)。可以用于人源化的人框架区包括但不限于:使用“最佳拟合(best-fit)”方法选择的框架区(见例如Sims等J.1mmunol.151:2296 (1993))；自轻或重链可变区的特定亚组的人抗体的共有序列衍生的框架区(见例如Carter等Proc.Natl.Acad.Sc1.USA,89:4285 (1992);及 Presta 等 J.1mmunol.，151:2623 (1993));人成熟的(体细胞突变的)框架区或人种系框架区(见例如Almagro和Fransson, Front.Biosc1.13:1619-1633 (2008));和通过筛选FR文库衍生的框架区(见例如Baca等，J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)及 Rosok 等，J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996))。4.人抗体在某些实施方案中，本文中提供的抗体是人抗体。可以使用本领域中已知的多种技术来生成人抗体。一般地，人抗体记载于van Dijk和van de ffinkel, Curr.0pin.Pharmacol.5:368-74(2001)及 Lonberg, Curr.0pin.1mmunol.20:450-459(2008)。可以通过对转基因动物施用免疫原来制备人抗体，所述转基因动物已经修饰为响应抗原性攻击而生成完整人抗体或具有人可变区的完整抗体。此类动物通常含有所有或部分人免疫球蛋白基因座，其替换内源免疫球蛋白基因座，或者其在染色体外存在或随机整合入动物的染色体中。在此类转基因小鼠中，一般已经将内源免疫球蛋白基因座灭活。关于自转基因动物获得人抗体的方法的综述，见Lonberg, Nat.Biotech.23:1117-1125 (2005)。还可见例如美国专利N0.6，075，181和6，150，584，其描述了 XEN0M0USE 技术；美国专利N0.5，770，429，其描述了 I IlJMAB i ,技术；美国专利N0.7，041，870，其描述T K-M MOUSE 技术，和美国专利申请公开文本N0.US2007/0061900,其描述了VELOCIMOUSLt技术)。可以例如通过与不同人恒定区组合进一步修饰来自由此类动物生成的完整抗体的人可变区。也可以通过基于杂交瘤的方法生成人抗体。已经描述了用于生成人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人异骨髓瘤细胞系(见例如Kozbor J.1mmunol.，133:3001 (1984) ;Brodeur 等,Monoclonal Antibody Production Techniques andApplications,第 51-63 页(Marcel Dekker, Inc., NewYork, 1987)；及 Boerner 等,J.1mmunol., 147:86 (1991))。经由人B细胞杂交瘤技术生成的人抗体也记载于Li等，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA, 103:3557-3562 (2006)。其它方法包括那些例如记载于美国专利N0.7，189，826 (其描述了自杂交瘤细胞系生成单克隆人IgM抗体)和Ni，XiandaiMianyixue, 26 (4): 265-268 (2006)(其描述了人-人杂交瘤)的。人杂交瘤技术(Trioma技术)也记载于 Vollmers 和 Brandlein, Histology and Histopathology, 20 (3): 927-937 (2005)及Vollmers和Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)。也可以通过分离自人衍生的噬菌体展示文库选择的Fv克隆可变域序列生成人抗体。然后，可以将此类可变域序列与期望的人恒定域组合。下文描述了自抗体文库选择人抗体的技术。5.文库衍生的抗体可以通过对组合文库筛选具有期望的一种或多种活性的抗体来分离本发明的抗体。例如，用于生成噬菌体展示文库并对此类文库筛选拥有期望结合特征的抗体的多种方法是本领域中已知的。此类方法综述于例如Hoogenboom等于Methods in MolecularBiologyl78:1-37 (O’ Brien 等编,Human Press, Totowa, NJ, 2001)，并且进一步记载于例如 McCafferty 等，Nature348:552-554;Clackson 等，Nature352:624-628(1991);Marks等，J.Mol.Biol.222:581-597(1992);Marks 和 Bradbury,于 Methods in MolecularBiology 248: 161-175 (Lo 编，Human Press, Totowa, NJ, 2003) ; Sidhu 等，J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004) ; Lee 等，J.Mol.Biol.340(5): 1073-1093(2004) ; Fellouse, Proc.Natl.Acad.Sc1.USAlOl (34): 12467-12472 (2004);及 Lee 等，J.1mmunol.Methods284(1-2): 119-132(2004)。在某些噬菌体展示方法中，将VH和VL基因的全集分别通过聚合酶链式反应(PCR)克隆，并在噬菌体文库中随机重组，然后可以对所述噬菌体文库筛选抗原结合噬菌体，如记载于 Winter 等,Ann.Rev.Tmmunol., 12:433-455 (1994)的。卩遼菌体通常以单链 Fv (scFv)片段或以Fab片段展示抗体片段。来自经免疫的来源的文库提供针对免疫原的高亲和力抗体，而不需要构建杂交瘤。或者，可以(例如自人)克隆天然全集以在没有任何免疫的情况中提供针对一大批非自身和还有自身抗原的抗体的单一来源，如由Griffiths等，EMBOJ, 12:725-734(1993)描述的。最后，也可以通过自干细胞克隆未重排的V基因区段，并使用含有随机序列的PCR引物编码高度可变的CDR3区并在体外实现重排来合成生成未免疫文库，如由 Hoogenboom 和 Winter, J.Mol .Biol.，227:381-388 (1992)所描述的。