抗c-met抗体及其用途
【专利摘要】一种抗c-Met抗体或抗体片段和包含其的药物组合物，以及一种用于通过对受试者施用该抗体来预防和治疗癌症的方法。
KCLRF-BP-00220
2009.10.06
【专利说明】抗C-MET抗体及其用途 发明领域
[0001] 本公开涉及一种抗C-Met抗体和包含其的、用于预防和治疗癌症的药物组合物。
[0002] 发明背景
[0003]c-Met是肝细胞生长因子（HGF)的受体，该细胞因子是一种结合c-Met受体酪氨酸 激酶的胞外区以诱导各种正常细胞和肿瘤细胞的细胞分裂、移动、形态发生和血管发生的 细胞因子。c-Met是存在于细胞表面上的一种代表性的受体酪氨酸激酶，其本身是原癌基 因，且有时独立于配体HGF而牵涉到与癌症有关的多种机制如癌症形成、转移、迁移、侵入 和血管发生中。因此，c-Met最近显现为抗癌疗法的新靶物。
[0004] 具体而言，已知c-Met涉及诱导针对普遍使用的抗癌药物的抗性，如此被视为对 于个性化治疗是重要的。靶向表皮生长因子受体EGFR(ERBBl)的代表性抗癌治疗药物，即 爱必妥（Erbitux)或特罗凯（Tarceva)，通过阻断与癌症形成有关的信号传导来起作用。另 夕卜，作为乳腺癌治疗药物而众所周知的赫塞汀（Here印tin)靶向ERBB2(HER2)且通过阻断 细胞增殖所需的信号转导来起作用。在对上述药物有抗性的患者中，诱导细胞增殖的信号 转导途径由于c-Met的过表达而未受阻断。因此，c-met已成为许多药物公司的感兴趣的 靶物。但仍需要另外的抗c-Met抗体和相关方法和组合物。
[0005] 发明概述
[0006] 本发明提供一种抗c-Met抗体或其抗原结合片段。在一个方面，所述抗c-Met抗体 或其抗原结合片段包含重链可变区，其包含至少一种选自下组的重链互补性决定区（CDR): 具有SEQIDNO:4的氨基酸序列的⑶R-Hl、具有SEQIDNO:5的氨基酸序列的⑶R-H2、具 有SEQIDNO:6的氨基酸序列的⑶R-H3;还包含轻链可变区，其包含至少一种选自下组的 轻链⑶R:具有SEQIDNO:7的氨基酸序列的⑶R-Ll、具有SEQIDNO:8的氨基酸序列的 CDR-L2、和具有SEQIDN0:9的氨基酸序列的CDR-L3,其中SEQIDN0:4至9分别由本文中 描述的式I至VI代表。在另一个方面，所述抗c-Met抗体或其抗原结合片段包含重链可变 区，其包含至少一种选自下组的重链互补性决定区（CDR):具有SEQIDNO: 1的氨基酸序列 的⑶R-Hl、具有SEQIDNO:2的氨基酸序列的⑶R-H2、和具有SEQIDNO:3的氨基酸序列 的⑶R-H3 ;还包含轻链可变区，其包含至少一种选自下组的轻链⑶R:具有SEQIDNO:7的 氨基酸序列的CDR-L1、具有SEQIDN0:8的氨基酸序列的CDR-L2、和具有SEQIDN0:9的 氨基酸序列的⑶R-L3,其中SEQIDN0:7至9分别由本文中描述的式IV至VI代表。本发 明还提供编码所述抗体和抗体片段的核酸。
[0007] 本发明还提供包含抗c-Met抗体或其抗原结合片段的药物组合物，通过施用所述 抗体或其抗原结合片段来预防或治疗癌症的方法，以及相关方法和组合物。
[0008] 附图简述
[0009] 这些和/或其他方面将从对以下实施方案的描述连同伴随的附图变得更加明显 和更容易领会，附图中：
[0010]图1显示使用重叠延伸PCR来获得huAbF46抗体的ScFv基因库，其中目标⑶R已 突变；
[0011] 图2是BrdU(%)对抗体浓度所绘的图，其显示BrdU测定法中huAbF46-H4-Al、 huAbF46-H4-A2、huAbF46-H4_A3 和huAbF46_H4_A5 抗体的c-Met激动（agonistic)效果；
[0012] 图3是相对细胞活力（％ )对抗体浓度所绘的图，其显示huAbF46-H4-Al、 huAbF46-H4-A2、huAbF46-H4-A3 和huAbF46-H4-A5 抗体对体外细胞增殖的影响；
[0013] 图4是Akt磷酸化（％ )对治疗抗体所绘的图，其显示huAbF46-H4-Al、 huAbF46-H4-A2、huAbF46-H4-A3 和huAbF46-H4-A5 抗体的激动作用程度；
[0014] 图 5 例示huAbF46-H4-Al、huAbF46-H4-A2、huAbF46-H4-A3 和huAbF46-H4-A5 抗体 的抗癌效果，如通过c-Met的降解程度测量的；
[0015] 图6A和6B是肿瘤体积对时间（天数）所绘的图，其显示各种浓度的 huAbF46-H4-Al抗体在U87MG脑癌小鼠异种移植模型或MKN45胃癌小鼠异种移植模型中的 体内抗癌效果；
[0016]图7是相对细胞活力（％ )对抗体浓度所绘的图，其显示huAbF46-H4-Al (U6-HC7)、 huAbF46-H4-Al (IgG2铰链）和huAbF46-H4-Al (IgG2Fc)抗体对体外细胞增殖的影响；
[0017] 图8A和8B是Akt磷酸化（％ )对治疗抗体所绘的图，其显示这些抗体的 激动作用程度。图 8A显示huAbF46-H4-Al(U6-HC7)、huAbF46-H4-Al(IgG2 铰链）和 huAbF46-H4-Al(IgG2Fc)抗体所致的Akt磷酸化程度，而图 8B显示huAbF46-H4-Al(IgG2Fc) 和L3-1IY抗体所致的Akt磷酸化程度；
[0018] 图9A和9B例示抗体的抗癌效果，如通过c-Met的降解程度测量的。图9A显示 huAbF46-H4-Al(U6-HC7)、huAbF46-H4-Al(IgG2 铰链）和huAbF46-H4-Al(IgG2Fc)抗体所致 的c-Met降解程度，而图9B显示huAbF46-H4-Al(IgG2Fc)和L3-11Y抗体所致的c-Met降 解程度；和
[0019] 图IOA和IOB是肿瘤体积对时间（天数）所绘的图，其显示 huAbF46-H4-Al (U6-HC7)、huAbF46-H4-Al (IgG2铰链）和huAbF46-H4-Al (IgG2Fc)抗体在 U87MG脑癌小鼠异种移植模型或MKN45胃癌小鼠异种移植模型中的体内抗癌效果。
