血管生成素样3(ANGPTL3)iRNA组合物及其使用方法
【专利摘要】本发明提供iRNA组合物，该组合物影响RNA诱导的沉默复合物(RISC)介导的ANGPTL3基因的RNA转录物的切割。该ANGPTL3可以在一个细胞内，例如在一个受试者，例如一个人的体内的一个细胞内。本发明还提供使用本发明的iRNA组合物的方法，用于抑制ANGPTL3基因的表达和/或用于治疗将受益于ANGPTL3基因表达抑制或减少的受试者，例如一个经受或易于经受脂类代谢作用失调的受试者，例如一个经受或易于经受高血脂症或高甘油三酯血症的受试者。
【专利说明】血管生成素样3 (ANGPTL3) i RNA组合物及其使用方法
[0001]相关申请
[0002]本申请要求2011年6月21日提交的美国临时申请号61/499，620以及2012年四月25日提交的美国临时申请号61/638，288的优先权，将它们每个的全部内容通过引用结合在此。
[0003]发明背景
[0004]血管生成素样3 (ANGPTL3)是调节脂质新陈代谢并主要在肝脏中表达的分泌因子的血管生成素样家族的一员(Koishi (小石),R.等人，(2002)Nat.Genet.(自然.遗传学)30(2):151-157)。ANGPTL3双重抑制脂蛋白脂肪酶(LPL)的催化活性，其催化甘油三酸酯的水解以及内皮脂肪酶(EL)的水解，该内皮脂肪酶水解高密度脂蛋白(HDL)磷脂。在降低血脂的又肥胖的KK/Snk小鼠中，ANGPTL3表达的缩减通过促进甘油三酸酯的清除对高血脂症和动脉粥样硬化具有一个保护效应(Ando (安藤)等人，(2003) J.LipidRes.(脂质研究杂志)，44 =1216-1223)。人类的ANGPTL3血浆浓度与血浆HDL胆固醇和HDL磷脂水平正相关(Shimamura (岛村)等人，(2007) Arterioscler.Thromb.Vase.Biol.(动脉粥样硬化、血栓和血管生物学)，27 =366-372)。 [0005]脂质代谢作用的失调会导致血脂例如甘油三酸酯和/或胆固醇的水平提高。提高的血脂与高血压、心血管疾病、糖尿病以及其他病理学病症高度相关。高甘油三酯血症是脂质代谢作用失调的一个实例，其特征为高血液水平的甘油三酸酯。它已经与动脉粥样硬化相关，甚至在没有高胆固醇水平(高胆固醇血症)的情况下。当甘油三酸酯浓度过多时(即闻于1000mg/dl或12mmol/l),闻甘油二酷血症还会导致膜腺炎。闻血脂症是脂质代谢作用失调的另一个实例，其特征为血液中脂质和/或脂蛋白中的任一种或全部的水平提高。针对脂质代谢作用失调的当前治疗包括节食、锻炼和用他汀类药物或其他药物治疗，这些不总是有效的。因此，本领域中存在对患有脂质代谢作用失调的受试者的替代治疗的需求。
[0006]发明概述
[0007]本发明提供iRNA组合物，该组合物影响RNA诱导的沉默复合物(RISC)介导的ANGPTL3基因的RNA转录物的切割。ANGPTL3基因可以在一个细胞内，例如在一个受试者例如一个人的体内的一个细胞内。本发明还提供使用本发明的iRNA组合物的方法，用于抑制ANGPTL3基因的表达和/或用于治疗将受益于ANGPTL3基因表达抑制或减少的受试者，例如一个经受或易于经受脂质代谢作用失调的受试者，例如一个经受或易于经受高血脂症或高甘油三酯血症的受试者。
[0008]因此，在一个方面，本发明提供用于抑制ANGPTL3基因的表达的双链核糖核酸(dsRNA)。该dsRNA包括一个正义链和一个反义链，其中该正义链包括与SEQ ID NO:1的核苷酸序列区别在于不多于3个核苷酸的至少15个连续的核苷酸，并且该反义链包括与SEQIDNO:5的核苷酸序列区别在于不多于3个核苷酸的至少15个连续的核苷酸。
[0009]在另一个方面，本发明提供用于抑制ANGPTL3基因的表达的双链核糖核酸(dsRNA)。该dsRNA包括一个正义链和一个反义链，该反义链包括一个互补性区域，该互补性区域包括与在表2、3、7、8、9和10中所列出的反义链序列中的任一个区别在于不多于3个核苷酸的至少15个连续的核苷酸。
