专利名称：色杆菌生物活性成份与代谢物的制作方法
技术领域：
本发明公开了用于防治有害生物的源自色杆菌属(Chromobacterium)的生物活性成分和代谢物，特别是Chromobacterium substugae培养物，以及它们用于防治有害生物(pest)的方法。
背景技术：
天然产物是由微生物、植物和其它生物产生的物质。微生物天然产物提供了丰富的化学多样性来源，并且将天然产物用于医药目的已有悠久的历史。虽然着重于用于人类治疗的天然产物(其中50%以上来自天然产物)，但仅有11%的农药来自天然来源。然而，天然产物农药可能在传统农场和有机农场中发挥防治有害生物的重要作用。微生物(细菌、放线菌和真菌)产生的次生代谢 物提供新化合物，其可单独使用或与已知化合物联合使用，以有效防治昆虫类有害生物并减少产生耐药性的风险。有许多公知的成功用作农业杀虫剂的微生物天然产物的实例(Thompson等人，2000;Arena等人，1995;Krieg等人1983)。微生物农药的开发始于纯培养物中微生物的分离。然后，使用体外试验、体内试验或在温室或田野中的中试规模试验有效进行波谱筛选。同时，对微生物产生的活性化合物进行分离和鉴定。对于微生物农药的商品化，需通过在工业规模下发酵以经济地生产微生物，并与生物相容且批准的添加剂配制以提高药效并将在田野条件下的施用容易性和储存稳定性增至最大。随着农民期待扩大他们的杀虫剂范围并随着在市场上出现新的微生物产品，在新旧杀虫剂间存在各种相互作用的可能性。目前经常使用2种或更多种杀虫剂的组合，将其同时或按序施加到单一作物上。为解决这些问题，科学家已使用外用和饲喂的方法来检验油类农药、真菌农药和化学农药对有害生物和益虫的相互作用(例如参见 Chalvet-Monfray, Sabatier 等人；Meunier, Carubel 等人 1999 ；Hummelbrunner 和 Isman2001 ；ffirth, Jiannino 等人 2004 ；Farenhorst, Knols 等人 2010 ；Shapiro-1lan, Cottrell等人2011等)。但目前尚未对所有的相互作用进行研究。色杆菌属β -色杆菌菌株(即Chromobacterium substugae)对许多昆虫表现出杀虫活性(Martin, Blackburn 等人 2004 ；Martin2004 ；Martin, Gundersen-Rindal 等人 2007 ；Martin, Hirose 等人 2007;Martin, Shropshire 等人 2007)。作用模式表现为拒食素和毒素活性的结合，在亚致死剂量下观察到饲喂抑制(feeding inhibition)(Martin, Gundersen-Rindal 等人 2007)。具体而言，已发现 Chromobacterium substugae有效防治科罗拉多马铃薯甲虫(Leptinotarse decemlineata)成虫、西部玉米根虫(Diabrotica virgifera)成虫、南方玉米根虫(Diabrotica undecimpunctata)成虫和幼虫、小蜂房甲虫(Aethina tumida)幼虫、小菜蛾(Plutella xyllostella)幼虫、甘薯粉風(Bernisia tabaci)成虫和幼虫以及南绿椿象(Nezara viridula)成虫。自Martin及其同事发现Chromobacterium substugae以来，至少已分离和表征出三个色杆菌的新物种；Young等人(2008)自台湾泉水样本中分离出一个新的色杆菌物种(C.aquaticum),而Kampfer等人(2009)也自马来西亚收集的环境样本中分离出二个物种(C.piscinae 和 C.pseudovioIaceum)。色杆菌属的次生代谢物在所有已知的色杆菌物种中，对于紫色色杆菌(C.violaceum)有最多的研究，关于色杆菌产生的次生代谢物的公布信息仅基于对紫色色杆菌的研究。