一种d-δ-生育酚的分离提纯方法
【专利摘要】本发明公开了一种d-δ-生育酚的分离提纯方法，将硅胶柱层析和树脂离子交换吸附结合使用，离子交换树脂采用采用CO2进行解析，有效的提高了d-δ-生育酚的收率。该方法对设备要求较低、能耗小、适宜于工业化。
【专利说明】—种d- δ -生育酚的分离提纯方法
【技术领域】
[0001]本发明属于化学工程领域，具体涉及一种d- δ -生育酚的分离提纯方法。
【背景技术】
[0002]天然维生素E是一种混合物，主要由从母育酚衍生而来的四种生育酚同系物组成，包括d- α -生育酚、d- β -生育酚、d- Y -生育酚和d- δ -生育酚，它们都带有饱和的C16侧链，仅在苯环上甲基的数目和位置上存在差异。虽然它们结构极其相似，但生物活性却不相同，分别为d- α -生育酚>d-13 -生育酚>d_ Y -生育酚>d_ δ -生育酹，而抗氧化性则是d- δ -生育酚最高，d- β _、d- Y -和d- δ -生育酚可通过化学转型的方法转化为d- α -生育酚，从而得到高纯度的d- α -生育酚浓缩液。然而，d- δ -生育酚的分离提纯目前少见报道。
[0003]申请号为02137090.7的专利申请涉及一种高含量混合生育酚的提取方法，采用固定床对脱臭馏出物进行酯化和吸附分离法从低生育酚含量的原料中提取含量大于90%混合剩余酚的方法。美国专利US 3122565, US 3402183, US 2005/131240均采用离子交换树脂分离生育酚，得到了高纯度的D- α -生育酚、D- Y -生育酚和D- δ -生育酹，由于各个生育酚同系物结构差异很小，需消耗大量的树脂和溶剂，分离成本太高，无法实现工业化；美国专利 US 4480108,US 4602098,US 4607111 等根据 D-α -生育酚、D-β -生育酚、D-Y -生育酚和D- δ -生育酚的酯类衍生物进行脱酰反应的难易程度不同，采用脱酰反应与色谱分离或蒸馏过程相结合，实现各个生育酚同系物的分离。这类方法并不是直接以生育酚作为分离原料，而且过程较为复杂，因此也不易于工业应用。
【发明内容】
[0004]本发明提供一种d- δ -生育酚的分离提纯方法，该方法对设备要求较低、能耗小、适宜于工业化。
[0005]本发明采用的技术方案为，一种d- δ -生育酚的分离提纯方法，具体包括以下步骤:
[0006](I)称取一定量的混合生育酚浓缩液，按1:1?2 (m/v)加入非极性或低极性溶剂，加热至全溶；
[0007](2)将混合生育酚浓缩液按照硅胶质量的10%?45% wt.转移至硅胶柱上方，使其缓慢流过硅胶柱，待所有溶液被完全吸附到硅胶柱上，加入0.5_1BV(柱体积)非极性或低极性溶剂洗脱，然后再用0.5BV?IBV的3%?5%非极性溶剂或低极性溶剂与极性溶剂的混合洗脱液洗脱柱子，进一步提高混合溶剂的极性，最后加入0.5BV?IBV的8%?10%非极性溶剂或低极性溶剂与极性溶剂的混合洗脱液洗脱柱子；
[0008](3)上述过程中，分段收集洗脱液，根据TLC检测结果合并具有相同组分的洗脱液，洗脱液脱除溶剂后得到富集d- δ -生育酚的浓缩液；
[0009](4)将步骤(3)得到的浓缩液溶解于I?2(m/v)倍体积的溶剂中，转移至碱性阴离子交换树脂柱上进行离子交换吸附，并用CO2进行解析，得到的解析液经分子蒸馏浓缩后得到高含量d-δ-生育酚。
[0010]优选的，步骤(I)中按1:1 (m/v)加入非极性或低极性溶剂。
[0011]优选的，非极性溶剂为正己烷、正庚烷中的一种或两种。
[0012]优选的，低极性溶剂为石油醚。
[0013]优选的，极性溶剂为乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃中的一种或多种。
[0014]优选的，步骤(3)中，加入IBV(柱体积)非极性或低极性溶剂洗脱，然后再用
0.5BV的3%非极性溶剂或低极性溶剂与极性溶剂的混合洗脱液洗脱柱子，进一步提高混合溶剂的极性，最后加入0.5BV的8%非极性溶剂或低极性溶剂与极性溶剂的混合洗脱液洗脱柱子；
[0015]优选的，步骤(4)中的离子交换吸附所采用的溶剂为乙醇或甲醇溶液。
[0016]碱性阴离子交换树脂可以选择现有技术常见的D201、D202等等。
[0017]本发明的样品来源可以来源于食油、水果、蔬菜及粮食，也可以是试验用的混合生育酚浓缩液。样品来源也可以通过制备获得，制备方法:以DD油为原料，通过分子蒸馏和离子交换吸附得到混合生育酚浓缩液，该混合生育酚浓缩液中生育酚的含量可以是25%?90%，然后以此为原料进行本发明d- δ -生育酚的分离提纯方法。
[0018]相比现有技术，本发明具有如下优势:
[0019]将硅胶柱层析和树脂离子交换吸附结合使用，使得d- δ -生育酚的分离和提纯效果更好；