[0020] 发明详述
[0021] 现将对实施方案进行详细提述，其例子例示在伴随的附图中，其中同样的参照编 号始终指同样的要素。在此方面，本申请实施方案可以具有不同的形式且不应理解为限制 本文中所述的说明。因此，参照附图在下文对实施方案的描述仅为解释本说明书的各方面。 如本文中使用的，术语"和/或"包括一种或多种所列关联项目的任意和所有组合。表述如 "至少一个/种"在要素列表之前时，修饰整个要素列表而并非修饰该列表中的单个要素。
[0022] 依照一个实施方案，提供一种抗c-Met抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包 含：重链可变区，其包含至少一种选自下组的重链互补性决定区（⑶R):具有SEQIDN0:4 的氨基酸序列的⑶R-H1、具有SEQIDN0:5的氨基酸序列的⑶R-H2、和具有SEQIDN0:6 的氨基酸序列的CDR-H3;和轻链可变区，其包含至少一种选自下组的轻链CDR:具有SEQID N0:7的氨基酸序列的CDR-L1、具有SEQIDN0:8的氨基酸序列的CDR-L2、和具有SEQID NO:9的氨基酸序列的⑶R-L3,其中SEQIDN0:4至9分别由下式I至VI代表：
[0023]式I
[0024] Xaa1-Xaa2-Tyr-Tyr-Met-Ser(SEQ IDNO:4)
[0025]式II
[0026]Arg-Asn-Xaa3-Xaa4-Asn-Gly-Xaa5-Thr(SEQIDNO:5)
[0027]式III
[0028]Asp-Asn-Trp-Leu-Xaa6-Tyr(SEQIDNO:6)
[0029]式IV
[0030]Lys-Ser-Ser-Xaa7-Ser-Leu-Leu-Ala-Xaa8-Gly-Asn-Xaa9-Xaa10-Asn-Tyr-Leu-Al a(SEQIDNO:7)
[0031]式V
[0032]Trp-Xaa11-Ser-Xaa12-Arg-Val-Xaa13(SEQIDNO:8)
[0033]式VI
[0034]Xaa14-Gln-Ser-Tyr-Ser-Xaa15-Pro-Xaa16-Thr(SEQIDNO:9)
[0035] 在式I中，Xaa1是Pro或Ser或不存在，而Xaa2是Glu或Asp。
[0036]在式II中，Xaa3 是Asn或Lys，Xaa4 是Ala或Val，而Xaa5 是Asn或Thr。
[0037]在式III中，Xaa6 是Ser或Thr。
[0038]在式IV中，Xaa7 是His、Arg、Gln或Lys，Xaa8 是Ser或Trp，Xaa9 是His或Gln， 而Xaa10 是Lys或Asn0
[0039]在式V中，Xaa11 是Ala或Gly，Xaa12 是Thr或Lys,而Xaa13 是Ser或Pro。
[0040]在式VI中，Xaa14 是Gly、Ala或Gin,Xaa15 是Arg、His、Ser、Ala、Gly或Lys，而 Xaa16 是Leu、Tyr、Phe或Met。
[0041] 例如，⑶R-Hl可以是具有选自由SEQIDN0:22至24的氨基酸序列组成的组的 一种氨基酸序列的多肽，CDR-H2可以是具有SEQIDN0:25或26的氨基酸序列的多肽，而 ⑶R-H3可以是具有SEQIDNO:27或28的氨基酸序列的多肽。
[0042] 还有，CDR-Ll可以是具有选自由SEQIDNO:29-33和71的氨基酸序列组成的组 的一种氨基酸序列的多肽，⑶R-L2可以是具有选自由SEQIDNO:34-36的氨基酸序列组成 的组的一种氨基酸序列的多肽，而⑶R-L3可以是具有选自由SEQIDNO: 13-16的氨基酸序 列组成的组的一种氨基酸序列的多肽或具有SEQIDN0:37的氨基酸序列的多肽。
[0043] 依照另一个实施方案，提供一种抗c-Met抗体或其抗原结合片段，其包含：重链可 变区，其包含至少一种选自下组的重链互补性决定区（CDR):具有SEQIDNO: 1的氨基酸序 列的⑶R-Hl、具有SEQIDNO:2的氨基酸序列的⑶R-H2、和具有SEQIDNO:3的氨基酸序 列的⑶R-H3 ;和轻链可变区，其包含至少一种选自下组的轻链⑶R:具有SEQIDN0:7的氨 基酸序列的CDR-L1、具有SEQIDN0:8的氨基酸序列的CDR-L2、和具有SEQIDN0:9的氨 基酸序列的⑶R-L3,其中SEQIDN0:7至9分别由下式IV至VI代表：
[0044]式IV
[0045]Lys-Ser-Ser-Xaa7-Ser-Leu-Leu-Ala-Xaa8-Gly-Asn-Xaa9-Xaa10-Asn-Tyr-Leu-Al a(SEQIDNO:7)
[0046]式V
[0047]Trp-Xaa11-Ser-Xaa12-Arg-Val-Xaa13(SEQIDNO:8)
[0048]式VI
[0049]Xaa14-Gln-Ser-Tyr-Ser-Xaa15-Pro-Xaa16-Thr(SEQIDNO:9)
[0050]在式IV中，Xaa7 是His、Arg、Gln或Lys，Xaa8 是Ser或Trp，Xaa9 是His或Gln, 而Xaa10 是Lys或Asn〇
[0051]在式V中，Xaa11 是Ala或Gly，Xaa12 是Thr或Lys，而Xaa13 是Ser或Pro。
[0052]在式VI中，Xaa14 是Gly、Ala或Gin,Xaa15 是Arg、His、Ser、Ala、Gly或Lys，而 Xaa16 是Leu、Tyr、Phe或Met。
[0053] 例如，所述轻链可变区可具有至少一种选自下组的轻链互补性决定区：具有SEQ IDNO: 10或71的氨基酸序列的CDR-Ll、具有SEQIDNO: 11的氨基酸序列的CDR-L2、和具 有选自由SEQIDNO: 13-16的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列的⑶R-L3。
[0054] 再举个例子，所述重链可变区可具有SEQIDNO: 17的氨基酸序列，而所述轻链可 变区具有选自下组的氨基酸序列：SEQIDNO: 18-21和72的氨基酸序列。