Durdn和Menck(2001)已就紫色色杆菌(来自土壤和水中的革兰阴性腐生生物)的药理和工业前景发表了综述。此物种通常被认为对人类无致病性，但作为机会致病菌，其偶而在人类和动物中成为败血症和致命感染的病原体。已知紫色色杆菌产生一种紫色色素(紫色杆菌素)，其是通过在氧的存在下使2个L-色氨酸分子稠和而生成(Hoshino等人，1987;Ryan和Drennan; 2009)。紫色杆菌素的生物合成受到群体感应(quorum-sensing)的调节,所述群体感应是一种在革兰氏阴性菌中调节各种其它次级代谢途径的常见机制(McClean等人，1997)。由Durdn和Menck (2001)总结的紫色色杆菌的其它已知代谢物包括氢氰酸、(高)铁氧胺 E (ferrioxamine B)、B-丙氨酸糖肽(B-lactamic glycopeptides)SQ28, 504 和 SQ28, 546、抗生素(如 aerocyanidin、aerocavin、3, 6- 二轻基-1，2-苯异唑(3，6-dihydroxy-l, 2-1ndoxazene)和单酰胺菌素SB-26.180)和抗肿瘤缩酹酸肽FR901228。依据Durdn和Menck(2001)的综述文章，紫色色杆菌也产生不寻常的糖化合物，如胞外多糖和脂多糖。线虫和杀线虫剂 线虫是不分节两侧对称的蠕虫状无脊椎动物，其具有体腔和完整的消化系统，但无呼吸和循环系统。其体壁由多层的角质层、具有四条纵线的皮下组织和内部肌肉组织组成(Chitwood，2003)。其身体大部份为消化和生殖系统。大部分的线虫可自由生活，但有少数物种是动物或植物的遍在寄生虫。根结线虫(Meloidogyne spp.)寄生于许多的一年生和多年生作物中，同时影响市场收率的产量和品质。该属的线虫被认为是最具经济重要性的植物寄生线虫(Whitehead, 1998)。植物寄生线虫每年造成的作物损失估计超过1000亿美元(Koenning等人1999)，超过一半是根结线虫属造成的。该品系的接种物来自虫卵，其在有利条件下孵化以释出感染性第二阶段幼虫(J2S)，所述幼虫在土壤中迁移到宿主植物的根上。藉由根尖渗透而发生感染，然后幼虫移至维管组织(线虫在该处常驻)，直接自植物细胞中得到养分。植物因而产生形成虫瘿(根节)的巨细胞。在整个生殖阶段(reproductive life)中，雌虫保持埋入植物组织中，只有虫卵自根中伸出。防治根结线虫最有效的方法是使用抑制虫卵孵化、幼虫活动和/或植物感染性的杀线虫剂。因为以下环境和生理上的原因，开发化学防治植物寄生线虫的农药是具有挑战性的工作:1.大部份植物寄生性线虫生活在靠近根部的土壤的狭窄区域中，从而难以递送化学杀线虫剂。2.线虫的外表面是不良生化靶，无法渗透到许多有机分子中(Chitwood, 2003)。此外，口服递送有毒化合物是几乎不可能的，因为大多数植物寄生线虫物种在其侵入和感染植物根系后才摄取宿主养分。因此，杀线虫剂往往是具有高挥发性或具有促进它们在土壤中的流动性的其它化学和物理性质的广谱毒素。
在过去十年中，卤代烃(如二溴乙烯、溴甲烷)是世界各地使用最频繁的杀线虫齐U。因为它们具有人体高毒性且对平流臭氧层具有有害作用，因而在蒙特利尔公约中已禁止使用这些化合物，但因为缺乏替代品，所以仍可使用溴甲烷用于防治线虫和植物病原体。随着有机磷的使用，氨基甲酸酯是最有效的非熏蒸类杀线虫剂。可惜的是，大部分氨基甲酸酯如涕灭威和杀线威等也属剧毒物。2010年8月，涕灭威的制造商拜耳公司已同意取消在美国马铃薯和柑橘中的所有产品注册，而在2018年8月底时，涕灭威将彻底淘汰。近日，阿维菌素(由阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis)产生的两种除虫菌素的混合物)已
注册用于杀线虫用途(Faske和Starr, 2006)。Syngenta公司将该活性成分以八\,_丨(；丨3'1<'商