[0010]在一个实施例中，该正义链和反义链包括选自下组的序列，该组由以下各项组成:表7和表8 的 AD-53063.1、AD_53001.1、AD_53015.1、AD_52986.1、AD_52981.1、AD_52953.1、AD-53024.UAD-53033.1、AD_53030.1、AD_53080.1、AD_53073.1、AD_53132.1、AD_52983.1、AD-52954.1、AD_52961.1、AD_52994.1、AD_52970.1、AD_53075.1、AD_53147.1、AD_53077.1。
[0011]在本发明的某些实施例中，该dsRNA包括至少一个修饰核苷酸。在一个实施例中，修饰的核苷酸的至少一个选自下组，该组由以下各项组成'2' -O-甲基修饰的核苷酸、包括5'-硫代磷酸酯基的核苷酸，和与胆留烯基衍生物或十二烷酸双癸酰胺基连接的末端核苷酸。在另一个实施例中，修饰的核苷酸选自下组，该组由以下各项组成:2'-脱氧-2'-氟修饰的核苷酸、2'-脱氧修饰的核苷酸、锁定核苷酸、非碱基核苷酸、2'-氨基修饰的核苷酸、2'-烷基修饰的核苷酸、吗啉代核苷酸、磷酰胺酯，和包括非天然碱基的核苷酸。
[0012]该dsRNA的互补性区域可能是至少17个核苷酸的长度、19个和21个核苷酸之间的长度、或19个核苷酸的长度。
[0013]在一个实施例中，该dsRNA的每个链不多于30个核苷酸长度。
[0014]dsRNA的至少一个链包括至少I个核苷酸或至少2个核苷酸的的3’突出。
[0015]在某些实施例中，一个dsRNA进一步包括一个配体。在一个实施例中，该配体轭合至该dsRNA的正义链的3’末端。
[0016]在一些实施例中，该配体是通过二价或三价分支连接物而附接的一个或多个N-乙酰半乳胺糖(GalNAc)衍生物。在具体实施例中，该配体是
[0017]
【权利要求】
1.一种用于抑制ANGPTL3表达的双链核糖核酸(dsRNA)，其中所述dsRNA包括一个正义链和一个反义链，其中所述正义链包括与SEQ ID NO:1的核苷酸序列区别在于不多于3个核苷酸的至少15个连续的核苷酸，并且所述反义链包括与SEQ ID NO:5的核苷酸序列区别在于不多于3个核苷酸的至少15个连续的核苷酸。
2.一种用于抑制ANGPTL3表达的双链核糖核酸(dsRNA)，其中所述dsRNA包括一个正义链和一个反义链，该反义链包括一个互补性区域，所述互补性区域包括与表2、3、7、8、9和10中列出的反义序列中任一个区别在于不多于3个核苷酸的至少15个连续核苷酸。
3.如权利要求2所述的dsRNA，其中该正义链和反义链包括选自下组的序列，该组由以下各项组成:表 7 和表 8 的 AD-5298L 1、AD-53063.1、AD-53001.1、AD-53015.1、AD-52986.1、AD_52953.UAD-53024.1、AD_53033.1、AD_53030.1、AD_53080.1、AD_53073.1、AD-53132.UAD-52983.1、AD_52954.1、AD_52961.1、AD_52994.1、AD_52970.1、AD_53075.1、AD-53147.UAD-53077.1。
4.如权利要求1或2所述的dsRNA，其中所述dsRNA包括至少一个修饰的核苷酸。
5.如权利要求4所述的dsRNA，其中所述修饰的核苷酸的至少一个选自下组，该组由以下各项组成:一种2' -O-甲基修饰的核苷酸、一种包括5'-硫代磷酸酯基的核苷酸、以及与一种胆留烯基衍生物或一种十二烷酸双癸酰胺基连接的一种末端核苷酸。
6.如权利要求4所述的dsRNA，其中所述的经修饰的核苷酸选自下组，该组由以下各项组成:一种W -脱氧-2'-氟修饰的核苷酸、一种Y -脱氧修饰的核苷酸、一种锁定的核苷酸、一种脱碱基核苷酸、一种2’ -氨基修饰的核苷酸、一种2’ -烷基修饰的核苷酸、一种吗啉代核苷酸、一种氨基磷酸酯、以及一种包括非天然碱基的核苷酸。
7.如权利要求2所述的dsRNA，其中该互补性区域是至少17个核苷酸长度。
8.如权利要求2所述的dsRNA，其中该互补性区域是在19个和21个核苷酸长度之间。
9.如权利要求8所述的dsRNA，其中该互补性区域是19个核苷酸长度。
10.如权利要求1或2所述的dsRNA，其中每个链不多于30个核苷酸长度。
