高纯度高抗氧化活性黑果腺肋花楸原花青素的提取方法
【专利摘要】高纯度高抗氧化活性黑果腺肋花楸原花青素的提取方法属于原花青素的提取与纯化【技术领域】，该方法以黑果腺肋花楸为原料，首先采用冷冻干燥技术得到黑果腺肋花楸冻干粉，然后采用超临界CO2萃取技术对黑果腺肋花楸冻干粉进行萃取，最后采用AB-8型大孔吸附树脂纯化技术提纯黑果腺肋花楸原花青素。本发明由于采用了冷冻干燥技术和超临界CO2萃取技术，提高了提取效率并保持了生物活性，采用大孔树脂纯化技术提高了黑果腺肋花楸原花青素的提取纯度，其纯度达到90.1-98.6%，黑果腺肋花楸原花青素对DPPH·的清除能力的IC50为11.2-15.6μg/mL，所得原花青素因其纯度高、活性好，可直接应用于药品、保健食品中。
【专利说明】高纯度高抗氧化活性黑果腺肋花楸原花青素的提取方法
【技术领域】
[0001]本发明属于原花青素的提取与纯化【技术领域】，具体涉及一种以黑果腺肋花楸为原料提取并纯化原花青素的方法。
【背景技术】
[0002]目前，原花青素(简称0PC)的提取方法主要有以下几种:
[0003]1、溶剂法:该方法是原花青素提取中最常见的方法之一，也是应用最早、最为广泛的方法之一，溶剂常用水、甲醇、乙醇、丙酮、石油醚，其工艺虽简单，但极性有毒溶剂的大量使用，极易产生环境污染、生产安全和产品安全等方面的问题，同时高能耗一直是该方法应用中突出问题之一。陈健等人采用甲醇提取蓝莓花青素，甲醇浓度80%，得率4.29% (见陈健，孙爱东，高雪娟，陶晓赞，王姗姗.蓝莓花青素的提取及抗氧化性的研究[J].北京林业大学学报，2011，33 (2):126-129)，其溶剂浓度太高，安全性差，得率低。
[0004]2、辅助提取法或综合提取法:该方法通常在溶剂法的基础上，加入辅助物理、化学生物方法，促进原花青素的溶出，从而达到提高提取率的目的，常常采用超声波、超高压、高压脉冲电场、微波、纤维素酶解等方法，由于产业化设备昂贵、配套应用成本高，同时其物理原理容易造成原花青素改性，降低抗氧化能力，制约着辅助方法的产业化应用。肖丽霞等人在乙醇提取的基础上，分别采用微波、纤维素酶和超声波辅助提取葡萄籽中原花青素，结果表明最佳方法为微波辅助提取，其最佳工艺条件:料液比l:25(g/mL)、乙醇体积分数80%、微波时间40s、微波功率115W，原花青素的提取率为10.70% (见肖丽霞，何志贵，朱勇，曾庆文，胡博然.葡萄籽中原花青素提取工艺[J].食品科学，2011，32 (20):89-94)。微波作为一种电波，其电场也有尖角集中性，即棱角效应，这种效应使物料的边角升温较快，甚至能将这些部分烤焦。原花青素作为一种活性物质，在微波条件容易失去活性，降低抗氧化能力。
[0005]3、超临界法:该方法是利用超临界流体的溶解能力与其密度的关系，即利用压力和温度对超临界流体溶解能力的影响而进行的。在超临界状态下，将超临界流体与待分离的物质接触，使其有选择性地把极性大小、沸点高低和分子量大小的成分依次萃取出来。叶春皓等人将超临界流体萃取技术与大孔树脂吸附技术优化结合，从葡萄籽中提取葡萄籽油和原花青素，形成高效提取、纯化原花青素的集成一体化工艺。通过此方法分离得到的原花青素经UV法分析原花青素含量97.82%，总提取率为4.88%。(见叶春皓，李淑芬，唐韶坤.超临界C02-大孔树脂分离纯化葡萄籽中原花青素[J].化学工业与工程，2006，23
