专利名称：一种提取山香酸a的方法
技术领域：
本发明属于中药化学技术领域，涉及一种一种提取山香酸A的方法。
背景技术：
山香酸A (Asprellic acid A),分子式为C3tlH48O5,分子量为488. 71,无色棱晶，mp. 298_304°C。山香酸 A 是从唇形科(Labiatae)头状山香 Hyptis capitata Jacq.地上部分中分离得到一种三萜类化合物。药理研究表明，山香酸A具有细胞毒活性，对A-549、HCT-8、P388 呈细胞毒活性。其 ED50(yg/ml)依次为 5. 9、4. 2、6. 7。现有技术中，尚未见制备山香酸A的生产工艺报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种提取山香酸A的方法。为实现上述目的，本发明采用以下技术方案· Cl)以头状山香地上部分为原料，切成段状，放入高速组织捣碎机，在转速为18000rpm条件下保持5min后，过60目筛备用；
(2)原料按照料液比1:12-18(g/ml)的比例加入乙醇水溶液后，再加入O. 5%的纤维素酶，在超声功率500W、4rC条件下酶解15-20min，得到酶解原料；
(3)将酶解原料投入萃取釜中进行超临界流体萃取，向萃取釜中泵入CO2和夹带剂，萃取压力为28-45MPa，萃取温度为35-55°C，萃取时间l_3h，解析压力为6_8MPa，解析温度为28-36 °C，收集萃取物；
(4)将所得萃取物用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶柱层析纯化，二氯甲烷-甲醇溶剂系统梯度洗脱，收集山香酸A流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶；
(5)将粗晶用甲醇重结晶得到山香酸A。所述步骤(2)中乙醇水溶液体积百分比为85%
所述步骤(3)中夹带剂为85-95%的乙醇水溶液，用量为lml/g生药，CO2流量为
2-3. 5ml/g 生药 /min。所述步骤(4)中所述高压硅胶柱层析，硅胶目数为200目，柱压为3_5MPa，柱内径为50-200mm，层析柱径高比为I :8_18。所述步骤(4)中所述二氯甲烷-甲醇的体积比为1:1-1:7。所述步骤(5)中所述甲醇为90%的甲醇水溶液。本发明的有益效果是本发明操作简单，耗时短，得率高，易规模化生产；采用高压层析柱，上样量大，生产周期短，分离度好，产品纯度高。
具体实施例方式 下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。实施例I :以头状山香地上部分为原料，切成Icm左右段状，放入高速组织捣碎机，在转速为18000rpm条件下保持5min后,过60目筛备用，称取Ikg,按照料液比1:18(g/ml)的比例加入85%乙醇水溶液后，再加入O. 5%的纤维素酶，在超声功率500W、41°C条件下酶解20min，得到酶解原料，投入萃取釜中进行超临界流体萃取，向萃取釜中泵入CO2和夹带剂，夹带剂为95%的乙醇水溶液，用量为lml/g生药，CO 2流量为3ml/g生药/min，萃取压力为28MPa，萃取温度为55°C，萃取时间3h，解析压力为6MPa，解析温度为28°C，收集萃取物，将所得萃取物用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶(硅胶目数为200目)柱层析纯化，柱压为4. 5MPa，柱内径为50mm，层析柱径高比为I :15，二氯甲烷-甲醇按体积比为1:1、1:4、1:7梯度洗脱，收集山香酸A流分，减压浓缩，冷却析晶 ，得粗晶，粗晶用90%甲醇重结晶得到山香酸A，含量为90. 8%。实施例2:
以头状山香地上部分为原料，切成Icm左右段状，放入高速组织捣碎机，在转速为18000rpm条件下保持5min后,过60目筛备用，称取Ikg,按照料液比1:12(g/ml)的比例加入85%乙醇水溶液后，再加入O. 5%的纤维素酶，在超声功率500W、41°C条件下酶解20min，得到酶解原料，投入萃取釜中进行超临界流体萃取，向萃取釜中泵入CO2和夹带剂，夹带剂为85%的乙醇水溶液，用量为lml/g生药，CO 2流量为2ml/g生药/min，萃取压力为42MPa，萃取温度为35°C，萃取时间I. 5h，解析压力为8MPa，解析温度为28°C，收集萃取物，将所得萃取物用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶(硅胶目数为200目)柱层析纯化，柱压为4MPa，柱内径为200mm，层析柱径高比为I : 12，二氯甲烷-甲醇按体积比为I: I、1: 3、1:7梯度洗脱，收集山香酸A流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶，粗晶用90%甲醇重结晶得到山香酸A，含量为 92. 1%。实施例3
