一种从枣皮中高效提取cAMP的方法
【专利摘要】本发明一种从枣皮中高效提取cAMP的方法属于农产品深加工【技术领域】；本发明所要解决的技术问题为提供一种有效利用枣皮中cAMP，工艺简单成本低廉的高效提取cAMP的方法；所采用的技术方案为：将从枣果制汁分离出来的皮渣依次进行烘干、风选、破碎、复水、复合酶酶解、超声波助提、过滤和离心，得到的上清液即为枣皮cAMP提取液；本发明广泛应用于枣品加工【技术领域】。
【专利说明】—种从枣皮中高效提取cAMP的方法【技术领域】
[0001]本发明一种从枣皮中高效提取cAMP的方法属于农产品深加工【技术领域】。
【背景技术】
[0002]红枣是中国人民的传统果品，是我国特有的果品资源。我国拥有世界98%以上的红枣种植面积和产量，以及100%的枣产品国际贸易。我国红枣品种丰富，有700余个品种，其中在全国各地形成百万亩以上种植面积的主栽品种有10余个，如金丝小枣、吕梁木枣、赞皇大枣、交城骏枣、太谷壶瓶枣、河南灰枣等。目前全国红枣种植面积2000余万亩，产量430余万吨，是我国第一大干果和第七大果品，极具产业化开发价值。
[0003]红枣皮薄肉厚，香甜脆郁、营养丰富，素有“木本粮食、滋补佳品”之称；红枣富含多糖、维生素、矿物质、皂苷、生物碱和黄酮类物质等，具有极高的营养价值、药用价值及多种保健功效，是集药、食、补3大功能为一体的优质滋补保健果品。鲜枣中含维生素38(T600mg/100g，比苹果、桃高80~90倍，比柑桔高7~10倍，甚至比以维生素C含量高而著称的猕猴桃还高，为目前栽培果实维生素C含量之冠。红枣中还含有丰富的芦丁，能够降低毛细管脆性，降低血管胆固醇、血脂、血糖含量，防止心脑血管疾病，可以治疗高血压和动脉硬化等疾病。红枣所含的环磷酸腺苷(cAMP)，具有抗过敏作用和抑制癌症细胞生长并促进癌细胞转化成正常细胞的功能，同时对防治冠心病也有一定的疗效。红枣多糖具有清除自由基、抗肿瘤、抗衰老、提高机体特异及非特异性免疫功能的作用。药理研究亦表明，红枣有降低血清中的胆固醇，增加血清总蛋白质及白蛋白，保护肝脏，抗变态反应，增强肌力，抑制癌细胞增殖等作用。
[0004]随着人们保健意识的增强，工业化生产保健食品大势所趋，是人们对保健食品所具有的特殊疗效迫切需求的必然结果。因此，随着人们对红枣营养价值认识的不断加深，大力开发研究红枣保健食品有着广阔的市场前景和较高的经济效益及社会效益。虽然，除传统的免洗干枣、蜜枣、熏枣、酒枣外，红枣的各种固体饮料、液体饮料、红枣浓浆以及红枣保健食品等新产品也不断涌现。但总体而言:红枣加工业技术含量较低，产品档次不高，技术设备落后，加工的精度、深度不够，而且随着红枣产业不断扩大、加工研发不断深入，由此而产生的副产物(枣渣、枣皮、枣核等)也逐渐增多，所以红枣资源的综合利用程度下降，并且未能形成规模化生产。现在，市场红枣产品较为单一，缺乏突出枣果营养和独特食疗价值的高附加值产品，所以很难满足广大消费者的需求。这就大大影响了红枣资源优势向商品优势的转化和枣区经济的发展，以及产业结构的调整。
[0005]现对红枣副产物的研究报道中大都是关于工业生产中分离出的枣渣，而对专门针对枣皮的研究鲜有报道，有研究表明，不同品种的枣果内cAMP含量差别很大，相同品种的枣果其不同的组织部位cAMP含量也存在较大差异，其中以枣皮中cAMP的含量为最高。
[0006]现有红枣营养浓缩液生产工艺中，最终浓缩液中cAMP含量达到6(Tl25mg/kg，相当于干枣中cAMP的提取率为30~60 mg/kg，远低于有关报道中红枣cAMP的提取率。这说明红枣中的大部分cAMP并未进入浓缩液，而极有可能残留在枣渣和枣皮中。但在现有红枣浓缩液生产工艺流程中，红枣原料经过打浆、超声波浸提、酶解、离心等一系列步骤的处理分离得到枣渣，故在枣渣中cAMP的残留量相对较少；而枣皮和枣核是红枣原料经拣选、清洗、破碎、复水、打浆后就将其分离出去的，这个过程都是在低温(低于60°C )、快速的处理下进行，枣皮并没有经之后的超声波提取、酶解等步骤处理，所以其在整个生产过程中没有被充分利用，尤其是枣皮中的cAMP未被有效提取出来，对浓缩液中cAMP提取率的贡献率几乎为零。这可能是造成红枣营养浓缩液生产过程中cAMP提取率较低的直接原因。
