一种从含10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ的浸膏分离和提纯10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法
【专利摘要】一种从含10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ的浸膏分离和提纯10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法，涉及分离纯化10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ的【技术领域】，该方法包括如下步骤：萃取、正相层析、结晶、反相层析和结晶，本发明有益效果是既保证了高纯度又保证了高收率，萃取用有机溶剂、层析用填料和层析用有机溶剂都可以重复使用。
【专利说明】—种从含10-去乙酰基巴卡亭III的浸膏分离和提纯10-去乙酰基巴卡亭III的方法【技术领域】
[0001]本发明涉及分离纯化10-去乙酰基巴卡亭III的【技术领域】，具体涉及一种从含10-去乙酰基巴卡亭III的浸膏分离和提纯10-去乙酰基巴卡亭III的方法。
【背景技术】
[0002]紫杉醇是红豆杉属植物中的一种复杂的次生代谢产物，也是目前所了解的惟一一种可以促进微管聚合和稳定已聚合微管的药物。同位素示踪表明，紫杉醇只结合到聚合的微管上，不与未聚合的微管蛋白二聚体反应。细胞接触紫杉醇后会在细胞内积累大量的微管，这些微管的积累干扰了细胞的各种功能，特别是使细胞分裂停止于有丝分裂期，阻断了细胞的正常分裂。通过I1-1II临床研究，紫杉醇主要适用于卵巢癌和乳腺癌，对肺癌、大肠癌、黑色素瘤、头颈部癌、淋巴瘤、脑瘤也都有一定疗效。
[0003]10-去乙酰基巴卡亭III可以通过化学方法转化为紫杉醇，所以制备10-去乙酰基巴卡亭III是有重大的意义。
【发明内容】
[0004]现有技术中如果想得到高纯度10-去乙酰基巴卡亭III，必然10-去乙酰基巴卡亭III收率会降低。实际生产中纯度和收率是一对矛盾。本发明提供了一种既能保证高纯度又能保证高收率的分离和提纯10-去乙酰基巴卡亭III的方法。
[0005]本发明提供了一种 从含10-去乙酰基巴卡亭III的浸膏分离和提纯10-去乙酰基巴卡亭III的方法，所述方法包括如下步骤:
[0006]⑴用乙醇水溶液溶解含10-去乙酰基巴卡亭III的浸膏；
[0007]⑵用有机溶剂萃取步骤⑴溶解10-去乙酰基巴卡亭III的溶液；
[0008]⑶干燥萃取相，得到含10-去乙酰基巴卡亭III的固体粉末I ;
[0009]⑷用正相色谱纯化固体粉末I，收集含10-去乙酰基巴卡亭III的馏分；
[0010](5)干燥步骤⑷得到的含10-去乙酰基巴卡亭III的馏分，得到含10-去乙酰基巴卡亭III的固体粉末II ；
[0011](6)结晶固体粉末II ；
[0012](7)干燥步骤(6)得到的晶体，得到含10-去乙酰基巴卡亭III的固体粉末III ；
[0013](8)用反相色谱纯化固体粉末III，收集含10-去乙酰基巴卡亭III的馏分；
[0014](9)干燥步骤(8)得到的含10-去乙酰基巴卡亭III的馏分，得到含10-去乙酰基巴卡亭III的固体粉末IV ；
[0015](1Φ结晶固体粉末IV ；
[0016](11)干燥步骤(1Φ得到的晶体，得到高纯度10-去乙酰基巴卡亭III。
[0017]所述方法步骤⑴中浸膏优选为含有紫杉醇、7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇、10-去乙酰基紫杉醇、10-去乙酰基巴卡亭II1、巴卡亭II1、三尖衫宁碱和13-乙酰基-9-羟基巴卡亭III。
[0018]所述方法步骤⑴中乙醇水溶液的酒精度优选为40~60，用该酒精度乙醇水溶液溶解浸膏，优点是在步骤⑵中萃取时易分层。
[0019]所述方法步骤⑵中有机溶剂优选为二氯甲烷或乙酸乙酯，萃取温度20~25°C，等体积萃取三次，合并萃取相，萃余相HPLC检测不含紫杉烷类化合物时废弃。
[0020]所述方法步骤⑶优选为将萃取相先用减压蒸馏方法，后用真空干燥方法得到固体粉末I，回收的有机溶剂可以做下次萃取时重复利用。
