用于治疗炎性病症的il17c拮抗剂的制作方法

用于治疗炎性病症的il17c拮抗剂的制作方法
【专利摘要】本发明提供了用于在治疗炎性病症中使用的IL17C拮抗剂。
【专利说明】用于治疗炎性病症的IL17C拮抗剂
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2011年10月19日提交的美国临时专利申请号61/548，744的权益，其全文通过引用结合在此。
发明领域
[0003]本申请涉及用于对如关节炎等炎性病症进行治疗的IL17C拮抗剂。示例性的IL17C拮抗剂是IL17C特异性抗体或其片段，如人抗IL17C抗体。
[0004]背景
[0005]IL17C是IL17蛋白质家族的一种分泌型二硫键连接的同型二聚体。已经显示，IL17C在体内刺激单核细胞系THP-1释放TNF-α和IL-1 β (Li等人(2000)《美国科学院院刊》(Proc.Natl.Acad.Sc1.USA) 97，773-8)。IL17C 可诱导炎性细胞因子，如 IL-1 β、IL-6和IL-23在腹腔渗出细胞(PECS)和3Τ3细胞系中的mRNA表达(Yamaguchi等人(2007 )《免疫学杂志》(J.1mmunol) 179，7128-36。在体内，IL17C转导的⑶4+T细胞可加重小鼠的胶原诱导性关节炎(CIA)，并且IL17C转导的骨髓细胞重建的小鼠可遭受严重的胶原诱导性关节炎。据报告，IL17C可与IL-17受体E (IL17RE/Fc)结合，并且似乎可激活NF-κ B(Calhoun (2007)本科毕业论文:概念分子的证明的产生:中和IL17C的单克隆抗体；美国俄勒冈州立大学，大学荣誉学院；Gaffen (2009)《免疫学自然评论》(Nat Rev Immunol)9，556-67)，并且还有报告在IL17C缺陷型小鼠中可影响核IkappaB家族成员——IkB ζ对Thl7细胞的激活。(Chang等人(2011)《免疫学杂志》(Immunity) 35，1-11)。IL17C在正常组织中的表达似乎受到成人和胎儿肾脏地限制。IL17C在CIA小鼠的关节爪中的mRNA表达大大上升的。Hwang等人对类风湿关节炎患者的滑液和周围血液的单核细胞中的IL17C表达进行了描述(Hwang和Kim (2005)《分子与细胞》(Mol Cells) 19，180-184)。
[0006]W099/060127 对 IL17C 的克隆进行了说明(PR01122)。W099/060127 将某些病症与IL17C松散地相关联，这些病症包括关节炎(例如骨关节炎、类风湿关节炎、银屑病关节炎)、脓毒病、溃疡性结肠炎、银屑病、多发性硬化症、I型糖尿病、巨细胞动脉炎、系统性红斑性狼疮和修格兰氏综合征。在此考虑，W099/060127的化合物可被用于治疗多种病情，包括以在此明确的疾病相关基因的过量表达和/或激活为特征的病情。然而，对IL17C的推测的功能还没有实验证明。对于W02005/065711，也是如此。
[0007]本发明首次说明了，在体内实验中，IL17C拮抗剂在炎性病症的治疗中非常有效。
【发明内容】

[0008]本发明提供了用于治疗炎性病症的IL17C拮抗剂。
[0009] 用本发明的拮抗剂进行治疗的炎性病症可以是任何选自于下述疾病的炎性病症，即:关节炎(如类风湿关节炎)、哮喘、脓毒病、自身免疫性疾病(如炎症性肠病)、COPD (慢性阻塞性肺病)、系统性红斑性狼疮(SLE)和结节病。在具体实施例中，所述炎性病症是关节炎。[0010]本发明的IL17C拮抗剂可以是任何拮抗剂。优选的是，所述拮抗剂是一种抗体或抗体片段，如单克隆抗体。所述抗体可以是一种IL17C特异性抗体或其片段或一种IL17C受体特异性抗体或其片段。
[0011]图例
[0012]MlA显示了一种受体相互作用分析的测定设定。在Mult1-array? 384孔板上包被IL17受体的E⑶融合蛋白。加入生物素酰化的小鼠IL17C，并通过链亲和素进行检测。
[0013]图1B显示了如图1A所示的受体相互作用测定的结果。清楚地看到，IL17C是结合到小鼠IL17RE/FC上的，但是不结合到小鼠IL-17RB或另一种不相关的受体上。
[0014]凰1￡显示了如图1A所示的受体相互作用测定的结果。三种现有技术抗体均不能抑制小鼠IL17C与小鼠IL17RE/FC的结合。
[0015]图2显示了基于尺寸排阻色谱法(SEC)的质量控制结果。
[0016]M3显示了 ELISA中的EC5tl的确定结果。以IOOnM作为起始浓度，将所有纯化的嵌合的人-小鼠嵌合IgG2a抗体滴定到小鼠IL17C上。
[0017]Mi显示了抗IL17C抗体的单价亲和力。通过溶液平衡滴定法(SET)，使用Fab片段对亲和力进行确定。
[0018]显示了在实例11中所描述的IL-17受体E抑制试验中所确定的IC5tl值。