[0007]最近几年，随着人们对大枣进行深入地研究，开发出许多枣产品，如枣酒、枣汁等。但随着大枣工业加工的发展，也不可避免的带来了许多工业生产废料，如枣渣、枣皮、枣核等。经研究发现，在大枣的工业废料中含有多糖、三帖酸、环磷酸腺苷(cAMP)及红枣色素等有效成分。针对红枣工业生产中所产生的副产物的开发现状和药用前景，本试验将研究目标定位于从枣皮中提取分离其富含的cAMP，寻找到可行、成本低、环境友好的提取工艺，以期为给工业化生产提供较为详尽的技术方案和试验数据，为开发新的保健品及医药制剂提供原材料。这样既可以提高资源的有效利用率，又能降低生产废料的排放量，节约资源，保护环境，同时可以带来良好的经济效益及社会效益。
[0008]环磷酸腺苷是核苷酸的衍生物，为蛋白激酶致活剂，是有机体中广泛存在的一种具有生理活性的重要物质，为细胞内传递激素和递质作用充当中介因子，是当前分子生物学研究的重要内容之一。医学研究已证明，环核苷酸对40多种疾病(包括癌症、高血压、心肌梗塞、冠心病、心肌梗塞和心源性休克等重大疾病)有显著疗效。基础医学研究发现，cAMP可使培养条件下疯狂分裂的癌细胞停止分裂，甚至恢复正常。临床研究也证明，cAMP或其双丁酞衍生物对冠心病、心肌梗塞和心源性休克等重大疾病有明显疗效。环磷酸腺苷(cAMP)作为核苷酸的衍生物，具有广阔的市场开发前景。
[0009]红枣中不仅含有大量的具有生理活性的氨基酸及多糖类物质，同时还含有较为丰富的维生素C、微量元素、cAMP等多种生物活性物质，其中红枣多糖、cAMP和三萜酸是枣果中最具特色和优势的三大类功能性成分，而cAMP是枣果中最为突出的重要生物活性物质，在鲜枣中其含量可高达100~600 nmol/g，是己测动植物材料中最高的，为一般动植物材料cAMP含量的数千至数万倍。不同的物种或同一物种不同品种间cAMP含量存在较大的差异，即使是同一植物品种，其不同组织部位cAMP的相对含量也有所不同。有研究表明:不同品种的枣果内cAMP含量差别较大，且相同品种的枣果肉中cAMP含量与采摘期及枣的品质也有一定的关系:成熟度较好、果肉较丰满的枣果，cAMP含量较高；枣果的不同组织部位其cAMP含量也大为不同，其中以枣皮中cAMP的含量为最高。
[0010]红枣拥有其他动植物材料无法比拟的高cAMP含量，但在红枣营养浓缩液制备过程中，cAMP进入浓缩液的比例并不高，这就意味着更多的cAMP残留在其副产物中。研究发现:要使红枣细胞内cAMP最大程度地溶出，关键在于降低cAMP与其他物质之间的结合力以及破坏阻碍cAMP溶出的细胞壁。传统方法采用高温长时间的浸提可提高提取液中cAMP的含量，但高温长时间作用会造成营养浓缩液风味劣化及热敏性营养成分损失，使得浓缩汁感官品质和营养价值下降。现探求一种既能保证产品品质又能提高cAMP提取率的制备方法具有十分重要的意义，因此综合利用复合酶解破壁、超声波辅助提取等较为温和的技术在功能成分提取领域的优势对枣皮中cAMP进行提取，以期进一步提高cAMP的提取率，既可以合理利用生产过程中的废弃料，避免资源浪费和环境污染；还可以为综合利用红枣资源 、突出枣果营养保健价值以及生产高附加值产品奠定基础。
【发明内容】
[0011]本发明为了克服现有技术的不足，提供一种有效利用枣皮中cAMP，工艺简单成本低廉的高效提取cAMP的方法。
[0012]为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为一种从枣皮中高效提取cAMP的方法:将从枣果制汁分离出来的皮渣依次进行烘干、风选、破碎、复水、复合酶酶解、超声波助提、过滤和离心，得到的上清液即为枣皮cAMP提取液；
具体工艺步骤为:
a、将从枣果制汁分离出来的皮渣进行烘干、风选、破碎后，按照粉碎后的枣皮粉末与水的重量份比为1:10-15，进行复水得到枣皮混合液；
b、向所述枣皮混合液中添加复合酶酶解，酶解条件为:控制酶解温度为45飞(TC，酶解pH值为3.5^5.5，酶解广3小时完成酶解，得到枣皮酶解液；
C、将所述枣皮酶解液在超声频率为2(T80kHz，温度为50 °C~65 °C的条件下，处理2(T60min，再进行过滤和离心即得到所述枣皮cAMP提取液。
