专利名称：一种结晶法提高甜菊糖总甙含量的方法
技术领域：
本发明属于生物工程和新型甜味剂领域，特别涉及一种提高甜菊糖总甙含量的方法。
背景技术：
甜菊糖是从菊科草本植物甜叶菊中精提的新型天然甜味剂。它具有高甜度、低热能的特点，其甜度是蔗糖的200— 350倍，热值仅为蔗糖的I / 300。是继甘蔗、甜菜之外第三种最具有开价值和健康推崇的天然蔗糖替代品，被誉为“世界第三糖源”。甜菊糖在一般着色性，安全无毒，被广泛应用于食品、酿酒、医药、日用化工等行业。甜菊糖的九种甜味成分中，甜菊甙、莱鲍迪甙A(RA)和莱鲍迪甙C(RC)的相对含量较高，共占90%以上，是决定甜菊糖味质的主要成分。RA甜度最高，相当于蔗糖的450倍，甜 味特性也与蔗糖相接近；甜菊甙甜味相当于蔗糖的300倍，具有一定的苦味和不愉快的后味，影响了甜菊糖的味质，限制了其更为广泛的应用。现有技术中并无一种简单易行的方法既能提高甜菊糖总甙含量又能提高莱鲍迪甙A含量的工艺。
发明内容
本发明解决的技术问题是提供一种能提高甜菊糖总甙含量的工艺。本发明提供一种利用下述工艺提高甜菊糖总甙含量的方法，工艺流程为将甜菊糖原料溶于有机溶剂中，保持温度为30_50°C，保持3-10小时进行结晶；结晶过程中进行搅拌，搅拌转速为20_150rpm ;上述结晶溶液进行固液分离，固体物质用溶剂洗涤除去母液杂质，烘干获得精制甜菊糖；结晶溶液的固液分离选择抽滤或离心分离；所述甜菊糖原料的质量与溶剂的质量体积比为I: I. 5-8 ;所述甜菊糖原料的质量与溶剂的质量体积比优选为1:1.5-6;上述甜菊糖原料总甙含量不得低于85% ；所述有机溶剂为甲醇与丙醇的混合溶剂；所述甲醇或丙醇纯度为95-100% ;所述甲醇或丙醇纯度优选为98-100% ；所述甲醇与丙醇的比例为1:2-10 ;所述甲醇与丙醇的比例优选1:3-8 ；所述结晶温度优选35_45°C，结晶时间优选3-8小时；所述结晶过程的搅拌转速优选20-100rpm ；所述固液分离的离心机转速为2000-5000rpm ;上述结晶分离后的固体洗晶时固体湿重与溶剂的体积比为1:1. 5-8，洗晶时间为15_50min ；上述精制样品的烘干温度为45-85°C。有益效果本发明可将甜菊糖原料的总甙由85%_90%提高至95%以上；本发明可提闻甜菊糖精制样品中RA的比例，进而改善甜菊糖的整体品质；本发明生产时搅拌与控温的能耗较低，操作简单，易于规模化、连续化生产；本发明中精制后样品的收率为30%_80%，母液可浓缩后回收，溶剂可蒸馏 后循环利用，实现了较好的经济效益和较低的环境污染。
具体实施例方式下面通过具体的实施方案叙述本发明方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的结晶条件进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。甜菊糖总甙的测定法法如下HPLC定量测定方法(JECFA 2010会议标准)检测步骤按照以下液相色谱条件检测每种糖甙的含量。试剂乙腈，在210nm下检测透光度>95%.标准品规格甜菊甙标准品干重纯度>99%莱鲍迪式A标准品干重纯度>99%含有9种甜菊糖甙的基准溶液鲍含甜菊甙、莱鲍迪甙A、莱鲍迪甙B、莱鲍迪甙C、莱鲍迪甙D、莱鲍迪甙F、杜尔克甙A、悬钩子甙和甜菊双糖甙。用7:3的水乙腈溶液将含有9种甜菊糖甙的标准溶液进行稀释，以便用来确定各个糖甙的出峰时间。标准品可在日本Wako公司和美国ChromaDex公司买到。标准品溶液的配制精确称取50毫克甜菊甙标准品和50毫克莱鲍迪甙A标准品，分别放入50毫升的容量瓶中，然后加入7:3的水乙腈溶液进行溶解至50毫升刻度。样品溶液的配制精确称取50 - 100毫克甜菊甙样品，放入50毫升的容量瓶中，然后加入7:3的水乙腈溶液进行溶解至50毫升刻度。检测步骤在以下条件下注入5 U I的样品溶液。色谱柱Shiseido公司的 Capcell pak C18 MG II 型色谱柱或者 Phenomenex 公司的Luna5ii C18 (2) 100A型色谱柱或者相当规格的色谱柱(长度250毫米；内径4. 6毫米，填料粒度5 ii m)。；流动相比例为32:68的乙腈和磷酸钠缓冲液(规格10mmol/L，pH值2. 6)的混合液。磷酸钠缓冲液的配置方法将2. 76克磷酸二氢钠溶解到2升水中，加入磷酸将pH值调整到2. 6流速I毫升/每分钟。
检测器210nm紫外检测。色谱柱温度40°C记录大约30分钟的检测结果。峰值识别和计算将样品溶液的出峰与含有9种甜菊糖甙的基准溶液的出峰时间相对比，确定样品溶液中各个出峰对应的糖甙。算出样品溶液中9种糖甙对应的峰面积，算出甜菊甙标准品溶液和莱鲍迪甙A标准品溶液的峰面积。按照以下公式，计算样品中莱鲍迪甙A之外的8种糖甙中每一种糖甙的百分比%X= [ffs/ff] X [fxAx/As] xlOO