[0055] 术语"c-Met"或"c-Met蛋白"可以指结合肝细胞生长因子（HGF)的受体酪氨酸 激酶（RTK)。c-Met可以是来自任何物种，特别是哺乳动物或灵长类的c-Met蛋白，例如人 c-Met(例如NP_000236)、或猴c-Met(例如猕猴（Macacamulatta)，NP_001162100)、或啮 齿动物如小鼠c-Met(例如NP_032617. 2)、大鼠c-Met(例如NP_113705. 1)等。c-Met蛋白 可包括由标识为GenBank登录号NM_000245的核苷酸序列编码的多肽，具有标识为GenBank 登录号NP_000236的氨基酸序列的多肽或其胞外域。受体酪氨酸激酶c-Met参与各种机制， 如癌症形成、转移、癌细胞的迁移、癌细胞的侵入和血管发生。
[0056] 通过用目标抗原给无免疫性动物免疫所产生的动物来源的抗体在注射于人以用 于医学治疗时一般引起免疫原性，因此已开发出嵌合抗体来抑制此类免疫原性。嵌合抗体 通过将导致抗同种型应答的动物来源抗体的恒定区经由遗传工程而用人抗体的恒定区替 换来制备。嵌合抗体在抗同种型应答中相比于动物来源的抗体有相当大的改进，但动物来 源的氨基酸仍然占有可变区，因此嵌合抗体在潜在的抗同种型应答方面具有副作用。开发 了人源化抗体来减少这类副作用。人源化抗体通过将互补性决定区（⑶R)嫁接到人抗体框 架中来产生，所述互补性决定区在嵌合抗体的可变区的抗原结合中起着重要作用。
[0057] 在CDR嫁接以产生人源化抗体中最重要的事是选择优化的人抗体来接受动物来 源抗体的CDR。抗体数据库、晶体结构分析和分子建模技术都被采用。然而，即使将动物来 源抗体的CDR嫁接到最优化的人抗体框架，仍存在位于动物来源CDR的框架中的影响抗原 结合的氨基酸。因此，在许多情况中，抗原结合亲和力不能维持，故需要应用另外的抗体工 程技术来恢复抗原结合亲和力。
[0058] 所述抗c-Met抗体可以是小鼠来源的抗体、小鼠-人嵌合抗体、或人源化抗体。所 述抗体或其抗原结合片段可以是从活体分离的抗体。
[0059] 所述抗体可以是单克隆抗体。
[0060] 完整的抗体包含两条全长轻链和两条全长重链，其中每条轻链通过二硫键连接 至一条重链。抗体具有重链恒定区和轻链恒定区。重链恒定区有gammaU)、mu(i0、 alpha( a)、delta( 8)、或epsilon(e)型，其可进一步分类为gammal(Y I)、gamma2(Y 2)、 gamma3(Y3)、gamma4(Y4)、alphal(a 1)、或alpha2(a 2)。轻链恒定区为kappa(k)或 lambda(X)型。
[0061] 术语"重链"指全长重链及其片段，其包含可变区VH(包含足以提供对抗原的特异 性的氨基酸序列）和3个恒定区CH1、Ch2和Ch3，以及铰链。术语"轻链"指全长轻链及其片 段，其包含可变区 '(包含足以提供对抗原的特异性的氨基酸序列）和恒定区CL。
[0062] 术语"互补性决定区（CDR) "指见于免疫球蛋白重链或轻链的高可变区中的氨基 酸序列。所述重链和轻链可分别包含3个⑶R(⑶RH1、⑶RH2和⑶RH3 ;和⑶RL1、⑶RL2和 CDRL3)。CDR可提供在抗体对抗原或表位结合中起着重要作用的接触残基。术语"特异性 结合"或"特异性识别"是本领域普通技术人员公知的，且指示抗体和抗原彼此特异性地相 互作用以引起免疫学活性。
[0063] 依照一个实施方案，所述抗体可以是选自下组的抗原结合片段：scFv、（scFv)2、 Fab、Fab' 和F(ab'）2。
[0064] 术语"抗原结合片段"用于本文指完整免疫球蛋白的片段，其包括包含具有特异 性结合抗原的抗原结合区的多肽的部分。例如，抗原结合片段可以是scFv、（scFv)2、Fab、Fab'、或F(ab'）2，但不限于此。在各种抗原结合片段中，Fab包含轻链和重链可变区、轻链 恒定区、和第一重链恒定区Chi，具有一个抗原结合位点。Fab'片段与Fab片段不同之处在 于Fab'包含铰链区，在Chi的C末端具有至少一个半胱氨酸残基。？(&13'）2抗体经由Fab' 片段铰链区中的半胱氨酸残基进行二硫键桥联而形成。Fv是最小的抗体片段，仅具有重链 可变区和轻链可变区。生成Fv片段的重组技术是本领域中公知的。双链Fv包含重链可变 区和轻链区，它们通过非共价键连接。单链Fv-般包含重链可变区和轻链可变区，它们通 过共价键经由肽接头连接，或在C末端连接以具有类似双链Fv的二聚体结构。抗原结合片 段可使用蛋白酶得到（例如，Fab片段可通过用木瓜蛋白酶对整个抗体的限制性切割获得， 而F(ab'）2片段可通过用胃蛋白酶切割获得），或者可通过使用遗传重组技术来制备。
[0065] 再举一个例子，所述抗c-Met抗体或抗体片段可包含具有SEQIDNO: 62的氨基酸 序列（其中从第1至17位的氨基酸序列为信号肽）或SEQIDN0:62的第18至462位的氨 基酸序列的重链，和具有SEQIDN0:68的氨基酸序列（其中从第1至20位的氨基酸序列 是信号肽）或SEQIDNO:68的第21至240位的氨基酸序列的轻链；或具有SEQIDNO:64 的氨基酸序列（其中从第1至17位的氨基酸序列为信号肽）或SEQIDNO:64的第18至 461位的氨基酸序列的重链，和具有SEQIDN0:68的氨基酸序列或SEQIDN0:68的第21 至240位的氨基酸序列的轻链；或具有SEQIDN0:66的氨基酸序列（其中从第1至17位 的氨基酸序列为信号肽）或SEQIDN0:66的第18至460位的氨基酸序列的重链，和具有 SEQIDN0:68的氨基酸序列或SEQIDN0:68的第21至240位的氨基酸序列的轻链。
[0066] 抗c-Met抗体的另外的例子包括，其中抗c-Met抗体包含具有SEQIDN0:62的 氨基酸序列或SEQIDN0:62的第18至462位的氨基酸序列的重链，和具有SEQIDN0:70 的氨基酸序列（其中从第1至20位的氨基酸序列是信号肽）或SEQIDNO:70的第21至 240位的氨基酸序列的轻链；具有SEQIDN0:64的氨基酸序列或SEQIDN0:64的第18至 461位的氨基酸序列的重链，和具有SEQIDN0:70的氨基酸序列或SEQIDN0:70的第21 至240位的氨基酸序列的轻链；或具有SEQIDN0:66的氨基酸序列或SEQIDN0:66的第 18至460位的氨基酸序列的重链，和具有SEQIDN0:70的氨基酸序列或SEQIDN0:70的 第21至240位的氨基酸序列的轻链。