[0013]所述复合酶与枣皮粉末的重量份比为0.3^0.8:100o [0014]所述复合酶由纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和蛋白酶组成；所述纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和蛋白酶重量份比为10~40:2~15:1~8:5~20。
[0015]所述枣皮高效提取cAMP整个步骤中处理温度不高于65 °C。
[0016]所述枣皮cAMP提取液在转速4000r/min下离心15min后，取上清液在65°C减压浓缩，得到高浓度cAMP浓缩液。
[0017]所述枣果选用吕梁木枣。
[0018]本发明与现有技术相比具有以下有益效果。
[0019]1、品种的选择。本试验选择富含cAMP的枣品种——吕梁木枣，为晋陕峡谷带黄河滩流域、海拔800米以下区域的主栽品种。并且该区域光照充足、昼夜温差较大，有利于红枣营养物质的积累，经检测吕梁木枣是已测枣果品种中cAMP含量最高的品种之一。
[0020]2、原料的选择。关于枣皮中cAMP的提取鲜有报道，选择枣皮作为试验原料:一方面，枣皮是枣果中cAMP含量最多的部位；另一方面，枣皮是红枣浓缩液生产过程中的副产物，既可以通过高效提取枣皮中cAMP来提高红枣利用价值，又可以避免资源浪费。
[0021]3、适时采收。在成熟期大枣中cAMP的含量达到最大值。吕梁木枣在山西当地一般9月下旬进入脆熟期，枣果表面着色转红，10月上中旬进入完熟期，枣肉含糖量得到充分积累，其他营养物质含量包括cAMP的含量都达到峰值。由此，通常在完熟期采收。
[0022]4、温和提取条件。本试验选用复合酶酶法提取和超声波辅助提取，并且在整个实验过程中，温度均控制在65°C以下，其目的都是为活性物质的提取提供一个较为温和的条件，有效避免了高温引起的营养物质的损失、高温下美拉德反应导致的褐变、及高温下引起的焦糊味等不良变化，有效地保持了产品良好的感官品质。本发明在提取前的预处理过程中也应控制处理温度低于65°C，以免提前失活。
[0023]5、复合酶剂的确定。在红枣细胞中，蛋白质、粘性果胶质、淀粉、多糖之间紧密结合，阻挡细胞内物质的外逸，导致红枣中有效物质提取工艺周期过长。引入复合酶目的就是借助不同酶自身的一些特性，在提高红枣有效物质得率和缩短提取时间的前提下，直接克服具有活性的红枣有效物质在提取过程的难题。
[0024]6、复合酶各酶制剂添加量确定。本试验在单因素试验的基础上进行了正交试验，以枣皮中cAMP提取率为指标，对各影响因素进行优化试验，得到最优的酶制剂加入量参数:纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、蛋白酶的添加量分别为0.1-θ.4%、0.02-0.15%、0.01-0.08%,0.05^0.2%。
[0025]7、复合酶酶解和超声波辅助提取工艺参数确定。以枣皮中cAMP提取率为指标，在单因素试验的基础上进行了正交优化试验，分别得到复合酶酶解和超声波辅助提取的最优工艺参数。复合酶酶解最优工艺参数为料液比为1:10-15，酶解温度为45飞(TC，酶解pH值为3.5^5.5，酶解时间为f 3h。超声波辅助提取最优工艺参数为超声频率2(T80kHz，处理时间2(T60min，处理温度50~65°C。
[0026]8、提取效率高。利用高效液相色谱仪外标法对枣皮浓缩液中cAMP含量进行检测，与现有红枣cAMP浓缩液提取技术相比，采用本试验方法，浓缩液中cAMP含量可达到红枣果肉浓缩液中cAMP含量的5~7倍，可作为一种食品配料或者营养强化剂加以应用。
[0027]本发明选用吕梁木枣枣皮为发明材料，采用该发明方法可使浓缩液中cAMP含量达到50(T650mg/kg，与以红枣果肉为主要原料的红枣浓缩汁生产过程相比，专门针对枣皮中cMAP进行高效提取所得的浓缩液中cAMP含量是红枣果肉浓缩液cAMP含量的5~7倍。同时也大大提高了红枣中cAMP的提取率，得到高浓度cAMP的浓缩液，充分有效利用了红枣资源。
