从罗汉果中提取罗汉果甜甙v的方法
【专利摘要】本发明提供了一种从罗汉果中提取罗汉果甜甙Ⅴ的方法，包括以下步骤：1)将罗汉果加入其重量3～6倍的乙醇回流提取3次，每次提取1～2h，合并提取液，过滤，收集滤液备用；2)将滤液浓缩至原体积的1/2～1/3，上大孔吸附树脂柱层析，用酸液洗脱，合并流出液及酸洗液；3)调节流出液和酸洗液pH值至中性，上大孔吸附树脂与硅胶作填充物的层析柱，分别用体积浓度为20％、40％和50％的乙醇洗脱，收集50％的乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即为高纯度罗汉果甜甙Ⅴ。本发明工艺简单，对设备要求低，产品收率高，纯度大，品质好。
【专利说明】从罗汉果中提取罗汉果甜甙V的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物活性成分提取【技术领域】，主要涉及一种从罗汉果中提取罗汉果甜甙V的方法。
【背景技术】
[0002]罗汉果属葫芦科多年生草质藤本植物的果实，是我国南方特有植物，主要产于桂北地区，以广西桂林的罗汉果品质最好。罗汉果味甜、性凉、无毒，具有清肺止咳、润肠通便、清热解毒、祛痰补血，益肝、健脾、促进肠胃功能等功效。罗汉果中含有赛门甙I (sianenoside I )、罗汉果甜式 II E (eogroside II E)、罗汉果甜式III (mogroside III)、罗汉果甜式III E (mogroside III E)、罗汉果甜式IV (ogroside IV )、罗汉果甜式V (mogroside V )、罗汉果甜甙A、罗汉果新甙等葫芦烷素三萜甙类物质，除罗汉果甜甙IV和罗汉果新甙外，均为甜味物质，其中罗汉果甜甙V的甜度最高，相当于蔗糖的300倍，且甜味纯正、无异味、回味感强、热稳定性好，可作为食品、菜肴的甜味剂，是糖尿病人的理想糖代品。
【发明内容】
[0003]本发明要解决的技术问题是提供一种产品收率高、纯度大的从罗汉果中提取罗汉果甜甙V的方法。
[0004]本发明提供的技术方案是一种从罗汉果中提取罗汉果甜甙V的方法，包括以下步骤:
[0005]I)将罗汉果加入其重量3?6倍的乙醇回流提取3次，每次提取I?2h，合并提取液,过滤,收集滤液备用；
[0006]2)将滤液浓缩至原体积的1/2?1/3，上大孔吸附树脂柱层析，用酸液洗脱，合并流出液及酸洗液；
[0007]3)调节流出液和酸洗液pH值至中性，上大孔吸附树脂与硅胶作填充物的层析柱，分别用体积浓度为20^^40%和50%的乙醇洗脱，收集50%的乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即为高纯度罗汉果甜甙V。
[0008]罗汉果中含有大量的蛋白质、葡萄糖和果糖，采用乙醇为溶媒，乙醇不利于蛋白质和果糖的溶解，可以减少杂质的溶出，对后续纯化有益。乙醇体积浓度为45?50%为佳，乙醇浓度过高会对蛋白质产生凝聚作用，使得蛋白质滞留在颗粒的内部孔道中，反而增加罗汉果甜甙的扩散阻力，降低终产品的收率。乙醇浓度过低则杂质含量较大，影响终产品的纯度。
[0009]第一次上大孔吸附树脂柱，由于溶液中的大量的脂溶性成分(叶绿素和油脂)及部分大分子低极性物质更容易被树脂吸收至饱和，采用酸液洗脱，可以将罗汉果甜甙以及少量杂质(盐类、糖类、多酚类物质)洗脱下来，采用PH值为2.5?3.5的酸液可以最大限度将罗汉果甜甙洗脱下来，提高收率。
[0010]第二次上层析柱，采用的是大孔吸附树脂和硅胶的混合填充物，这两种填充物按体积比1:1，并分层放置于层析柱中，大孔吸附树脂在上，硅胶在下，并采用分级解吸的方式，可以将小分子物质(盐类、糖类、多酚类物质)以及罗汉果其他甜味成分除去，得到纯度较高的罗汉果甜甙V。
[0011]上述大孔吸附树脂的型号为D101、AB-8、DM130或LX-22。
[0012]与现有技术相比，本发明工艺简单，对设备要求低，产品收率高，纯度大，品质好。
【具体实施方式】
[0013]以下具体实施例对本发明作进一步阐述，但不作为对本发明的限定。
[0014]实施例1
[0015]I)将100g罗汉果粉碎后加入其重量3倍的45v%乙醇回流提取3次，每次提取lh，合并提取液，过滤，收集滤液备用；
[0016]2)将滤液浓缩至原体积的1/2，上DlOl大孔吸附树脂柱层析，用pH值为2.5的盐酸溶液洗脱，合并流出液及酸洗液；