[0067] 在其他例子中，所述抗c-Met抗体可包含具有SEQIDNO:62的氨基酸序列或SEQ IDN0:62的第18至462位的氨基酸序列的重链，和具有SEQIDN0:73的氨基酸序列的轻 链；具有SEQIDN0:64的氨基酸序列或SEQIDN0:64的第18至461位的氨基酸序列的重 链，和具有SEQIDN0:73的氨基酸序列的轻链；或具有SEQIDN0:66的氨基酸序列或SEQ IDN0:66的第18至460位的氨基酸序列的重链，和具有SEQIDN0:73的氨基酸序列的轻 链。
[0068] 在一个实施方案中，所述抗c-Met抗体可包含具有SEQIDNO: 66的第18至460 位的氨基酸序列的重链，和具有SEQIDN0:68的第21至240位的氨基酸序列的轻链；或具 有SEQIDN0:66的第18至460位的氨基酸序列的重链，和具有SEQIDN0:73的氨基酸序 列的轻链。
[0069] 在上文氨基酸序列中使用的信号肽仅用于例示，且信号肽的氨基酸序列可由本领 域技术人员适宜地确定或修饰。
[0070] 本文中还提供包含SEQIDN0:68或73的氨基酸序列的多肽。具有SEQIDN0:70 的氨基酸序列的多肽是包含人kappa(K)恒定区的轻链，而具有SEQIDN0:68的氨基酸序 列的多肽是通过将具有SEQIDNO: 70的氨基酸序列的多肽在位置62处（依照kabat编号 为位置36)的组氨酸用酪氨酸替换获得的多肽。抗体的生产产率可通过该替换而增加。具 有SEQIDN0:73的氨基酸序列的多肽是通过将具有SEQIDN0:68的第21至240位的氨 基酸序列的多肽位置32处（依照kabat编号为位置27e;位于⑶R-Ll内）的丝氨酸用色 氨酸替换获得的多肽。通过此类替换，包含这类序列的抗体和抗体片段展现出增加的活性， 如c-Met结合亲和力、c-Met降解活性、Akt磷酸化活性等。
[0071] 另一个实施方案提供一种具有SEQIDN0:71的氨基酸序列的多肽，其可用作轻链 互补性决定区（CDR-Ll)。另一个实施方案提供抗c-Met抗体或其抗原结合片段，包含具有SEQIDN0:71的氨基酸序列的轻链互补性决定区、具有SEQIDN0:72的氨基酸序列的轻链 可变区、或具有SEQIDN0:73的氨基酸序列的轻链，任选地与如本文中描述的重链可变区 或重链或提供抗c-Met抗体或抗体片段的其他重链组合。所述抗体或其抗原结合片段展现 出增加的c-Met降解活性和Akt磷酸化活性，如图8B和9B中显示的。
[0072] 依照另一个实施方案，提供包含所述抗c-Met抗体或抗原结合片段作为活性成分 的药物组合物。所述药物组合物可用于预防或治疗癌症，并且可包含药学有效量的抗c-Met 抗体或抗原结合片段；和药学可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
[0073] 所述癌症可以是任何与c-Met活性有关的癌症。所述癌症可选自下组：鳞状细胞 癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺的腺癌、肺的鳞状细胞癌、腹膜癌、皮肤癌、皮肤或眼内黑 素瘤、结直肠癌、肛门附近的癌、食道癌、小肠肿瘤、内分泌腺的癌、副甲状腺癌、肾上腺癌、 软组织肉瘤、尿道癌、慢性或急性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、肝细胞瘤、胃肠癌、胰腺癌、成 胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞腺瘤、乳腺癌、结肠癌、大肠癌、子宫内膜 癌或子宫癌、唾液腺肿瘤、肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、或头和颈部的癌。
[0074] 所述药物组合物可包含药学可接受的载体、稀释剂和/或赋形剂。包含在组合物 中的药学可接受的载体可包括通常使用的乳糖、右旋糖（dextrose)、蔗糖、山梨糖醇、甘露 醇、淀粉、阿拉伯树胶（gumacacia)、磷酸钙、藻酸盐、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡 咯烷酮、纤维素、水、糖浆剂、甲基纤维素、甲基羟基苯甲酸盐/酯、丙基羟基苯甲酸盐/酯、 滑石、硬脂酸镁和矿物油，但不限于此。所述药物组合物还可包括滑润剂、加湿剂、增甜剂、 增味剂（flavorenhancer)、乳化剂、混悬剂和防腐剂。
[0075] 所述药物组合物可口服或胃肠外施用。胃肠外施用可包括静脉内注射、皮下注射、 肌肉注射、腹膜内注射、内皮施用、局部施用、鼻内施用、肺内施用、和直肠施用。由于口服施 用导致蛋白质或肽的消化，因此必须将活性成分包裹或配制在药物组合物中，阻止其消化。 另外，可通过使用任何能够将活性材料移向靶细胞的装置来施用药物组合物。
[0076] 药物组合物的合适剂量可能取决于许多因素，如配制方法、施用方法、患者的年 龄、体重、性别和病理状况、饮食、施用时间、施用路径、排泄速度和反应敏感性。期望的药物 组合物剂量对于成人可以在约〇. 001至l〇〇mg/kg的范围内。术语"药学有效量"或"治疗 有效量"用于本文指用于预防或治疗癌症和/或血管发生相关疾病的量。
[0077] 所述药物组合物可与药学可接受的载体和/或添加剂通过本领域公知的方法配 制成单位剂量或多剂量形式。在此方面，制剂可以是油或水性介质中的溶液、或者是混悬 齐IJ、糖浆剂、乳化溶液、提取物、粉剂、颗粒剂、片剂或胶囊，且可进一步包含分散剂或稳定 齐U。另外，所述药物组合物可施用为单独的药物，或与其他药物一起施用，且可以与先前存 在的药物序贯或同时施用。所述药物组合物包含抗体或其抗原结合片段，如此可配制成免 疫脂质体。含有抗体的脂质体可使用本领域中公知的方法制备。所述免疫脂质体是包括卵 磷脂、胆固醇、和聚乙二醇衍生的磷脂酰乙醇胺的脂质组合物，且可以通过逆相蒸发方法制 备。例如，Fab'片段可经由二硫键交换反应附接于脂质体。脂质体中还可包含化学药物如 多柔比星（doxorubicin)。