[0028]复合酶酶解法主要是利用复合酶中各酶制剂之间的协同作用对阻碍待提取物质溶出的基体进行降解，从而达到提高提取率和缩短提取周期的目的。其中，纤维素酶主要用于对植物细胞壁中纤维质的水解，并可将淀粉和纤维质转化为糖类；果胶酶可以对细胞壁的中间层和不溶性高分子原果胶进行分解；木聚糖酶可破坏植物组织纤维，降解木聚糖和β -葡聚糖，与纤维素酶协同破坏细胞壁结构，从而增加细胞内物质的溶出。蛋白酶对植物细胞中的游离蛋白质具有水解作用，其可使植物结构变得松散；同时还会使糖蛋白和聚糖中游离蛋白质水解，降低了它们与糖链或者目标物质的结合力，有利于细胞结构的破坏和目标物质的浸出。
[0029]本发明复合酶的选择
在红枣细胞中，蛋白质、粘性果胶质、淀粉、多糖之间紧密结合，阻挡细胞内物质的外逸，导致红枣中有效物质提取工艺周期过长。引入复合酶目的就是借助酶自身的一些特性，在提高红枣有效物质得率和缩短提取时间的前提下，直接地克服具有活性的红枣有效物质提取过程的难题。酶制剂的品种很多，但功效不一，结合红枣枣皮的结构及cAMP在细胞中的位置及其存在形式有针对性地选择合适的酶制剂。
[0030]本发明中酶解破壁所选用的复合酶为纤维素酶-果胶酶-木聚糖酶-蛋白酶。纤维素酶、蛋白酶、果胶酶和木聚糖酶的协同作用，催化红枣细胞中不同部位的各物质发生水解，促使细胞壁降解其结构和功能破坏，细胞内的膜系统就会因内部结构的变化而发生紊舌L、变形或破裂，从而使膜的通透性增加，促进细胞内物质的溶出。
[0031]本发明在单因素试验的基础上，采用4因素3水平正交表L9(34)进行正交试验，以枣皮提取液中cAMP含量为指标，综合考察复合酶制剂中各酶添加量对枣皮提取液中cAMP含量的影响。探索出纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶、蛋白酶的最适添加量分别为0.1%-0.4%、
0.02~0.15%,0.01%-Ο.08%,0.05~0.2%。
[0032]同时本发明对酶解工艺进行研究:以料液比、酶解温度、pH、酶解时间为影响因素，以枣皮提取液中cAMP含量为检测指标，进行单因素试验，以确定各因素对cAMP提取影响的最佳参数。在单因素试验的基础上，采用4因素3水平正交表L9(34)进行正交试验，以枣皮中cAMP提取率为指标，综合考察料液比、酶解温度、时间和pH对枣枣皮提取液中cAMP含量的影响。最终确定最佳的酶处理工艺参数为:料液比为1:10-15，酶解温度为45飞(TC，酶解pH为3.5~5.5，酶解时间为I~3h。
[0033]超声波提取法主要是通过超声波产生独特的机械振动效应和空化效应作用于媒质质点。当超声波振动时能产生并传递强大的能量，引起媒质质点以较大速度和加速度进入振动状态，使媒质结构发生变化，促使有效成分快速进入溶剂中；同时超声波强大的能量作用于媒质，在振动处于稀疏状态时，声波在样品基体里比电磁波穿透更深，停留时间也更长，使溶剂被击成很多小的空穴，这些小空穴一瞬间就闭合，闭合时产生高达3000 MPa的瞬间压力，即产生空化效应，也就是在相当大的破坏应力的作用下，液体内形成空化泡的现象。空化泡在瞬间迅速涨大并破裂，破裂时把吸收的声场能量在极短的时间和极小的空间内释放出来，形成高温和高压的环境，同时伴随有强大的冲击波和微声流，从而破坏细胞壁结构，使其在瞬间破裂，植物细胞内的有效成分得以释放、直接进入溶剂并充分混合，从而提高提出率。另外，超声波的许多次级效应如热效应、乳化、扩散、击碎、化学效应、生物效应、凝聚效应等，也能加速植物有效成分在溶剂中的扩散释放，促进植物有效成分与溶剂充分接触，有利于使植物中有效成分向提取溶剂转移、扩散，提高提取效率。本发明以超声波频率、超声时间、超声温度为影响因素，以枣皮提取液中cAMP含量为检测指标，进行单因素试验，以确定超声各因素对cAMP提取影响的最佳参数。在单因素试验的基础上，采用3因素3水平正交表L9 (33)进行正交试验，以枣皮提取液中cAMP含量为指标，综合考察超声波功率、超声时间及温度对枣皮提取液中cAMP含量的影响。最终确定最佳的超声辅助提取工艺参数为:超声频率20-80kHz，处理时间20-60min，处理温度50-65°C。