标名投放到市场中，作为棉花和蔬菜的种子处理剂。据报导有些微生物植物/线虫病原体对植物寄生线虫具有活性(Guerena2006)。这些生物防治剂包括以下细菌:苏云金芽孢杆菌、洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderiacepacia)、穿刺巴氏菌(Pasteuria penetrans)和 P.usgae。Pasteuria Biosciences 已开始在美国南部使用P.usgae来防治草地线虫(sting nematodes)。杀线虫真菌包括木霉菌(Trichoderma harzianum)、线虫寄生菌(Hirsutella rhossiliensis)、食线虫真菌(H.minnesotensis)、厚垣轮枝抱菌(Verticillium chlamydosporium)、线虫捕捉菌(Arthrobotrys dactyloides)和淡紫拟青霉(Paecilomyces lilanicus) (Prophyta 公司
的产品名称为BioAetlR Melcon"')。另一种真菌抚孢漆斑菌(Myrothecium verrucaria)可用于商业制剂(Valent Biosciences公司的DiTem R■产品)。这是杀线虫真菌，由于杀线虫化合物而具有活性。其它市售的生物杀线虫剂包括DenyiIP BlueGircle*(B.cepacia)、Activate^ (Bacillus chitinosporus) (Quarles, 2005)和以色列的产品
BioNem (Bacillus firmus)(目前由拜耳公司以种子处理剂VotiW5'销售)(Terefe
等人2009)。据假定，微生物分离物对线虫虫卵孵化、幼虫活动和感染性的有害作用可归因于这些生物体产生的毒素(H allman和Sikora, 1996; Marrone等人,1998; Siddiqui和 Mahmood, 1999; Saxena 等人,2000; Meyer 和 Roberts, 2002)寄生或甚至扑杀线虫(Siddiqui 和 Mahmood, 1996; Kerry, 2001; Jaffee 和 Muldoon, 1995)、引发系统抵抗作用(Hasky-Gunther 等人 1998)、改变线虫行为(Sikora 和 Hoffman-Hergarter, 1993)或干扰植物识别功能(Oostendorp和Sikora, 1990)的能力。植物杀线虫剂如植物提取物和精油可用于防治线虫(Kokalis-Burrelle和Rodriguez-Kabana, 2006)。Chitwood在其最近的综述文章中总结了利用源自植物的化合物防治线虫的选择(Chitwood, 2002)。Siddiqui和Alam (2001)证明，用印楝树(Azadirachta indica)和苦楝树(Melia azadirah)的植物部分改造的盆栽土壤抑制番茄的根结线虫产生。但目前在美国没有印楝产品注册用于防治线虫。基于含皂苷的皂树(Quillaja saponaria)提取物(在C_3处被三糖取代并在C-28处被寡糖取代的阜树酸
的bidesmosidic衍生物)的来自智利的新植物产品(NEMA-Ql最近已经美国环保署
注册为有机杀线虫剂，并由有机物质检查委员会(OMRI)登录用于有机农业。经MontereyAgResources 市售。
通常对非宿主作物的轮作本身足以防止线虫种群达到经济损害水平(Guerena2006)。信息素(allelochemicals)是影响植物环境中的生物行为的由植物产生的化合物。杀线虫信息素包括polythienyls、硫配糖体(glucisonolates)、生物碱、脂质、職类、留体、三職类和酌■类化合物(Kokalis-Burrelle 和 Rodriguez-Kabana, 2006;Chitwood, 2002)。当成长为覆盖作物时，来自化感植物(allelopathic plant)的生物活性化合物在生长期中渗出和/或在生物质分解过程中释出到土壤中。