[0078] 依照一个实施方案，所述抗体或抗体片段可充当抗C-Met蛋白的拮抗剂。
[0079] 术语"拮抗剂"理解为包括部分或完全阻断、抑制和/或中和其靶物（例如c-Met) 的至少一种生物学活性的所有分子。例如，术语"拮抗剂抗体"指抑制或降低抗体结合的抗 原（例如c-Met)的生物学活性的抗体。拮抗剂由于将受体结合至配体，促进降解，而降低 受体磷酸化，或者可以使配体所活化的细胞失能或将其破坏。还有，拮抗剂可完全阻断受体 和配体之间的相互作用，或者由于受体的三级结构变化或受体的下调而可以实际上减少相 互作用。
[0080] 依照另一个实施方案，提供一种预防和/或治疗癌症的方法，所述方法包括对需 要预防和/或治疗癌症的受试者施用所述抗C-Met抗体或抗原结合片段。所述抗体或抗体 片段可以药学有效量施用，且可作为与如本文中描述的药学可接的载体、稀释剂或赋形剂 一起配制的药物组合物来施用。所述方法还可包括在施用步骤之前鉴定出需要预防和/或 治疗癌症的受试者。
[0081] 依照另一个实施方案，提供抗C-Met抗体或抗原结合片段，其用于预防和/或治疗 癌症，或制备用于预防和/或治疗癌症的药物。
[0082] 可施用抗c-Met抗体或抗原结合片段或药物组合物来预防或治疗癌症的受试者 包括动物，如哺乳动物。例如，所述动物可以是人、犬、猫或小鼠。
[0083] 依照本发明的另一个实施方案，提供编码如本文中描述的抗体或其抗原结合片段 的核酸，以及编码任一种前述多肽或氨基酸序列的核酸。编码所述抗体或其抗原结合片段 的核酸可以是例如DNA或RNA，且任选地可以纳入载体如表达载体中。
[0084] 依照本发明的另一个实施方案，提供包含编码如本文中描述的抗体或其抗原结合 片段的核酸，以及编码任一种前述多肽或氨基酸序列的核酸的细胞。
[0085] 依照本发明的另一个实施方案，提供一种制备如本文中描述的抗体或其抗原结合 片段的方法，所述方法包括在细胞中表达编码所述抗体或其抗原结合片段的核酸。
[0086] 现将参照以下实施例对本发明的一个或多个实施方案进行更详细地描述。然而， 这些实施例仅用于例示目的且不意图限制本发明的范围。 实施例
[0087] 实施例1 :制备抗c-Met的小鼠抗体AbF46
[0088]小鼠的免疫
[0089] 为了获得形成杂交瘤细胞系所需的免疫小鼠，将IOOug人c-Met/Fc融合蛋白（R&D Systems)和相同量的完全弗氏佐剂混合，并经由腹膜内注射将混合物施用到5只4至6周 龄BALB/c小鼠（JapanSLC，Inc.)的每一只中。2周后，使用与上文所述相同的方法将抗原 (先前注射量的一半）与不完全弗氏佐剂混合，并经由腹膜内注射将混合物施用到每只小 鼠中。1周后，实施末次加强注射，并在3天后从每只小鼠的尾部收集血液以获得血清。然 后，将血清以1/1000用PBS稀释，并进行酶联免疫吸附测定法（ELISA)来分析识别c-Met 的抗体的滴度是否提高。之后，选出其中获得充足量抗体的小鼠，并在选出的小鼠上进行细 胞融合过程。
[0090](2)细朐融合和杂夺瘤细朐的制各
[0091] 在细胞融合实验之3天前，经由腹膜内注射将50ugPBS与人c-Met/Fc融合蛋白 的混合物施用给每只小鼠（BALB/c小鼠JapanSLC，Inc.)。将每只免疫后小鼠麻醉，然后 提取其位于身体左侧的脾并用网磨碎（groundwithamesh)以分离细胞，将其与培养基 (DMEM，GIBC0,Invitrogen)混合来制备脾细胞悬浮液。将该悬浮液离心以收集细胞层。将 获得的IxlO8个脾细胞与IxlO8个骨髓瘤细胞（Sp2/0)混合，并将混合物离心以将细胞沉 淀。将沉淀物缓慢分散，用lml45 % (w/v)聚乙二醇（PEG)的DMEM溶液处理，并在37°C维 持1分钟，接着添加ImlDMBL在引入另外的IOmlDMEM达1分钟后，将所得物在37°C水 浴中维持5分钟。使其总量达到50ml，并将所得物离心。将所得细胞沉淀物以IXIO5个细 胞/ml至2XIO5个细胞/ml的浓度重悬于分离培养基（HAT培养基，即次黄嘌呤-氨基蝶 呤-胸腺嘧啶核苷培养基）。然后，将所得物分布于96孔板（0.Iml每孔），将其在37°C二 氧化碳培养箱中温育以制备杂交瘤细胞。
[0092](3)选择产牛.抗.c-Met蛋白的单克降抗.体的杂交瘤细胞
[0093] 为了从上述操作（2)中制备的杂交瘤细胞中选出特异性结合c-Met的杂交瘤细 胞，实施ELISA来筛选出产生有效抗人c-Met/Fc融合蛋白和人Fc蛋白的抗体的细胞。
[0094] 将50ul(2ug/ml)人c-Met/Fc融合蛋白在微滴定板的每个孔上包被，并通过清洗 除去未反应的抗原。为了排除抗体对Fc而非对c-Met的结合，使用与上文相同的方法将人 Fc蛋白在一个不同微滴定板的每个孔上包被。然后，将50ul的杂交瘤细胞悬浮液添加到微 滴定板的每个孔以反应1小时。接着，将微滴定板用磷酸盐缓冲液-tween20 (TBST)溶液清 洗以除去未反应的培养基。向其添加山羊抗小鼠IgG-辣根过氧化物酶（IgG-HRP)，并允许 反应在室温进行1小时，用TBST溶液进行清洗。之后，向每个孔添加过氧化物酶的底物溶液 (OPD)，并通过使用ELISA读数器测量在450nm处的吸收来评估反应程度。经由此方法，重复 地选择能产生对人c-Met蛋白而非对人Fc蛋白高度特异性的抗体的杂交瘤细胞系。在获 得的杂交瘤细胞系上进行有限稀释以获得产生单克隆抗体的杂交瘤细胞系的单个克隆。选 出的产生单克隆抗体的杂交瘤细胞系在KoreanCellLineBank以登录号KCLRF-BP-00220 登记。
[0095](4)单克降抗体的产牛和钝化
[0096] 将在上文描述的操作（3)中获得的杂交瘤细胞在无血清培养基中培养以产生单 克隆抗体，并将该单克隆抗体纯化。