[0034]本发明经过一次复合酶酶解和超声波助提后的产物即可达到应用的目的，在本【技术领域】中可知，如果进行多次复合酶酶解和超声波助提，会提高枣皮cAMP的提取率，但随着提取次数的增加，成本也会随之增加，因此枣皮cAMP提取率和提取次数会有一个平衡的最佳值，这是本领域技术人员通过多次试验能够得到的。
[0035]本发明测定cAMP的方法 色谱条件确定
色谱柱为 InertSustain C18 柱(5 Mm、4.6 mm X 150 mm);流动相:20mmol/L KH2P04:CH30H(体积比 85:15);柱温:30°C ;柱压:19.11 MPa ;流速:1.0 mL/min ;波长:254 nm ；进样量:?ο μ?。
[0036]标准曲线绘制及cAMP含量的测定
以0.02mol/L的磷酸二氢钾为溶剂，准确配制0.lmg/mL的cAMP标准液，再分别配置
1.0、2.0、5.0、10.0、15.0、20.0Pg/mL 的使用液，过 0.45 Mm 针式滤头，滤液待用。
[0037]准确吸取提取液2.0 mL，加人10 mL容量瓶，用0.02mol/L磷酸二氢钾定容，过
0.45 Mm针式滤头，滤液待用。[0038]分别准确吸取ΙΟμ?标准使用液和样品溶液，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行分析，分别测定检测液的峰面积，并以标准使用液色谱图的峰面积为纵坐标，浓度(Pg/mL)为横坐标,绘制标准曲线。
【具体实施方式】
[0039]以下结合具体实施例对本发明作进一步说明。
[0040]实施例1
一种从枣皮中高效提取cAMP的方法将从枣果制汁分离出来的皮渣依次进行烘干、风选、破碎、复水、复合酶酶解、超声波助提、过滤和离心，得到的上清液即为枣皮cAMP提取液；
具体工艺步骤为:
a、将从枣果制汁分离出来的皮渣进行烘干、风选、破碎后，按照粉碎后的枣皮粉末与水的重量份比为1: 15，进行复水得到枣皮混合液；
b、向所述枣皮混合液中添加复合酶酶解，酶解条件为:控制酶解温度为60°C，酶解pH值为5.5，酶解I小时完成酶解，得到枣皮酶解液；
C、将所述枣皮酶解液在超声频率为80kHz，温度为65°C的条件下，处理20min，再进行过滤和离心即得到所述枣皮cAMP提取液。
[0041]复合酶与枣皮粉末的重量份比为0.8:100。
[0042]复合酶由纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和蛋白酶组成；所述纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和蛋白酶重量份比为:40:2:l:5o
[0043]所述枣皮提取cAMP步骤中物料处理温度不高于65 °C。
[0044]枣皮cAMP提取液在转速4000r/min下离心15min后，取上清液在65°C减压浓缩，得到高浓度cAMP浓缩液。
[0045]实施例2
一种从枣皮中高效提取cAMP的方法将从枣果制汁分离出来的皮渣依次进行烘干、风选、破碎、复水、复合酶酶解、超声波助提、过滤和离心，得到的上清液即为枣皮cAMP提取液；
具体工艺步骤为:
a、将从枣果制汁分离出来的皮渣进行烘干、风选、破碎后，按照粉碎后的枣皮粉末与水的重量份比为1: 15，进行复水得到枣皮混合液；
b、向所述枣皮混合液中添加复合酶酶解，酶解条件为:控制酶解温度为40°C，酶解pH值为3.5，酶解4小时完成酶解，得到枣皮酶解液；
C、将所述枣皮酶解液在超声频率为20kHz，温度为45°C°C的条件下，处理60min，再进行过滤和离心即得到所述枣皮cAMP提取液。
[0046]复合酶与枣皮粉末的重量份比为0.3:100。
[0047]复合酶由纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和蛋白酶组成；所述纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和蛋白酶重量份比为:40: 15: 8: 20。
[0048]所述枣皮提取cAMP步骤中物料处理温度不高于65 °C。