[0019]图6显示了小鼠血清稳定件测定的结果。在小鼠血清孵育24h之后，11种纯化IgG显示出具有可接受的产量并且与小鼠IL17C的特异性结合。
[0020]Ml显示了 M0R12743和M0R12762给药对于小鼠CIA模型的治疗方案的临床评分与载体Enbrc丨⑩(依那西普)以及与对照抗体(M0R03207)相比较的结果。
[0021]_显示了 M0R12743和M0R12762给药对于小鼠CIA模型的治疗方案的AUC临床评分与载体Enbrehi?:(依那西普)以及与对照抗体(M0R03207)相比较的结果。
[0022]_显示了 M0R12762给药对于小鼠CIA模 型的预防方案的Larsen评分与对照抗体(M0R03207)相比较的结果。
[0023]图10显示了在急件肺中件白细朐增多症小鼠樽型中，M0R12762或M0R12743给药对于炎性细胞进入BALF的募集反应与对照抗体(M0R03207)相比较的结果。
[0024]ail显示了使用qRT-PCR的IL17C表达谱的结果。与对照样品的IL17C表达水平相比较，在来源于诊断为炎性呼吸道疾病的供体的肺组织样品中检测到增加的IL17C表达水平。对每组的5个单独的供体样品进行分析。
[0025]图12显示了在眯喹草特GMQ)银屑病样小鼠模型中，M0R1243中和抗体对于表皮厚度的效应。
[0026]图 13A 显示了在单用培养基、IL-1 (10ng/mL)、TNF (10ng/mL)、IL-17A (250ng/mL)或这些引发剂的组合进行处理2h、6h、24h或48h的人表皮角化细胞中的IL17C mRNA表达的定量RT-PCR分析的结果。
[0027]图13B显示了单用培养基或多种TLR配体:TLR4配体LPS (I μ g/mL)、TLR5配体鞭毛蛋白(I P g/mL)、TLR7 配体保卫性喹莫(guardiquimod) (4 μ g/mL)、TLR7/8 配体 CL097(10 μ g/mL)与TLR9配体CpG 0DN2116 (10 μ Μ)进行处理2h、6h或24h的人表皮角化细胞中的IL-17C mRNA表达的定量RT-PCR分析的结果。[0028]本发明的详细说明
[0029]本发明说明，IL17C是一种炎性病症治疗的有效靶标。在这方面，在一方面，本发明提供了在炎性病症治疗中使用IL17C拮抗剂的预防或治疗益处。
[0030]本发明提供了治疗方法，这些方法包括对需要这种治疗的受试者给予治疗有效量的IL17C拮抗剂。在此所用的“治疗有效量”或“有效量”是指引发理想的生物反应所必需的IL17C拮抗剂的用量。根据本发明，治疗有效量是治疗和/或预防炎性病症所必需的IL17C拮抗剂的用量。
[0031]术语“炎性病症(inflammatorydisorder)” 或“炎性疾病(inflammatorydisease)”可互换使用，并且在此所用是指任何与炎症相关联的异常。与炎症相关联的疾病的实例包括寻常痤疮、关节炎、如类风湿关节炎、哮喘、自身免疫性疾病、慢性前列腺炎、COPD (慢性阻塞性肺病)、肾小球肾炎、超敏反应、炎症性肠病、盆腔炎、再灌注损伤、结节病、移植排斥、血管炎、间质性膀胱炎和脓毒病。炎性病症可以是慢性的或者是急性的。自身免疫性疾病的实例包括强直性脊柱炎、克罗恩氏病(Crohn’ s Disease), II型糖尿病、胃炎、格-巴二氏综合征(Guillain-Barr6 syndrome)、特发性血小板减少性紫癜、红斑狼疮、多发性硬化症、银屑病、银屑病关节炎、下肢不宁综合征、类风湿关节炎、结节病、硬皮病、系统性红斑性狼疮和溃疡性结肠炎。
[0032]关节炎可以表现为其自身是疾病的主要形式。这是例如在骨关节炎、类风湿关节炎、脓毒性关节炎、痛风和假痛风、幼年型特发性关节炎、斯蒂尔病和强直性脊柱炎的情况下。其他形式的关节炎是继发于其他疾病的，例如埃勒斯-当洛斯综合征、结节病、过敏性紫癜、银屑病关节炎 、反应性关节炎、血色素沉着症、肝炎、韦格纳氏肉芽肿病(Wegener’sgranulomatosis)(以及其他血管炎综合征)、莱姆病(Lyme disease)、家族性地中海热、伴有回归热的高免疫球蛋白血症D、TNF受体相关性周期性综合症和炎症性肠病(包括克罗恩氏病和溃疡性结肠炎)。
[0033]术语“肺部炎症”包括任何炎症性肺部疾病、急慢性支气管炎、慢性阻塞性肺疾病、肺纤维化、古德帕斯彻氏综合征(Goodpasture’s syndrome)和其他白细胞起作用的肺部病症，包括但不限于特发性肺纤维化和任何其他自身免疫性肺部疾病。
[0034]术语“IL17C”是指一种已知为白细胞介素17C的蛋白质(在HUGO基因命名委员会(HGNC)中以ID5983进行标明，在小鼠基因组信息学(MGI)数据库中以ID2446486进行标明)。IL17C在某些较老的出版物中是指CX2或IL-21，然而，它不能与IL-21细胞因子相混淆，IL-21细胞因子是在活化⑶4+T细胞中特异性表达的，而不在大多数其他组织中表达(Parrish-Novak 等人(2000)，《自然杂志》(Nature) 408 (6808):57 - 63)。人 IL-21 位于4号染色体上，可在HGNC数据库中被ID6005识别。人IL17C位于16号染色体上，具有氨基酸序列(UniProt Q9P0M4)如下:
