专利名称：一种泰乐菌素的半抗原、人工抗原、单克隆抗体及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及食品安全领域，具体涉及一种泰乐菌素的半抗原、人工抗原和单克隆抗体及其制备方法与应用。
背景技术：
大环内酯类药物是一类具有14 16元环内酯结构的抗生素。自1952年发现代表品种红霉素以来，已有多个品种问世。兽医临床应用的主要有红霉素、泰乐菌素、替米考星、泰万菌素、吉他霉素、螺旋霉素、竹桃霉素等，其中泰乐菌素、替米考星和泰万菌素为动物专用药物。泰乐菌素对支原体和多种G+菌具有很强的抗菌作用。替米考星具有同泰乐菌素相似的广谱抗菌活性，对革兰氏阳性菌和某些革兰氏阴性菌、支原体、螺旋体等有抑制作用。泰万菌素具有比泰乐菌素更强的抗菌作用。因此，这些药物在畜禽养殖中应用非常 广泛。随着这些药物的广泛应用，其在动物性食品中的残留问题也日益突出。例如，为了控制泰乐菌素的残留，欧盟于1999年首先禁止泰乐菌素作为饲料添加剂使用。随后各国相继制定了一系列关于泰乐菌素在各种禽畜产品和蜂蜜中的最高残留限量。中国农业部规定泰乐菌素在牛、猪、鸡的肉中最大残留限量为200 μ g/kg,牛奶中最大残留限量为50 μ g/kg。泰乐菌素用于防治蜜蜂幼虫腐臭病时很容易在蜂蜜中残留，且在蜂蜜中残留的泰乐菌素代谢物脱红霉糖泰乐菌素的半衰期为75天。另外，中国农业部规定替米考星在牛、猪、鸡的肉中最大残留限量为200 μ g/kg,牛奶中最大残留限量为50 μ g/kg。因此，非常有必要对动物性食品中这几种动物专用大环内酯类药物的残留进行鉴控。目前，针对泰乐菌素、替米考星和泰万菌素的残留检测方法有高效液相色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法、免疫分析测定法等。其中免疫分析法逐渐脱离昂贵的仪器和繁琐的操作，有很高的精确度、灵敏性和特异性，且对技术要求不高，检测时间短，适用于大批量样品快速检测。因此，免疫分析检测技术已逐渐成为世界各国对有毒有害残留物快速筛选监测的主要方法之一，这为大环内酯类药物的快速检测提供了一种新的途径。免疫分析法的核心试剂是抗体。目前，国内外针对这几种动物专用大环内酯类药物的免疫检测技术，均是利用泰乐菌素或替米考星分子中的羟基直接与载体蛋白连接作为免疫原去制备抗体，所得抗体不能识别其他同类药物。泰乐菌素分子中含有泰乐菌素、替米考星、泰万菌素及泰乐菌素代谢物脱红霉糖泰乐菌素的共有结构部分。将此共有结构部分与大分子载体蛋白偶联，突出于载体蛋白的表面，也就是将这一共有结构部分作为载体的一个抗原表位暴露给动物免疫系统，能获得同时识别这几种药物及代谢物的广谱性抗体，为建立和研发多残留免疫检测方法或检测产品奠定基础。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种泰乐菌素的半抗原。
为实现上述目的，本发明采取以下技术方案一种泰乐菌素的半抗原，其分子结构式如式I所示
权利要求
1.一种泰乐菌素的半抗原，其分子结构式如式I所示
2.一种如权利要求I所述的泰乐菌素半抗原的制备方法，包括如下步骤， (a)将等物质的量的泰乐菌素和6-氨基己酸在水和乙酸的混和液中加热回流反应，得到含半抗原的黄色液体； (b)将所得黄色液体浓缩蒸发后得固体，重结晶，得到固体的泰乐菌素半抗原。
3.一种泰乐菌素的人工抗原，由权利要求I所述的泰乐菌素半抗原与载体蛋白结合而成，其分子结构式如式2所示
4.如权利要求3所述的泰乐菌素的人工抗原，其特征在于，所述的载体蛋白为卵清蛋白或牛血清白蛋白。
5.如权利要求3或4所述泰乐菌素的人工抗原的制备方法，包括如下步骤 (a)将式I结构的化合物、氯甲酸异丁酯和三正丁胺溶于N，N-二甲基甲酰胺中，在I 15°C下搅拌反应得溶液A ;将载体蛋白溶解于磷酸缓冲液中，得溶液B ; (b)将溶液A加入到溶液B中，在I 15°C下搅拌反应过夜，得泰乐菌素的人工抗原。
6.一种泰乐菌素的单克隆抗体，是能与权利要求3或4所述的泰乐菌素的人工抗原发生特异性免疫反应的免疫球蛋白。
7.如权利要求6所述的泰乐菌素的单克隆抗体的应用，所述单克隆抗体用于泰乐菌素、替米考星、泰万菌素及脱红霉糖泰乐菌素的免疫检测。
全文摘要
本发明公开了一种泰乐菌素的半抗原、人工抗原和单克隆抗体及其制备方法与应用。该半抗原含有泰乐菌素、替米考星、泰万菌素及泰乐菌素代谢物脱红霉糖泰乐菌素的共有结构部分，并且在所述泰乐菌素人工抗原的制备过程中，利用了引入的羧基与载体蛋白连接，也就是使该共有结构部分远离载体蛋白，充分暴露给动物的免疫识别系统。因此，以该人工抗原作为免疫原免疫动物，可获得能同时识别泰乐菌素、替米考星、泰万菌素及泰乐菌素代谢物脱红霉糖泰乐菌素的广谱特异性抗体，用于快速免疫分析和筛选，提高检测效率，缩短检测时间，降低检测成本。
文档编号C07H1/00GK102827222SQ20121031561
公开日2012年12月19日 申请日期2012年8月25日 优先权日2012年8月25日
发明者刘聚祥, 王建平, 王丽莉, 刘静, 张会彩 申请人:河北农业大学