专利名称：山楂中黄酮类物质的提取纯化方法
技术领域：
本发明涉及一种提取纯化方法，具体涉及一种山楂中黄酮类物质的提取纯化方法。
背景技术：
黄酮是一类多酚化合物，广泛存在于多种植物中，具有较强的生理活性，近年来作为一种保健品而受到关注。山楂(Hawthorn)是“药食同源”植物,黄酮类物质(Flavonoids)含量较高，主要包括牡荆素、槲皮素以及金丝桃苷。从山楂中提取黄酮类化合物可以提高山楂的附加值。目前，常见的黄酮提取方法的总体缺陷为所得的总黄酮杂质多、色价低，溶剂提取法中以热水提取法最为普遍，但是其选择性差，目标产物浓度偏低。碱液提取法可以增加提取溶剂的选择性，从而提高目标产物浓度，但选择合适的提取液成为提取工艺的核心问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种有效提高提取物中黄酮浓度的山楂中黄酮类物质的提取纯化方法。本发明所采用的技术方案是:
山楂中黄酮类物质的提取纯化方法，其特征在于:
由以下步骤实现:
步骤一:提取:
(1)将干山楂粉末浸泡在稀碱溶液中，加热至70-90°C保温，使黄酮类物质充分溶解到水中，如此提取三次，前两次Ih,第三次30min,过滤后合并滤液；
(2)滤液于旋转蒸发仪中进行减压浓缩，使滤液浓度达到40%-50%，向浓缩液中加入乙醇溶液，使混合液的醇度达到70% ；
(3)将混合液在4°C温度下冷藏12h，去除沉淀；
(4)将去除沉淀的混合液置于旋转蒸发仪中减压浓缩至恒重，同时回收溶液中的乙
醇；
(5)将步骤四得到的浓缩液置于干燥箱中进行干燥，待其形成黄酮浸膏状后取出；
步骤二:纯化:
(O将黄酮浸膏溶解于乙醇溶液中，使混合液中黄酮浸膏的质量体积浓度达到IOmg/
mL ；
(2)向混合液中加入20-70mg/mL的金属盐溶液，调节pH值至出现絮状沉淀；
(3)收集沉淀，并溶于乙醇溶液中，加EDTA于60°C水浴中超声波振荡反应使其完全溶解，EDTA的添加量为步骤(1)中黄酮浸膏量的40%，置于旋转蒸发仪中进行减压浓缩，至溶液旋转蒸干，然后用甲醇溶解，过滤，将滤液再旋转蒸干，并回收甲醇。再用甲醇溶解，过滤，将滤液浓缩并干燥即得纯化后产品。
步骤一的(I)中，稀碱溶液选取质量分数为0.4%-0.6%的NaOH溶液。步骤一的(2)中，乙醇溶液的质量分数为95%。步骤二的(I)中，乙醇溶液的质量分数为60%。步骤二的(2)中，金属盐溶液选自硫酸铜溶液、硫酸锌溶液、氯化铝溶液、氯化铁溶液。步骤二的(3)中，乙醇溶液的质量分数为30%。本发明具有以下优点:
本发明采用金属离子络合法提取山楂中的黄酮类物质并进行纯化，提取物中黄酮浓度可提高9.34%，工艺简单且纯化效果显著。较之现存的纯化方法，在成本、操作及效果上都有较大改善。
具体实施例方式
下面结合具体实施方式
对本发明进行详细的说明。本发明所涉及的山楂中黄酮类物质的提取纯化方法，由以下步骤实现:
步骤一:提取:
(I)将干山楂粉末浸泡在稀碱溶液中，加热至70-90°C保温，使黄酮类物质充分溶解到水中，如此提取三次，前两次Ih,第三次30min,过滤后合并滤液；