[0035]MTLLPGLLFLTWLHTCLAHHDPSLRGHPHSHGTPHCYSAEELPLGQAPPHLLARGAKWGQALPVALVSSLEAASHRGRHERPSATTQCPVLRPEEVLEADTHQRSISPWRYRVDTDEDRYPQKLAFAECLCRGCIDARTGRETAALNSVRLLQSLLVLRRRPCSRDGSGLPTPGAFAFHTEFIHVPVGCTCVLPRSV (SEQ ID N0.:181)
[0036]术语“IL17RA”是指一种已知为白细胞介素17受体A的蛋白质。人IL17RA的氨基酸序列(UniProt Q96F46)如下:
[0037]MGAARSPPSAVPGPLLGLLLLLLGVLAPGGASLRLLDHRALVCSQPGLNCTVKNSTCLDDSWIHPRNLTPSSPKDLQIQLHFAHTQQ⑶LFPVAHIEWTLQTDASILYLEGAELSVLQLNTNERLCVRFEFLSKLRHHHRRWRFTFSHFWDPDQEYEVTVHHLPKPIPD⑶PNHQSKNFLVPDCEHARMKVTTPCMSSGSLWDPNITVETLEAHQLRVSFTLWNESTHYQILLTSFPHMENHSCFEHMHHIPAPRPEEFHQRSNVTLTLRNLKGCCRHQVQIQPFFSSCLNDCLRHSATVSCPEMPDTPEPIPDYMPLWVYWFITGISILLVGSVILLIVCMTWRLAGPGSEKYSDDTKYTDGLPAADLIPPPLKPRKVWIIYSADHPLYVDVVLKFAQFLLTACGTEVALDLLEEQAISEAGVMTWVGRQKQEMVESNSKIIVLCSRGTRAKWQALLGRGAPVRLRCDHGKPVGDLFTAAMNMILPDFKRPACFGTYVVCYFSEVSCD⑶VPDLFGAAPRYPLMDRFEEVYFRIQDLEMFQPGRMHRVGELS⑶NYLRSPGGRQLRAALDRFRDWQVRCPDWFECENLYSADDQDAPSLDEEVFEEPLLPPGTGIVKRAPLVREPGSQACLAIDPLVGEEGGAAVAKLEPHLQPRGQPAPQPLHTLVLAAEEGALVAAVEPGPLADGAAVRLALAGEGEACPLLGSPGAGRNSVLFLPVDPEDSPLGSSTPMASPDLLPEDVREHLEGLMLSLFEQSLSCQAQGGCSRPAMVLTDPHTPYEEEQRQSVQSDQGYISRSSPQPPEGLTEMEEEEEEEQDPGKPALPLSPEDLESLRSLQRQLLFRQLQKNSGffDTMGSESEGPSA (SEQ ID N0.:182) [0038]术语“IL17RE”是指一种已知为白细胞介素17受体E的蛋白质。人IL17RE的氨基酸序列(UniProt Q8NFR9)如下:
[0039]MGSSRLAALLLPLLLIVIDLSDSAGIGFRHLPHWNTRCPLASHTDDSFTGSSAYIPCRTWWALFSTKPffCVRVWHCSRCLCQHLLSGGSGLQRGLFHLLVQKSKKSSTFKFYRRHKMPAPAQRKLLPRRHLSEKSHHISIPSPDISHKGLRSKRTQPSDPETWESLPRLDSQRHGGPEFSFDLLPEARAIRVTISSGPEVSVRLCHQWALECEELSSPYDVQKIVSGGHTVELPYEFLLPCLCIEASYLQEDTVRRKKCPFQSWPEAYGSDFWKSVHFTDYSQHTQMVMALTLRCPLKLEAALCQRHDWHTLCKDLPNATARESDGWYVLEKVDLHPQLCFKFSFGNSSHVECPHQTGSLTSWNVSMDTQAQQLILHFSSRMHATFSAAWSLPGLGQDTLVPPVYTVSQARGSSPVSLDLIIPFLRPGCCVLVWRSDVQFAWKHLLCPDVSYRHLGLLILALLALLTLLGVVLALTCRRPQSGPGPARPVLLLHAADSEAQRRLVGALAELLRAALGGGRDVIVDLWEGRHVARVGPLPWLWAARTRVAREQGTVLLLWSGADLRPVSGPDPRAAPLLALLHAAPRPLLLLAYFSRLCAKGDIPPPLRALPRYRLLRDLPRLLRALDARPFAEATSWGRLGARQRRQSRLELCSRLEREAARLADLG (SEQ ID N0.:183)
