专利名称：一种维替新拉亭的提纯方法
技术领域：
本发明属于天然产物分离领域，尤其涉及一种采用高速逆流色谱法提取高含量维替新拉亭的方法。
背景技萝芙木，来源于夹竹桃科萝芙木属植物萝芙木ZfeoraJrZYa verticillata (Lour.)Baill.及云南萝芙木/ . yunnanensis Tsiang,以根入药。性苦,寒。有小毒。具有镇静，降压，活血止痛，清热解毒的功效。可用于高血压病，头痛，眩晕，失眠，高热不退等症；外用治跌打损伤，毒蛇咬伤等症。红果萝芙木含多种吲哚生物碱，目前已知吲哚生物碱类物质是红果萝芙木的主要降压成分。维替新拉亭，吲哚生物碱，无色针晶，mp. 324 326 °C (分解)，[α ]D+ll. 4° (c=0. 9，水)。分子式=C2tlH25N2O3Cl，分子量376. 88。已知维替新拉亭具有降压作用，对神经节有阻断作用，对正常和高血压动物有强的急性降压效力，且作用有明显的剂量依赖性。对中度和严重高血压患者肌注或静注本品，均有明显的急性降压作用，副反应很少。现有エ艺对维替新拉亭的提取研究涉及较少，尚未见批量制备维替新拉亭的方法报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供ー种从天然产物中提纯维替新拉亭方法。本发明之所以采用阳离子树脂富集，是因为维替新拉亭在酸性条件下呈离子状态，可以与阳离子树脂进行离子交换而吸附在阳离子树脂上，达到与杂质有效分离的目的；采用高速逆流色谱法进一歩分离纯化，因为该分离方法操作简便，同时也避免了样品的损失，与传统分离手段相比，克服了其操作繁琐，分离周期长的缺点，并具有制备量大，产品纯度高的优点。本发明是采用以下技术方案来实现的
取夾竹桃科植物红果萝芙木的根粉碎，用Γ10倍量酸性醇溶液冷浸或回流提取广4次，合并提取液，浓缩无醇后上阳离子树脂柱，用:T6BV50%こ醇溶液洗去杂质，将阳离子树脂从色谱柱中倒出，加氨水调节至ρΗ ΓΙΟ，采用こ酸こ酯回流提取2次，提取液浓缩至干得到维替新拉亭粗品，最后采用高速逆流色谱法进行分离纯化，以氯仿-甲醇-O. IMHCl(Γ8:3 5:3)作为两相溶剂系统，混匀后置分液漏斗中静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，将维替新拉亭粗品用下相溶解，进样后45min开始收集流出物，采用UV手段监测收集流出物，干燥即得产品。所述的酸性醇溶液是指pH2 4的6(Γ90%こ醇或甲醇溶液，酸可选用盐酸、硫酸、磷酸或甲酸中的ー种。所述的阳离子树脂选用强酸性阳离子树脂，吸附流速为I. 5 4ml/min。
所述的高速逆流色谱法分离，參数设定色谱仪转速75(T950r/min，流动相流速I 2.5ml/min。所述的干燥方法可选用喷雾干燥、冷冻干燥、真空干燥或微波干燥等方式中的一种。本发明的积极效果是
O强酸性阳离子树脂富集通过离子交换达到有效富集的目的，调碱后采用回流方式使维替新拉亭得到有效分离；
2)高速逆流色谱法分离无需使用载体，減少了操作过程中样品的损失，分离效果好，制备量大。下面将结合具体实施方式
进ー步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式实施例I :