稀碱溶液选取质量分数为0.4%-0.6%的NaOH溶液。(2)滤液于旋转蒸发仪中进行减压浓缩，使滤液浓度达到40%_50%，向浓缩液中加入乙醇溶液，使混合液的醇度达到70% ；
乙醇溶液的质量分数为95%。(3)将混合液在40C温度下冷藏12h，去除沉淀。(4)将去除沉淀的混合液置于旋转蒸发仪中减压浓缩至恒重，同时回收溶液中的乙醇。(5)将步骤四得到的浓缩液置于干燥箱中进行干燥，待其形成黄酮浸膏状后取出。步骤二:纯化:
(O将黄酮浸膏溶解于乙醇溶液中，使混合液中黄酮浸膏的质量体积浓度达到IOmg/
mL ；
乙醇溶液的质量分数为60%。(2)向混合液中加入20-70 mg/mL的金属盐溶液,调节pH值至出现絮状沉淀； 金属盐溶液选自硫酸铜溶液、硫酸锌溶液、氯化铝溶液、氯化铁溶液。(3)收集沉淀，并溶于乙醇溶液中，加EDTA于60°C水浴中超声波振荡反应使其完全溶解，EDTA的添加量为步骤(I)中黄酮浸膏量的40%，置于旋转蒸发仪中进行减压浓缩，至溶液旋转蒸干，然后用甲醇溶解，过滤，将滤液再旋转蒸干，并回收甲醇。再用甲醇溶解，过滤，将滤液浓缩并干燥即得纯化后产品。乙醇溶液的质量分数为30%。
实施例1:
步骤一:提取:
(O将干山楂粉末浸泡在稀碱溶液中，加热至70°c保温，使黄酮类物质充分溶解到水中，如此提取三次，前两次Ih,第三次30min,过滤后合并滤液；
稀碱溶液选取质量分数为0.4%的NaOH溶液。(2)滤液于旋转蒸发仪中进行减压浓缩，使滤液浓度达到40%，向浓缩液中加入乙醇溶液，使混合液的醇度达到70% ；
乙醇溶液的质量分数为95%。(3 )将混合液在40C温度下冷藏12h，去除沉淀。(4)将去除沉淀的混合液置于旋转蒸发仪中减压浓缩至恒重，同时回收溶液中的乙醇。(5)将步骤四得到的浓缩液置于干燥箱中进行干燥，待其形成黄酮浸膏状后取出。步骤二:纯化:
(O将黄酮浸膏溶解于乙醇溶液中，使混合液中黄酮浸膏的质量体积浓度达到IOmg/
mL ；
乙醇溶液的质量分数为60%。(2)向混合液中加入20mg/mL的金属盐溶液,调节pH值至出现絮状沉淀；
金属盐溶液选取硫酸铜溶液。
`
(3)收集沉淀，并溶于乙醇溶液中，加EDTA于60°C水浴中超声波振荡反应使其完全溶解，EDTA的添加量为步骤(I)中黄酮浸膏量的40%，置于旋转蒸发仪中进行减压浓缩，至溶液旋转蒸干，然后用甲醇溶解，过滤，将滤液再旋转蒸干，并回收甲醇。再用甲醇溶解，过滤，将滤液浓缩并干燥即得纯化后产品。乙醇溶液的质量分数为30%。实施例2:
步骤一:提取:
(I)将干山楂粉末浸泡在稀碱溶液中，加热至80°C保温，使黄酮类物质充分溶解到水中，如此提取三次，前两次Ih,第三次30min,过滤后合并滤液；
稀碱溶液选取质量分数为0.5%的NaOH溶液。(2)滤液于旋转蒸发仪中进行减压浓缩，使滤液浓度达到45%，向浓缩液中加入乙醇溶液，使混合液的醇度达到70% ；
乙醇溶液的质量分数为95%。(3 )将混合液在40C温度下冷藏12h，去除沉淀。(4)将去除沉淀的混合液置于旋转蒸发仪中减压浓缩至恒重，同时回收溶液中的乙醇。(5)将步骤四得到的浓缩液置于干燥箱中进行干燥，待其形成黄酮浸膏状后取出。步骤二:纯化:
(O将黄酮浸膏溶解于乙醇溶液中，使混合液中黄酮浸膏的质量体积浓度达到IOmg/