(3):220-223)。吴朝霞等人采用超临界CO2萃取技术提取葡萄籽中低聚原花青素(OPC’s)，并初步分析了产物的构成。结果表明:不使用夹带剂时，不能萃取出OPC’s ;甲醇或乙醇作为夹带剂时可以增加OPC’s的提取率，且甲醇效果更好，但总体提取率仍较低。进一步的色谱分析表明，产物中含有儿茶素、表儿茶素及两种二聚体(见吴朝霞，孟宪军，张红，吴朝晖.超临界C02萃取葡萄籽中低聚原花青素的初探[J].沈阳农业大学学报，2007，38 (2):241-243)。该方法应用刚刚起步，并且由于原料的差异，其制备工艺还有较大的差异性，必须进行针对性的应用研究。
[0006]综合以上摘要，并通过文献和专利检索发现，原花青素的提取已经有了相当的历史，但其工艺主要集中在溶剂法，溶剂多采用成本最低的甲醇和丙酮，其溶剂具有毒性、残留性，不仅严重制约着原花青素的产业发展，更为环境带来了极大污染，与今天提倡绿色环境友好产业相违背，故在工艺上必须改进。
[0007]根据美国塔夫茨(Tufts)大学的分析，在40种具有抗氧化效力的蔬菜和水果中，蓝莓的原花青素含量排名第一，栽培蓝莓原花青素其含量在0.07-0.15g/100g鲜重，而黑果腺肋花楸原花青素含量经检测为1.3-2g/100g鲜重，是蓝莓原花青素含量的9-29倍。目前，俄罗斯和波兰是黑果腺肋花楸的主要栽培国，朝鲜和我国是亚洲主要栽培国，经过十几年的发展，我国的栽培面积已达到1000公顷以上。而在应用研究领域，仅仅只有I篇黑果腺肋花楸果酒的研究报道，其特征原花青素的研究和应用并未见有报道出现；并且，采用黑果腺肋花楸为原料提取高纯度高抗氧化活性的原花青素的工艺也未见报道。
【发明内容】
[0008]本发明的目的是提供一种能够产业化提取高纯度高抗氧化活性黑果腺肋花楸原花青素的工艺，同时提供适合黑果腺肋花楸原花青素提取的最佳冷冻干燥工艺、超临界CO2萃取工艺、大孔树脂纯化工艺，解决现有技术存在的原花青素提取率不高、失活、纯度低等技术问题。
[0009]本发明高纯度高抗氧化活性黑果腺肋花楸原花青素的提取方法的研发思路是:首先以制备营养价值高、原花青素保存率好、外观干燥细腻的高品质黑果腺肋花楸干粉为目标，以原花青素含量为指标研究了不同干燥载体、不同干燥方法、具体干燥工艺等技术指标，最终得到了冷冻干燥工艺的具体参数；其次，研究了超临界CO2萃取黑果腺肋花楸干粉的工艺参数，将萃取的压力、萃取温度、料液比、夹带剂的用量做为研究对象，采用单因素实验、正交试验优化参数，最终得到了超临界CO2萃取黑果腺肋花楸干粉的工艺参；最后，研究了大孔树脂的纯化吸附工艺，研究了不同大孔树脂对原花青素的纯化效果，最后选取AB-8型大孔吸附树脂，最终得到了 AB-8型树脂对黑果腺肋花楸原花青素的适宜吸附条件。
[0010]本发明解决技术问题所采取的技术方案如下:
[0011]高纯度高抗氧化活性黑果腺肋花楸原花青素的提取方法，包括如下步骤:
[0012]第一步、用组织捣碎机将黑果腺肋花楸研磨成质地均匀细密的果泥备用；
[0013]第二步、将第一步研磨得到的果泥均匀平铺至冷冻盘中，果泥的厚度为3_4mm，在-40°C下速冻4小时，冷阱温度为-50°C，然后在冷冻干燥机上干燥18h，干燥后打碎过100目筛，得到黑果腺肋花楸冻干粉；
[0014]第三步、对第二步得到的黑果腺肋花楸冻干粉进行超临界CO2萃取，称取定量的黑果腺肋花楸冻干粉放入萃取罐中，并向罐中通入CO2，通过控制面板设定萃取压力为30-40MPa、萃取温度为40_50°C、萃取时间90min、料液比1: 1.08，用夹带剂泵加入浓度40-70%乙醇做为夹带剂，接收分离釜中得到的萃取物；