[0097] 首先，将在有10% (w/v)FBS的50ml培养基（DMEM)中培养的杂交瘤细胞离心以获 得细胞沉淀物，将其用20mlPBS清洗超过2次以除去FBS。然后，引入50mlDMEM以将细胞 沉淀物重悬，并将所得物在37°C二氧化碳培养箱中温育3天。在离心以移出产生抗体的细 胞之后，将包含抗体的细胞培养物分离并储存于4°C，或直接使用。使用装备有亲和柱（蛋 白G琼脂糖柱；Pharmacia,USA)的AKTA纯化装置（GEHealth)从50至300ml培养物中纯 化出抗体，并通过使用用于蛋白质聚集的滤器（Amicon)将上清液用PBS替换来存储纯化的 抗体。
[0098] 实施例2:制备抗c-Met的嵌合抗体chAbF46
[0099] 一般地，当将小鼠抗体注射到人中用于医学目的时，经常可能发生免疫原性。因 此，为了降低免疫原性，从实施例1所得小鼠抗体AbF46来制备嵌合抗体chAbF46,其中恒定 区被人IgGl抗体的氨基酸序列取代。
[0100] 合成多个基因，使得对应于重链的核酸序列为EcoRI-信号序 列-VH-Nhel-CH-TGA-Xhol(SEQIDN0:38)，而对应于轻链的核酸序列为EcoRI-信号序 列-VL-BsiWI-CL-TGA-XhoI(SEQIDNO: 39)。然后，构建表达嵌合抗体的载体，方法是，用 限制酶EcoRI(NEB,R0101S)和XhoI(NEB,R0146S)，分别将具有与重链对应的核酸序列的 DNA片段（SEQIDN0:38)克隆到包含在Invitrogen的OptiCHO?抗体表达试剂盒（目录 号12762-019)中的p0ptiVEC?-T0P0TA克隆试剂盒中，并将具有与轻链对应的核酸序列的 DNA片段（SEQIDN0:39)克隆到pcDNA?3.3-T0P0TA克隆试剂盒（目录号8300-01)中。
[0101] 构建的载体用QiagenMaxiprep试剂盒（目录号12662)扩增，并将包含重链的载 体和包含轻链的载体以约4:1 (约80ug:20ug)的比率与360ul2MCaCl2 -起添加到293T细 胞（2. 5xl07)中进行转染。接着，将混合物在有10% (w/v)FBS的DMEM培养基中于37°C在 5% (v/v)C02条件中培养5小时，然后在没有FBS的DMEM培养基中于37°C在5% (v/v)C02 条件中培养48小时。
[0102] 将培养的细胞离心，并使用AKTAPrime(GEhealthcare)将IOOml的每种上清液 纯化。将蛋白A柱（GEhealthcare, 17-0405-03)置于AKTAPrime中，并使培养的溶液以 5ml/分钟的流速流动，用IgG洗脱缓冲液（ThermoScientific，21004)洗脱。将缓冲液用 PBS缓冲液替换，如此纯化出最终的嵌合抗体（下文中chAbF46)。
[0103] 实施例3:从嵌合抗体chAbF46制备人源化抗体huAbF46
[0104] 重链人源化
[0105] 对于Hl-重链和H3-重链，使用NCBIIgBlast鉴定与小鼠抗体AbF46的VH基因 最同源的人种系基因。确认VH3-71在氨基酸水平具有83%同源性。使用Kabat编号方式对 小鼠抗体AbF46的⑶R-Hl、⑶R-H2和⑶R-H3编号，并将小鼠抗体AbF46的一个⑶R部分引 入VH3-71的框架中。将位置30(S-T)、位置48(V-L)、位置73(D-N)和位置78(T-L) 的氨基酸回复突变为初始的小鼠AbF46抗体的氨基酸序列，其中依照Kabat编号来对氨基 酸的数目编号，因此，该编号对于VH3-71和小鼠AbF46抗体是通用的。然后，在Hl-重链中， 另外突变位置83(R-K)和位置84(A-T)的氨基酸，由此完成Hl-重链（SEQIDNO: 40) 和H3-重链（SEQIDN0:41)的构建。
[0106] 对于H4-重链，获得人抗体的框架序列，并将VH3亚型（已知具有类似于AbF46 抗体的小鼠框架序列的序列且稳定）用于引入使用Kabat编号定义的小鼠抗体AbF46的 CDR-H1、CDR-H2 和CDR-H3。因此，构建H4-重链（SEQIDN0:42)。
[0107] (2)轻链人源化
[0108] 对于Hl-轻链（SEQIDNO: 43)和H2-轻链（SEQIDNO: 44)，使用NCBIIgBlast 鉴定与小鼠抗体AbF46的VL基因最同源的人种系基因。确认VK4-1在氨基酸水平具有 75%同源性。使用Kabat编号定义小鼠抗体AbF46的⑶R-L1、⑶R-L2和⑶R-L3,并将小鼠 抗体AbF46的一个⑶R部分引入VK4-1的框架中。在Hl-轻链中，将位置36(Y-H)、位置 46(L-M)和位置49(Y-I)的3个氨基酸回复突变。在H2-轻链中，仅位置49(Y-I)的 1个氨基酸回复突变。
[0109] 对于H3-轻链（SEQIDNO: 45)，使用NCBIIgBlast鉴定与小鼠抗体AbF46的VL 基因最同源的人种系基因。结果，除了VK4-1(上文提述）以外还选择VK2-40。确认小鼠抗 体AbF46VL和VK2-40在氨基酸水平具有61 %同源性。使用Kabat编号定义小鼠抗体AbF46 的⑶R-L1、⑶R-L2和⑶R-L3,并将小鼠抗体AbF46的一个⑶R部分引入VK4-1的框架中。 在H3-轻链中，将位置36(Y-H)、位置46(L-M)和位置49(Y-I)的3个氨基酸回复突 变。
[0110] 对于H4-轻链（SEQIDNO:46)，获得人抗体的框架序列，并将VKl亚型（常规已 知为稳定）用于引入使用Kabat编号定义的小鼠抗体AbF46的⑶R-L1、⑶R-L2和⑶R-L3。 在H4-轻链中，将位置36(Y-H)、位置46(L-M)和位置49(Y-I)的3个氨基酸另外回 复突变。
[0111] 然后构建用于表达人源化抗体的载体，方法是，用限制酶EcoRI(NEB，R0101S)和 XhoI(NEB,R0146S)，分别将具有与重链对应的核酸序列的第一组DNA片段（H1-重链；SEQ IDNO: 47,H3-重链；SEQIDNO: 48,和H4-重链；SEQIDNO: 49)克隆到包含在Invitrogen 的OptiCHO?抗体表达试剂盒（目录号12762-019)中的p0ptiVEC?-T0P0TA克隆试剂盒中， 将具有与轻链对应的核酸序列的第二组DNA片段（H1-轻链；SEQIDNO: 50,H2-轻链；SEQ IDN0:51，H3-轻链；SEQIDN0:52,和H4-轻链；SEQIDN0:53)克隆到pcDNA?3.3-T0P0 TA克隆试剂盒（目录号8300-01)中。
