一个治疗肺动脉高压的新靶点的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一个治疗肺动脉高压的新靶点。该治疗肺动脉高压新靶点针对五羟色胺2B型受体(5-HT2BR)，肺动脉高压的显著性特点为肺动脉的高收缩性，抑制5-HT2BR活性可明显抑制肺动脉的收缩功能，该受体可以作为新的肺动脉高压的治疗靶点。
【专利说明】一 ^Iv治疗肺动脉高压的新朝点
【技术领域】
[0001]本发明涉及五羟色胺2B型受体(5-HT2BR)通过參与肺动脉的收缩从而在肺动脉高压过程中起到重要作用，从而作为治疗肺动脉高压的新靶点。 【背景技术】
[0002]肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)是以肺动脉高收缩性和血管重构为特点并伴随肺动脉压カ增高，右心室衰竭的慢性疾病[1]，PAH已成为一类严重威胁人类身心健康的常见疾病。正常人在静息状态下肺动脉压カ为12-16mmHg，而当肺动脉压カ高于25mmHg吋，即被定义为肺动脉高压。PAH的主要症状包括呼吸短促，头晕和晕厥，胸疼等。PAH分为原发性与继发性。继发性肺动脉高压常与药物、毒素、HIV感染、胶原血管病-硬皮病、慢性阻塞性肺病(COPD)、间质性肺病(ILD)、睡眠呼吸障碍、肺泡通气不足等有关。PAH没有有效的治疗药物，现有治疗方法仅能缓解PAH发病过程。利尿药和强心药通过调节心脏功能缓解PAH症状，但不针对PAH发病原因；钙离子通道阻断剂和内皮素受体阻断剂属于血管舒张类药物，仅适用于少数人群；吸氧是常规治疗方法。因此目前对PAH潜在的有效治疗靶点的研究有广阔的应用前景。
[0003]PAH与内皮素-1 (ET-1)、血栓素A2 (TXA2)、一氧化氮(NO)、前列环素(PGI2)、转化生长因子(TGFP)等血管舒缩及细胞增殖相关因子有密切关系。五羟色胺(5-hydroxytryptamin, 5-HT)在PAH中有重要的病理生理意义,这种观点于20世纪中旬被提出。这是由于减肥药aminorex的使用在20世纪60年代在奥地利、德国及瑞士等国家引起PAH的广泛流行，而fenfluramine与dexfenfIuramine于20世纪末在欧美国家广泛使用导致了又ー批PAH的高发。Aminorex和fenfluramine药物具有抑制5-HT的吸收作用且促进5-HT的释放，造成患者血浆中5-HT浓度明显增高，从而诱导了 PAH的发生[2_4]。研究发现，连续服用dexfenf Iuramine三个月，摧患PAH的几率增加了 23倍[4]。上述事实提示5-HT在PAH发病过程中具有重要作用。
[0004]5-HT具有多种受体，其中受体5_HT1B、2A和2B存在于肺动脉中[5]。PAH肺动脉5-HT2BR的表达水平升高，而敲除5-HT2BR或使用其抑制剂可以逆转缺氧诱导的小鼠PAH的发生发展过程[6]。提示5-HT2BR在PAH发病过程中具有关键作用。但5-HT2BR在PAH中的作用机制及其调控还不清楚。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种在肺动脉高压过程中參与血管收缩的受体5-HT2BR，作为肺动脉高压治疗的新祀点。
[0006]本发明所提供5-HT2BR蛋白序列号为:NP_058946.1【专利附图】
【附图说明】
[0007]图1为5-HT2BR在肺动脉高压大鼠中表达增高[0008]A, B为在肺动脉中利用免疫组化染色检测5-HT2BR表达结果
[0009]C，D为在肺动脉中利用western blot检测5-HT2BR表达结果
[0010]E，F为在肺动脉中利用PCR检测5-HT2BR表达结果
[0011]图2为5-HT2BR特异性激动剂诱导的肺动脉收缩在肺动脉高压大鼠中增强
[0012]A,B为在野百合碱(monocrotaline,MCT)诱导的肺动脉高压大鼠中5-HT2BR介导的肺动脉收缩
[0013]C，D为在慢性缺氧诱导的肺动脉高压大鼠中5-HT2BR介导的肺动脉收缩【具体实施方式】
[0014]图1为5-HT2BR在肺动脉高压大鼠中表达增高
[0015]实验建立了两种肺动脉高压大鼠模型，野百合碱(monocrotaline, MCT)及慢性缺氧(chronic hypoxia, CH)诱导的PAH大鼠模型。单次皮下注射60mg/Kg剂量的MCT, 3周后即可形成PAH大鼠模型。慢性缺氧PAH大鼠模型的建立是将大鼠置于10%氧气浓度的环境下持3周，即可形成肺动脉高压大鼠模型。
[0016]我们利用免疫组化实验方法观察肺动脉5-HT2BR在PAH疾病过程中的表达。使用肺动脉冰冻切片进行5-HT2BR免疫组化染色，发现在MCT及CH大鼠肺动脉平滑肌中，5-HT2BR表达增高。提取肺动脉蛋白及mRNA，利用Western blot和RT-qPCR检测5-HT2BR表达水平，也证实了这ー变化。
[0017]图2为5-HT2BR特异性激动剂诱导的肺动脉收缩在肺动脉高压大鼠中增强
[0018]在5-HT2BR表达变化的基础上，我们利用离体微血管张カ测定仪检测5-HT2BR介导的肺动脉收缩功能的变化 。分离大鼠的肺动脉，置于微血管离体张力测定仪中，在37°C预热的krebs液平衡90分钟，L-NAME预处理10分钟以排除内皮舒张功能。使用5-HT2BR特异性激动剂BW723C86刺激血管，观察血管张カ变化。结果显示正常大鼠肺动脉对于5-HT2BR激动剂基本无收缩反应，但在MCT或慢性缺氧诱导的PAH大鼠中，BW723C86诱导的肺动脉收缩明显增强，这ー实验说明PAH肺动脉的高收缩性是由5-HT2BR介导的。
【权利要求】
1.ー个治疗肺动脉高压的新靶点。该治疗肺动脉高压新靶点针对五羟色胺2B型受体(5-HT2BR)，肺动脉高压的显著性特点为肺动脉的高收缩性，抑制5-HT2BR活性可明显抑制肺动脉的收缩功能，该受体可以 作为新的肺动脉高压的治疗靶点。
【文档编号】C07K14/705GK103467596SQ201210183131
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2012年6月6日 优先权日:2012年6月6日
【发明者】汪南平, 刘雅涵, 赵蓓蕾 申请人:北京大学