[0040]在此所用的“IL17C 拮抗剂(antagonist of IL17C)” 和 “IL17C 拮抗剂(IL17Cantagonist)”是指广义上的IL17C拮抗剂。包括任何抑制IL17C的活性或功能的分子或以任何其他方式对IL17C产生效应的分子。术语IL17C拮抗剂包括但不限于与IL17C特异性结合的抗体或抗体片段、IL17C特异性抑制性核酸或IL17C特异性有机小分子。在术语IL17C拮抗剂的意义范围内还包括与IL17C受体特异性结合的抗体或抗体片段、IL17C受体特异性抑制性核酸或IL17C受体特异性有机小分子。术语IL17C拮抗剂还指非抗体骨架分子，如纤维连接蛋白骨架、锚蛋白、maxybodies/avimers、A蛋白源分子、anticalins、人泛素(affi I ins)、蛋白表位模拟物(PEMs)等等。
[0041]抑制性核酸包括但不限于反义DNA、三链形成寡核苷酸、外部指导序列、SiRNA和microRNA。有用的抑制性核酸包括与对照相比可减少编码IL17C的RNA的表达至少20、30、40、50、60、70、80、90或95%的那些。抑制性核酸及其生成方法是本领域众所周知的。siRNA设计软件可供使用。
[0042]通过天然产物筛选或化学品文库筛选，可鉴定IL17C或IL17C受体特异性有机小分子(SMOLs)。典型地，SMOL的分子量低于500道尔顿，更典型地是从160到480道尔顿。SMOL的其他典型特性包括下述的一种或多种:
[0043]?分配系数log P的范围是从-0.4到+5.6
[0044]?摩尔折射率是从40到130[0045]?原子数是从20到70
[0046]其评论见Ghose等人(1999)《组合化学杂志》(J Combin Chem):1，55-68以及Lipinski 等人(1997)《先进药物递送评论》(Adv.Drug Del.Rev.):23, 3-25。
[0047]优选的是，用于本发明的IL17C拮抗剂是一种IL17C特异性抗体或IL17C受体特异性抗体。这种抗体可以是任何类型的，如鼠类、大鼠、嵌合体、人源化或人源抗体。“人源”抗体或功能性人源抗体片段在此定义是一种非嵌合体的(例如不是“人源化的”)抗体，并且不是来自于(全部或部分地)一种非人物种。人源抗体或功能性抗体片段可来源于人类，可者可以是一种合成人源抗体。“合成人源抗体”在此定义为，是一种具有经由电脑模拟地全部或部分地来源于基于已知的人源抗体序列分析的合成序列的抗体。可通过对人源抗体或抗体片段序列数据库进行分析并且利用从其得到的数据对多肽序列进行设计，而达到人源抗体序列或其片段的电脑模拟设计。人源抗体或功能性抗体片段的另一个实例是由人类起源的抗体序列文库中分离出来的一种核酸所编码的抗体或抗体片段(即这种文库基于从人类天然来源中采离的抗体)。
[0048]“人源化抗体”或功能性人源化抗体片段在此定义为，是一种(i )来源于一种非人类来源(例如带有异源性免疫系统的转基因小鼠)的抗体，这种抗体是基于人类种系序列的；或(^)嵌合的抗体，其中可变域来源于一种非人类来源，并且恒定域来源于一种人类来源，或(iii ) CDR-移植抗体，其中可变域的CDR来源于非人类来源，而可变域的一个或多个构架是人类来源的，恒定域(如果有)是人类来源的。
[0049]术语“嵌合的抗体”或功能性嵌合的抗体片段在此定义为，是一种具有恒定抗体区域和可变抗体区域的抗体分子，该恒定抗体区域是来源于或对应于在一种物种中发现的序列，该可变抗体区域来源于另一种物种。优选的是，恒定抗体区域是来源于或对应于在人类中，例如在人类种系或体细胞中，发现的序列，可变抗体区域(例如VH、VL、CDR或FR区域)来源于在非人类动物中，例如在小鼠、大鼠、兔或仓鼠中，发现的序列。
[0050]一方面，可通过一个完整抗体的“片段”来进行抗原结合。在抗体的术语“抗体片段”中包括的结合片段的实例包括:Fab片段，是一种由VL、VH、CL和CHl结构域组成的单价片段；F(ab)2片段，是一种包含由二硫键在铰链区连接的两个Fab片段的二价片段；由VH和CHl结构域组成的Fd片段；由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；由VH结构域组成的单域抗体(dAb)片段(Ward等人，(1989)《自然杂志》(Nature) 341:544-546);以及分离的互补性决定区(⑶R)。
[0051]“单链片段(scFv)”是一种蛋白质单链，其中VL和VH区域配对形成了单价分子(已知为单链Fv (scFv);参见，例如Bird等人，(1988)《科学杂志》(Science) 242 =423-426 ；以及 Huston 等人，(1988)《美国科学院院刊》(Proc.Natl.Acad.Sc1.)85:5879_5883)。尽管VL和VH这两个结构域是用单独的基因进行编码的，它们可以用重组方法或用人工肽连接子进行连接，使它们可以一个蛋白质单链来制成。这类单链抗体包括一种或多种抗原结合部分。这些抗体片段可以通过本领域技术人员已知的常规方法获得，并且对这些片段采用与完整抗体相同的方式进行有用性筛。
