专利名称：弥散型浅表性光线性汗孔角化症(dsap)相关基因的制作方法
技术领域：
本发明涉及分子遗传学领域以及疾病诊断和治疗领域。特别地，本发明鉴定了与弥散型浅表性光线性汗孔角化症(DSAP)相关的致病基因-MVK基因。在此基础上，本发明提供了一种突变的MVK基因、其编码蛋白质及其用途，包含突变的MVK基因的载体、宿主细胞以及试剂盒。此外，本发明还提供了用于诊断或治疗DSAP的方法，用于所述方法的诊断剂或治疗剂，以及包含所述诊断剂或治疗剂的试剂盒。
背景技术：
汗孔角化症(Porokeratosis，PK)是一种罕见的皮肤角化病，早在1893年，Mibelli就对该疾病作了详细的临床报道，到目前为止，临床上有5种典型的汗孔角化症亚型:经典Mibelli型汗孔角化症(PM);弥散型浅表性汗孔角化症(DSP);弥散型浅表性光线性汗孔角化症(Disseminated superficial actinic porokeratosis,DSAP);弥散型足底、手掌汗孔角化症(PPPD)以及线性角化症(LP)。弥散型 浅表性光线性汗孔角化症(DSAP)是角化症中最常见的类型，它是一种罕见的慢性皮肤角化病，呈常染色体显性遗传，以众多的、环形的皮疹为特征，一般十几岁发病，皮疹多发生于皮肤的阳光暴露区，表现为周边角质嵴稍隆起，中央呈轻度萎缩。皮肤角化症的发生，尤其是大面积的皮肤病变容易导致其发生恶性转变。同时，皮肤角质化严重影响患者的外观，给患者生活和工作带来诸多不便，造成了巨大心理负担。以往利用连锁分析方法，将与DSAP发病相关的区域主要定位在以下5个区域:2q23.2-24.1，12q24.1_q24.2，15q25.1-26.1，1ρ31.3_p31.l，16q24.1_24.3 (表 I)，然而基因缺陷与 DSAP 的病理关系依然不明确。表1.汗孔角化病连锁分析得到的遗传易感区域
权利要求
1.突变的MVK基因，其与MVK基因相比具有至少I个杂合突变，并且所述突变的MVK基因导致弥散型浅表性光线性汗孔角化症的发生； 优选地，所述杂合突变选自错义突变、起始密码子突变、缺失突变、插入突变和剪接位点突变中的一种或多种； 优选地，所述杂合突变位于这样的区域，所述区域选自MVK基因的外显子2-11中的一个或多个； 优选地，所述杂合突变位于MVK基因的第2个、第3个、第5个、第6个、第7个、第8个、第9个、第10个和/或11个外显子； 优选地，所述杂合突变位于选自下列位置中的一个或多个位置:c.3，c.34，c.122,c.481—482，c.417—418，c.604，c.635—637，c.764，c.836，c.871，c.1039+2，c.935，c.1094，c.1126 ； 优选地，所述杂合突变是选自下列突变中的一个或多个突变:C.3G > C，c.34G > C，c.122T > C，c.481_482delTG，c.417_418insC，c.604G > A, c.635_637delGAG，c.764T >C, c.836T > C, c.871T > G, c.1039+2T > C, c.935A > G, c.1094T > C, c.1126G > A。
2.由权利要求1的突变的MVK基因编码的蛋白质。
3.包含权利要求1的突变的MVK基因的载体。
4.包含权利要求1的突变的MVK基因和/或权利要求3的载体的宿主细胞。
5.权利要求1的突变的MVK基因或者权利要求2的蛋白质的用途，其用于产生DSAP动物模型，或用作药物靶点，或用于制备试剂盒，所述试剂盒用于产生DSAP动物模型，或用作药物靶点。
6.权利要求3的载体或权利要求4的宿主细胞的用途，其用于产生DSAP动物模型，或用于制备试剂盒，所述试剂盒用于产生DSAP动物模型。
7.试剂盒，其包含权利要求1的突变的MVK基因和/或权利要求3的载体和/或权利要求4的宿主细胞。