描述人抗体噬菌体文库的专利公开文本包括例如:美国专利N0.5，750, 373、和美国专利公开文本N0.2005/0079574，2005/0119455，2005/0266000，2007/0117126，2007/0160598，2007/0237764，2007/0292936 和 2009/0002360。认为自人抗体文库分离的抗体或抗体片段是本文中的人抗体或人抗体片段。6.多特异性抗体在某些实施方案中，本文中提供的抗体是多特异性抗体，例如双特异性抗体。多特异性抗体是对至少两个不同位点具有结合特异性的单克隆抗体。在某些实施方案中，结合特异性之一针对NRPl，而另一种针对任何其它抗原。在某些实施方案中，双特异性抗体可以结合NRPl的两个不同表位。也可以使用双特异性抗体来将细胞毒剂定位于表达NRPl的细胞。双特异性抗体可以以全长抗体或抗体片段制备。用于生成多特异性抗体的技术包括但不限于具有不同特异性的两对免疫球蛋白重链-轻链对的重组共表达(见 Milstein 和 Cuello, Nature305:537 (1983))、W093/08829、和Traunecker等，EMBO J.10:3655 (1991))、和“突起-入-空穴”工程化(见例如美国专利N0.5，731，168)。也可以通过用于生成抗体Fe-异二聚体分子的工程化静电操纵效应(W02009/089004A1);交联两个或更多个抗体或片段(见例如美国专利N0.4，676，980，及Brennan等，Science, 229:81 (1985));使用亮氨酸拉链来生成双特异性抗体(见例如Kostelny等，J.1mmunol.，148(5): 1547-1553(1992));使用用于生成双特异性抗体片段的“双抗体”技术(见例如 Hollinger 等,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA, 90:6444-6448 (1993));及使用单链Fv(sFv) 二聚体(见例如Gruber 等，J.1mmunol., 152:5368 (1994));及如例如Tutt等J.1mmunol.147:60(1991)中所描述的,制备三特异性抗体来生成多特异性抗体。本文中还包括具有三个或更多个功能性抗原结合位点的工程化改造抗体，包括“章鱼抗体”(见例如US2006/0025576A1)。本文中的抗体或片段 还包括包含结合NRPl及另一种不同抗原的抗原结合位点的“双重作用 FAb” 或“DAF”(见例如 US2008/0069820)。7.抗体变体在某些实施方案中，涵盖本文中提供的抗体的氨基酸序列变体。例如，可以期望改善抗体的结合亲和力和/或其它生物学特性。可以通过将合适的修饰引入编码抗体的核苷酸序列中，或者通过肽合成来制备抗体的氨基酸序列变体。此类修饰包括例如对抗体的氨基酸序列内的残基的删除、和/或插入和/或替代。可以进行删除、插入、和替代的任何组合以得到最终的构建体，只要最终的构建体拥有期望的特征，例如，抗原结合。a)替代、插入、和删除变体在某些实施方案中，提供了具有一处或多处氨基酸替代的抗体变体。替代诱变感兴趣的位点包括HVR和FR。保守替代在表I中在“保守替代”的标题下显示。更实质的变化在表I中在“例示性替代”的标题下提供，并且如下文参照氨基酸侧链类别进一步描述的。可以将氨基酸替代引入感兴趣的抗体中，并且对产物筛选期望的活性，例如保留/改善的抗原结合、降低的免疫原性、或改善的ADCC或CDC。表I
权利要求
1.一种结合神经毡蛋白-1 (NRPl)的分离的抗体，其中该抗体包含:(a)HVR-Hl，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:3 ;(b)HVR-H2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:4 -M (c)HVR_H3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:5。
2.权利要求1的抗体，进一步包含:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:8 ；(b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID N0:9 ;和(c)HVR-L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 10。
3.一种分离的结合神经毡蛋白-1 (NRPl)的抗体，其中该抗体包含:(a)HVR-Ll，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:8 ;(b)HVR-L2，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:9 -M (c)HVR_L3，其包含氨基酸序列SEQ ID NO: 10。
4.一种结合神经毡蛋白-1 (NRPl)的分离的抗体，其中该抗体包含:(a)VH序列，其与氨基酸序列SEQ ID NO:2具有至少95%序列同一性；(b) VL序列，其与氨基酸序列SEQ ID NO:7具有至少95%序列同一性；或(c) (a)中的VH序列和(b)中的VL序列。
5.权利要求4的抗体，包含VH序列SEQID NO:2。
6.权利要求4的抗体，包含VL序列SEQID NO:7。
7.一种结合神经毡蛋白-1 (NRPl)的分离的抗体，其中该抗体包含VH序列SEQ ID NO: 2和 VL 序列 SEQ ID NO: 7。
8.权利要求1-7任一项的抗体，其为IgGl抗体。
9.权利要求1-7任一项的抗体，其为结合神经毡蛋白的抗体片段。
10.一种分离的核酸，其编码权利要求1-7任一项的抗体。
11.一种宿主细胞，其包含权利要求10的核酸。
12.一种生产抗体的方法，包括培养权利要求11的宿主细胞从而生成抗体。
13.一种免疫偶联物，其包含权利要求1-7任一项的抗体。
14.权利要求1-7任一项的抗体，其用于检测生物学样品中NRPl的存在。
15.权利要求14的抗体，其中检测NRPl的存在通过免疫组织化学来进行。
16.一种检测生物学样品中NRPl的存在的方法，包括使生物学样品与权利要求1-7任一项的抗体接触并检测结合的抗体的存在。
17.权利要求15的方法，其中NRPl的存在通过免疫组织化学来检测。
全文摘要
本发明提供了抗NRP1抗体及其使用方法。
文档编号C07K16/28GK103097418SQ201180043301
公开日2013年5月8日 申请日期2011年7月8日 优先权日2010年7月9日
发明者M.施米特, C.卡拉汉, J-A.S.宏戈, H.科彭, R.J.沃茨 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司