[0021]所述方法步骤⑷中正相色谱条件优选为:固定相是硅胶，流动相是二氯甲烷和无水乙醇，体积比是二氯甲烷/无水乙醇=100/5~10，上样量是每100g的硅胶单次纯化I~20g的固体粉末I。
[0022]所述方法步骤⑷中正相色谱条件最优选为:固定相是200~300目的非球型硅胶，流动相是二氯甲烷和无水乙醇，体积比是二氯甲烷/无水乙醇=100/6，上样量是每100g的硅胶单次纯化IOg的固体粉末I，收集含10-去乙酰基巴卡亭III的馏分，硅胶使用后用体积比是二氯甲烷/无水乙醇=100/20再生，洗脱至紫外检测没有杂质。
[0023]所述方法步骤(5)优选为将含10-去乙酰基巴卡亭III的馏分先用减压蒸馏方法，后用真空干燥方法得到固体粉末II，回收的流动相用GC检测后，配成体积比是二氯甲烷/无水乙醇=100/2的流动相可以做下次层析时重复利用。
[0024]所述方法步骤(6)优选为用甲醇-水结晶。
[0025]所述方法步骤(7)优选为用真空干燥方法得到含10-去乙酰基巴卡亭III的固体粉末 III。`
[0026]所述方法步骤(8)中反相色谱条件优选为:固定相是C18，流动相是乙腈和超纯水，体积比是乙腈/超纯水=100/80~120，上样量是每100g的C18单次纯化I~IOg的固体粉末III。
[0027]所述方法步骤(8)中反相色谱条件最优选为:固定相是5 μ m的C18,流动相是乙腈和超纯水，体积比是乙腈/超纯水=100/100，上样量是每100g的C18单次纯化2g的固体粉末III，收集含10-去乙酰基巴卡亭III的馏分，C18使用后用体积比是乙腈/超纯水=100/10再生，洗脱至紫外检测没有杂质。
[0028]所述方法步骤(9)优选为将含10-去乙酰基巴卡亭III的馏分先用减压蒸馏方法，当蒸发到一定程度时自然结晶析出，最后用真空干燥方法得到含10-去乙酰基巴卡亭III的固体粉末IV，回收的流动相用GC检测后，配成体积比是乙腈/超纯水=100/100的流动相可以做下次层析时重复利用。
[0029]所述方法步骤(K))优选为用丙酮-石油醚结晶。
[0030]所述方法步骤(11)优选为用真空干燥方法得到高纯度10-去乙酰基巴卡亭III。
[0031]本发明有益效果为:
[0032]1、本发明最大的有益效果是最后得到的10-去乙酰基巴卡亭III产品纯度高到98.5%以上，杂质总含量小于1%，单一杂质含量小于0.5%。最后得到的10-去乙酰基巴卡亭III收率95%以上。既保证了高纯度又保证了高收率。
[0033]2、工艺中萃取用的有机溶剂、正相层析用的二氯甲烷/无水乙醇、反相层析用的乙腈/超纯水都可以回收利用，降低了工艺成本。[0034]3、工艺中正相硅胶、反相C18都可以再生利用，降低了工艺成本。
【专利附图】
【附图说明】
[0035]图1是从含10-去乙酰基巴卡亭III的浸膏分离和提纯10-去乙酰基巴卡亭III的工艺流程图。
【具体实施方式】
[0036]下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
[0037]实施例1
[0038]⑴用酒精度50的乙醇水溶液溶解含紫杉醇、7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇、10-去乙酰基紫杉醇、10-去乙酰基巴卡亭II1、巴卡亭II1、三尖衫宁碱和13-乙酰基-9-羟基巴卡亭III的浸膏，浸膏中10-去乙酰基巴卡亭III含量2% ；
[0039]⑵用二氯甲烷萃取步骤⑴溶解10-去乙酰基巴卡亭III的溶液，萃取温度25°C，等体积萃取三次，合并三次二氯甲烷相，HPLC检测萃余相，当萃取相不含紫杉烷化合物时废弃处理；
[0040]⑶蒸干二氯甲烷相，减压蒸馏的条件是真空度0.4MPa、水浴温度35°C，蒸干至不再减重，真空干燥的条件是真空度0.8MPa、干燥温度60°C，干燥产品至不再减重，得到含10-去乙酰基巴卡亭III的固体粉末I，固体粉末I中10-去乙酰基巴卡亭III含量20% ； [0041]⑷正相色谱纯化，色谱条件是制备柱规格是Φ 200 X 300，固定相是4kg的200~300目非球型硅胶，流动相是60L的二氯甲烷和无水乙醇，体积比是二氯甲烷/无水乙醇=100/6，上样量是400g的固体粉末I，洗脱流速是lL/min，紫外检测波长是227nm，收集含10-去乙酰基巴卡亭III的馏分；
