一种多肽的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种多肽的制备方法。本发明采用半制备型高效液相色谱系统，采用反相C18填料，以乙腈（含三氟乙酸）和水（含三氟乙酸）为流动相洗脱。采用本方法制备，条件简单，产品纯度高，效率高。
【专利说明】一种多肽的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种生物活性物质的制备方法，特别是一种多肽的制备方法。
【背景技术】
[0002]多肽是α —氨基酸以肽链连接在一起而形成的化合物，它也是蛋白质水解的中间产物。主要控制人体的生长、发育、免疫调节和新陈代谢，它在人体处于一种平衡状态，人体缺少活性肽后，自身的免疫力就会下降，新陈代谢紊乱，内分泌失调，引起各种疾病的产生，如失眠、身体消瘦或浮肿。由于活性肽还作用于神经系统，因此人体就会变得动作迟缓，头脑不再聪慧，更主要的是活性肽减少，直接引起人身体各部位逐渐出现全面衰老，引发各种疾病。
[0003]专利200480019915.1公开了通过细胞因子拮抗多肽与编码细胞因子拮抗多肽的配位多肽的核酸共同表达制备细胞因子拮抗多肽的方法。专利97198637.1提供了一种用于方便纯化(多)肽的多肽修饰方法。专利200580015378.8描述了相对于大肠杆菌异源的多肽的制备方法，其中在培养基中培养包含编码所述多肽的核酸的大肠杆菌细胞，同时向该培养基进料可转运的有机磷酸酯，从而表达所述核酸。然后从所述细胞回收所述多肽。专利00109935.3则公布了一种经过预处理、多种酶酶解、过滤、除盐纯化、真空浓缩、喷雾干燥、收集、分装等多步骤制备多肽。但未见用高效液相色谱法制备多肽的报道。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种多肽的高效液相色谱制备方法。
[0005]本发明为实现上述发明目的采用的技术方案如下:采用半制备型高效液相色谱分离纯化系统，以乙腈(含三氟乙酸)和水(含三氟乙酸)为流动相洗脱，采用反相C18填料，填料粒度5um，系统温度为25~40°C。本发明具有以下技术效果:本发明采用半制备型高效液相色谱分离纯化系统，制备多肽，制备条件简单，多肽活性得到很好的保持，产品纯度高，效率高。
[0006]【具体实施方式】:
实施例1
采用半制备型高效液相色谱分离纯化系统，以乙腈(含三氟乙酸)和水(含三氟乙酸)为流动相洗脱，流动相的比例为:0-l5min:乙腈(含0.05%三氟乙酸)/水(含0.05%三氟乙酸)=5/95，16~20min:乙腈(含0.05%三氟乙酸)/水(含0.05%三氟乙酸)=90/10，21~25min:乙腈(含0.05%三氟乙酸)/水(含0.05%三氟乙酸)=50/50，流速4ml/min，采用反相C18填料，填料粒度5um，色谱柱尺寸为Φ 10 X 250mm,系统温度为25°C。
[0007]采用的紫外光度检测器的检测波长为220nm，收集甾体类药物多肽，经HPLC分析纯度≥99.0%。
[0008]实施例2
采用半制备型高效液相色谱分离纯化系统，以乙腈(含三氟乙酸)和水(含三氟乙酸)为流动相洗脱，流动相的比例为:(Tl5min:乙腈(含0.05%三氟乙酸)/水(含0.05%三氟乙酸)=5/95，16~20min:乙腈(含0.05%三氟乙酸)/水(含0.05%三氟乙酸)=90/10，21~25min:乙腈(含0.05%三氟乙酸)/水(含0.05%三氟乙酸)=50/50，流速Ilml/min，采用反相C18填料，填料粒度5um，色谱柱尺寸为Φ 20 X 250mm,系统温度为30°C。
[0009]采用的紫外光度检测器的检测波长为220nm，收集甾体类药物多肽，经HPLC分析纯度≥99.1%。
[0010]实施例3
采用半制备型高效液相色谱分离纯化系统，以乙腈(含三氟乙酸)和水(含三氟乙酸)为流动相洗脱，流动相的比例为:(Tl5min:乙腈(含0.05%三氟乙酸)/水(含0.05%三氟乙酸)=5/95，16~20min:乙腈(含0.05%三氟乙酸)/水(含0.05%三氟乙酸)=90/10，21~25min:乙腈(含0.05%三氟乙酸)/水(含0.05%三氟乙酸)=50/50，流速22ml/min，采用反相C18填料，填料粒度5um，色谱柱尺寸为Φ 30 X 250mm,系统温度为35°C。
[0011]采用的紫外光度检测器的检测波长为220nm，收集甾体类药物多肽，经HPLC分析
纯度≥99.2%ο
【权利要求】
1.一种多肽的制备方法，其特征在于:采用半制备型高效液相色谱分离纯化系统，以乙腈(含三氟乙酸)和水(含三氟乙酸)为流动相洗脱，采用反相C18填料，填料粒度5um，系统温度为25~40°C。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是:流动相的洗脱方式是等度洗脱。
3.根据权 利要求1所述的方法，其特征是:最适宜的操作温度为30°C。
【文档编号】C07K1/20GK103788172SQ201210429193
【公开日】2014年5月14日 申请日期:2012年11月1日 优先权日:2012年11月1日
【发明者】王亚辉, 祁威, 李丹丹 申请人:江苏汉邦科技有限公司