[0015]第四步、将第三步得到的萃取物用AB-8型大孔吸附树脂纯化，吸附柱直径为24mm,吸附柱高径比值为10，上样流速为200-240BV.h'上样量为树脂体积的4倍，pH值为3，吸附温度为25°C，脱附液为浓度为40-60%的乙醇，吸脱液流速110-130BV.h—1，脱附温度为50°C，得到高纯度高抗氧化活性的黑果腺肋花楸原花青素。
[0016]本发明的有益效果是:本发明采用冷冻干燥技术和超临界CO2萃取技术相结合的提取工艺，规避了有机溶剂环境问题和安全问题，极大的降低了提取过程中的抗氧化能力损失；其次，采用大孔树脂纯化技术，保证了原花青素的最大提取率和纯度，工艺技术适合于现代工业生产高纯度黑果腺肋花楸原花青素。由于采用了冷冻干燥技术和超临界CO2萃取技术，提高了提取效率并保持了生物活性，采用大孔树脂纯化技术提高了黑果腺肋花楸原花青素的提取纯度，其纯度达到90.1-98.6%，黑果腺肋花楸原花青素对DPPH.的清除能力的IC50为11.2-15.6 μ g/mL，所得原花青素因其纯度高、活性好，可直接应用于药品、保健食品中。
【具体实施方式】
[0017]下面结合实施例对本发明做进一步详细说明。
[0018]实施例一
[0019]挑选成熟无病虫害的黑果腺肋花楸原材料，用组织捣碎机打浆，打完浆置于_40°C速冻4个小时，上冻干盘，物料厚度3-4mm，冷阱温度_50°C，然后置于冷冻干燥机上冷冻干燥18h。干燥完之后，冻干粉用粉碎机粉碎，然后过100目筛子，获得黑果腺肋花楸冻干粉。
[0020]取冻干粉500g，进行超临界CO2萃取、萃取的压力35MPa、萃取时间90min，萃取温度45°C、料液比1:1.08,60 %乙醇做为夹带剂，在此条件下萃取原花青素。
[0021]将超临界CO2萃取物用AB-8型大孔吸附树脂纯化，吸附柱直径24mm，吸附柱高径比值为10，原液浓度0.285mg/ml，上样流速为220BV.h—1，pH值3，上样量为树脂体积的4倍，吸附温度为25°C，洗脱剂用50%乙醇-水溶液脱附，洗脱液流速120BV.h—1，脱附温度50°C，解吸后洗脱率96.37%，原花青素含量达到98.6%，萃取工艺提取率89%。对比检测显示，蓝莓原花青素对DPPH.的清除能力的IC50约为17.5 μ g/ml，而黑果腺肋花楸原花青素对DPPH.的清除能力的IC50约为11.2 μ g/mL。
[0022]实施例二
[0023]挑选成熟无病虫害的黑果腺肋花楸原材料，用组织捣碎机打浆，打完浆置于_40°C速冻4个小时，上冻干盘，物料厚度3-4mm，冷阱温度_50°C，然后置于冷冻干燥机上冷冻干燥18h。干燥完之后，冻干粉用粉碎机粉碎，然后过100目筛子，获得黑果腺肋花楸冻干粉。
[0024]取冻干粉500g，进行超临界CO2萃取、萃取的压力30MPa、萃取温度45°C、萃取时间90min，料液比1:1.08,60%乙醇做为夹带剂，在此条件下萃取原花青素。
[0025]将超临界CO2萃取物用AB-8型大孔吸附树脂纯化，吸附柱直径24mm，吸附柱高径比值为10，原液浓度0.285mg/ml，上样流速为220BV.h—1，pH值3，上样量为树脂体积的4倍，吸附温度为25°C，洗脱剂用50%乙醇-水溶液脱附，洗脱液流速120BV.h—1，脱附温度500C，解吸后洗脱率96.11%，原花青素含量达到95.8%，萃取工艺提取率81%，该黑果腺肋花楸原花青素对DPPH.的清除能力的IC50约为12.2 μ g/mL。