[0017]3)将体积比为1:1的DlOl大孔吸附树脂与硅胶作填充物分层置于层析柱中，大孔吸附树脂在上，硅胶在下，调节流出液和酸洗液PH值至中性后上柱层析，分别用体积浓度为20 %、40 %和50 %的乙醇洗脱，收集50 %的乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到2.55g高纯度罗汉果甜甙V，为白色粉末，甜味纯正，无涩味，经HPLC检测，成品中罗汉果甜甙V的含量为
95.2%。
[0018]实施例2
[0019]I)将100g罗汉果粉碎，加入其重量6倍的50v%乙醇回流提取3次，每次提取2h，合并提取液，过滤，收集滤液备用；
[0020]2)将滤液浓缩至原体积的1/3，上AB-8大孔吸附树脂柱层析，用pH值为3.5的盐酸溶液洗脱，合并流出液及酸洗液；
[0021]3)将体积比为1:1的AB-8大孔吸附树脂与硅胶作填充物分层置于层析柱中，大孔吸附树脂在上，硅胶在下，调节流出液和酸洗液PH值至中性后上柱层析，分别用体积浓度为20 %、40 %和50 %的乙醇洗脱，收集50 %的乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到2.8Ig高纯度罗汉果甜甙V，为白色粉末，甜味纯正，无涩味，经HPLC检测，成品中罗汉果甜甙V的含量为
96.1%。
[0022]实施例3
[0023]I)将100g罗汉果粉碎，加入其重量4.5倍的48v%乙醇回流提取3次，每次提取
1.5h，合并提取液，过滤，收集滤液备用；
[0024]2)将滤液浓缩至原体积的1/3，上DM130大孔吸附树脂柱层析，用pH值为3的盐酸溶液洗脱，合并流出液及酸洗液；
[0025]3)将体积比为1:1的DM130大孔吸附树脂与硅胶作填充物分层置于层析柱中，大孔吸附树脂在上，硅胶在下，调节流出液和酸洗液PH值至中性后上柱层析，分别用体积浓度为20 %、40 %和50 %的乙醇洗脱，收集50 %的乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到2.62g高纯度罗汉果甜甙V，为白色粉末，甜味纯正，无涩味，经HPLC检测，成品中罗汉果甜甙V的含量为 95.5%。
[0026]实施例4
[0027]I)将100g罗汉果粉碎，加入其重量3倍的50v%乙醇回流提取3次，每次提取lh，合并提取液，过滤，收集滤液备用；
[0028]2)将滤液浓缩至原体积的1/3，上LX-22大孔吸附树脂柱层析，用pH值为2.5的盐酸溶液洗脱，合并流出液及酸洗液；
[0029]3)将体积比为1:1的LX-22大孔吸附树脂与硅胶作填充物分层置于层析柱中，大孔吸附树脂在上，硅胶在下，调节流出液和酸洗液PH值至中性后上柱层析，分别用体积浓度为20 %、40 %和50 %的乙醇洗脱，收集50 %的乙醇洗脱液，浓缩，干燥，得到2.58g高纯度罗汉果甜甙V，为白色粉末，甜味纯正，无涩味，经HPLC检测，成品中罗汉果甜甙V的含量为 95.8%。
【权利要求】
1.从罗汉果中提取罗汉果甜甙V的方法，其特征在于:包括以下步骤: 1)将罗汉果加入其重量3?6倍的乙醇回流提取3次，每次提取1?2h，合并提取液，过滤，收集滤液备用； 2)将滤液浓缩至原体积的1/2?1/3，上大孔吸附树脂柱层析，用酸液洗脱，合并流出液及酸洗液； 3)调节流出液和酸洗液pH值至中性，上大孔吸附树脂与硅胶作填充物的层析柱，分别用体积浓度为20 %、40 %和50 %的乙醇洗脱，收集50 %的乙醇洗脱液，浓缩，干燥，即为高纯度罗汉果甜甙V。
2.根据权利要求1所述的从罗汉果中提取罗汉果甜甙V的方法，其特征在于:步骤1)中，乙醇体积浓度为45?50%。
3.根据权利要求1所述的从罗汉果中提取罗汉果甜甙V的方法，其特征在于:步骤2)和步骤3)中，大孔吸附树脂的型号为D101、AB-8、DM130或LX-22。
4.根据权利要求1所述的从罗汉果中提取罗汉果甜甙V的方法，其特征在于:步骤2)中，酸液的pH值为2.5?3.5。
5.根据权利要求1所述的从罗汉果中提取罗汉果甜甙V的方法，其特征在于:步骤3)中，大孔吸附树脂与硅胶的体积比为1:1。
【文档编号】C07J17/00GK104262446SQ201410522475
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年9月30日 优先权日:2014年9月30日
【发明者】卢照凯, 谢冬养, 周晓青, 钟德品, 梁小珍 申请人:桂林三宝药业有限公司