一种从虎杖根中提取分离白藜芦醇的方法
【专利摘要】本发明公开了一种从虎杖根中提取分离白藜芦醇的方法。以虎杖根为原料，通过粉碎、酶解、用乙酸乙酯混合溶剂提取、浓缩、用乙醇分离粗品、氧化铝、活性炭脱色、除杂、乙醇结晶得白藜芦醇，其为含量98-99％。本工艺收率高、工艺成熟，适用于工业化生产。
【专利说明】一种从虎杖根中提取分离白藜芦醇的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及从植物中提取分离具有抗氧化生物活性物质白藜芦醇。具体涉及从中药材虎杖根中提取分离白藜芦醇。
【背景技术】
[0002]虎杖(Polygonum Cuspidatum Sied etzuce)是一味传统中药,用于治疗皮炎、脓肿等。属寥科多年生草本植物，在我国分布较广。我国华东、中南、四川、云南、贵州等地均有野生。其作为提取原料的应用前景十分广阔。
[0003]白藜芦醇(反_3、4、5三羟基二苯乙烯,resveratrol)是一种活性多酹类物质。具有显著的抗氧化、清除自由基的作用，从而能有效预防动脉硬化、防止冠心病；降低血清和肝脏的脂质、保护肝脏；对癌变过程中细胞和组织异变都有抑制作用。成为抑制和治疗组织癌变和肿瘤发生的有前途的天然药物之一。目前国内外关于白藜芦醇研究表明其在医药、食品、化妆品等领域中具有重要的应用价值。
[0004]目前从虎杖根中提取白藜芦醇的发明专利较多，经综合分析有以下不足之点:酶解时间短，酶解不彻底，影响产品收率。同时水酶解单价过高增加了产品的成本。提取溶剂选择性差，提取物含杂质较多，增加了精制成本。单独生产50%白藜芦醇含大黄素偏高。为降低产品中的大黄素，多家企业使用氯仿，从而造成产品中残留氯仿，影响了产品的使用。
[0005]本工艺生产过程中只用了酵母、阿米诺酶、乙酸乙酯、6号溶剂、乙醇和水，产品收率高，含大黄素低，生产成本低，经济效率高。
【发明内容】
[0006]本发明要解决的技术问题是:提供一种从虎杖根中提取分离白藜芦醇的方法。采用该方法提取白藜芦醇具有纯度含量高，产品收率高，生产成本低，经济效率高的优点。
[0007]为解决该技术问题:本发明采用的技术方案是:
[0008]一种从虎杖根中提取分离白藜芦醇的方法，步骤如下:
[0009](1)原料处理:将虎杖根原料去杂，粉碎成l_3mm的粗粉；
[0010](2)原料酶解:取酵母0.5-3kg，阿米诺酶0.5-3kg，加28°C _35°C的水配成1000L的酶解液，放置18-32小时备用；取粉碎好的虎杖根粗粉，加入55-60%的酶解液，充分拌匀，压堆密封，酶解15-30天备用；
[0011](3)提取浓缩:取酶解好的原料，投入多功能提取罐中，第一次加4-8倍量的混合溶剂，回流提取3小时，收集提取液；第二次加4-8倍量的混合溶剂，回流提取2小时，收集提取液；第三次加入4-8倍量的混合溶剂，提取2小时，收集提取液；剩余残渣回收混合溶剂；合并三次提取液，常压浓缩混合溶剂；视该浓缩液出现浑浊时加水适量，减压浓缩至无味，使其成水相，有沉淀析出，将PH值调为2.0~4.0，放至过滤，沉淀含白藜芦醇，离心得沉淀物，离心水相，用乙酸乙酯萃取，回收萃取物与沉淀物合并；
[0012](4)粗品分离:取沉淀物加7-9倍量的70%乙醇，加热至70°C溶解，搅拌15_40分钟,放至冷却、过滤,收集溶解液,回收乙醇成水相,将PH值调为2.0~4.0，有沉淀物析出，离心水相用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，萃取物与沉淀物合并；
[0013](5)过氧化铝柱:将沉淀物粗品加热溶于4-8倍量的70%乙醇中，放置冷却至50°C左右，用2BV/h的速度通过，收集过柱液，回收乙醇至无醇味，冷却有白藜芦醇沉淀析出；
[0014](6)脱色、结晶:将通过氧化铝获得的白藜芦醇湿品用8倍量60%乙醇加热溶解，加入粗品量的10%的活性炭，搅拌，加热至沸30分钟，然后过板框脱炭、收集脱炭醇溶液，向其中加蒸馏水至醇含量在25%左右，放置、结晶。
[0015]步骤⑵取酵母2kg，阿米诺酶2kg，加30°C的水配成1000L的酶解液，放置24小时备用；取已粉碎好的虎杖根粗粉，加入58%的酶解液，充分拌匀，压堆密封，酶解20天备用。
[0016]步骤⑶中所述的混合溶剂是乙酸乙酯和6号溶剂，其比例为乙酸乙酯:6号溶剂=85: 15。
[0017]步骤(3)中所述的混合溶剂第一次加6倍量，第二次加5倍量，第三次加5倍量。
[0018]步骤(3)中所述的PH值为3.0。步骤(4)中所述的PH值为3.0。
[0019]本发明的有益效果是:
[0020]从虎杖中提取的白藜芦醇含量高，收率高，且已用于工业化生产。
【具体实施方式】
[0021](I)原料处理:将虎杖根原料去杂，粉碎成1-3_的粗粉。加入配置好的含酵母、阿米诺酶各0.2%的酶解液，使粗粉含酶解液55%。充分拌匀，压堆密封，自然酶解15-30天备用，待酶解后产生浓厚的醇香即可；