[0052]术语“分离的”是指一种可以是如抗体或抗体片段化合物，基本上不含其他的具有不同的抗原特异性的抗体或抗体片段。此外，分离的抗体或抗体片段可以是基本上不含其他细胞材料和/或化学品的。[0053]如在此使用的术语“单克隆抗体”是指具有单一分子构成的抗体分子的制剂。单克隆抗体组合物展示了一个对于特定表位的具有独特的结合特异性和亲和力的独特的结合位点。
[0054] 如在此所用的,一种“特异性结合到(binds specifically to)”、“特异性结合到(specifically binds to)”的抗体,是对于一种抗原“具有特异性”或对其“特异性识别”(在这里是IL17C，或者是IL17C受体)，如果这种抗体能够区别这种抗原与一种或多种参考抗原，因为结合特异性不是一种绝对的，而是一种相对的特性。这类参考抗原可能是一种或多种密切相关的抗原，其可用作参考点，例如IL17A或IL17B。在其最常用的形式中(并且当未提及定义的参考)，“特异性结合”是指该抗体可区别感兴趣的抗原与无关抗原的能力，如所确定的，例如，根据下述方法中的一种。这类方法包括但不限于蛋白质印迹、ELISA-,RIA-、ECL-、IRMA-检验和肽扫描方法。例如，可以进行标准ELISA检验。通过标准显色可进行评分(例如带有辣根过氧化物酶的第二抗体，以及带有过氧化氢的四甲基联苯胺)。通过光密度，例如在450nm，对某些孔内的反应进行评分。典型背景(=阴性反应)可以是0.1OD ；典型的阳性反应可以是10D。意思是阳性/阴性差可以超过10倍。典型地，可以使用一组大约三到五种非相关抗原，如奶粉、BSA、转铁蛋白等等，而不是一种单一的参考抗原，来确定结合特异性。另外地，“特异性结合”可以涉及抗体对其靶抗原的不同部分(例如IL17C或IL17C受体的不同的结构域或区域)之间进行区别的能力，或抗体对IL17C或IL17C受体的一种或多种关键氨基酸残基或氨基酸残基的延伸片段之间进行区别的能力。
[0055]“交叉竞争”的意思是在标准竞争结合测定中，一种抗体、抗体片段或其他抗原-结合部分对干扰其他抗体、抗体片段或抗原-结合部分与特异性抗原的结合的能力。可采用标准竞争结合测定来确定一种抗体、抗体片段或其他抗原-结合部分能够干扰另一种抗体、抗体片段或其他抗原-结合部分与特异性抗原的结合并由此根据本发明进行交叉竞争的能力或程度。一种合适的测定包括应用Biacore技术(例如通过使用BIAcore3000仪器(Biacore，乌普萨拉，瑞典))，该技术可采用表面等离振子共振技术对相互作用的程度进行测量。另一种用于对交叉竞争进行测量的测定是使用基于ELISA的方法。在国际专利申请号TO2003/48731中描述了一种用于“表位结合”抗体的基于其交叉竞争的高通量方法。如果接受研究的抗体或抗体片段可将如表1中所述的抗体之一与IL17C的结合减少60%或以上，具体地说是减少70%或以上，更具体地说是减少80%或以上，并且如果如表1中所述的抗体之一将所述抗体或抗体片段与IL17C的结合减少60%或以上，具体地说是减少70%或以上，更具体地说是减少80%或以上，则存在交叉竞争。
[0056]术语“表位”包括任何可被免疫球蛋白或T-细胞受体特异性识别的或以另外的方式与一种分子相互作用的蛋白质的区域。通常，表位是如氨基酸或碳水化合物或糖侧链等的分子的化学活性表面组群，并且通常可具有特异性的三维结构特征以及特异性电荷特征。本领域的普通技术人员会赞同，事实上抗体可特异性结合的几乎任何东西都是表位。表位可包括与抗体结合的残基，并且可以是“线性的”或“构象的”。术语“线性表位”指的是在表位中，蛋白与相互作用分子(如抗体)之间的所有相互作用点是沿着该蛋白的初级氨基酸序列而线性发生的(连续的)。术语“构象表位”是指在表位中，不连续的氨基酸在三维构象中聚在一起。在构象表位中，相互作用点发生在蛋白上的彼此分离的氨基酸残基上。
[0057]“将相同的表位结合作为”意思是抗体、抗体片段或其他抗原-结合部位与特异性抗原相结合并将相同的表位作为示例抗体的能力。可使用表位作图技术对示例抗体及其他抗体的表位进行确定。表位作图技术是在本领域中所熟知的。例如，通过确定氨基酸的空间构象易于鉴定构象表位，例如通过如氢-氘交换、X射线的结晶以及二维核磁共振。