[0026]实施例三
[0027]挑选成熟无病虫害的黑果腺肋花楸原材料，用组织捣碎机打浆，打完浆置于_40°C速冻4个小时，上冻干盘，物料厚度3-4mm，冷阱温度_50°C，然后置于冷冻干燥机上冷冻干燥18h。干燥完之后，冻干粉用粉碎机粉碎，然后过100目筛子，获得黑果腺肋花楸冻干粉。[0028]取冻干粉500g，进行超临界CO2萃取、萃取的压カ40MPa、萃取时间90min，萃取温度45°C、料液比1:1.08,60%こ醇做为夹带剂，在此条件下萃取原花青素。
[0029]将超临界CO2萃取物用AB-8型大孔吸附树脂纯化，吸附柱直径24mm，吸附柱高径比值为10，原液浓度0.285mg/ml，上样流速为220BV ? h' pH值3，上样量为树脂体积的4倍，吸附温度为25°C，洗脱剂用50%こ醇-水溶液脱附，洗脱液流速120BV ? h'脱附温度500C，解吸后洗脱率96.20%,原花青素含量达到94.1%，萃取エ艺提取率78%，该黑果腺肋花楸原花青素对DPPH ?的清除能力的IC50约为12.3 u g/mL。
[0030]实施例四
[0031]挑选成熟无病虫害的黑果腺肋花楸原材料，用组织捣碎机打浆，打完浆置于_40°C速冻4个小吋，上冻干盘，物料厚度3-4mm，冷阱温度_50°C，然后置于冷冻干燥机上冷冻干燥18h。干燥完之后，冻干粉用粉碎机粉碎，然后过100目筛子，获得黑果腺肋花楸冻干粉。
[0032]取冻干粉500g，进行超临界CO2萃取、萃取的压カ35MPa、萃取温度40°C、萃取时间90min，料液比1:1.08,60%こ醇做为夹带剂，在此条件下萃取原花青素。
[0033]将超临界CO2萃取物用AB-8型大孔吸附树脂纯化，吸附柱直径24mm，吸附柱高径比值为10，原液浓度0.285mg/ml，上样流速为220BV ? h' pH值3，上样量为树脂体积的4倍，吸附温度为25°C，洗脱剂用50%こ醇-水溶液脱附，洗脱液流速120BV ? h'脱附温度500C，解吸后洗脱率95，89%，原花青素含量达到95.6%，萃取エ艺提取率79%，该黑果腺肋花楸原花青素对DPPH ?的清除能力的IC50约为12.8 u g/mL。
[0034]实施例五
[0035]挑选成熟无病虫害的黑果腺肋花楸原材料，用组织捣碎机打浆，打完浆置于_40°C速冻4个小吋，上冻干盘，物料厚度3-4mm，冷阱温度_50°C，然后置于冷冻干燥机上冷冻干燥18h。干燥完之后，冻干粉用粉碎机粉碎，然后过100目筛子，获得黑果腺肋花楸冻干粉。
[0036]取冻干粉500g，进行超临界CO2萃取、萃取的压カ35MPa、萃取温度50°C、萃取时间90min，料液比1:1.08,60%こ醇做为夹带剂，在此条件下萃取原花青素。
[0037]将超临界CO2萃取物用AB-8型大孔吸附树脂纯化，吸附柱直径24mm，吸附柱高径比值为10，原液浓度0.285mg/ml，上样流速为220BV ? h' pH值3，上样量为树脂体积的4倍，吸附温度为25°C，洗脱剂用50%こ醇-水溶液脱附，洗脱液流速120BV ? h'脱附温度500C，解吸后洗脱率95，66%，原花青素含量达到96.1%，萃取エ艺提取率83%，该黑果腺肋花楸原花青素对DPPH ?的清除能力的IC50约为13.7 u g/mL。
[0038]实施例六
[0039]挑选成熟无病虫害的黑果腺肋花楸原材料，用组织捣碎机打浆，打完浆置于_40°C速冻4个小吋，上冻干盘，物料厚度3-4mm，冷阱温度_50°C，然后置于冷冻干燥机上冷冻干燥18h。干燥完之后，冻干粉用粉碎机粉碎，然后过100目筛子，获得黑果腺肋花楸冻干粉。
