专利名称：一种从杜仲叶快速纯化桃叶珊瑚甙的方法
技术领域：
本发明属于天然产物加工领域，涉及了一种杜仲叶桃叶珊瑚甙的提取纯化方法， 更具体地说是涉及了一种从杜仲叶中提取并纯化高纯度桃叶珊瑚甙的方法。
背景技术：
桃叶珊瑚甙是一种环烯醚萜甙类化合物，为白色粉末。由于C4去甲环烯醚萜甙结构不太稳定，桃叶珊瑚甙相对稳定性较差。桃叶珊瑚甙吸湿性不是很强，在潮湿的情况下很不稳定，容易变色，而干燥品相对较稳定。光线对桃叶珊瑚甙的影响较小，而温度、氧化剂的影响较大。碱性物质对桃叶珊瑚甙的影响比酸性物质大得多。桃叶珊瑚甙的甙元及其多聚体具有抗菌作用，是一种抗菌素，其抗炎、抗菌性能与当药苦甙相同。桃叶珊瑚甙本身不具抗病毒作用，但当它与葡萄糖甙酶一起预培养后会产生明显的抗病毒作用。可刺激副交感神经中枢、加速尿酸转移和排出，利尿作用明显。能促进干细胞再生，明显抑制乙型肝炎病毒D N A的复制。另外桃叶珊瑚甙具有镇痛、清湿热、 抗肿瘤等作用。桃叶珊瑚甙是杜仲中有效活性成分之一，杜仲皮、叶和种子中均含有此成分，种子中含量可高达19% 23%，是杜仲种子的苦味素物质之一。在杜仲皮和叶中桃叶珊瑚甙含量有较大区别，杜仲叶比杜仲皮含量高，由于环烯醚双键性质活泼，甙易被酶和酸水解，故甙在鲜品和干品中的含量差别也很大。温度对桃叶珊瑚甙抗氧化活性的影响很大，桃叶珊瑚甙抗氧化活性保存率随着加热时间的延长而出现不同程度的下降趋势，温度愈高保存率下降愈快。在室温条件下4h 内桃叶珊瑚甙是稳定的；在高温条件下连续加热处理8h，桃叶珊瑚甙抗氧化活性损失高达 70%。这可能因为桃叶珊瑚甙本身是热敏性物质，高温处理会使其发生氧化分解，产生黑色物质。100°C处理的桃叶珊瑚甙溶液在第I个小时内即已颜色变深。桃叶珊瑚甙在杜仲种子含量最高，由于杜仲种子产量少，另外杜仲种子目前主要用于热榨提取杜仲油，虽有文献报道从杜仲籽柏中提取桃叶珊瑚甙，必须采用冷榨或超临界CO2提取杜仲油后得到的杜仲籽柏，才能用于提取桃叶珊瑚甙，但是会影响杜仲油原有风味。而且目前都是采用制备色谱法进行制备高纯度桃叶珊瑚甙，严重影响了桃叶珊瑚甙的规模化生产。目前杜仲叶主要处理方法是采用阴干或晒干，对其桃叶珊瑚甙含量具有很大影响，在干燥过程中桃叶珊瑚甙发生氧化分解，严重影响了桃叶珊瑚甙的收率。
发明内容
本发明的目的在于针对目前杜仲种子资源不足，严重影响了桃叶珊瑚甙的规模化生产，而采用干燥过后杜仲叶桃叶珊瑚甙发生氧化分解造成收率低下，公开一种利用萃取、 结晶与重结晶方法从杜仲叶中规模化生产桃叶珊瑚甙，有效解决杜仲种子资源不足问题， 又能提高杜仲叶中桃叶珊瑚甙收率。因此，本发明提供一种从杜仲叶中快速纯化桃叶珊瑚甙的方法，其具体步骤如下(I)将新鲜杜仲叶采用茶叶滚筒杀青机进行杀青2-3分钟，立即进行绞碎；(2)将杜仲叶与80%乙醇溶液进行混合提取，加热至40°C提取90min ；(3)过滤除渣后滤液中加入适量抗氧化剂在50°C进行真空浓缩至原有体积的 1/10-1/15 ；(4)将浓缩液用2倍体积的石油醚进行萃取，取水相；(5)将水相用KLFC-150大孔树脂吸附，并用乙醇溶液进行洗脱，得到洗脱液；(6)将洗脱液再经浓缩至原有体积的1/3-1/8，室温过夜结晶得到桃叶珊瑚甙粗品;(7)加入70%乙醇进行加热溶解，然后加入水调节乙醇终浓度为30-40%，室温过