[0058]还有，如在此所用的，“免疫球蛋白”(Ig)在此是定义为一种属于IgG、IgM、IgE、IgA或IgD(或其任何亚类)类的蛋白质，并且包括所有常规的已知的抗体及其功能片段。抗体/免疫球蛋白的“功能片段”由此被定义为是一种保留了抗原结合区的抗体/免疫球蛋白的片段(例如一种IgG的可变区)。典型地，可在抗体的一种或多种高变区中，即在⑶R-1、CDR-2和/或-CDR-3区中，发现抗体的“抗原结合区”;然而，可变“构架”区也在抗原结合中起到了重要的作用，如通过为CDR提供骨架。优选的是，“抗原结合区”包括可变轻链(VL)的至少氨基酸残基4至103和可变重链(VH)的5至109，更优选的是VL的3至107和VH的4至111，特别优选的是完全VL和VH链(VL的氨基酸位置I至109和VH的I至113 ;根据TO97/08320确定其数目)。在本发明中所用的优选的免疫球蛋白类是IgG。本发明的“功能片段”包括F (ab’)2片段、Fab片段、scFv或包含单一免疫球蛋白可变结构域或单一结构域抗体多肽的构建体的结构域，例如单一重链可变结构域或单一轻链可变结构域。F(ab’)2或Fab可被工程化而使 在CHl与CL结构域之间发生的分子间二硫化物的相互作用可被最小化或完全除去。
[0059]本发明的抗体可来源于基于被电脑模拟设计的并且由合成生成的核酸所编码的氨基酸序列的重组抗体文库。例如通过对人源序列数据库进行分析并且利用从其得到的数据对多肽序列进行设计，可得到抗体序列的电脑模拟设计。对设计并得到电脑模拟生成的序列的方法进行了描述，例如，Knappik等人，《分子生物学杂志》(J.Mol.Biol.) (2000)296:57 ；Krebs 等人，《免疫学方法杂志》(J.1mmunol.Methods) (2001) 254:67, Rothe 等人，《分子生物学杂志》(J.Mol.Biol.) (2008)376:1182 ;以及由Knappik等人等人发布的美国专利号6，300, 064，将其通过引用以其全文结合在此。
[0060]本发明可使用任何IL17C特异性抗体。示例性的抗体包括本领域中的抗体，如
[0061]A:大鼠IgG2A单克隆抗小鼠IL17C抗体(安迪生物科技公司(R&D Systems);克隆311522，#MAB23061),
[0062]B:大鼠IgG2A单克隆抗小鼠IL17C抗体(安迪生物科技公司(R&D Systems);克隆311523，#MAB2306),以及
[0063]C:大鼠抗小鼠 IL17C (美国 US Biological 公司；克隆:8B28, #I8439_20R3)(实例4接受)。
[0064]其他可用于实践本发明的抗体包括Abnova供应的抗IL17C抗体(Walnut,CA,USA ；目录 #H00027189-B01P、#H00027189-D01 和 #H00027189-D01P)以及 antibodies-onlineGmbH 供应的抗 IL17C 抗体(亚琢(Aachen)，德国；目录 #ABIN525892、#ABIN327411、#ABIN525893、#ABIN221340、#ABIN22134U #ABIN221342 和 #ABIN525891 )。本发明可使用的其他IL17C特异性抗体是本发明自身所分离并描述的，即表1中所列的抗体。
[0065]本发明的组合物可用于治疗或预防应用。本发明因此包括一种药物组合物，该药物组合物包含一种本发明的抗体(或功能性抗体片段)的以及一种药理学上可接受的载体或其赋形剂。在相关的方面中，本发明提供了一种用于治疗炎性病症的方法。这种方法含有以下步骤:给予需要的受试者一种有效量的含有在此所述的或设计的本发明的抗体的药物组合物。
[0066]在某些方面中，本发明提供了用于治疗受试者的炎性病症的方法，所述方法包括以下步骤:对所述受试者给予一种IL17C拮抗剂。“受试者”，如在此上下文中所用的，是指任何哺乳动物，包括啮齿类，如小鼠或大鼠，以及灵长类，如食蟹猴(Macacafascicularis),罗猴(Macaca mulatta)或人类(Homo sapiens)。优选地受试者是一种灵长类，最优选的是人类。
[0067]在某些方面中，本发明提供了用于治疗炎性病症的方法，所述方法包括以下步骤:向受试者给予一种IL17C拮抗剂，其中所述IL17C拮抗剂可与IL17C相结合，其亲和力是大约小于IOOnM,更优选的是小于大约60nM,并且仍更优选的是小于大约30nM。更优选的是可与IL17C相结合的抗体或抗体片段，其亲和力小于大约ΙΟηΜ，并且更优选的是小于大约3nM0
[0068]在某些方面中，所述的IL17C拮抗剂是一种IL17C特异性抗体或抗体片段，并且所述抗体或抗体片段与另一物种的IL17C (如从小鼠、大鼠、罗猴和/或食蟹猴的IL17C)可交叉反应。在某些方面中，所述IL17C抗体或抗体片段是一种IL17C特异性分离抗体或抗体片段。在另一个实施例中，所述的IL17C特异性分离抗体或抗体片段是一种单克隆抗体或抗体片段。在一个另外的实施例中，所述的分离单克隆抗体或抗体片段是一种对包含SEQID N0.:181的氨基酸序列的多肽具有特异性的分离单克隆抗体。在一个另外的实施例中，所述的分离单克隆抗体或抗体片段是一种对由SEQ ID N0.:181的氨基酸序列组成的多肽具有特异性的分离单克隆抗体。在一个另外的实施例中，所述的分离单克隆抗体或抗体片段与另一物种的IL17C (小鼠、大鼠、罗猴和/或食蟹猴的IL17C)可交叉反应。
