一种布舍瑞林的制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种布舍瑞林的制备方法，该方法包括采用固相合成法制备Fmoc-Pro-CTC树脂；使用偶联剂偶联保护氨基酸；布舍瑞林-CTC树脂裂解；乙胺化、氢化、脱保护与纯化等步骤。与现有技术的纯液相合成工艺相比，本发明合成方法操作简便、中间体不用纯化，后处理容易，总收率达到31％。本发明中常压催化氢化反应脱保护中用甲酸铵替代氢气，在常温条件下反应，操作简便安全；此外，本发明使用三氟乙酸作为切肽试剂，避免使用剧毒的氢氟酸，所用原料钯碳可以回收再利用，这些都有利于减小环境污染。本发明工艺具有成本低、操作简便，反应条件温和，环境污染小，易于实现产业化生产等优点。
【专利说明】一种布舍瑞林的制备方法
【【技术领域】】
[0001]本发明涉及多肽合成【技术领域】。更具体地，本发明涉及一种布舍瑞林的制备方法。【【背景技术】】
[0002]布舍瑞林(Buserelin)的化学名是L-焦谷酰_L_组氨酰_L_色氨酰_L_丝氨酰-L-酪氨酰-D- (O-叔丁基)-丝氨酰-L-亮氨酰-L-精氨酰-L-脯氨酰乙胺，其分子式为C6tlH86N16O13，分子量1239.4。布舍瑞林的化学结构式如下所示:
【权利要求】
1.一种布舍瑞林的制备方法，其特征在于该方法的步骤如下: A、采用固相合成法，在N，N-二异丙基乙胺存在的条件下由Fmoc-PiO-OH和取代度0.6~1.3mmol/g的CTC树脂得到取代度0.4~0.9mmol/g的Fmoc-Pro-CTC树脂；其中CTC树脂与N，N- 二异丙基乙胺的摩尔比为1:3~9 ; B、将步骤A得到的Fmoc-PiO-CTC树脂在除去Fmoc后，以与步骤A同样的方式，按照肽序列 Pyr-His (Trt)-Trp-Ser-Tyr (Bzl)-D-Ser (tBu) - Leu-Arg (NO2)-Pro-OH 使用偶联剂逐步偶联保护氨基酸，得到布舍瑞林-CTC树脂，所述保护氨基酸是指N端采用Fmoc保护的氨基酸； C、在以体积计0.5~3.5%三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液里将步骤B得到的布舍瑞林-CTC树脂进行裂解，得到全保护肽； D、步骤C得到的全保护肽经过乙胺化、氢化、脱保护与纯化步骤后得到所述的布舍瑞林。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤A中，使用的偶联剂是DIC/HOBt、PyBOP/HOBt、TBTU/HOBt、HBTU/HOBt 或 HCTU/HOBt。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤B中，偶联时使用的有机碱是N, N-二异丙基乙胺。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤B中，利用以体积计10~30%哌啶在N，N- 二甲基甲酰胺中的溶液处理除去保护氨基酸中的Fmoc。
5.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于在步骤B中，所述的Fmoc保护氨基酸是Fmoc-Arg (NO2) -OH> Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Ser (tBu) -OH、Fmoc-Tyr (Bzl) -OH、Fmoc-Trp-OH、Fmoc-Ser-OH、Fmoc-His (Trt) -OH 或 Pyr-OH。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤C中，所述的裂解是使用以体积计1.5%~2.5%三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液在温度25~35°C的条件下进行的。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在步骤D中，在催化剂PyBOP的存在下，在温度25~350C的条件下，按照全保护肽、PyBOP与NH2Et.HCl的摩尔比1: 1.4~1.6:1.4~1.6，让步骤C得到的全保护肽与乙胺盐酸盐进行乙胺化。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤D中，所述的氢化是在钯碳催化剂存在与5~10大气压的条件下，按照所述中间体、钯碳催化剂与甲酸铵的质量比1:0.8~1.2:0.8~1.2,使用甲酸铵供氢体通过氢化还原或氢转移反应脱除所述的中间体Pyr-His(Trt)-Trp-Ser-Tyr (Bzl)-D-Ser (tBu)-Leu-Arg(NO2)-Pro-NHEt 中的精氨酸侧链硝基和酪氨酸侧链苄基。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤D中，所述脱保护是Pyr-His(Trt)-Trp-Ser-Tyr-D-Ser (tBu) -Leu-Arg-Pro-NHEt在含有间甲酹的三氟乙酸在二氯甲烧中的溶液里，在温度25~35°C条件下裂解0.5~2小时，选择脱去组氨酸侧链三苯甲基，而保留 D-丝氨酸叔丁基，得到 Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser (tBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt,其中三氟乙酸:间甲酌.(m-Cresol):二氯甲烧的体积比12~18:4~6:76~84。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤D中,所述纯化是Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser (tBu) -Leu-Arg-Pro-NHEt采用HPLC在常规条件下进行纯化,得到高纯度的布舍瑞林 Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser (tBu)-Leu-Arg-Pro-OH,其纯度为纯度为 95 ~98%,收率为25~31%。
【文档编号】C07K1/06GK103936849SQ201410185283
【公开日】2014年7月23日 申请日期:2014年5月5日 优先权日:2014年5月5日
【发明者】王良友, 代涛, 李松涛, 尹志峰, 赵红玲, 高杨 申请人:承德医学院中药研究所