夜再结晶，得桃叶珊瑚甙纯品。在一个实施方案中，步骤2中所述加入80%乙醇溶液的量，按体积(V)/杜仲叶重量(kg)比为 2-4 I。在一个实施方案中，步骤3中所述过滤过程是纱布过滤、陶瓷膜过滤，其中，优选是三层纱布过滤2次、陶瓷膜过滤I次；加入适量抗氧化剂是抗坏血酸，滤液体积与加入抗坏血酸的重量比(V/g)为25-50 8。在一个实施方案中，步骤5中所述的乙醇溶液是用pH6. 5左右的水与乙醇进行配制，其浓度为50%的乙醇溶液。在一个实施方案中，步骤7的乙醇溶液的终浓度为35%。技术效果I、本发明方法中所用的原料、设备均为常见的普通原料、设备，避免了工业化生产过程中对于昂贵原材料、仪器的依赖，大大地降低了生产成本。2、杜仲叶产量高、价格低，来源方便，后续资源有保障。使用杜仲叶作为杜仲皮、杜仲籽的替代物，既大大提高了杜仲叶的利用效率，提高杜仲叶的附加值，又摆脱了对于杜仲籽的依赖，完全缓解了市场对杜仲籽的大量需求，同时又能对废弃杜仲叶充分利用。3、本发明方法操作简单，仅使用萃取、树脂层析过滤、结晶再结晶技术，也不需要精密仪器或自动化设备，可在杜仲资源丰富的乡镇企业进行生产，这极大地降低了桃叶珊瑚甙的生产成本，简化了生产过程，确保规模化生产桃叶珊瑚甙。4、本发明所用的试剂均为无毒、廉价、量产的化学试剂，整个过程中可利用成熟的试剂回收的常规技术，这极大地降低了向环境排放废弃物的风险。
图I :从杜仲叶中提取桃叶珊瑚甙的纯度HPLC曲线图，其中纵坐标表示峰面积，横坐标表示分离时间。图2 :桃叶珊瑚甙标准品的HPLC曲线图，其中纵坐标表示峰面积，横坐标表示分离时间。
具体实施例方式下面结合附图，用本发明的实施实例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限制本发明。实施例I将鲜杜仲叶采用茶叶滚筒杀青机(岳阳市农业机械化研究所生产茶叶滚筒杀青机6CST-80)进行杀青并绞碎，称取IOOkg杜仲叶加入80%乙醇溶液400L，加热至40°C提取 90min后；三层纱布过滤2次、陶瓷膜过滤I次得滤液，加入IOOg抗坏血酸在50°C进行真空浓缩至40L ;将浓缩液用80L石油醚进行萃取，取水相；上KLFC-150大孔树脂柱子吸附，并用50%乙醇溶液进行洗脱，得到洗脱液80L ;将洗脱液再经浓缩至15L，室温过夜结晶得到桃叶珊瑚甙粗品I. 76kg ;加入70%乙醇溶液2. 5L进行搅拌加热溶解，然后加入水调节乙醇终浓度为35%，室温过夜再结晶，得桃叶珊瑚甙纯品O. 81kg。检测设备为AgilentllOO高效液相色谱仪，色谱柱为Hypersil ODS(150mmX4. 6mm，5l·!)，检测条件流动相为甲醇1%醋酸水溶液(88 12，￥八)、检测波长为21011111、流速0.5111171^11、柱温301、进样量为2(^1^ 检测结晶样品的含量为98. 82%的桃叶珊瑚甙，检测结果如图I所示。实施例2将鲜杜仲叶采用茶叶滚筒杀青机(岳阳市农业机械化研究所生产茶叶滚筒杀青机6CST-80)进行杀青并绞碎，称取200kg杜仲叶加入80%乙醇溶液800L，加热至40°C提取90min后；三层纱布过滤2次、陶瓷膜过滤I次得滤液，加入120g抗坏血酸在50°C进行真空浓缩至55L ;将浓缩液用IlOL石油醚进行萃取，取水相；iKLFC-150大孔树脂吸附，并用50%乙醇溶液进行洗脱，得到洗脱液120L ;将洗脱液再经浓缩至25L，室温过夜结晶得到桃叶珊瑚甙粗品3. 