[0069]在某些方面中，所述的IL17C特异性抗体或抗体片段是人源、人源化或嵌合的抗体。在某些方面中，所述的IL17C特异性抗体或抗体片段是一种人源合成抗体。在某些方面中，本发明提供了一种对于包含SEQ ID N0.:181的氨基酸序列的多肽具有特异性的分离单克隆抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段是人源的、人源化的或嵌合的抗体。在某些方面中，本发明提供了一种对于由SEQ ID N0.:181的氨基酸序列所组成的多肽具有特异性的分离单克隆抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段是人源的、人源化的或嵌合的抗体。在某些方面中，所述的对由SEQ ID N0.:181的氨基酸序列所组成的多肽具有特异性的抗体或抗体片段是一种人源合成抗体或抗体片段。
[0070]在一个特定的方面中，本发明提供了一种组合物，该组合物包括一种能够拮抗炎性病症中的IL17C的IL17C拮抗剂，所述组合物进一步包括一种或多种药理学上可接受的载体和/或稀释剂。在某些方面中，IL17C拮抗剂，如IL17C特异性抗体，可拮抗任何IL17C在炎性病症中的作用。
[0071]在另一个方面中，本发明提供了一种用于对受试者的炎性病症进行预防的方法，所述包括对所述受试者给予一种IL17C拮抗剂。在此上下文中所用的“预防”是指以预防疾病的发生或延缓疾病的发生为目的的方法。
[0072]在某些方面中，本发明提供了一种包括有用于对炎性病症的治疗的IL17C拮抗剂的组合物，所述组合物进一步包括一种或多种药理学上可接受的载体和/或稀释剂。
[0073]在某些方面中，本发明提供了用于治疗炎性病症的IL17C拮抗剂。
[0074]在其他方面中，本发明提供了 IL17C拮抗剂在制备用于治疗炎性病症的药物中的应用。
[0075]在其他方面中，本发明提供了一种用于治疗受试者的炎性病症的方法，该方法包括向受试者给予一种IL17C拮抗剂。
[0076]在特定的方面中，本发明的IL17C拮抗剂可皮下给药。在其他方面中，本发明的IL17C拮抗剂可静脉内给药、动脉内给药或椎管内给药。
[0077]本发明的组合物优选的是包括一种IL17C拮抗剂以及一种药理学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的用于治疗炎性病症的药物组合物。这类载体、稀释剂和赋形剂是本领域所熟知的，并且熟练的业内人士会发现采用本发明的IL17C拮抗剂对受试者的最适合的制剂及给药途径。
[0078]在某些方面中，本发明提供了一种用于治疗或预防受试者的炎性病症的方法，该方法包括以下步骤:对受试者给予一种有效量的IL17C拮抗剂。在某些方面中，所述受试者是人类。在另外替代的方面中，所述受试者是啮齿类，如大鼠或小鼠。
[0079]在某些方面中，所述IL17C拮抗剂是一种IL17C特异性抗体或抗体片段。在某些方面中，所述拮抗剂是一种对于包含SEQ ID N0.: 181的氨基酸序列的多肽具有特异性的抗体或抗体片段。在另外替代的方面中，所述IL17C拮抗剂是一种IL17C受体特异性的抗体或抗体片段。
[0080]在某些方面中，所述的IL17C特异性抗体或抗体片段可阻断IL17C与IL17C受体的结合。在另外替代的方面中，所述的IL17C受体特异性抗体或抗体片段阻断了 IL17C与IL17C受体的结合。
[0081]在某些方面中，所述的IL17C特异性抗体或抗体片段阻断了 IL17C与IL17受体的结合，其中所述受体是IL17RE。在另外替代的方面中，所述的IL17C受体特异性抗体或抗体片段阻断了 IL17C与IL17RE的结合。
[0082]在某些方面中，所述的IL17C特异性抗体或抗体片段阻断了 IL17C与IL17RE的结合，其 IC5tl 浓度小于 100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nM、lnM、100pM、90pM、80pM、70pM、60pM、50pM、40pM、30pM、20pM、10pM、9pM、8pM、7pM、6pM、5pM、4pM、3pM、2pM 或 lpM。在某些方面中，可通过 ELISA、SET、FACS或 MSD (Meso Scale Discovery)对 IC5tl 浓度进行确定。
[0083]在某些方面中，所述的IL17C特异性抗体或抗体片段阻断了 IL17C与一种或多种IL17C受体的结合。在另外替代的方面中，所述的IL17C受体特异性抗体或抗体片段阻断了IL17C与IL17C受体的结合，其中IL17受体包括IL17RE和IL17RA。在另外替代的方面中，所述的IL17C受体特异性抗体或抗体片段阻断了 IL17C与IL17RE和IL17RA的结合。