以头状山香地上部分为原料，切成Icm左右段状，放入高速组织捣碎机，在转速为18000rpm条件下保持5min后,过60目筛备用，称取Ikg,按照料液比1:15(g/ml)的比例加入85%乙醇水溶液后，再加入O. 5%的纤维素酶，在超声功率500W、41°C条件下酶解15min，得到酶解原料，投入萃取釜中进行超临界流体萃取，向萃取釜中泵入CO2和夹带剂，夹带剂为90%的乙醇水溶液，用量为lml/g生药，CO 2流量为3. 5ml/g生药/min，萃取压力为45MPa，萃取温度为55°C，萃取时间lh，解析压力为7MPa，解析温度为36°C，收集萃取物，将所得萃取物用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶(硅胶目数为200目)柱层析纯化，柱压为3. 5MPa，柱内径为100mm，层析柱径高比为I :8，二氯甲烷-甲醇按体积比为1:1、1:3、1:7梯度洗脱，收集山香酸A流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶，粗晶用90%甲醇重结晶得到山香酸A，含量为93. 3%。实施例4:
以头状山香地上部分为原料，切成Icm左右段状，放入高速组织捣碎机，在转速为18000rpm条件下保持5min后,过60目筛备用，称取Ikg,按照料液比1:16(g/ml)的比例加入85%乙醇水溶液后，再加入O. 5%的纤维素酶，在超声功率500W、41°C条件下酶解18min，得到酶解原料，投入萃取釜中进行超临界流体萃取，向萃取釜中泵入CO2和夹带剂，夹带剂为90%的乙醇水溶液，用量为lml/g生药，CO 2流量为2. 5ml/g生药/min，萃取压力为35MPa，萃取温度为48°C，萃取时间2h，解析压力为6. 5MPa，解析温度为35°C，收集萃取物，将所得萃取物用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶(硅胶目数为200目)柱层析纯化 ，柱压为5MPa，柱内径为100mm，层析柱径高比为I :18，二氯甲烷-甲醇按体积比为I: I、1: 3、1:7梯度洗脱，收集山香酸A流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶，粗晶用90%甲醇重结晶得到山香酸A，含量为 92. 6%ο
权利要求
1.一种提取山香酸A的方法，其特征在于包括以下步骤 Cl)以头状山香地上部分为原料，切成段状，放入高速组织捣碎机，在转速为18000rpm条件下保持5min后，过60目筛备用； (2)原料按照料液比1:12-18(g/ml)的比例加入乙醇水溶液后，再加入O. 5%的纤维素酶，在超声功率500W、4rC条件下酶解15-20min，得到酶解原料； (3)将酶解原料投入萃取釜中进行超临界流体萃取，向萃取釜中泵入CO2和夹带剂，萃取压力为28-45MPa，萃取温度为35-55°C，萃取时间l_3h，解析压力为6_8MPa，解析温度为28-36 °C，收集萃取物； (4)将所得萃取物用甲醇溶解，干法上样至高压硅胶柱层析纯化，二氯甲烷-甲醇溶剂系统梯度洗脱，收集山香酸A流分，减压浓缩，冷却析晶，得粗晶； (5)将粗晶用甲醇重结晶得到山香酸A。
2.如权利要求I所述的一种提取山香酸A的方法，其特征在于所述步骤(2)中乙醇水溶液体积百分比为85%。
3.如权利要求I所述的一种提取山香酸A的方法，其特征在于所述步骤(3)中夹带剂为85-95%的乙醇水溶液，用量为lml/g生药，CO 2流量为2_3. 5ml/g生药/min。
4.如权利要求I所述的一种提取山香酸A的方法，其特征在于所述步骤(4)中所述高压硅胶柱层析，硅胶目数为200目，柱压为3-5MPa，柱内径为50_200mm，层析柱径高比为I :8-18。
5.如权利要求I所述的一种提取山香酸A的方法，其特征在于所述步骤(4)中所述二氯甲烷-甲醇的体积比为1:1-1:7。
6.如权利要求I所述的一种提取山香酸A的方法，其特征在于所述步骤(5)中所述甲醇为90%的甲醇水溶液。
全文摘要
本发明公开了一种提取山香酸A的方法，其特征在于包括以头状山香地上部分为原料，通过组织破碎、纤维素酶酶解得到酶解原料，采用超临界CO2萃取，解析收集得到三萜类提取物，再利用高压硅胶柱层析纯化，收集山香酸A流分，减压浓缩，重结晶得到山香酸A。本发明的方法操作简单，适合规模化生产，且能耗低、污染小、生产周期短，是一种环保型生产工艺。
文档编号C07J63/00GK102887935SQ20121036649
公开日2013年1月23日 申请日期2012年9月28日 优先权日2012年9月28日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司