[0040]取冻干粉500g，进行超临界CO2萃取、萃取的压カ35MPa、萃取温度45°C、萃取时间90min，料液比1:1.08,50%こ醇做为夹带剂，在此条件下萃取原花青素。
[0041]将超临界CO2萃取物用AB-8型大孔吸附树脂纯化，吸附柱直径24mm，吸附柱高径比值为10，原液浓度0.285mg/ml，上样流速为220BV ? h' pH值3，上样量为树脂体积的4倍，吸附温度为25°C，洗脱剂用50%こ醇-水溶液脱附，洗脱液流速120BV ? h'脱附温度500C，解吸后洗脱率95，78%，原花青素含量达到96.4%，萃取エ艺提取率76%，该黑果腺肋花楸原花青素对DPPH ?的清除能力的IC50约为15.2 u g/mL。
[0042]实施例七
[0043]挑选成熟无病虫害的黑果腺肋花楸原材料，用组织捣碎机打浆，打完浆置于_40°C速冻4个小吋，上冻干盘，物料厚度3-4mm，冷阱温度_50°C，然后置于冷冻干燥机上冷冻干燥18h。干燥完之后，冻干粉用粉碎机粉碎，然后过100目筛子，获得黑果腺肋花楸冻干粉。
[0044]取冻干粉500g，进行超临界CO2萃取、萃取的压カ35MPa、萃取温度45°C、萃取时间90min，料液比1:1.08,70%こ醇做为夹带剂，在此条件下萃取原花青素。
[0045]将超临界CO2萃取物用AB-8型大孔吸附树脂纯化，吸附柱直径24mm，吸附柱高径比值为10，原液浓度0.285mg/ml，上样流速为220BV ? h' pH值3，上样量为树脂体积的4倍，吸附温度为25°C，洗脱剂用50%こ醇-水溶液脱附，洗脱液流速120BV ? h'脱附温度500C，解吸后洗脱率95，63%，原花青素含量达到95.3%，萃取エ艺提取率79%，该黑果腺肋花楸原花青素对DPPH ?的清除能力的IC50约为14.2 u g/mL。
[0046]实施例八
[0047]挑选成熟无病虫害的黑果腺肋花楸原材料，用组织捣碎机打浆，打完浆置于_40°C速冻4个小吋，上冻干盘，物料厚度3-4mm，冷阱温度_50°C，然后置于冷冻干燥机上冷冻干燥18h。干燥完之后，冻干粉用粉碎机粉碎，然后过100目筛子，获得黑果腺肋花楸冻干粉。
[0048]取冻干粉500g，进行超临界CO2萃取、萃取的压カ35MPa、萃取温度45°C、萃取时间90min，料液比1:1.08,60%こ醇做为夹带剂，在此条件下萃取原花青素。
[0049]将超临界CO2萃取物用AB-8型大孔吸附树脂纯化，吸附柱直径24mm，吸附柱高径比值为10，原液浓度0.285mg/ml，上样流速为220BV ? h' pH值3，上样量为树脂体积的4倍，吸附温度为25°C，洗脱剂用40%こ醇-水溶液脱附，洗脱液流速120BV ? h—1，脱附温度500C，解吸后洗脱率96.13% ，原花青素含量达到94.9%，萃取エ艺提取率88%，该黑果腺肋花楸原花青素对DPPH ?的清除能力的IC50约为14.4 u g/mL。
[0050]实施例九
[0051]挑选成熟无病虫害的黑果腺肋花楸原材料，用组织捣碎机打浆，打完浆置于_40°C速冻4个小吋，上冻干盘，物料厚度3-4mm，冷阱温度_50°C，然后置于冷冻干燥机上冷冻干燥18h。干燥完之后，冻干粉用粉碎机粉碎，然后过100目筛子，获得黑果腺肋花楸冻干粉。