[0112] 构建的载体用QiagenMaxiprep试剂盒（目录号12662)扩增，并将包含重链的载 体和包含轻链的载体以约4:1 (约80ug:20ug)的比率与360ul2MCaCl2 -起添加到293T细 胞（2. 5xl07)中进行转染。接着，将混合物在添加有10% (w/v)FBS的DMEM培养基中于37°C 在5% (v/v)CO2条件中培养5小时，然后在没有FBS的DMEM培养基中于37°C在5% (v/v) CO2条件中培养48小时。
[0113] 将培养的细胞离心，并使用AKTAPrime(GEhealthcare)将IOOml的每种上清液 纯化。将蛋白A柱（GEhealthcare, 17-0405-03)置于AKTAPrime中，并使培养液以5ml/ 分钟的流速流动，用IgG洗脱缓冲液（ThermoScientific，21004)洗脱。将缓冲液与PBS缓 冲液交换，如此纯化最终的人源化抗体（下文中huAbF46)。下文中使用人源化huAbF46的 H4-重链和H4-轻链的组合。
[0114] 实施例4 :制备huAbF46抗体的scFv库
[0115] 用huAbF46抗体的重链可变区和轻链可变区来设计用于制备huAbF46抗体的scFv 的基因。重链可变区和轻链可变区每一个都设计为具有'VH-接头-VL'形式，其中接头设 如上述设计的编码huAbF46抗体的scFv的多核苷酸（SEQIDNO: 55)，而用于表达该多核苷 酸的载体表示为SEQIDN0:56。
[0116] 然后，分析由所述载体表达的所得物，鉴定c-Met特异性结合。
[0117] 实施例5 :制备用于亲和力成熟的库基因
[0118] 靶⑶R的诜择和引物的制各
[0119] 对于huAbF46抗体的亲和力成熟，通过'Kabat编号'从制备的小鼠抗体AbF46定 义6个互补性决定区（⑶R)。⑶R显示于表1中。
[0120] 表 1
【权利要求】
1. 一种抗c-Met抗体或其抗原结合片段，包含： 重链可变区，其包含至少一种选自下组的重链互补性决定区（⑶R):具有SEQ ID N0:4 的氨基酸序列的⑶R-H1、具有SEQ ID N0:5的氨基酸序列的⑶R-H2、和具有SEQ ID N0:6 的氨基酸序列的CDR-H3 ;和 轻链可变区，其包含至少一种选自下组的轻链⑶R:具有SEQ ID N0:7的氨基酸序列的 CDR-L1、具有SEQ ID N0:8的氨基酸序列的CDR-L2、和具有SEQ ID N0:9的氨基酸序列的 ⑶R-L3,其中SEQ ID N0:4至9分别由下式I至VI代表： 式I XaafXaafTyr-Tyr-Met-SeiKSEQ ID N0:4)，其中 乂331是？1'〇 或 Ser 或不存在，而 Xaa2是 Glu 或 Asp ; 式II Arg-Asn-Xaa3-Xaa4-Asn-Gly-Xaa5-Thr (SEQ ID NO: 5)，其中 Xaa3 是 Asn 或 Lys，Xaa4 是 Ala 或 Val,而 Xaa5 是 Asn 或 Thr ; 式III Asp-Asn-Trp-Leu-Xaa6-Tyr(SEQ ID N0:6);其中 Xaa6 是 Ser 或 Thr; 式IV Lys-Ser-Ser-Xaa7-Ser-Leu-Leu-Ala-Xaa8-Gly-Asn-Xaa 9-Xaa1〇-Asn-Tyr-Leu-Ala (SE Q ID 腸:7)，其中乂337是]^8、4找、6111或1^8，乂338是361'或1'印，乂33 9是]^8或6111，而 Xaa10 是 Lys 或 Asn ; 式V Trp-Xaan-Ser-Xaa12-Arg-Val-Xaa13(SEQ ID N0:8)，其中 Xaan 是 Ala 或 Gly，Xaa12 是 Thr 或 Lys,而 Xaa13 是 Ser 或 Pro ;和 式VI Xaa14-Gln-Ser-Tyr-Se;r-Xaa15-P;r〇-Xaa16-Th;r(SEQ ID 腸：9)，其中父&&14是61丫、六1&或 Gin, Xaa15 是 Arg、His、Ser、Ala、Gly 或 Lys,而 Xaa16 是 Leu、Tyr、Phe 或 Met。
2. 权利要求1的抗体或抗原结合片段，其中⑶R-Hl是具有SEQ ID NO: 22、23、或24的 氨基酸序列的多肽。
3. 权利要求1的抗体或抗原结合片段，其中⑶R-H2是具有SEQ ID NO: 25或26的氨基 酸序列的多肽。
4. 权利要求1的抗体或抗原结合片段，其中⑶R-H3是具有SEQ ID NO: 27或28的氨基 酸序列的多肽。
5. 权利要求1的抗体或抗原结合片段，其中CDR-L1是具有SEQ ID N0:29、30、31、32、 33、或71的氨基酸序列的多肽。
6. 权利要求1的抗体或抗原结合片段，其中CDR-L2是具有SEQ ID N0:34、35、或36的 氨基酸序列的多肽。
7. 权利要求1的抗体或抗原结合片段，其中⑶R-L3是具有SEQ ID NO: 13、14、15、16、 或37的氨基酸序列的多肽。
8. -种抗c-Met抗体或其抗原结合片段，包含： 重链可变区，其包含至少一种选自下组的重链互补性决定区（⑶R):具有SEQ ID NO: 1 的氨基酸序列的⑶R-H1、具有SEQ ID N0:2的氨基酸序列的⑶R-H2、和具有SEQ ID N0:3 的氨基酸序列的CDR-H3 ;和 轻链可变区，其包含至少一种选自下组的轻链⑶R:具有SEQ ID N0:7的氨基酸序列的 CDR-L1、具有SEQ ID N0:8的氨基酸序列的CDR-L2、和具有SEQ ID N0:9的氨基酸序列的 ⑶R-L3,其中SEQ ID N0:7至9分别由下式IV至VI代表： 式IV Lys-Ser-Ser-Xaa7-Ser-Leu-Leu-Ala-Xaa8-Gly-Asn-Xaa 9-Xaa1〇-Asn-Tyr-Leu-Ala (SE Q ID 腸:7)，其中乂337是]^8、4找、6111或1^8，乂338是361'或1'印，乂33 9是]^8或6111，而 Xaa10 是 Lys 或 Asn ; 式V Trp-Xaan-Ser-Xaa12-Arg-Val-Xaa13(SEQ ID N0:8)，其中 Xaan 是 Ala 或 Gly，Xaa12 是 Thr 或 Lys,而 Xaa13 是 Ser 或 Pro ;而 式VI Xaa14-Gln-Ser-Tyr-Se;r-Xaa15-P;r〇-Xaa16-Th;r(SEQ ID 腸：9)，其中父&&14是61丫、六1&或 Gin, Xaa15 是 Arg、His、Ser、Ala、Gly 或 Lys,而 Xaa16 是 Leu、Tyr、Phe 或 Met。