芸苔属作物可用于生物熏蒸，所述生物熏蒸是基于在分解土壤掺入组织(soil-1ncorporated tissue)过程中释放杀生物挥发物的有害生物防治策略(Kirkegaard和Sarwar, 1998)。但Roubtsova等人(2007)在绿花椰菜腐败组织对南方根结线虫数量的影响的研究中指出为了适当防治，需彻底混合植物组织与完全被线虫感染的土壤体积。在农业土壤中的线虫防治的未来有赖于两个因素:培育抗线虫作物和发现并开发新的广谱低毒杀线虫剂。 研究、开发和注册新的化学杀线虫剂的成本非常高(超过2亿美元)，从而限制了它们的开发。从1967-1997年中，在497种注册用作农药的新活性成份中，只有7个注册为杀线虫剂(Aspelin和Grube, 1999)。除了传统的化学方法外，也建议使用RNA干扰(RNAi)作为防治线虫的方法。藉由RNAi的基因沉默作用最初被证明用于秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans),而最近也被证明用于植物寄生线虫如根结线虫(Bakhetia等人2005)。为了降低植物寄生线虫造成的显著经济损失以及降低目前注册用于线虫防治的有毒化合物的使用，寻找用作生物杀线虫剂的新的微生物株成为重要的目标。根据Sasser和Freckman (1987年)的研究,线虫对世界各地的主要作物造成的作物损失为8%至20%。植物寄生线虫可导致相当大的作物损失，估计全球每年损失约870亿美元(Dong和Zhang, 2006)。抗线虫作物物种和化学杀线虫剂是目前线虫防治的主要选择。诸如溴甲烷的熏蒸剂对防治土壤传播的植物病害和线虫非常有效，但因为对哺乳动物具有高毒性、臭氧耗减效应和其它残留效应，许多国家已禁止使用溴甲烷，并经国际协商计划将其完全撤出市场(Oka等人，2000)。化学替代品如碘甲烷、1，3-二氯丙烯和氯化苦(cholorpicrin)对哺乳动物和环境也有安全上的问题。目前正逐渐淘汰和禁用化学非熏蒸杀线虫剂。最近，美国环保署宣布将淘汰涕灭威。发明概述本文提供新用途和新组合，具体提供包含色杆菌属物种的菌株，特别是Chromobacterium substugae 的菌株，更特别是色杆菌新物种(Chromobacteriumsubstugae sp.Nov.)的菌株，甚至更特别是与美国专利7，244，607中所述的NRRL B-30655具有相同特征的色杆菌新物种的菌株的组合物。由此，本文提供调节植物中的线虫侵害的方法，其包括向植物和/或其种子和/或用于使所述植物生长的基质施用有效调节所述线虫侵害的量的以下物质:色杆菌属物种的菌株(特别是Chromobacterium substugae的菌株,更特别是色杆菌新物种的菌株,甚至更特别是与美国专利7，244，607中所述的NRRL B-30655具有相同特征的色杆菌新物种的菌株)的上清液、滤液和/或提取物，和/或所述上清液、滤液和/或提取物的一种或多种代谢物，以及任选存在的另一种杀线虫物质。本发明也提供对至少一种有害生物具有协同作用的农药组合，其包含作为活性成份的以下物质:(a)色杆菌属物种的菌株(特别是Chromobacterium substugae的菌株,更特别是色杆菌新物种的菌株，甚至更特别是与美国专利7，244，607中所述的NRRL B-30655具有相同特征的色杆菌新物种的菌株)的上清液、滤液和/或提取物，和/或所述色杆菌属物种的菌株(特别是Chromobacterium substugae的菌株,更特别是色杆菌新物种的菌株，甚至更特别是与美国专利7，244，607中所述的NRRL B-30655具有相同特征的色杆菌新物种的菌株)的上清液、滤液和/或提取物的一种或多种代谢物，和(b)另一种农药物质，其中(a)和(b)以协同量存在。在一具体实施方案中，所述有害生物可以是昆虫类有害生物，但也可以包括但不限于线虫、植物真菌、植物病毒、植物细菌和杂草。