[0042](5)蒸干含10-去乙酰基巴卡亭III的馏分，减压蒸馏的条件是真空度0.4MPa、水浴温度35°C，蒸干至不再减重，真空干燥的条件是真空度0.8MPa、干燥温度60°C，干燥产品至不再减重，得到含10-去乙酰基巴卡亭III的固体粉末II，固体粉末II中10-去乙酰基巴卡亭III含量 50% ；
[0043](6)用甲醇-水结晶固体粉末II ；
[0044](7)干燥步骤(6)得到的晶体，真空干燥的条件是真空度0.8MPa、干燥温度60°C，干燥广品至不再减重，得到含10-去乙酸基巴卡亨III的固体粉末III，固体粉末III中10-去乙酸基巴卡亭III含量70% ；
[0045]⑶反相色谱分离，色谱条件是制备柱规格是Φ 200 X 300，固定相是4kg的5 μ m的C18，流动相是80L乙臆和超纯水，体积比是乙臆/超纯水=100/100,上样量是80g的固体粉末III，洗脱流速是lL/min，紫外检测波长是227nm，收集含10-去乙酰基巴卡亭III的馏分；
[0046](9)蒸发含10-去乙酰基巴卡亭III的馏分，减压蒸馏的条件是真空度0.8MPa、水浴温度55°C，蒸发至有晶体析出，真空干燥析出晶体，真空干燥的条件是真空度0.8MPa、干燥温度60°C，干燥产品至不再减重，得到含10-去乙酰基巴卡亭III的固体粉末IV，固体粉末IV中10-去乙酰基巴卡亭III含量95% ；
[0047](1Φ用丙酮-石油醚结晶固体粉末IV ;[0048](11)干燥步骤(1Φ得到的晶体，真空干燥的条件是真空度0.8MPa、干燥温度60°C，干燥产品至不再减重，得到高纯度10-去乙酰基巴卡亭III含量99%、收率90%。
【权利要求】
1.一种从含10-去乙酰基巴卡亭III的浸膏分离和提纯10-去乙酰基巴卡亭III的方法，所述方法包括如下步骤: ⑴用乙醇水溶液溶解含10-去乙酰基巴卡亭III的浸膏； ⑵用有机溶剂萃取步骤⑴溶解10-去乙酰基巴卡亭III的溶液； ⑶干燥萃取相，得到含10-去乙酰基巴卡亭III的固体粉末I ; ⑷用正相色谱纯化固体粉末I，收集含10-去乙酰基巴卡亭III的馏分； (5)干燥步骤⑷得到的含10-去乙酰基巴卡亭III的馏分，得到含10-去乙酰基巴卡亭III的固体粉末II ； (6)结晶固体粉末II； (7)干燥步骤(6)得到的晶体，得到含10-去乙酰基巴卡亭III的固体粉末III； ⑶用反相色谱纯化固体粉末III，收集含10-去乙酰基巴卡亭III的馏分； ⑶干燥步骤⑶得到的含10-去乙酰基巴卡亭III的馏分，得到含10-去乙酰基巴卡亭III的固体粉末IV ； (10)结晶固体粉末IV； (11)干燥步骤(1Φ得到的晶体，得到高纯度10-去乙酰基巴卡亭III。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:所述方法步骤⑴中浸膏含有紫杉醇、7-木糖-10-去乙酰基紫杉醇、10-去乙酰基紫杉醇、10-去乙酰基巴卡亭II1、巴卡亭II1、三尖衫宁碱和13-乙酰基-9-羟基巴卡亭III。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:所述方法步骤⑴中乙醇水溶液的酒精度是40~60。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:所述方法步骤⑵中有机溶剂是二氯甲烷或乙酸乙酯。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:所述方法步骤⑷中正相色谱条件:固定相是硅胶，流动相是二氯甲烷和无水乙醇，体积比是二氯甲烷/无水乙醇=100/5~10，上样量是每100g的硅胶单次纯化I~20g的固体粉末I。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于:所述方法步骤⑶中反相色谱条件:固定相是C18,流动相是乙臆和超纯水,体积比是乙臆/超纯水=100/80~120,上样量是每100g的C18单次纯化1~10g的固体粉末III。
【文档编号】C07D305/14GK103804326SQ201210460414
【公开日】2014年5月21日 申请日期:2012年11月15日 优先权日:2012年11月15日
【发明者】刘胜远 申请人:刘胜远