[0020]硅胶柱层析所采用的上柱量以及多种溶剂体系的依次使用，即采用非极性溶剂或低极性溶剂一非极性溶剂或低极性溶剂与极性溶剂的混合洗脱液的梯度洗脱，是发明人经过长期创造性劳动摸索出来的最佳选择，非常有效的提高了 d- δ -生育酚的收率；
[0021]离子交换树脂采用采用CO2进行解析，工艺成熟，能耗小；
[0022]本发明的方法对设备要求较低、适宜于工业化。
【具体实施方式】
[0023]下面结合实施例对本发明作进一步描述:
[0024]实施例1
[0025]称取20g的高含量混合生育酚浓缩液(所述高含量混合生育酚浓缩液通过制备获得，制备方法:以DD油为原料，通过分子蒸馏和离子交换吸附得到混合生育酚浓缩液，该混合生育酚浓缩液中生育酚的含量是30% )，加入20ml正己烷，加热至全溶，将生育酚溶液转移至装有200g硅胶的柱上方，使其缓慢流过硅胶柱，待所有溶液被完全吸附到硅胶柱上，加入IBV (柱体积)正己烷洗脱，然后改用0.5BV的3%四氢呋喃-正己烷混合洗脱液洗脱柱子，然后进一步提高混合溶剂的极性，加入0.5BV的8%四氢呋喃-正己烷混合洗脱液洗脱柱子；上述过程中，分段收集洗脱液，根据TLC检测结果合并具有相同组分的洗脱液，洗脱液脱除溶剂后得到富集d- δ -生育酚的浓缩液，共得浓缩液4.12g，其中总生育酚含量66.71%,d-δ-生育酚相对含量89.3%，收率91.01 % ;将该浓缩液溶解于4.5ml倍体积的乙醇溶液中，转移至碱性阴离子交换树脂柱上进行离子交换吸附，吸附完毕后用CO2进行解析，然后用乙醇洗脱得到解吸液，解吸液脱溶并经分子蒸馏后得到2.39g高含量d- δ -生育酚浓缩液，其中总生育酚含量93.6 %，d- δ -生育酚相对含量93.83%，收率85.54%。
[0026]以上实施例显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，而不是以任何方式限制本发明的范围，在不脱离本发明范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的范围内。
【权利要求】
1.一种d- δ -生育酚的分离提纯方法，具体包括以下步骤: (1)称取一定量的混合生育酚浓缩液，按1:1?2 (m/v)加入非极性或低极性溶剂，加热至全溶； (2)将混合生育酚浓缩液按照硅胶质量的10%?45%wt.转移至硅胶柱上方，使其缓慢流过硅胶柱，待所有溶液被完全吸附到硅胶柱上，加入0.5_1BV(柱体积)非极性或低极性溶剂洗脱，然后再用0.5BV?IBV的3%?5%非极性溶剂或低极性溶剂与极性溶剂的混合洗脱液洗脱柱子，进一步提高混合溶剂的极性，最后加入0.5BV?IBV的8%?10%非极性溶剂或低极性溶剂与极性溶剂的混合洗脱液洗脱柱子； (3)上述过程中，分段收集洗脱液，根据TLC检测结果合并具有相同组分的洗脱液，洗脱液脱除溶剂后得到富集d- δ -生育酚的浓缩液； (4)将步骤(3)得到的浓缩液溶解于I?2(m/v)倍体积的溶剂中，转移至碱性阴离子交换树脂柱上进行离子交换吸附，并用CO2进行解析，得到的解析液经分子蒸馏浓缩后得到高含量d-δ-生育酚。
2.根据权利要求1所述的一种d-δ-生育酚的分离提纯方法，其特征在于，步骤(I)中按1:1 (m/v)加入非极性或低极性溶剂。
3.根据权利要求1所述的一种d-δ -生育酚的分离提纯方法，其特征在于，非极性溶剂为正己烷、正庚烷、石油醚中的一种或两种。
4.根据权利要求1所述的一种d-δ -生育酚的分离提纯方法，其特征在于，低极性溶剂为石油醚。
5.根据权利要求1所述的一种d-δ -生育酚的分离提纯方法，其特征在于，极性溶剂为乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃中的一种或多种。
6.根据权利要求1所述的一种d-δ -生育酚的分离提纯方法，其特征在于，步骤(3)中，加入1BV(柱体积)非极性或低极性溶剂洗脱，然后再用0.5BV的3%非极性溶剂或低极性溶剂与极性溶剂的混合洗脱液洗脱柱子，进一步提高混合溶剂的极性，最后加入0.5BV的8%非极性溶剂或低极性溶剂与极性溶剂的混合洗脱液洗脱柱子。
7.根据权利要求1所述的一种d-δ-生育酚的分离提纯方法，其特征在于，步骤(4)中的离子交换吸附所采用的溶剂为乙醇或甲醇溶液。
【文档编号】C07D311/72GK104230872SQ201410452296
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年9月5日 优先权日:2014年9月5日
【发明者】张源仁, 肖翔, 章生, 魏国华 申请人:宁波大红鹰生物工程股份有限公司