此外，所述组合可以是组合物。所述农药物质可能:(a)源自微生物；(b)是天然产物和/或(b)是化学农药，尤其是化学杀线虫剂。具体而言，所述组合可包含色杆菌属物种的菌株(特别是Chromobacteriumsubstugae的菌株，更特别是色杆菌新物种的菌株,甚至更特别是与美国专利7，244，607中所述的NRRL B-30655具有相同特征的色杆菌新物种的菌株)的上清液、滤液和/或提取物和源自微生物的农药物质，所述微生物包括但不限于芽孢杆菌(Bacillus sp.)(如苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)或苏云金芽孢杆菌库斯塔克变种(Bacillusthuringiensis var.kurstaki))和多杀菌素。或者,所述组合可包含色杆菌属物种的菌株(特别是Chromobacterium substugae的菌株,更特别是色杆菌新物种的菌株，甚至更特别是与美国专利7，244，607中所述的NRRL B-30655具有相同特征的色杆菌新物种的菌株)的上清液、滤液和/或提取物和源自天然产物如除虫菊(pyrethrum)的农药物质。或者，所述组合可包含色杆菌属物种的菌株(特别是Chromobacterium substugae的菌株,更特别是色杆菌新物种的菌株，甚至更特别是与美国专利7，244，607中所述的NRRL B-30655具有相同特征的色杆菌新物种的菌株)的上清液、滤液和/或提取物和农药物质，所述农药物质是化学农药，特别是杀虫剂，其中所述杀虫剂包括但不限于除虫菊酯、螺虫乙酯(spirotetramet)和邻甲酸氨 基苯甲酸胺(anthranilic diamide)。在相关方面，本文提供协同调节植物中的至少一种有害生物或有害生物物种侵害的方法，其包括向植物和/或其种子和/或用于使所述植物生长的基质施用有效调节所述有害生物或有害生物物种侵害的量的上述组合。本文还提供可获自或源自色杆菌属物种的菌株(特别是Chromobacterium substugae的菌株,更特别是色杆菌新物种的菌株,甚至更特别是与美国专利7，244，607中所述的NRRL B-30655具有相同特征的色杆菌新物种的菌株)的分离的化合物，或者能够产生这些化合物的生物体，所述化合物可用于防治各种有害生物，特别是线虫类有害生物。在一实施方案中，所述化合物具有以下特征:(a)具有农药活性；(b)经液相色谱/质谱法(LC/MS)测定具有约840-900的分子量；(c)使用水:乙腈(CH3CN)梯度溶剂系统(0-20 分钟；90-0%CH3CN 水溶液，20-24 分钟；100%CH3CN，24-27 分钟；0_90%CH3CN 水溶液，27-30分钟；90%CH3CN水溶液)，在0.5毫升/分钟的流速和210nm的紫外线检测下，其在反相C-18HPLC柱上的高压液相色谱(HPLC)保留时间为约7_12分钟；和(d)任选地可获自色杆菌属(Chromobacterium)物种的菌株(特别是Chromobacterium substugae的菌株,更特别是色杆菌新物种的菌株，甚至更特别是与美国专利7，244，607中所述的NRRL B-30655具有相同特征的色杆菌新物种的菌株)。在一实施方案中，所述化合物可以是肽。
在一具体实施方案中，经13C NMR测定，所述化合物具有43个碳，包括7个甲基碳、10个亚甲基碳、12个次甲基碳、6个烯属次甲基(olefinic methines)碳和8个季碳。在一具体实施方案中，化合物“A”具有以下特征:(a)可获自色杆菌属物种的菌株(特别是Chromobacterium substugae的菌株,更特别是色杆菌新物种的菌株,甚至更特别是与美国专利7，244，607中所述的NRRL B-30655具有相同特征的色杆菌新物种的菌株)；(b)对有害生物具有毒性；(c)经液相色谱/质谱法(LC/MS)测定具有约840-890，更特别是 860 的分子量；(Cl)1H NMR 的 δ 值为 8.89、8.44、8.24、8.23、7.96、7.63、6.66、5.42,5.36,5.31,5.10,4.13,4.07,4.05,3.96,3.95,3.88,3.77,3.73,3.51,3.44,3.17、