[0022](2)提取:将相当于干粉500KG酶解好的虎杖原料，投入多功能提取罐中，第一次加6倍量的乙酸乙酯混合溶剂，回流提取3小时，收集提取液；第二次加5倍量的乙酸乙酯混合溶剂，回流提取2小时，收集提取液。第三次加入5倍量乙酸乙酯混合溶剂，提取2小时，收集提取液，合并三次提取液。
[0023](3)浓缩:将提取液置于浓缩器中常压浓缩乙酸乙酯混合溶剂，待该浓缩液出现浑浊时加水适量，减压浓缩至无味，使浓缩液成水相约250-300L，放出冷却，调节PH，有沉淀析出。收集沉淀，离心水相，用乙酸乙酯萃取，回收萃取物与沉淀物合并。此沉淀干粉为含有白藜芦醇25-30%之间的粗品；
[0024](4)粗品分离:取沉淀物(湿品)加8倍量70 %乙醇，加热至70°C溶解，搅拌30分钟，放至冷却、过滤。不溶物为大黄素等。收集溶解液，回收乙醇，减压浓缩至无醇味约100L，调PH值放置，有白藜芦醇析出。离心水相，用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，萃取物与沉淀物合并，此沉淀物含白藜芦醇58.5% (HPLC)，干燥得7.9KG ；
[0025](5)过氧化铝柱:将粗品分离后的产品加热溶于4倍量的70%乙醇中，放置冷却至50°C左右，用2BV/H的速度通过4倍量粗频率的氧化铝柱，过后用1.5倍氧化铝量的60%乙醇洗柱，收集过柱液，回收乙醇至无醇味。冷却有白藜芦醇沉淀析出，含量在80-90%之间；
[0026](6)脱色、结晶:将通过氧化铝获得的白藜芦醇湿品(粗品)用8倍量60%乙醇加热溶解，加入粗品量的10%的活性炭，搅拌，加热至沸30分钟，然后过板框脱炭、收集脱炭醇溶液，向其中加蒸馏水至醇含量在25%左右，放置、结晶。收集结晶，用40%的乙醇淋洗一次，干燥，得3.1KG产品， 其含量在99%以上(HPLC)。
【权利要求】
1.一种从虎杖根中提取分离白藜芦醇的方法，步骤如下: (1)原料处理:将虎杖根原料去杂，粉碎成l-3mm的粗粉； (2)原料酶解:取酵母0.5-3kg，阿米诺酶0.5-3kg，加28°C _35°C的水配成100L的酶解液，放置18-32小时备用；取已粉碎好的虎杖根粗粉，加入55-60%的酶解液，充分拌匀，压堆密封，酶解15-30天备用； (3)提取浓缩:取酶解好的原料，投入多功能提取罐中，第一次加4-8倍量的混合溶剂，回流提取3小时，收集提取液；第二次加4-8倍量的混合溶剂，回流提取2小时，收集提取液；第三次加入4-8倍量的混合溶剂，提取2小时，收集提取液；剩余残渣回收混合溶剂；合并三次提取液，常压浓缩混合溶剂；视该浓缩液出现浑浊时加水适量，减压浓缩至无味，使其成水相，有沉淀析出，将PH值调为2.0~4.0，放至过滤，沉淀含白藜芦醇，离心得沉淀物，离心水相，用乙酸乙酯萃取，回收萃取物与沉淀物合并； (4)粗品分离:取沉淀物加7-9倍量的70%乙醇，加热至70°C溶解，搅拌15-40分钟，放至冷却、过滤,收集溶解液,回收乙醇成水相,将PH值调为2.0~4.0，有沉淀物析出，离心水相用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，萃取物与沉淀物合并； (5)过氧化铝柱:将沉淀物粗品加热溶于4-8倍量的70%乙醇中，放置冷却至50°C左右，用2BV/h的速度通过，收集过柱液，回收乙醇至无醇味，冷却有白藜芦醇沉淀析出； (6)脱色、结晶:将通过氧化铝获得的白藜芦醇湿品用8倍量60%乙醇加热溶解，加入粗品量的10%的活性炭，搅拌，加热至沸30分钟，然后过板框脱炭、收集脱炭醇溶液，向其中加蒸馏水至醇含量在25%左右，放置、结晶。
2.根据权利要求1所述的从虎杖根中提取白藜芦醇的方法，其特征在于:步骤(2)取酵母2kg，阿米诺酶2kg，加30°C的水配成1000L的酶解液，放置24小时备用；取已粉碎好的虎杖根粗粉，加入58%的酶解液，充分拌匀，压堆密封，酶解20天备用。
3.根据权利要求1所述的从虎杖根中提取白藜芦醇的方法，其特征在于:步骤(3)中所述的混合溶剂是乙酸乙酯和6号溶剂，其比例为乙酸乙酯:6号溶剂=85: 15。
4.根据权利要求1所述的从虎杖根中提取白藜芦醇的方法，其特征在于:步骤(3)中所述的混合溶剂第一次加6倍量，第二次加5倍量，第三次加5倍量。
5.根据权利要求1所述的从虎杖根中提取白藜芦醇的方法，其特征在于:步骤(3)中所述的PH值为3.0。
6.根据权利要求1所述的从虎杖根中提取白藜芦醇的方法，其特征在于:步骤(4)中所述的PH值为3.0。
【文档编号】C07C39/21GK104045523SQ201310108226
【公开日】2014年9月17日 申请日期:2013年3月16日 优先权日:2013年3月16日
【发明者】窦家琨, 盘斌 申请人:永州一东生物技术有限责任公司