[0052]取冻干粉500g，进行超临界CO2萃取、萃取的压カ35MPa、萃取温度50°C、萃取时间90min，料液比1:1.08,60%こ醇做为夹带剂，在此条件下萃取原花青素。
[0053]将超临界CO2萃取物用AB-8型大孔吸附树脂纯化，吸附柱直径24mm，吸附柱高径比值为10，原液浓度0.285mg/ml，上样流速为220BV ? h' pH值3，上样量为树脂体积的4倍，吸附温度为25°C，洗脱剂用60%こ醇-水溶液脱附，洗脱液流速120BV ? h'脱附温度500C，解吸后洗脱率95.81%，原花青素含量达到93.1%，萃取エ艺提取率89%，该黑果腺肋花楸原花青素对DPPH ?的清除能力的IC50约为13.9 u g/mL。
[0054]实施例十
[0055]挑选成熟无病虫害的黑果腺肋花楸原材料，用组织捣碎机打浆，打完浆置于_40°C速冻4个小吋，上冻干盘，物料厚度3-4mm，冷阱温度_50°C，然后置于冷冻干燥机上冷冻干燥18h。干燥完之后，冻干粉用粉碎机粉碎，然后过100目筛子，获得黑果腺肋花楸冻干粉。
[0056]取冻干粉500g，进行超临界CO2萃取、萃取的压カ35MPa、萃取温度45°C、萃取时间90min，料液比1:1.08,60%乙醇做为夹带剂，在此条件下萃取原花青素。
[0057]将超临界CO2萃取物用AB-8型大孔吸附树脂纯化，吸附柱直径24mm，吸附柱高径比值为10，原液浓度0.285mg/ml，上样流速为200BV ? h—1-，pH值3，上样量为树脂体积的4倍，吸附温度为25 V，洗脱剂用60%乙醇-水溶液脱附，洗脱液流速120BV ? h'脱附温度500C，解吸后洗脱率95.47%，原花青素含量达到92.1%，萃取エ艺提取率87%，该黑果腺肋花楸原花青素对DPPH ?的清除能力的IC50约为14.5 u g/mL。
[0058]实施例^^ 一
[0059]挑选成熟无病虫害的黑果腺肋花楸原材料，用组织捣碎机打浆，打完浆置于_40°C速冻4个小吋，上冻干盘，物料厚度3-4mm，冷阱温度_50°C，然后置于冷冻干燥机上冷冻干燥18h。干燥完之后，冻干粉用粉碎机粉碎，然后过100目筛子，获得黑果腺肋花楸冻干粉。
[0060]取冻干粉500g，进行超临界CO2萃取、萃取的压カ35MPa、萃取温度45°C、萃取时间90min，料液比1:1.08,60%乙醇做为夹带剂，在此条件下萃取原花青素。
[0061]将超临界CO2萃取物用AB-8型大孔吸附树脂纯化，吸附柱直径24mm，吸附柱高径比值为10，原液浓度0.285mg/ml，上样流速为240BV ? h—1-，pH值3，上样量为树脂体积的4倍，吸附温度为25 V，洗脱剂用60%乙醇-水溶液脱附，洗脱液流速120BV ? h'脱附温度500C，解吸后洗脱率95.55%，原花青素含量达到91.1%，萃取エ艺提取率88%，该黑果腺肋花楸原花青素对DPPH ?的清除能力的IC50约为15.6 u g/mL。
[0062]实施例十二
[0063]挑选成熟无病虫害的黑果腺肋花楸原材料，用组织捣碎机打浆，打完浆置于_40°C速冻4个小吋，上冻干盘，物料厚度3-4mm，冷阱温度_50°C，然后置于冷冻干燥机上冷冻干燥18h。干燥完之后，冻干粉用粉碎机粉碎，然后过100目筛子，获得黑果腺肋花楸冻干粉。
[0064]取冻干粉500g，进行超临界CO2萃取、萃取的压カ35MPa、萃取温度50°C、萃取时间90min，料液比1:1.08,60%乙醇做为夹带剂，在此条件下萃取原花青素。