2.40,2.27,2.11,2.08,2.03,2.01、1.97、1.95、1.90、1.81、1.68、1.63、1.57、1.53、1.48、
1.43,1.35,1.24,1.07,1.02,0.96,0.89,0.88,0.87,0.80，并且 13CNMR 的 δ 值为 173.62、172.92,172.25,172.17,171.66,171.28,170.45,132.13,130.04,129.98,129.69,129.69、125.48,98.05,70.11,69.75,68.30,68.25,64.34,60.94,54.54,52.82,49.72,48.57、45.68,40.38,39.90,38.18,36.60,31.98,31.62,31.58,29.53,28.83,27.78,24.41、23.06、22.09、20.56、19.31、18.78、17.66、15.80 ;(e)使用水:乙腈(CH3CN)梯度溶剂系统(0-20 分钟；90-0%CH3CN 水溶液，20-24 分钟；100%CH3CN，24-27 分钟；0_90%CH3CN 水溶液，27-30分钟；90%CH3CN水溶液)，在0.5毫升/分钟的流速和210nm的紫外线检测下，其在反相 C-18HPLC 柱(Phenomenex, Luna5 μ C18 (2) 100Α, 100x4.60mm)上的高压液相色谱(HPLC)保留时间为约7-12分钟，更特别为约9分钟。具体而言，13C-NMR谱显示了 43个碳的信号，包括7个甲基碳、10个亚甲基碳、12个次甲基碳、6个烯属次甲基碳和8个季碳，和/或1H NMR谱显示典型的肽的特征，显示了 5个酰胺NH信号[δ H:8.89、8.44、8.23,8.22、7.96]、一个胺 NH2 基信号[δΗ:7.64,6.65]、6 个 α -氨基质子[δ H:4.07,4.06,3.96,3.95、
3.88,3.72]，并且在 13C-NMR谱中，有 6 个/7 个酰胺或酯共振[δ c:173.62,172.92,172.25、
1.72.17,171.66,171.28,170.45]。在另一具体实施方案中，化合物“B”具有下列特征:(a)可获自色杆菌属物种的菌株(特别是Chromobacterium substugae的菌株,更特别是色杆菌新物种的菌株,甚至更特别是与美国专利7，244，607中所述的NRRL B-30655具有相同特征的色杆菌新物种的菌株)；(b)对有害生物具有毒性；(c)经液相色谱/质谱法(LC/MS)测定具有约850-890，更特别是874的分子量；(d)使用水:乙腈(CH3CN)梯度溶剂系统(0-20分钟；90_0%CH3CN水溶液，20-24 分钟；100%CH3CN，24-27 分钟；0_90%CH3CN 水溶液，27-30 分钟；90%CH3CN 水溶液)，在0.5毫升/分钟的流速和210nm的紫外线检测下，其在反相C-18HPLC柱(Phenomenex, Luna5 μ C18 (2) 100Α, 100x4.60mm)上的高压液相色谱(HPLC)保留时间为约7_12分钟，更特别为约9分钟，甚至更特别为约9.54分钟。在更具体的实施方案中，提供包括但不限于以下的化合物:(A)具有##STR001##结构的化合物
权利要求
1.化合物，其具有以下特征:(a)具有农药活性；(b)经液相色谱/质谱法(LC/MS)测定具有约840-900的分子量；(c)使用水:乙腈(CH3CN)梯度溶剂系统(0_20分钟；90_0%CH3CN水溶液，20-24 分钟；100%CH3CN，24-27 分钟；0_90%CH3CN 水溶液，27-30 分钟；90%CH3CN 水溶液)，在0.5毫升/分钟的流速和210nm的紫外线检测下，其在反相C-18HPLC柱上的高压液相色谱(HPLC)保留时间为约7-12分钟；和(d)任选地可获自色杆菌属(Chromobacterium)物种。