11.如权利要求1或2所述的dsRNA，其中至少一个链包括至少I个核苷酸的3^突出端。
12.如权利要求1或2所述的dsRNA，其中至少一个链包括至少2个核苷酸的:V突出端。
13.如权利要求1或2所述的dsRNA,进一步包括一个配体。
14.如权利要求13所述的dsRNA，其中该配体轭合至该dsRNA的正义链的3’末端。
15.如权利要求13所述的dsRNA，其中该配体是一种N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)衍生物。
16.如权利要求15所述的dsRNA，其中该配体是
17.如权利要求2所述的dsRNA，其中该互补性区域由表2、3、7、8、9和10的反义序列之一组成。
18.如权利要求1或2所述的dsRNA，其中该dsRNA包括由选自表2、3、9和10的序列的一个正义序列组成的一个正义链和由选自表2、3、7、8、9和10的序列的一个反义序列组成的一个反义链。
19.一种细胞，其包含如权利要求1或2所述的dsRNA。
20.一种编码dsRNA的至少一个链的载体，其中所述dsRNA包括与编码ANGPTL3的mRNA的至少一部分互补的一个区域，其中所述dsRNA是30个或更少碱基对长度，并且其中所述dsRNA靶向所述mRNA用于切割。
21.如权利要求20所述的载体，其中该互补性区域是至少15个核苷酸长度。
22.如权利要求20所述的载体，其中该互补性区域是19个至21个核苷酸长度。
23.—种细胞，包含如权利要求20所述的载体。
24.—种用于抑制一种ANGPTL3基因表达的药物组合物，包括如权利要求1或2所述的dsRNA或如权利要求20所述的载体。
25.如权利要求24所述的药物组合物，进一步包括一种脂质配制品。
26.如权利要求24所述的药物组合物，其中该脂质配制品包括SNALP、或XTC。
27.如权利要求24所述的药物组合物，其中该脂质配制品包括一种MC3。
28.—种抑制细胞中ANGPTL3表达的方法，该方法包括: (a)用如权利要求1或2所述的dsRNA或如权利要求20所述的载体接触该细胞；以及 (b)维持步骤(a)中产生的细胞一段时间，该时间足以获得ANGPTL3基因的mRNA转录物的降解，由此抑制该细胞中的ANGPTL3基因的表达。
29.如权利要求28所述的方法，其中所述细胞是在一个受试者体内。
30.如权利要求29所述的方法，其中该受试者是一个人。
31.如权利要求30所述的方法，其中该人类受试者患有一种脂质代谢作用失调。
32.如权利要求31所述的方法，其中该脂质代谢作用失调是高脂血症或高甘油三酯血症。
33.如权利要求28-32中任一项所述的方法，其中ANGPTL3表达被抑制至少约30%。
34.—种治疗患有一种失调的受试者的方法,该受试者将受益于ANGPTL3表达的减少，该方法包括将一个治疗有效量的如权利要求1或2所述的dsRNA或如权利要求20所述的载体给予该受试者，由此治疗所述受试者。
35.如权利要求34所述的方法，其中该失调是一种脂质代谢作用失调。
36.如权利要求35所述的方法，其中该脂质代谢作用失调是高脂血症或高甘油三酯血症。
37.如权利要求34所述的方法，其中向该受试者给予该dsRNA造成一种或多种血脂的减少和/或ANGPTL3蛋白累积的降低。
38.如权利要求34所述的方法,其中将该dsRNA以约0.01mg/kg至约10mg/kg或约5mg/kg至约50mg/kg的剂量给予。
39.一种在一个受试者体内抑制ANGPTL3表达的方法，该方法包括将一个治疗有效量的如权利要求1或2所述的dsRNA或如权利要求20所述的载体给予所述受试者，由此抑制所述受试者体内的ANGPTL3表达。
40.如权利要求39所述的方法,其中将该dsRNA以约0.01mg/kg至约10mg/kg或约5mg/kg至约50mg/kg的剂量给予 所述受试者。
【文档编号】C07H21/04GK103890000SQ201280041047
【公开日】2014年6月25日 申请日期:2012年6月20日 优先权日:2011年6月21日
【发明者】B·贝藤考特, W·奎尔比斯, K·非茨杰拉德, M·弗兰克-卡梅内茨基, S·米尔斯坦, S·舒尔加-莫斯卡亚 申请人:阿尔尼拉姆医药品有限公司