mL ；
乙醇溶液的质量分数为60%。(2)向混合液中加入45 mg/mL的金属盐溶液,调节pH值至出现絮状沉淀；
金属盐溶液选取硫酸锌溶液。(3)收集沉淀，并溶于乙醇溶液中，加EDTA于60°C水浴中超声波振荡反应使其完全溶解，EDTA的添加量为步骤(I)中黄酮浸膏量的40%，置于旋转蒸发仪中进行减压浓缩，至溶液旋转蒸干，然后用甲醇溶解，过滤，将滤液再旋转蒸干，并回收甲醇。再用甲醇溶解，过滤，将滤液浓缩并干燥即得纯化后产品。乙醇溶液的质量分数为30%。实施例3:
步骤一:提取:
(I)将干山楂粉末浸泡在稀碱溶液中，加热至90°C保温，使黄酮类物质充分溶解到水中，如此提取三次，前两次Ih,第三次30min,过滤后合并滤液；
稀碱溶液选取质量分数为0.6%的NaOH溶液。(2)滤液于旋转蒸发仪中进行减压浓缩，使滤液浓度达到50%，向浓缩液中加入乙醇溶液，使混合液的醇度达到70% ；
乙醇溶液的质量分数为95%。 (3)将混合液在40C温度下冷藏12h，去除沉淀。(4)将去除沉淀的混合液置于旋转蒸发仪中减压浓缩至恒重，同时回收溶液中的乙醇。(5)将步骤四得到的浓缩液置于干燥箱中进行干燥，待其形成黄酮浸膏状后取出。步骤二:纯化:
(O将黄酮浸膏溶解于乙醇溶液中，使混合液中黄酮浸膏的质量体积浓度达到IOmg/
mL ；
乙醇溶液的质量分数为60%。(2)向混合液中加入70 mg/mL的金属盐溶液,调节pH值至出现絮状沉淀；
金属盐溶液选取氯化铝溶液。(3)收集沉淀，并溶于乙醇溶液中，加EDTA于60°C水浴中超声波振荡反应使其完全溶解，EDTA的添加量为步骤(I)中黄酮浸膏量的40%，置于旋转蒸发仪中进行减压浓缩，至溶液旋转蒸干，然后用甲醇溶解，过滤，将滤液再旋转蒸干，并回收甲醇。再用甲醇溶解，过滤，将滤液浓缩并干燥即得纯化后产品。乙醇溶液的质量分数为30%。实施例4:
步骤一:提取:
(I)将干山楂粉末浸泡在稀碱溶液中，加热至90°C保温，使黄酮类物质充分溶解到水中，如此提取三次，前两次Ih,第三次30min,过滤后合并滤液；
稀碱溶液选取质量分数为0.6%的NaOH溶液。(2)滤液于旋转蒸发仪中进行减压浓缩，使滤液浓度达到50%，向浓缩液中加入乙醇溶液，使混合液的醇度达到70% ；
乙醇溶液的质量分数为95%。(3 )将混合液在40C温度下冷藏12h，去除沉淀。(4)将去除沉淀的混合液置于旋转蒸发仪中减压浓缩至恒重，同时回收溶液中的乙醇。(5)将步骤四得到的浓缩液置于干燥箱中进行干燥，待其形成黄酮浸膏状后取出。
步骤二:纯化:
(O将黄酮浸膏溶解于乙醇溶液中，使混合液中黄酮浸膏的质量体积浓度达到IOmg/
mL ；
乙醇溶液的质量分数为60%。(2)向混合液中加入70 mg/mL的金属盐溶液,调节pH值至出现絮状沉淀；
金属盐溶液选取氯化铁溶液。(3)收集沉淀，并溶于乙醇溶液中，加EDTA于60°C水浴中超声波振荡反应使其完全溶解，EDTA的添加量为步骤(I)中黄酮浸膏量的40%，置于旋转蒸发仪中进行减压浓缩，至溶液旋转蒸干，然后用甲醇溶解，过滤，将滤液再旋转蒸干，并回收甲醇。再用甲醇溶解，过滤，将滤液浓缩并干燥即得纯化后产品。乙醇溶液的质量分数为30%。本发明的内容不限于实施例所列举，本领域普通技术人员通过阅读本发明说明书而对本发明技术方案采取的任 何等效的变换，均为本发明的权利要求所涵盖。