2.根据权利要求1的化合物，其中经13CNMR测定，所述化合物具有43个碳，包括7个甲基碳、10个亚甲基碳、12个次甲基碳、6个烯属次甲基碳和8个季碳。
3.根据权利要求1的化合物，其中所述化合物具有以下特征:(i)经液相色谱/质谱法(LC/MS)测定具有约 840-890 的分子量；(ii) 1H NMR 的 δ 值约为 8.89,8.44,8.24,8.23、7.96,7.63,6.66,5.42,5.36,5.31,5.10,4.13,4.07,4.05,3.96,3.95,3.88,3.77,3.73、3.51,3.44,3.17,2.40,2.27,2.11,2.08,2.03,2.01、1.97、1.95、1.90、1.81、1.68、1.63、1.57,1.53,1.48,1.43,1.35,1.24,1.07,1.02,0.96,0.89,0.88,0.87,0.80 ；和(iii)13CNMR 的 δ 值约为 173.62,172.92,172.25,172.17,171.66,171.28,170.45,132.13,130.04、129.98,129.69,129.69,125.48,98.05,70.11,69.75,68.30,68.25,64.34,60.94,54.54、52.82,49.72,48.57,45.68,40.38,39.90,38.18,36.60,31.98,31.62,31.58,29.53、28.83,27.78,24.41,23.06,22.09,20.56,19.31,18.78,17.66,15.80。
4.根据权利要求1的化合物，其中所述化合物选自: (A)具有##STR001##结构的化合物
5.组合物，其包含: (A)以下中的至少一种: (i)权利要求1的化合物； ( )具有以下特性的化合物:(a)具有农药性质；(b)经液相色谱/质谱法(LC/MS)测定具有约315-360的分子量；(c)使用水:乙腈(CH3CN)梯度溶剂系统(0_20分钟；90-0%CH3CN 水溶液，20-24 分钟；100%CH3CN，24-27 分钟；0_90%CH3CN 水溶液，27-30 分钟；90%CH3CN水溶液)，在0.5毫升/分钟的流速和2IOnm的紫外线检测下，其在反相C-18HPLC柱上的高压液相色谱(HPLC)保留时间为约8-15分钟；和(d)任选地可获自色杆菌属物种；和 (B)以下中的至少一种: (i)第二物质，其中所述第二物质为化学农药或生物农药；和 ( )载体、稀释剂、表面活性剂或辅剂中的至少一种。
6.获得选自以下的化合物的方法: (i)权利要求1的化合物；和 ( )具有以下特性的化合物:(a)具有农药性质；(b)经液相色谱/质谱法(LC/MS)测定具有约315-360的分子量；和(c)使用水:乙腈(CH3CN)梯度溶剂系统(0_20分钟；90-0%CH3CN 水溶液，20-24 分钟；100%CH3CN，24-27 分钟；0_90%CH3CN 水溶液，27-30 分钟；90%CH3CN水溶液)，在0.5毫升/分钟的流速和2IOnm的紫外线检测下，其在反相C-18HPLC柱上的高压液相色谱(HPLC)保留时间为约8-15分钟， 所述方法包括: (A)在足以产生所述化合物的条件下，在全细胞培养液中培养色杆菌属物种的菌株； (B)从所述全细胞培养液中分离(A)中产生的所述化合物。
7.根据权利要求7的方法，其中通过以下操作来分离步骤(A)中产生的所述化合物:(a)将所述全细胞培养液施加到离子交换柱、尺寸排阻柱或反相HPLC柱中的任意一种以得到柱流分；(b)测定所述柱流分的农药活性；和(C)浓缩(b)中的柱流分以得到分离的化合物。