[0084]在某些方面中，本发明提供了一种用于对炎性病症进行治疗或预防的IL17C拮抗剂。在某些方面中，所述治疗或预防包括以下步骤:对受试者给予一种有效量的IL17C拮抗剂。在某些方面中 ，所述受试者是人类。在另外替代的方面中，所述受试者是啮齿类，如大鼠或小鼠。
[0085]在另一个方面中，本披露是关于与表1中所述的抗体交叉竞争的分离单克隆抗体或其片段。在某个实施例中，本披露是关于一种分离单克隆抗体或其片段，该分离单克隆抗体或其片段与一种抗体交叉竞争，该抗体包含如表1中所述的抗体中之一的6个CDR。在某个实施例中，本披露是关于一种分离单克隆抗体或其片段，该分离单克隆抗体或其片段与在表1中所述的一种抗体交叉竞争，并且在基于ELISA的交叉竞争中可将表1所述的抗体之一的特异性结合减少至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。在某个实施例中，本披露是关于一种分离单克隆抗体或其片段，该分离单克隆抗体或其片段与一种在表1中所述的抗体交叉竞争，并在基于ELISA的交叉竞争中将表1所述的抗体之一与IL17C的特异性结合减少至少 20%、30%、40%、50%、60%、70%、80% 或 90%。
[0086]在另一个方面中，本披露是关于一种分离单克隆抗体或其片段，该分离单克隆抗体或其片段与表1中所述的抗体相同的表位有相互作用(例如通过结合、稳定化、空间分布)。
[0087]在一个方面中，本披露是关于一种分离单克隆抗体或其片段，该分离单克隆抗体或其片段包含由表1中的任何抗体的卡巴特(Kabat)所定义的6个⑶R。在另一个方面中，本披露是关于一种分离单克隆抗体或其片段，该分离单克隆抗体或其片段包含由表1中的各抗体的卡巴特所定义的6个CDR。
[0088]在一个方面中，本披露是关于一种分离单克隆抗体或其片段，该分离单克隆抗体或其片段包含表1中所述的任何抗体的VH和VL。
[0089]在另一个方面中，本披露是关于一种核酸，该核酸编码一种分离单克隆抗体或其片段，其中该核酸包含表1中所述的任何抗体的VH和VL。
[0090]在另一个方面中，本披露是关于一种核酸，该核酸编码一种分离单克隆抗体或其片段，该分离单克隆抗体或其片段与表1中所述的核酸具有至少75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%的序列一致性。
[0091]本领域的普通技术人员将赞同，在此描述的本发明易受不同于具体所述的变化和修改的那些变化和修改的影响。应理解的是，本发明包括所有这类变化和修改。本发明还包括在本说明书中参考的或指出的所有的步骤、特征、组合物和化合物，单独地或共同地，以及任何或所有所述步骤或特征中的任何两个或多个的组合。
[0092]表1:
[0093]
【权利要求】
1.一种用于在治疗炎性病症中使用的IL17C特异性分离抗体或抗体片段。
2.根据权利要求1所述的分离抗体或抗体片段，其中IL17C包括SEQ.1D Nol81的氨基酸。
3.根据权利要求1或2所述的分离抗体或抗体片段，其中所述治疗是对关节炎、哮喘、脓毒病、自身免疫性疾病、肺部炎症、银屑病、炎症性肠病、类风湿关节炎、COPD (慢性阻塞性肺病)、系统性红斑性狼疮和/或结节病的治疗。
4.根据权利要求1-3所述的分离抗体或抗体片段，其中所述抗体阻断了IL17C与IL17RE的结合。
5.根据权利要求1 -4中之一所述的分离抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段与包含由表1中的任何抗体的卡巴特所定义的6个CDR的一种抗体或抗体片段具有交叉竞争。
6.根据权利要求1-5中之一所述的分离抗体或抗体片段，其中所述抗体或其片段是一种单克隆抗体。
7.根据权利要求6所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段是一种人源的、人源化的或嵌合的抗体或抗体片段。
8.根据权利要求6所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含一个人重链恒定区以及一个人轻链恒定区。
9.根据权利要求6所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体是IgG同种型。
10.根据权利要求6所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体片段选自由以下各项组成的组:Fab、F (ab2)’、F (ab)2，、scFV。
【文档编号】C07K16/24GK103974976SQ201280051378
【公开日】2014年8月6日 申请日期:2012年10月19日 优先权日:2011年10月19日
【发明者】安德里亚斯·布尔特曼, 罗伯特·米尔鲍尔, 特里萨·加西亚, 雷金纳德·克里斯多夫·泽维尔·布莱斯, 卢克·尼尔斯, 卡杰·康拉斯 申请人:莫佛塞斯公司, 加拉帕戈斯股份有限公司