取Ikg夾竹桃科植物红果萝芙木的根，粉碎，用10LpH2(甲酸)的60%甲醇溶液冷浸提取，提取液浓缩无醇后上阳离子树脂柱，控制吸附流速为I. 5ml/min，用3BV50%こ醇溶液洗去杂质，再将阳离子树脂从色谱柱中倒出，加氨水调节至PH9，采用こ酸こ酯回流提取2次，提取液浓缩至干得到维替新拉亭粗品；
将氯仿-甲醇-O. IMHCl按8:5:3的体积比量取，超声混合后加入分液漏斗中，静置使上、下相分层，取上相作为固定相，下相作为流动相，将上述粗品用下相溶解，再用上相泵满色谱柱，然后以I. 5ml/min的流速泵入流动相，平衡后设定色谱仪转速为750r/min，通过进样阀进样，设定UV检测器波长为280nm，依照图谱收集流出液，真空干燥即得维替新拉亭
I.lg，含量 98. 1%。实施例2:
取Ikg夾竹桃科植物红果萝芙木的根，粉碎，用4LpH4(硫酸)的60%こ醇溶液回流提取4次，提取液浓缩无醇后上阳离子树脂柱，控制吸附流速为2. 5ml/min，用6BV50%こ醇溶液洗去杂质，再将阳离子树脂从色谱柱中倒出，加氨水调节至PH10，采用こ酸こ酯回流提取2次，提取液浓缩至干得到维替新拉亭粗品；
将氯仿-甲醇-O. IMHCl按7:4:3的体积比量取，超声混合后加入分液漏斗中，静置使上、下相分层，取上相作为固定相，下相作为流动相，将上述粗品用下相溶解，再用上相泵满色谱柱，然后以I. 8ml/min的流速泵入流动相，平衡后设定色谱仪转速为850r/min，通过进样阀进样，设定UV检测器波长为280nm，依照图谱收集流出液，喷雾干燥即得维替新拉亭
I.2g，含量 97. 7%。实施例3:
取5kg夾竹桃科植物红果萝芙木的根，粉碎，用8LpH3 (磷酸)的60%こ醇溶液冷浸提取2次，提取液浓缩无醇后上阳离子树脂柱，控制吸附流速为3. 5ml/min，用5BV50%こ醇溶液洗去杂质，再将阳离子树脂从色谱柱中倒出，加氨水调节至PH9，采用こ酸こ酯回流提取2次，提取液浓缩至干得到维替新拉亭粗品；
将氯仿-甲醇-O. IMHCl按6:4:3的体积比量取，超声混合后加入分液漏斗中，静置使上、下相分层，取上相作为固定相，下相作为流动相，将上述粗品用下相溶解，再用上相泵满色谱柱，然后以I. 5ml/min的流速泵入流动相，平衡后设定色谱仪转速为900r/min，通过进样阀进样，设定UV检测器波长为280nm，依照图谱收集流出液，微波干燥即得维替新拉亭
4.6g，含量 98. 6%ο实施例4:
取5kg夾竹桃科植物红果萝芙木的根，粉碎，用10LpH2 (盐酸)的60%甲醇溶液冷浸提取2次，提取液浓缩无醇后上阳离子树脂柱，控制吸附流速为4ml/min，用4BV50%こ醇溶液洗去杂质，再将阳离子树脂从色谱柱中倒出，加氨水调节至PH10，采用こ酸こ酯回流提取2次，提取液浓缩至干得到维替新拉亭粗品；
将氯仿-甲醇-O. IMHCl按5:3:3的体积比量取，超声混合后加入分液漏斗中，静置使上、下相分层，取上相作为固定相，下相作为流动相，将上述粗品用下相溶解，再用上相泵满色谱柱，然后以2. Oml/min的流速泵入流动相，平衡后设定色谱仪转速为950r/min，通过进样阀进样，设定UV检测器波长为280nm，依照图谱收集流出液，真空干燥即得维替新拉亭
4.8g，含量 98. 7%ο实施例5:
取IOkg夾竹桃科植物红果萝芙木的根，粉碎，用6LpH4(硫酸)的60%こ醇溶液冷浸提取3次，提取液浓缩无醇后上阳离子树脂柱，控制吸附流速为3ml/min，用3BV50%こ醇溶液洗去杂质，再将阳离子树脂从色谱柱中倒出，加氨水调节至PH9，采用こ酸こ酯回流提取2次，提取液浓缩至干得到维替新拉亭粗品；
