一种金雀花碱的提取分离方法
【专利摘要】本发明提供的一种金雀花碱的提取分离方法，包括以下步骤：提取：将牧马豆种子粉碎，加4-10倍质量的有机溶剂水溶液，回流提取1-4h，提取液浓缩至质量浓度为0.5～1.5g/ml，得到浓缩液；大孔树脂联用分离：采用孔径在130-300A°、比表面积在480-600m2/g的聚苯乙烯型非极性树脂一次分离；采用孔径在50-80A°、比表面积在800-1100m2/g的聚苯乙烯型非极性树脂二次分离；重结晶即得。该方法工艺简单、操作简便、原料来源方法、成本低廉，分离使用的材料再生简单、无毒无污染，适合工业化大生产。
【专利说明】一种金雀花碱的提取分离方法
【技术领域】
[0001]本发明属于中药化学领域，特别涉及一种生物碱的提取分离方法，具体涉及一种金雀花碱的提取分离方法。
【背景技术】
[0002]金雀花碱，其分子式为C11H14ON2，分子量为190.24。金雀花碱具有显著的生物活性，临床用金雀花碱0.15%的水溶液静脉注射，抢救因手术和各种创伤引起的反射性呼吸暂停、休克和新生儿窒息。近期研究表明，金雀花碱还具有抗心律失常、抗微生物感染、抗溃疡以及较强的抗癌活性。
[0003]现有对金雀花碱提取纯化工艺多是传统工艺。中国专利201010182690.9公开了一种金雀花碱的提取方法，包括CO2超临界提取后通过大孔树脂层析分离、丙酮重结晶、有机溶剂提取、酸化萃取、氧化铝柱或硅胶柱层析、丙酮结晶等工序，工艺复杂，操作繁琐。中国专利201110225551.4公开了披针叶黄华总生物碱和几种高纯度药用物质的分离方法，该发明以披针叶黄华为原料，通过酸水提取、离子树脂吸附、大孔树脂富集得到总生物碱，用高速逆流色谱法和制备液相色谱对总生物碱进行分离纯化，得到高纯度的金雀花碱、黄华碱、鹰爪豆碱和N-甲基金雀花碱，仅能进行实验室小试，难以扩大应用。中国专利201210315804.1公开了一种牧马豆中提取金雀花碱的方法，该发明以牧马豆为提取原料，用有机溶剂脱脂后提取，再用硅胶层析分离，最后重结晶得金雀花碱；然而硅胶层析可能带来二次污染，且纯度并不高。中国专利200910023485.5公开了一种从披针叶黄华种籽中提取金雀花碱和黄华碱的方法，该发明以披针叶黄华种籽为提取原料，将披针叶黄华种籽粉碎、提取、浓缩得浸膏，再用有机溶剂萃取浸膏，酸水溶液反萃取、净化萃取溶剂，同时得到含黄华碱的酸水溶液，此酸水溶液加入碱性试剂碱化，析晶，重结晶，可得到黄华碱产品；萃取过的浸膏碱化后用有机溶液萃取，浓缩，结晶，重结晶，可得到纯度98%以上的金雀花碱产品；该方法工艺复杂，收·率不高。
【发明内容】
[0004]发明目的:为了解决现有技术提取分离金雀花碱纯度低、成本高、污染重、周期长的问题，本发明的目的在于提供一种成本低、纯度高、适于工业应用的金雀花碱的提取分离方法。
[0005]技术方案:本发明提供的一种金雀花碱的提取分离方法，包括以下步骤:
[0006](I)提取:将牧马豆种子粉碎，加4-10倍质量的有机溶剂水溶液，回流提取l_4h，提取液浓缩至质量浓度为0.5~1.5g/ml，得到浓缩液；
[0007]( 2 )大孔树脂联用分离:
[0008]采用孔径在130-300A。、比表面积在480_600m2/g的聚苯乙烯型非极性树脂一次分离:将浓缩液调PH至8-9，加至大孔树脂柱上静置吸附；依次用5-10倍柱体积的纯化水、5-10倍柱体积的10%-40%的乙醇水溶液洗脱，乙醇洗脱液浓缩至质量浓度为0.5-1.5g/ml,得一次分离浓缩液；
