专利名称：滇姜花中两种滇姜花素的制备方法
技术领域：
本发明属于中药提取分离技术领域，涉及滇姜花中两种滇姜花素的制备方法，特别涉及一种超临界CO2萃取和制备液相色谱法结合制备两种滇姜花素的方法。
背景技术：
滇姜花(H. yunnanense Gagnep.)为姜花属植物,具有镇痛、驱寒等药效。仅分布于云南。其中有效成分滇姜花素A、滇姜花素B和滇姜花素E等具有抗肿瘤活性，已引起人们的重视。滇姜花素A，英文名Yunnancoronarin A, CAS 号162762_93-8，分子式C2(lH2802，分子量300. 4，无色油状物。滇姜花素B，英文名Yunnancoronarin B，CAS 号162762_94_9，分子式C2(lH2803，分子量316. 44，无色针晶(乙醚)。滇姜花素A和滇姜花素B均具有细胞毒活性，对KB细胞的IC50分别为7. 60,2. 04
微克/晕升。目前国内外对滇姜花研究较少，本发明提供一种滇姜花中特征性成分滇姜花素A和滇姜花素B的制备方法，为滇姜花的研究提供物质基础。
发明内容
本发明的目的在于提供一种超临界CO2和制备液相色谱结合提取滇姜花中两种滇姜花素的方法。滇姜花中两种滇姜花素的制备方法，其特征在于它是经CO2超临界流体萃取得二萜类化合物、氧化铝柱层析分离、再利用制备型液相纯化得两种滇姜花素产品。所述的滇姜花中两种滇姜花素的制备方法，其特征在于包括以下步骤
(1)CO2超临界流体萃取
取滇姜花的根粉碎，置于萃取釜中，通入30-60%原料量的乙醇作为夹带剂参与萃取，控制萃取温度保持在30-60 °C，压力为25-42MPa，CO2流速为15_28kg/h，进行萃取60_150min ；
(2)氧化铝柱层析分离
将步骤(2)中所得萃取物经氧化铝柱层析，依次用环己烷、环己烷-二氯甲烷(2:1)、甲醇梯度洗脱，经TLC监测，合并滇姜花素流分，回收至干，得滇姜花素粗品；
(3)制备液相纯化
将上述粗品用甲醇溶解，注入制备型高效液相色谱纯化，收集滇姜花素A和滇姜花素B对应成分峰流出液，真空干燥得姜花素A和滇姜花素B产品。所述的制备液相的流动相为甲醇-水或乙腈-水溶剂系统，体积百分比为40-70%。本发明的优点在于本发明采用的工艺，萃取温度低，可避免成分热分解；具有制备量大、产品纯度高、简单易行等优点，可产业规模化。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明进行说明。实施例I :
取Ikg滇姜花的根，粉碎，置于萃取釜中，通入300ml乙醇作为夹带剂参与萃取，控制萃取温度保持在60°C，压力为25MPa，CO2流速为15kg/h，进行萃取150min ;将所得萃取物用甲醇分散，过氧化铝柱层析，依次用环己烷、环己烷-二氯甲烷(2:1)、甲醇梯度洗脱，经TLC监测，合并滇姜花素流分，回收至干，得滇姜花素粗品；将上述粗品用甲醇溶解，配制成20mg/ml浓度的溶液注入制备型高效液相色谱纯化，以70%甲醇-水为溶剂系统，调节流速为20ml/min，收集滇姜花素A和滇姜花素B对应成分峰流出液，真空干燥得姜花素A280mg和滇姜花素B41mg，含量分别98. 1%和98. 4%。实施例2