27kg ;加入70%乙醇溶液5L进行搅拌加热溶解，然后加入水调节乙醇终浓度为35%，室温过夜再结晶，得桃叶珊瑚甙纯品I. 52kg，并按实例I进行检测，样品中桃叶珊瑚甙的含量为99. 04%。实施例3将鲜杜仲叶采用茶叶滚筒杀青机(岳阳市农业机械化研究所生产茶叶滚筒杀青机6CST-80)进行杀青并绞碎，称取300kg杜仲叶加入80%乙醇溶液1000L，加热至40°C提取90min后；三层纱布过滤2次、陶瓷膜过滤I次得滤液，加入120g抗坏血酸在50°C进行真空浓缩至70L ;将浓缩液用140L石油醚进行萃取，取水相；iKLFC-150大孔树脂吸附，并用50%乙醇溶液进行洗脱，得到洗脱液140L ;将洗脱液再经浓缩至30L，室温过夜结晶得到桃叶珊瑚甙粗品5. 38kg ;加入70%乙醇溶液6L进行搅拌加热溶解，然后加入水调节乙醇终浓度为35%，室温过夜再结晶，得桃叶珊瑚甙纯品2. 47kg，并按实例I进行检测，样品中桃叶珊瑚甙的含量为98. 79%。
权利要求
1.本发明提供一种从杜仲叶中快速纯化桃叶珊瑚甙的方法，步骤包括(1)将新鲜杜仲叶采用茶叶滚筒杀青机进行杀青2—3分钟，立即进行绞碎；(2)将杜仲叶与80%乙醇溶液进行混合提取，加热至40°C提取90min；(3)过滤除渣后滤液中加入适量抗氧化剂在50°C进行真空浓缩至原有体积的 1/10-1/15 ；(4)将浓缩液用2倍体积的石油醚进行萃取，取水相；(5)将水相用KLFC- 150大孔树脂吸附，并用乙醇溶液进行洗脱，得到洗脱液；(6)将洗脱液再经浓缩至原有体积的1/3-1/8，室温过夜结晶得到桃叶珊瑚甙粗品；(7)加入70%乙醇进行加热溶解，然后加入水调节乙醇终浓度为30-40%，室温过夜再结晶，得桃叶珊瑚甙纯品。
2.根据权利要求I的方法，其中步骤2中所述加入80%乙醇溶液的量，按体积(V)/杜仲叶重量(kg)比为2-4:1。
3.根据权利要求2的方法，其中步骤3中所述过滤过程是纱布过滤、陶瓷膜过滤，其中， 优选是三层纱布过滤2次、陶瓷膜过滤I次；加入适量抗氧化剂是抗坏血酸，滤液体积与加入抗坏血酸的重量比(V/g)为25— 50 :8。
4.根据权利要求3的方法，其中步骤5中乙醇溶液是用pH6.5左右的水与乙醇进行配制，其浓度为50%的乙醇溶液。
5.根据权利要求3的方法，其中步骤7中乙醇溶液的终浓度为35%。
全文摘要
本发明提供了一种从中提取高纯度桃叶珊瑚甙的方法，大大地提高桃叶珊瑚甙得率和纯度。提出了一整套从杜仲叶分离提取得到高纯度的桃叶珊瑚甙，采用杀青处理新鲜杜仲叶，萃取，大孔吸附树脂层析，浓缩，结晶，得到桃叶珊瑚甙纯品。整个分离过程中对环境条件要求不高，分离时间较短，纯度高。分离材料易得便宜，分离操作过程简单，易控制，采用结晶和重结晶，纯化效率高，降低对环境污染的风险，同时又节约了资源。
文档编号C07H1/08GK102603829SQ20121004103
公开日2012年7月25日 申请日期2012年2月22日 优先权日2012年2月22日
发明者向华, 唐忠海 申请人:向华