[0049]枣皮cAMP提取液在转速4000r/min下离心15min后，取上清液在65°C减压浓缩，得到高浓度cAMP浓缩液。
[0050]实施例3
一种从枣皮中高效提取cAMP的方法将从枣果制汁分离出来的皮渣依次进行烘干、风选、破碎、复水、复合酶酶解、超声波助提、过滤和离心，得到的上清液即为枣皮cAMP提取液；
具体工艺步骤为:
a、将从枣果制汁分离出来的皮渣进行烘干、风选、破碎后，按照粉碎后的枣皮粉末与水的重量份为1:12，进行复水得到枣皮混合液；
b、向所述枣皮混合液中添加复合酶酶解，酶解条件为:控制酶解温度为50°C，酶解pH值为3.5，酶解3小时完成酶解，得到枣皮酶解液；
C、将所述枣皮酶解液在超声频率为60kHz，温度为60°C的条件下，处理45min，再进行过滤即得到所述枣皮cAMP提取液。
[0051]复合酶与枣皮粉末的重量份比为0.5:100。
[0052]复合酶由纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和蛋白酶组成；所述纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和蛋白酶重量份比为:22:12:3:10。
[0053]烘干工艺中温度不高于60°C。
[0054]实施例4 一种从枣皮中高效提取cAMP的方法:将从枣果制汁分离出来的皮渣依次进行烘干、风选、破碎、复水、复合酶酶解、超声波助提、过滤和离心，得到的上清液即为枣皮cAMP提取液；
具体工艺步骤为:
a、将从枣果制汁分离出来的皮渣进行烘干、风选、破碎后，按照粉碎后的枣皮粉末与水的重量份比为1:11，进行复水得到枣皮混合液；
b、向所述枣皮混合液中添加复合酶酶解，酶解条件为:控制酶解温度为58°C，酶解pH值为4.2，酶解1.5小时完成酶解，得到枣皮酶解液；
C、将所述枣皮酶解液在超声频率为65kHz，温度为56°C的条件下，处理25min，再进行过滤和离心即得到所述枣皮cAMP提取液。
[0055]所述复合酶与枣皮粉末的重量份比为0.75:100。
[0056]所述复合酶由纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和蛋白酶组成；所述纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和蛋白酶重量份比为32:11:4:17。
[0057]所述枣皮高效提取cAMP整个步骤中处理温度不高于65 °C。
[0058]所述枣皮cAMP提取液在转速4000r/min下离心15min后，取上清液在65°C减压浓缩，得到高浓度cAMP浓缩液。
[0059]所述枣果选用吕梁木枣。
[0060]实施例5
一种从枣皮中高效提取cAMP的方法:将从枣果制汁分离出来的皮渣依次进行烘干、风选、破碎、复水、复合酶酶解、超声波助提、过滤和离心，得到的上清液即为枣皮cAMP提取液；
具体工艺步骤为:a、将从枣果制汁分离出来的皮渣进行烘干、风选、破碎后，按照粉碎后的枣皮粉末与水的重量份比为1:13，进行复水得到枣皮混合液；
b、向所述枣皮混合液中添加复合酶酶解，酶解条件为:控制酶解温度为57°C，酶解pH值为4.7，酶解2.2小时完成酶解，得到枣皮酶解液；
C、将所述枣皮酶解液在超声频率为45kHz，温度为54°C的条件下，处理55min，再进行过滤和离心即得到所述枣皮cAMP提取液。
[0061]所述复合酶与枣皮粉末的重量份比为0.5:100。
[0062]所述复合酶由纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和蛋白酶组成；所述纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和蛋白酶重量份比为25:3:2:15。
[0063]所述枣皮高效提取cAMP整个步骤中处理温度不高于65 °C。
[0064]所述枣皮cAMP提取液在转速4000r/min下离心15min后，取上清液在65°C减压浓缩，得到高浓度cAMP浓缩液。
[0065]所述枣果选用吕梁木枣。