8.调节植物中的有害生物侵害的方法，其包括向所述植物和/或其种子和/或用于使所述植物生长的基质施用有效调节所述有害生物侵害的量的以下物质: (A)以下中的至少一种: (i)权利要求1的化合物； ( )具有以下特性的化合物:(a)具有农药性质；(b)经液相色谱/质谱法(LC/MS)测定具有约315-360的分子量；(c)使用水:乙腈(CH3CN)梯度溶剂系统(0_20分钟；90-0%CH3CN 水溶液，20-24 分钟；100%CH3CN，24-27 分钟；0_90%CH3CN 水溶液，27-30 分钟；90%CH3CN水溶液)，在0.5毫升/分钟的流速和2IOnm的紫外线检测下，其在反相C-18HPLC柱上的高压液相色谱(HPLC)保留时间为约8-15分钟；和(d)任选地可获自色杆菌属物种的菌株；和 (B)任选存在的另一种农药物质。
9.根据权利要求8的方法，其中所述方法中所使用的所述化合物: (I)具有以下特性中的至少一种:(a)经液相色谱/质谱法(LC/MS)测定的分子量约为343 ;和(b)在所述C-18反相HPLC柱上的HPLC保留时间约为10分钟；或 (II)具有以下特性中的至少一种:(a)经液相色谱/质谱法(LC/MS)测定的分子量约为327 ;和(b)在所述C-18反相HPLC柱上的HPLC保留时间约为12分钟。
10.根据权利要求8的方法,其中所述化合物选自chromamideA、紫色杆菌素和脱氧紫色杆菌素。
11.调节植物中的线虫侵害的方法，其包括向所述植物和/或其种子和/或用于使所述植物生长的基质施用有效调节所述线虫侵害的量的以下物质:色杆菌属物种的菌株的上清液、滤液和/或提取物，和/或所述上清液、滤液和/或提取物的一种或多种代谢物，以及任选存在的另一种杀线虫物质。
12.对至少一种有害生物具有协同作用的农药组合，其包含作为活性成份的以下物质:(a)色杆菌属物种的菌株的上清液、滤液和/或提取物，和(b)另一种农药物质，其中(a)和(b)以协同量存在。
13.根据权利要求12的组合，其中所述有害生物为线虫类有害生物。
14.根据权利要求12的组合，其中所述农药物质:(a)源自微生物；(b)是天然产物或(b)是化合物。
15.根据权利要求12的组合，其中所述农药物质源自微生物，并且选自芽孢杆菌(Bacillus sp.)和多杀菌素。
16.根据权利要求12的组合，其中所述农药物质为选自除虫菊酯、螺虫乙酯和邻甲酰氨基苯甲酰胺(anthranilic diamide)的化学杀虫剂。
17.根据权利要求12的组合，其中所述组合为组合物。
18.协同调节植物中的至少一种有害生物株侵害的方法，其包括向所述植物和/或其种子和/或用于使所述植物生长的基质施用有效地协同调节植物中的至少一种有害生物侵害的量的权利要求13的组合。
19.选自以下的化合物在配制用于调节植物中有害生物侵害的组合物中的用途:(i)权利要求1-4的化合物； ( )具有以下特性的化合物:(a)具有农药性质；(b)经液相色谱/质谱法(LC/MS)测定具有约315-360的分子量；(c)使用水:乙腈(CH3CN)梯度溶剂系统(0_20分钟；90-0%CH3CN 水溶液，20-24 分钟；100%CH3CN，24-27 分钟；0_90%CH3CN 水溶液，27-30 分钟；90%CH3CN水溶液)，在0.5毫升/分钟的流速和2IOnm的紫外线检测下，其在反相C-18HPLC柱上的高压液相色谱(HPLC) 保留时间为约8-15分钟；和(d)任选地可获自色杆菌属物种。
全文摘要
本发明提供用于防治有害生物的源自色杆菌属物种培养物的生物活性化合物和代谢物、包含这些化合物的组合物、获得这些化合物的方法以及使用这些化合物和组合物来防治有害生物的方法。
文档编号C07K7/06GK103179862SQ201180051656
公开日2013年6月26日 申请日期2011年10月24日 优先权日2010年10月25日
发明者R·阿索卡, 黄华章, M·科伊武宁, P·马罗内 申请人:马罗内生物创新公司