权利要求
1.山楂中黄酮类物质的提取纯化方法，其特征在于: 由以下步骤实现: 步骤一:提取: (1)将干山楂粉末浸泡在稀碱溶液中，加热至70-90°C保温，使黄酮类物质充分溶解到水中，如此提取三次，前两次1h,第三次30min,过滤后合并滤液； (2)滤液于旋转蒸发仪中进行减压浓缩，使滤液浓度达到40%-50%，向浓缩液中加入乙醇溶液，使混合液的醇度达到70% ； (3)将混合液在4°C温度下冷藏12h，去除沉淀； (4)将去除沉淀的混合液置于旋转蒸发仪中减压浓缩至恒重，同时回收溶液中的乙醇； (5)将步骤四得到的浓缩液置于干燥箱中进行干燥，待其形成黄酮浸膏状后取出； 步骤二:纯化: (O将黄酮浸膏溶解于乙醇溶液中，使混合液中黄酮浸膏的质量体积浓度达到IOmg/mL ； (2)向混合液中加入20-70mg/mL的金属盐溶液，调节pH值至出现絮状沉淀； (3)收集沉淀，并溶于乙醇溶液中，加EDTA于60°C水浴中超声波振荡反应使其完全溶解，EDTA的添加量为步骤(1)中黄酮浸膏量的40%，置于旋转蒸发仪中进行减压浓缩，至溶液旋转蒸干，然后用甲醇溶解，过滤，将滤液再旋转蒸干，并回收甲醇； 再用甲醇溶解，过滤，将滤液浓缩并干燥即得纯化后产品。
2.根据权利要求1中所述的山楂中黄酮类物质的提取纯化方法，其特征在于: 步骤一的(1)中，稀碱溶液选取质量分数为0.4%-0.6%的NaOH溶液。
3.根据权利要求1或2中所述的山楂中黄酮类物质的提取纯化方法，其特征在于: 步骤一的(2)中，乙醇溶液的质量分数为95%。
4.根据权利要求3中所述的山楂中黄酮类物质的提取纯化方法，其特征在于: 步骤二的(1)中，乙醇溶液的质量分数为60%。
5.根据权利要求4中所述的山楂中黄酮类物质的提取纯化方法，其特征在于: 步骤二的(2)中，金属盐溶液选自硫酸铜溶液、硫酸锌溶液、氯化铝溶液、氯化铁溶液。
6.根据权利要求5中所述的山楂中黄酮类物质的提取纯化方法，其特征在于: 步骤二的(3)中，乙醇溶液的质量分数为30%。
全文摘要
本发明涉及一种山楂中黄酮类物质的提取纯化方法。常见黄酮提取方法的总体缺陷为所得的总黄酮杂质多、色价低、选择性差、目标产物浓度偏低。本发明将干山楂粉末浸泡在过量的稀碱溶液中，加热保温，提取过滤；滤液减压浓缩，加入乙醇；4℃温度下冷藏，去除沉淀；减压浓缩至恒重后干燥，形成黄酮浸膏；将浸膏溶乙醇中，加入金属盐溶液，调节pH值至出现絮状沉淀；沉淀溶于乙醇中加EDTA使金属离子解络合，再将溶液旋转蒸干，然后用甲醇溶解，过滤，将其减压浓缩至恒重并干燥，完成提纯。本发明采用金属离子络合法提取山楂中的黄酮类物质并进行纯化，提取物中黄酮浓度可提高9.34%，工艺简单且纯化效果显著。较之现存的纯化方法，在成本、操作及效果上都有较大改善。
文档编号C07D311/30GK103242279SQ201310181448
公开日2013年8月14日 申请日期2013年5月16日 优先权日2013年5月16日
发明者常大伟 申请人:陕西科技大学