[0066]实施例6
一种从枣皮中高效提取cAMP的方法:将从枣果制汁分离出来的皮渣依次进行烘干、风选、破碎、复水、复合酶酶解、超声波助提、过滤和离心，得到的上清液即为枣皮cAMP提取液；
具体工艺步骤为:
a、将从枣果制汁分离出来的皮渣进行烘干、风选、破碎后，按照粉碎后的枣皮粉末与水的重量份比为1:14，进行复水得到枣皮混合液；
b、向所述枣皮混合液中添加复合酶酶解，酶解条件为:控制酶解温度为48°C，酶解pH值为5.3，酶解2.5小时完成酶解，得到枣皮酶解液；
C、将所述枣皮酶解液在超声频率为35kHz，温度为64°C的条件下，处理45min，再进行过滤和离心即得到所述枣皮cAMP提取液。
[0067]所述复合酶与枣皮粉末的重量份比为0.4:100。
[0068]所述复合酶由纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和蛋白酶组成；所述纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和蛋白酶重量份比为33:5:7:14。
[0069]所述枣皮高效提取cAMP整个步骤中处理温度不高于65 °C。
[0070]所述枣皮cAMP提取液在转速4000r/min下离心15min后，取上清液在65°C减压浓缩，得到高浓度cAMP浓缩液。
[0071 ] 所述枣果选用吕梁木枣 。
[0072] 本发明可用其他的不违背本发明的精神或主要特征的具体形式来概述。因此，无论从那一点来看，本发明的上述实施方案都只能认为是对本发明的说明而不能限制发明，权利要求书指出了本发明的范围，而上述的说明并未指出本发明的范围，因此，在与本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何变化，都应认为是包括在权利要求书的范围内。
【权利要求】
1.一种从枣皮中高效提取CAMP的方法，其特征在于:将从枣果制汁分离出来的皮渣依次进行烘干、风选、破碎、复水、复合酶酶解、超声波助提、过滤和离心，得到的上清液即为枣皮cAMP提取液； 具体工艺步骤为: a、将从枣果制汁分离出来的皮渣进行烘干、风选、破碎后，按照粉碎后的枣皮粉末与水的重量份比为1:10-15，进行复水得到枣皮混合液； b、向所述枣皮混合液中添加复合酶酶解，酶解条件为:控制酶解温度为45飞(TC，酶解pH值为3.5^5.5，酶解广3小时完成酶解，得到枣皮酶解液； C、将所述枣皮酶解液在超声频率为2(T80kHz，温度为50 °C~65 °C的条件下，处理2(T60min，再进行过滤和离心即得到所述枣皮cAMP提取液。
2.根据权利要求1所述的一种从枣皮中高效提取cAMP的方法，其特征在于所述复合酶与枣皮粉末的重量份比为0.3、.8:100。
3.根据权利要求1或2所述的一种从枣皮中高效提取cAMP的方法，其特征在于所述复合酶由纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和蛋白酶组成；所述纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和蛋白酶重量份比为10~40:2~15:1~8:5~20。
4. 根据权利要求1所述的一种从枣皮中高效提取cAMP的方法，其特征在于所述枣皮高效提取cAMP整个步骤中处理温度不高于65 °C。
5.根据权利要求1所述的一种从枣皮中高效提取cAMP的方法，其特征在于所述枣皮cAMP提取液在转速4000r/min下离心15min后，取上清液在65°C减压浓缩，得到高浓度c AMP浓缩液。
6.根据权利要求1所述的一种从枣皮中高效提取cAMP的方法，其特征在于所述枣果选用吕梁木枣。
【文档编号】C07H1/08GK103467553SQ201310434569
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2013年9月23日 优先权日:2013年9月23日
【发明者】巩晋龙, 张佩舜, 李奠础, 杨天英, 王以强, 冯俊敏, 王晓艳, 康振奎 申请人:山西天骄生物集团有限公司