[0009]采用孔径在50-80A。、比表面积在800-1100m2/g的聚苯乙烯型非极性树脂二次分离:将一次分离浓缩液调PH至8-9，加至大孔树脂柱上静置吸附；依次用4-6倍量柱体积的纯化水、4-6倍量柱体积的10%乙醇、5-10倍量柱体积的15-25%乙醇洗脱，收集15-25%乙醇洗脱液，浓缩、干燥，得固体；
[0010](3)重结晶:将步骤(2)得到的固体在溶剂中重结晶，即得。
[0011]其中，步骤(1)中，牧马豆种子粉碎至10-60目；所述有机溶剂为乙醇或甲醇，有机溶剂水溶液的质量百分比浓度为35%-95%。
[0012]其中，步骤(2)中，一次分离所使用的聚苯乙烯型非极性树脂为X-5型大孔树脂或AB-8型大孔树脂。
[0013]其中，步骤(2)中，大孔树脂在使用前还需要进行预处理，方法为:用高于树脂层10-20厘米的乙醇浸泡3-4小时后放净乙醇洗涤液，用相同方法反复洗涤至乙醇洗涤液在试管中加3倍量水不显浑浊，再用清水洗涤至无乙醇味。
[0014]其中，步骤(2)中，一次分离条件:上样量为0.01-0.2倍柱体积，静置吸附时间为10-50分钟，洗脱速度为l_5mL/min。
[0015]其中，步骤(2)中，二次分离所使用的聚苯乙烯型非极性树脂为DM18型大孔树脂或DM2型大孔树脂。
[0016]其中，步骤(2)中，二次分离条件:上样量为0.01-0.2倍柱体积，静置吸附时间为20-40分钟，洗脱速度为l_3mL/min。
[0017]其中，步骤(3)中，溶剂为甲醇、乙醇、乙醚或丙酮；固体与溶剂的用量比为Ig:(l-10)ml。
[0018]有益效果:本发明提供的金雀花碱的提取分离方法工艺简单、操作简便、原料来源方法、成本低廉，分离使用的材料再生简单、无毒无污染，适合工业化大生产。
[0019]具体而言，本发明相对于现有技术具有以下突出的优势:
[0020]1.本发明利用不同孔径大孔树脂对物质的吸附能力不同，结合大孔树脂的比表面积，经过大量试验筛选，最终选择了两种孔径和比表面积不同的大孔树脂联用；应用特定的洗脱溶剂体系和特定的洗脱方法，通过柱分离实现高纯度金雀花碱的富集和提取。
[0021 ] 2.本方法操作简单，成本低廉，转化率高，大孔树脂可以反复利用，适合于工业化大生产。
[0022]3.本方法无毒无污染，完全做到了当今社会所提倡的绿色化学的概念，最终可得到含量在98%以上的金雀花碱。
【专利附图】
【附图说明】
[0023]图1为本发明实施例1产物液相图谱。
[0024]图2为本发明实施例2产物液相图谱。
[0025]图3为本发明实施例3产物液相图谱。
【具体实施方式】
[0026]根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。实施例1
[0027]取牧马豆原料IOOkg进行粉碎，将上述处理所得的原料过10目筛，用8倍质量的浓度为95%的乙醇回流提取I小时，得提取液。浓缩提取液至质量浓度为1.0g/mL，调pH至
8.0，上预处理过的X-5型大孔树脂柱(315 X 1500mm)，上样量为0.1倍柱体积，静置30min，依次用8倍柱体积的纯水、8倍柱体积的10%的乙醇水溶液洗脱，洗脱速度为1.0mL/min,收集10%乙醇洗脱液，再浓缩至质量浓度为1.0g/mL,调pH至9.0，上预处理好的DM18型大孔树脂柱(315 X 1500mm)，上样量为0.1倍柱体积，静置30min，依次用5倍柱体积的纯水、5倍柱体积的10%乙醇水溶液、8倍柱体积的20%乙醇水溶液洗脱，洗脱速度为1.0mL/min,收集20%乙醇洗脱液浓缩干燥得固体，用无水乙醇溶解，固体与无水乙醇的用量比为Ig:5ml，也可以用其他醇代替乙醇，例如甲醇，浓缩至金雀花碱结晶完全，得金雀花碱1.02kg,含量为99.658%，转移率为 60.0%。