8.用于诊断DSAP的诊断剂，其包含能够特异性扩增MVK基因的引物，或能够特异性检测MVK基因突变的探针； 优选地，所述引物能够特异性扩增MVK基因的外显子，优选第2个、第3个、第5个、第6个、第7个、第8个、第9个、第10个和/或11个外显子； 优选地，所述引物的序列选自SEQ ID NO:1 18 ; 优选地，所述引物是如SEQ ID NO:1和2所示的引物，或如SEQID NO:3和4所示的引物，或如SEQ ID NO:5和6所示的引物，或如SEQ ID NO:7和8所示的引物，或如SEQ IDNO:9和10所示的引物，或如SEQ ID NO:11和12所示的引物，或如SEQ ID NO:13和14所示的引物，或如SEQ ID NO:15和16所示的引物，或如SEQID NO: 17 18所示的引物; 优选地，所述突变位于MVK基因的外显子，优选第2个、第3个、第5个、第6个、第7个、第8个、第9个、第10个和/或11个外显子，更优选地位于选自下列的一个或多个位置:c.3，c.34，c.122，c.481_482，c.417_418，c.604，c.635_637，c.764，c.836，c.871，c.1039+2，c.935，c.1094，c.1126 ； 优选地，所述杂合突变是选自下列突变中的一个或多个突变:C.3G > C，c.34G > C，c.122T > C，c.481_482delTG，c.4174_18insC，c.604G > A, c.635_637delGAG，c.764T >C，c.836T > C，c.871T > G, c.1039+2T > C，c.935A > G, c.1094T > C，c.1126G > A。
9.用于治疗DSAP的治疗剂，其包含反义RNA，所述反义RNA特异于权利要求1的突变的MVK基因，且不作用于正常的MVK基因。
10.用于治疗DSAP的治疗剂，其包含抗体，所述抗体特异于权利要求1的突变的MVK基因所编码的蛋白，且不作用于正常的MVK基因所编码的蛋白。
11.试剂盒，其包含权利要求8的诊断剂，或权利要求9的治疗剂，或权利要求10的治疗剂。
12.诊断受试者是否患有DSAP的方法，其包括，检测受试者的MVK基因是否存在杂合突变； 优选地，所述杂合突变选自错义突变、起始密码子突变、缺失突变、插入突变和剪接位点突变中的一种或多种； 优选地，所述杂合突变位于这样的区域，所述区域选自MVK基因的外显子2-11中的一个或多个； 优选地，所述杂合突变位于MVK基因的第2个、第3个、第5个、第6个、第7个、第8个、第9个、第10个和/或11个外显子； 优选地，所述杂合突变位于选自下列位置中的一个或多个位置:c.3，c.34，c.122,c.481—482，c.417—418，c.604，c.635—637，c.764，c.836，c.871，c.1039+2，c.935，c.1094，c.1126 ； 优选地，所述杂合突变是选自下列突变中的一个或多个突变:C.3G > C，c.34G > C，c.122T > C，c.481_482delTG，c.417_41 8insC，c.604G > A, c.635_637delGAG，c.764T >C, c.836T > C, c.871T > G, c.1039+2T > C, c.935A > G, c.1094T > C, c.1126G > A ； 如果存在所述杂合突变，则判断受试者患有DSAP综合征。
13.检测MVK基因的突变的方法，其包括使用权利要求8的诊断剂。
14.治疗DSAP的方法，其包括使用权利要求9或10的治疗剂。
15.权利要求8的诊断剂在制备用于检测MVK基因的突变和/或用于诊断DSAP的试剂盒中的用途。
16.权利要求9或10的治疗剂在制备用于治疗DSAP综合征的试剂盒中的用途。
17.权利要求8的诊断剂用于DSAP综合征疾病筛查的用途， 优选地，所述的疾病筛查为产前DSAP综合征疾病筛查。
18.—种DSAP综合征疾病筛查或产前DSAP综合征疾病筛查的方法，其包括使用权利要求8的诊断剂或权利要求12的诊断方法。
全文摘要
本发明鉴定了与DSAP相关的致病基因MVK基因。并且，本发明提供了突变的TRPV 3基因、其编码的蛋白质及其用途，包含突变的TRPV3基因的载体、宿主细胞以及试剂盒。此外，本发明还提供了用于诊断或治疗DSAP的方法，用于所述方法的诊断剂或治疗剂，以及包含所述诊断剂或治疗剂的试剂盒。
文档编号C07K14/47GK103205432SQ201210006290
公开日2013年7月17日 申请日期2012年1月11日 优先权日2012年1月11日
发明者张学军, 蒋涛, 杨森, 孙良丹, 左先波, 王俊, 汪建, 杨焕明 申请人:安徽医科大学第一附属医院, 深圳华大基因科技有限公司