将氯仿-甲醇-O. IMHCl按7:4:3的体积比量取，超声混合后加入分液漏斗中，静置使上、下相分层，取上相作为固定相，下相作为流动相，将上述粗品用下相溶解，再用上相泵满色谱柱，然后以2. Oml/min的流速泵入流动相，平衡后设定色谱仪转速为800r/min，通过进样阀进样，设定UV检测器波长为280nm，依照图谱收集流出液，真空干燥即得维替新拉亭
8.lg，含量 99. 1%。实施例6:
取IOkg夾竹桃科植物红果萝芙木的根，粉碎，用9LpH3 (盐酸)的60%甲醇溶液回流提取3次，提取液浓缩无醇后上阳离子树脂柱，控制吸附流速为2. 8ml/min，用5BV50%こ醇溶液洗去杂质，再将阳离子树脂从色谱柱中倒出，加氨水调节至PH9，采用こ酸こ酯回流提取2次，提取液浓缩至干得到维替新拉亭粗品；
将氯仿-甲醇-O. IMHCl按8:4:3的体积比量取，超声混合后加入分液漏斗中，静置使上、下相分层，取上相作为固定相，下相作为流动相，将上述粗品用下相溶解，再用上相泵满色谱柱，然后以2. 2ml/min的流速泵入流动相，平衡后设定色谱仪转速为850r/min，通过进样阀进样，设定UV检测器波长为280nm，依照图谱收集流出液，冷冻干燥即得维替新拉亭
9.3g，含量 98. 4%ο
权利要求
1.一种维替新拉亭的提纯方法，其特征在于包含以下步骤取夹竹桃科植物红果萝芙木的根粉碎，用4 10倍量酸性醇溶液冷浸或回流提取广4次，合并提取液，浓缩无醇后上阳离子树脂柱，用3飞BV50%乙醇溶液洗去杂质，将阳离子树脂从色谱柱中倒出，加氨水调节至pHflO，采用乙酸乙酯回流提取2次，提取液浓缩至干得到维替新拉亭粗品，最后采用高速逆流色谱法进行分离纯化，以氯仿-甲醇-0. IMHCl (4m: 3)作为两相溶剂系统，混匀后置分液漏斗中静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，将维替新拉亭粗品用下相溶解，进样后45min开始收集流出物，采用UV手段监测收集流出物，干燥即得产品。
2.如权利要求I所述的一种维替新拉亭的提纯方法，其特征在于所述的酸性醇溶液是指pH2 4的60、0%乙醇或甲醇溶液，可选用盐酸、三氟乙酸或甲酸中的一种进行调酸。
3.如权利要求I所述的一种维替新拉亭的提纯方法，其特征在于所述的阳离子树脂选用强酸性阳离子树脂，吸附流速为I. 5 4ml/min。
4.如权利要求I所述的一种维替新拉亭的提纯方法，其特征在于所述的干燥方法可选用喷雾干燥、冷冻干燥、真空干燥或微波干燥等方式中的一种。
全文摘要
本发明涉及一种维替新拉亭的提纯方法，工艺步骤包括取夹竹桃科植物红果萝芙木的根粉碎，用酸性醇溶液冷浸或回流提取1~4次，合并提取液，浓缩至无醇后上阳离子树脂柱，用中性醇溶液洗去杂质，再将阳离子树脂从色谱柱中倒出，加氨水调节至pH9~10，采用乙酸乙酯回流提取，提取液浓缩至干，最后采用高速逆流色谱法进行分离纯化，流出物干燥即得产品。本方法毒性有机试剂用量小、制备量大，样品损失少，产品含量高。
文档编号C07D491/22GK102659798SQ201210117160
公开日2012年9月12日 申请日期2012年4月20日 优先权日2012年4月20日
发明者刘东锋, 吴艳波 申请人:南京泽朗医药科技有限公司