按照以下公式，计算样品中莱鲍迪甙A的百分比% 莱鲍迪甙 A= [WR/ff] X [Ax/AR] xlOO公式中X代表每种糖甙Ws是甜菊甙标准品溶液中甜菊甙的干重(mg)WR是莱鲍迪甙A标准品溶液中莱鲍迪甙A的干重(mg)W是样品溶液中样品的干重(mg)As是甜菊甙标准品溶液的峰面积
AR是莱鲍迪甙A标准品溶液的峰面积Ax是样品溶液每种糖甙的峰面积fx是每种糖甙的分子量与甜菊甙分子量的比值1. 00(甜菊甙)，I. 20 (莱鲍迪甙A), 1.00(莱鲍迪甙B)，I. 18 (莱鲍迪甙C)，1.40(莱鲍迪甙D)，I. 16(莱鲍迪甙F)，0. 98(杜尔克甙A) ,0.80(悬钩子甙),0.80(甜菊双糖甙)。计算甜菊糖甙总量的百分比(将9种糖甙的百分比相加)实施例I取甜菊糖原料IOOg (60。。烘I小时)，加入150ml溶剂(甲醇:丙醇=1:5)，充分溶解后置于三口烧瓶中，水浴控制温度40°C，搅拌速度为60rpm，时间为8小时，将结晶混合液用布氏漏斗进行抽滤，所得晶体用溶剂洗涤30min，上述结晶分离后的固体洗晶时固体湿重与溶剂的体积比为1:1.5 ;溶剂中甲醇丙醇=1:5，551过夜烘干，得干样79.88。液相测
定结果为
—名RA —— ST TlF................................. RC RS RB DA 总成—
拟料44. 1232.42 —^L27^ 8. 16 今检8°"97
_____________AI MI--II _____
,, AQ —An Qn — 7~Z J1 ,, 未检未ft 未检 96.87ImifJ1J/ mi 49,35 40,90 1,21 5.41 ,,, ., ,.,
___I__ Hi HS HI _该实验主要的有益效果为总甙的提升，而且产品收率较高。实施例2取甜菊糖原料IOOg (60°C烘I小时)，加入300ml溶剂(甲醇丙醇=1:2)，充分溶解后置于三口烧瓶中，水浴控制温度30°C，搅拌速度为20rpm，时间为10小时，将结晶混合液用布氏漏斗进行抽滤，所得晶体用溶剂洗涤50min，上述结晶分离后的固体洗晶时固体湿重与溶剂的体积比为1:8，65°C过夜烘干，得干样44.3g。液相测定结果为
权利要求
1.结晶法提高甜菊糖总甙含量的方法，包括如下步骤 将甜菊糖原料溶于有机溶剂中，保持温度为30-50°C，保持3-10小时进行结晶；结晶过程中进行搅拌，搅拌转速为20-150rpm;上述结晶溶液进行固液分离，固体物质用溶剂洗涤除去母液杂质，烘干获得精制甜菊糖；所述甜菊糖原料的质量与溶剂的质量体积比为1:1. 5-8 ;所述有机溶剂为甲醇与丙醇的混合溶剂，所述甲醇与丙醇的比例为1:2-10。
2.根据权利要求I所述结晶法提高甜菊糖总甙含量的方法，其特征在于所述结晶溶液的固液分离选择抽滤或离心分离。
3.根据权利要求I所述结晶法提高甜菊糖总甙含量的方法，其特征在于所述甜菊糖原料的质量与溶剂的质量体积比优选为1:1. 5-6。
4.根据权利要求I所述结晶法提高甜菊糖总甙含量的方法，其特征在于所述甲醇或丙醇纯度为95-100%。
5.根据权利要求I所述结晶法提高甜菊糖总甙含量的方法，其特征在于所述所述甲醇或丙醇纯度为98-100%。
6.根据权利要求I所述结晶法提高甜菊糖总甙含量的方法，其特征在于所述结晶温度优选35-45°C，结晶时间3-8小时。
7.根据权利要求I所述结晶法提高甜菊糖总甙含量的方法，其特征在于所述结晶分离后的固体洗晶时固体湿重与溶剂的体积比为1:1. 5-8，洗晶时间为15-50min。
8.根据权利要求I所述结晶法提高甜菊糖总甙含量的方法，其特征在于所述精制烘干温度为45-85°C。
全文摘要
本发明公开了一种提高甜菊糖总甙的新方法，本发明属于生物工程和新型甜味剂领域，特别涉及甜菊糖总甙含量的方法。一种提高甜菊糖总甙的新方法，步骤如下将甜菊糖原料溶于有机溶剂中，保持温度为25-45℃，保持2-8小时进行结晶；结晶过程中进行搅拌，搅拌转速为30-100rpm；上述结晶溶液进行固液分离，烘干获得精制甜菊糖，所述甜菊糖原料的质量与溶剂的体积比为1:2-10，所述有机溶剂为乙醇和丙酮的混合溶剂。本发明可将甜菊糖原料的总甙由80%提高至95%以上。
文档编号C07H1/08GK102766176SQ20121018332
公开日2012年11月7日 申请日期2012年6月6日 优先权日2012年6月6日
发明者乔长晟, 李利宁, 楼鹏, 王彦飞, 钟海蛟 申请人:天津北洋百川生物技术有限公司