[0065]将超临界CO2萃取物用AB-8型大孔吸附树脂纯化，吸附柱直径24mm，吸附柱高径比值为10，原液浓度0.285mg/ml，上样流速为220BV ? h' pH值3，上样量为树脂体积的4倍，吸附温度为25°C，洗脱剂用60%乙醇-水溶液脱附，洗脱液流速110BV ? h'脱附温度500C，解吸后洗脱率93.15%，原花青素含量达到94.1%，萃取エ艺提取率89%，该黑果腺肋花楸原花青素对DPPH ?的清除能力的IC50约为13.2 u g/mL。
[0066]实施例十三
[0067]挑选成熟无病虫害的黑果腺肋花楸原材料，用组织捣碎机打浆，打完浆置于_40°C速冻4个小吋，上冻干盘，物料厚度3-4mm，冷阱温度_50°C，然后置于冷冻干燥机上冷冻干燥18h。干燥完之后，冻干粉用粉碎机粉碎，然后过100目筛子，获得黑果腺肋花楸冻干粉。
[0068]取冻干粉500g，进行超临界CO2萃取、萃取的压カ35MPa、萃取温度40°C、萃取时间90min，料液比1:1.08,50%乙醇做为夹带剂，在此条件下萃取原花青素。
[0069]将超临界CO2萃取物用AB-8型大孔吸附树脂纯化，吸附柱直径24mm，吸附柱高径比值为10，原液浓度0.285mg/ml，上样流速为220BV ? h' pH值3，上样量为树脂体积的4倍，吸附温度为25°C，洗脱剂用60%乙醇-水溶液脱附，洗脱液流速130BV ? h'脱附温度500C，解吸后洗脱率96.15%，原花青素含量达到90.1%，萃取エ艺提取率89%，该黑果腺肋花楸原花青素对DPPH ?的清除能力的IC50约为11.9 ii g/mL。
【权利要求】
1.高纯度高抗氧化活性黑果腺肋花楸原花青素的提取方法，其特征在于，该方法包括如下步骤: 第一步、用组织捣碎机将黑果腺肋花楸研磨成质地均匀细密的果泥备用； 第二步、将第一步研磨得到的果泥均匀平铺至冷冻盘中，果泥的厚度为3-4mm，在-40°C下速冻4小时，冷阱温度为-50°C，然后在冷冻干燥机上干燥18h，干燥后打碎过100目筛，得到黑果腺肋花楸冻干粉； 第三步、对第二步得到的黑果腺肋花楸冻干粉进行超临界CO2萃取，称取定量的黑果腺肋花楸冻干粉放入萃取罐中，并向罐中通入CO2，通过控制面板设定萃取压力为30-40MPa、萃取温度为40-50°C、萃取时间90min、料液比1:1.08，用夹带剂泵加入40-70%乙醇做为夹带剂，接收分离釜中得到的萃取物； 第四步、将第三步得到的萃取物用AB-8型大孔吸附树脂纯化，吸附柱直径为24mm，吸附柱高径比值为10，上样流速为200-240BV.h'上样量为树脂体积的4倍，pH值为3，吸附温度为25°C，脱附液为浓度为40-60%的乙醇，吸脱液流速110-130BV.h—1，脱附温度为50°C，得到高纯度高抗氧化活性的黑果腺肋花楸原花青素。
2.如权利要求1所述的高纯度高抗氧化活性黑果腺肋花楸原花青素的提取方法，其特征在于，第三步所述的萃取压力为35MPa，萃取温度为45°C，夹带剂为浓度60%的乙醇。
3.如权利要求1所述的高纯度高抗氧化活性黑果腺肋花楸原花青素的提取方法，其特征在于，第四步所述的上样流速为220BV.h-1，脱附液为浓度为50%乙醇，吸脱液流速为120BV.h'
【文档编号】C07D311/62GK103450139SQ201310375421
【公开日】2013年12月18日 申请日期:2013年8月26日 优先权日:2013年8月26日
【发明者】张佳霖, 汪长钢, 孙智谋, 周旭, 戚译天 申请人:吉林省工致科技开发有限公司