9. 权利要求8的抗体或抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含至少一种选自下组的 轻链CDR :具有SEQ ID NO: 10或71的氨基酸序列的CDR-L1、具有SEQ ID NO: 11的氨基酸 序列的〇?-12、和具有5￡0 10勵:13、14、15、或16的氨基酸序列的〇)1?-13。
10. 权利要求8的抗体或抗原结合片段，其中所述重链可变区具有SEQ ID NO: 17的氨 基酸序列，而所述轻链可变区具有SEQ ID N0:18、19、20、21、或72的氨基酸序列。
11. 权利要求8的抗体或抗原结合片段，其包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID N0:62的第18至462位的氨基酸序列、SEQ ID N0:64的第18至461位的氨基酸序列、或 SEQ ID NO:66的第18至460位的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:68的第21至220 位的氨基酸序列。
12. 权利要求8的抗体或抗原结合片段，其包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID N0:62的第18至462位的氨基酸序列、SEQ ID N0:64的第18至461位的氨基酸序列、或 SEQ ID NO:66的第18至460位的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO: 70的第21至220 位的氨基酸序列。
13. 权利要求8的抗体或抗原结合片段，其包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:62的第18至462位的氨基酸序列、SEQ ID NO:64的第18至461位的氨基酸序列、或 SEQ ID N0:66的第18至460位的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID N0:73的氨基酸序列。
14. 一种抗c-Met抗体或其抗原结合片段，其包含SEQ ID N0:71、72、或73的氨基酸序 列。
15. 权利要求1-14中任一项的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是 单克隆抗体、小鼠来源的抗体、小鼠_人嵌合抗体、人源化抗体。
16. 权利要求1-15中任一项的抗体或抗原结合片段，其中所述抗原结合片段是scFv、 (scFv) 2、Fab、Fab'、或 F (ab，）2。
17. 权利要求1-16中任一项的抗体或抗原结合片段，其中所述c-Met是人c-Met、猴 c_Met、小鼠 c_Met、或大鼠 c_Met。
18. -种药物组合物，其包含权利要求1-17中任一项的抗c-Met抗体或抗原结合片段 和药学可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
19. 一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含权利要求1-18中任一项的抗体或 抗原结合片段和药学可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
20. 权利要求19的药物组合物，其中所述癌症是鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞 肺癌、肺的腺癌、肺的鳞状细胞癌、腹膜癌、皮肤癌、皮肤或眼内黑素瘤、结直肠癌、肛门附近 的癌、食道癌、小肠肿瘤、内分泌腺的癌、副甲状腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、慢性 或急性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、肝细胞瘤、胃肠癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢 癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞腺瘤、乳腺癌、结肠癌、大肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺肿瘤、 肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、或者头或颈部的癌。
21. 权利要求1-17中任一项的抗体或抗原结合片段，其用于预防或治疗癌症。
22. -种具有SEQ ID NO:71的氨基酸序列的多肽。
23. -种编码权利要求1-17中任一项的抗体或抗体片段的多核苷酸，任选地在载体 中。
24. -种包含权利要求23的多核苷酸的细胞。
【文档编号】C07K16/28GK104334579SQ201280059986
【公开日】2015年2月4日 申请日期:2012年10月5日 优先权日:2011年10月5日
【发明者】李承炫, 金健雄, 金敬儿, 朴慧圆, 宋镐英, 吴永美, S-B.李, 李至敏, 郑光镐, 郑闰宙, 赵美英, J-H.崔, 宋允姃, 崔允雅 申请人:三星电子株式会社