取Ikg滇姜花的根，粉碎，置于萃取釜中，通入600ml乙醇作为夹带剂参与萃取，控制萃取温度保持在30°C，压力为42MPa，CO2流速为28kg/h，进行萃取60min ;将所得萃取物用甲醇分散，过氧化铝柱层析，依次用环己烷、环己烷-二氯甲烷(2:1)、甲醇梯度洗脱，经TLC监测，合并滇姜花素流分，回收至干，得滇姜花素粗品；将上述粗品用甲醇溶解，配制成20mg/ml浓度的溶液注入制备型高效液相色谱纯化，以40%乙腈-水为溶剂系统，调节流速为20ml/min，收集滇姜花素A和滇姜花素B对应成分峰流出液，真空干燥得姜花素A227mg和滇姜花素B42mg，含量分别为99. 3%和97. 8%。实施例3:
取5kg滇姜花的根，粉碎，置于萃取釜中，通入2. 5L乙醇作为夹带剂参与萃取，控制萃取温度保持在50°C，压力为38MPa，CO2流速为22kg/h，进行萃取120min ;将所得萃取物用甲醇分散，过氧化铝柱层析，依次用环己烷、环己烷-二氯甲烷(2:1)、甲醇梯度洗脱，经TLC监测，合并滇姜花素流分，回收至干，得滇姜花素粗品；将上述粗品用甲醇溶解，配制成20mg/ml浓度的溶液注入制备型高效液相色谱纯化，以50%乙腈-水为溶剂系统，调节流速为20ml/min，收集滇姜花素A和滇姜花素B对应成分峰流出液，真空干燥得姜花素A982mg和滇姜花素B172mg，含量分别为97. 5%和98. 1%。实施例4:
取IOkg滇姜花的根，粉碎，置于萃取釜中，通入4. 5L乙醇作为夹带剂参与萃取，控制萃取温度保持在45°C，压力为40MPa，CO2流速为25kg/h，进行萃取120min ;将所得萃取物用甲醇分散，过氧化铝柱层析，依次用环己烷、环己烷-二氯甲烷(2:1)、甲醇梯度洗脱，经TLC监测，合并滇姜花素流分，回收至干，得滇姜花素粗品；将上述粗品用甲醇溶解，配制成20mg/ml浓度的溶液注入制备型高效液相色谱纯化，以60%甲醇-水为溶剂系统，调节流速为20ml/min，收集滇姜花素A和滇姜花素B对应成分峰流出液，真空干燥得姜花素A2. Ig和滇姜花素B384mg，含量分别为98. 6%和99. 3%。
权利要求
1.滇姜花中两种滇姜花素的制备方法，其特征在于它是经CO2超临界流体萃取得ニ萜类化合物、氧化铝柱层析分离、再利用制备型液相纯化得两种滇姜花素产品。
2.根据权利要求I所述的滇姜花中两种滇姜花素的制备方法，其特征在于包括以下步骤 (1)CO2超临界流体萃取 取滇姜花的根粉碎，置于萃取釜中，通入30-60%原料量的こ醇作为夹带剂參与萃取，控制萃取温度保持在30-60°C，压カ为25-42MPa，CO2流速为15_28kg/h，进行萃取60_150min ； (2)氧化铝柱层析分离 将步骤(2)中所得萃取物经氧化铝柱层析，依次用环己烷、环己烷-ニ氯甲烷(2:1)、甲醇梯度洗脱，经TLC监测，合并滇姜花素流分，回收至干，得滇姜花素粗品； (3)制备液相纯化 将上述粗品用甲醇溶解，注入制备型高效液相色谱纯化，收集滇姜花素A和滇姜花素B对应成分峰流出液，真空干燥得姜花素A和滇姜花素B产品。
3.根据权利要求I所述的滇姜花中两种滇姜花素的制备方法，其特征在于所述的制备液相的流动相为甲醇-水或こ腈-水溶剂系统，体积百分比为40-70%。
全文摘要
本发明公开了滇姜花中两种滇姜花素的制备方法，它是经CO2超临界流体萃取得二萜类化合物、氧化铝柱层析分离、再利用制备液相纯化得两种滇姜花素产品。本发明不仅可以连续提取出滇姜花中滇姜花素类化合物，而且能够制备出高纯度的滇姜花素A和滇姜花素B产品，它既适合小型实验，也可以用于产业化生产。
文档编号C07D307/58GK102627619SQ20121011551
公开日2012年8月8日 申请日期2012年4月19日 优先权日2012年4月19日
发明者刘东锋, 吴艳波 申请人:南京泽朗医药科技有限公司