[0028]该实施例使用的X-5型大孔树脂性能参数如下:
[0029]材料:交联聚苯乙烯；
[0030]极性:非极性；
[0031]平均孔径A:290-300A° ；
[0032]孔容:1.20-1.24mL/g ;
[0033]粒径范围:0.315-1.25mm ；
[0034]含水量:45-60%；
[0035]表观密度:0.44-0.487g/mL ；
[0036]骨架密度1.03-1.078g/mL ；
[0037]比表面积:500_600m2/g。
[0038]该实施例使用的DM18型大孔树脂性能参数如下:
[0039]材料:苯乙烯共聚体；
[0040]极性:非极性；
[0041]平均孔径A:50-60A° ；
[0042]粒径范围:0.25-0.84mm ；
[0043]含水量:55-75%；
[0044]比表面积:1000-1100m2/g。
[0045]产品采用HPLC检测纯度，结果见图1和表1。
[0046]表1实施例1的产品纯度
【权利要求】
1.一种金雀花碱的提取分离方法，其特征在于:包括以下步骤: (1)提取:将牧马豆种子粉碎，加4-10倍质量的有机溶剂水溶液，回流提取l_4h，提取液浓缩至质量浓度为0.5~1.5g/ml，得到浓缩液； (2)大孔树脂联用分离: 采用孔径在130-300A。、比表面积在480-600m2/g的聚苯乙烯型非极性树脂一次分离:将浓缩液调PH至8-9，加至大孔树脂柱上静置吸附；依次用5-10倍柱体积的纯化水、5-10倍柱体积的10%-40%的乙醇水溶液洗脱，乙醇洗脱液浓缩至质量浓度为0.5-1.5g/ml，得一次分离浓缩液； 采用孔径在50-80A。、比表面积在800-1100m2/g的聚苯乙烯型非极性树脂二次分离:将一次分离浓缩液调PH至8-9，加至大孔树脂柱上静置吸附；依次用4-6倍量柱体积的纯化水、4-6倍量柱体积的10%乙醇、5-10倍量柱体积的15-25%乙醇洗脱，收集15-25%乙醇洗脱液，浓缩、干燥，得固体； (3)重结晶:将步骤(2)得到的固体在溶剂中重结晶，即得。
2.根据权利要求1所述的一种金雀花碱的提取分离方法，其特征在于:步骤(1)中，牧马豆种子粉碎至10-60目；所述有机溶剂为乙醇或甲醇，有机溶剂水溶液的质量百分比浓度为 35%-95%。
3.根据权利要求1所述的一种金雀花碱的提取分离方法，其特征在于:步骤(2)中，一次分离所使用的聚苯乙烯型非极性树脂为X-5型大孔树脂或AB-8型大孔树脂。
4.根据权利要求1所述的一种金雀花碱的提取分离方法，其特征在于:步骤(2)中，一次分离条件:上样量为0.01·-0.2倍柱体积，静置吸附时间为10-50分钟，洗脱速度为1 -5mT ,/mi n n
5.根据权利要求1所述的一种金雀花碱的提取分离方法，其特征在于:步骤(2)中，二次分离所使用的聚苯乙烯型非极性树脂为DM18型大孔树脂或DM2型大孔树脂。
6.根据权利要求1所述的一种金雀花碱的提取分离方法，其特征在于:步骤(2)中，二次分离条件:上样量为0.01-0.2倍柱体积，静置吸附时间为20-40分钟，洗脱速度为l-3mL/min。
7.根据权利要求1所述的一种金雀花碱的提取分离方法，其特征在于:步骤(3)中，溶剂为甲醇、乙醇、乙醚或丙酮；固体与溶剂的用量比为Ig: (1-10) ml。
【文档编号】C07D471/18GK103588773SQ201310549873
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2013年11月7日 优先权日:2013年11月7日
【发明者】廖志新, 叶润, 纪兰菊, 孙洪发, 胥廉谦, 施天一 申请人:东南大学