专利名称:多聚路易斯x糖类及其制备方法
技术领域:
本发明涉及多聚路易斯X糖类及其新的有效的制备方法。本发明尤其涉及二聚至八聚路易斯X衍生物。
糖结合物尤其是糖脂和鞘糖脂在肿瘤诊断和肿瘤治疗领域作为肿瘤相关抗原的生物重要性(如Hakomori(1985)Cancer Res.45,2405)已在化学合成中引起极大兴趣(以上所有物质均为低聚糖)。低聚糖抗原决定簇可用为半抗原,并诱导产生可用于治疗或诊断癌症或癌转移或刺激抗肿瘤细胞之内源性防御的抗体(如Castronovo et al.(1989),J.Natl.Cancer Inst.81(3),212)。
一种已知的肿瘤相关抗原是路易斯抗原X(Lex),其低聚糖成份由Galβ(1→4)〔Fuca→3)〕GlcNAc组成。已知路易斯抗原X是以单体、二聚体和三聚体形式存在的(如Holmes et al.(1987),J.Biol.Chem.262,11331和15649)。
以前合成Lex抗原已集中在各种合成方案,使用不同的合成单位和使用不同的保护基上。因此,其一个例子是使4-0-未保护的葡糖胺受体与半乳糖基供体反应,并在除去3-0保护后将产物连接到岩藻糖残基上(如参见Nicolaou et al.(1990),J.Am.Chem.Soc.112,3693;Nicolaos et al.(1992),J.Am.Chem.Soc.114,3126;Sato et al.(1988),Tetrahedron Lett.29,5297;Sato et al.(1987),Carbohydr.Res.167,197;Hindsgaul et al.(1982),Carbohydr.Res.109,109;Lonn(1985),Carbohydr.Res.139,115;and Classon et al.(1989),J.Carbohydr.Chem.8,543)。另外可通过随后的岩藻糖基化使相应的乳糖胺衍生物发生链增长(如参见Nillson et al.(1987),Glycokonjugate J.4,219,and Nillson et al.(1988).Carbohydr Res.183,183),或者已发展了一种基于叠氮乳糖的合成方案(如参见Bommer et al.(1990),Liebigs Ann.Chem.425)。利用“反向程序”(如Schmidt et al.(1991),Tetrahedren Lett.32,3353)用岩藻糖供体进行α-岩藻糖基化,或利用“腈作用”(如Schmidt et al.(1990),Synlett 694;和Vankar et al.(1991),Tetrahedron Lett.47,9985)借助2-叠氮糖基供体进行β-糖苷键合而作出进一步改进。该方法还可获得很高的立体选择性,尤其是在糖基化步骤中。而这对于维持预期生物活性是必需的。
尽管存在上述最佳化方法,但仍发现,在合成已知四聚、六聚和八聚糖过程中,随着链长增加产率往往明显下降。因此,当将已知方法应用于合成具有与前述相似应用目的的高聚合度低聚糖时,其产率将会更低,效益更差。
总之,当利用已知方法生产三聚、四聚、六聚甚至八聚路易斯X衍生物(即由11、14、20或26个单糖单元组成的低聚糖)时,将不能获得令人满意的产率。
因此,本发明的目的是要对已被证明适用于低级Lex单元的方法进行改进并实现最佳化,以使八糖以上的衍生物也能以可行的合成方法得到。
现已发现,可利用相应的供体和受体单元,通过任何所需的自Lex六糖开始的链增长,制备出多聚路易斯X糖,可作为供体单元的是三氯乙酰亚胺酯(TCAI),可使用的受体单元是带有大空间保护基的糖,尤其是具有多个Lex三糖成分的O-叔丁基二甲基甲硅烷基化合物(OTBS),根据需要还可另外使用有受体的二糖。
根据本发明,所述受体化合物的不同在于存在亚芳基尤其是4,6-O-亚苄基,保护基,特别是在末端半乳糖吡喃糖环上的保护基,从而可易于选择性地进入特定的3-O位置,该位置即决定了糖基受体的性质。
而且发现,可利用得自易于得到的叔丁基二甲基甲硅烷基2-叠氮-4,6-O-亚共基-吡喃葡糖苷或在其它位置被甲硅烷基化和/或亚芳基化的相应2-叠氮吡喃葡糖苷的相应三糖,有效地制备出Lex六糖,这些糖苷同样具有上述方式的保护基,带有提供供体和受体功能的相应性质。
在每种情况下以一次链增长循环计,如此制得的多聚Lex衍生物所具有的立体选择率为90-100%,较好为95-99%,产率为65.85%,优选70-80%。令人惊奇的是,当链长增加,例如由二聚体通过四聚体增长为本发明的八聚路易斯X衍生物时,产率并未下降。即使在链增长更大的情况下(n>7,式Ⅰ,Ⅳ),也能得到类似结果,并可得出这样的结论即利用本发明的方法能够得到更高聚合度的路易斯X糖。
因此,本发明涉及一种由六糖单元开始制备式Ⅰ多聚路易斯X糖的方法
其中X为OC(=NH)CCl3(TCAI)、Z或S,Z为OCH2CH(NHCOCuH2u+1CH(OH)CH=CHCvH2v+1,S为(CH2)qCOOR″,R为OH或Rsg,Rsg为OAC、OBn或OBz,R′为OH,OAC或OPiv,R″为C1-C4烷基,Ac为乙酰基,Bn为苄基,Bz为苯甲酰基,Piv为新戊酰基,n为整数0-7,q为整数4-12,u为整数13-23,v为整数11-17,
其特征在于进行以下各步骤反应(a)将选自式Ⅱ化合物之一且在1-0位置被活化的供体糖单位(Ⅱ〔TCAI/(X)〕)
式Ⅱ中Y为OC(NH)CCl3(TCAI)或W,W为O-叔丁基二甲基甲硅烷基(OTBS)、O-thexyl二甲基甲硅烷基(OTDS)或O-叔丁基二苯基甲硅烷基(OTDPS),R的定义同前,R1为R,Ar为芳基,Me为甲基,K和l为整数0-6,且其中当Y为TCAI时,R1为OAc、OBn或OBz,当Y为W时,R1为OH,用式(V)的受体糖单位(V〔(Y)〕)糖苷化
式Ⅴ中R,Ar,Me和W的定义同前,且m为0-5的整数,以得到具有较高链长的式Ⅱ糖(Ⅱ〔W(X+Y〕),其中X为6、9、12、15、18或21,Y为3、6、9、12、15或18,它们代表了所研究的多糖中单糖成分的数目,且X+Y不大于24;
(b)用相应保护基取代游离OH基,并用TCAI残基取代W残基,转化得到相应的具有更高链长的式Ⅱ供体糖(Ⅱ〔TCAI/(X+Y)〕);
(c)用作为受体的下列式Ⅲ的二糖-其中R和R′的定义同前-使得自(b)的其1-0位已被活化的供体糖糖苷化,
得到式Ⅳ糖〔(X+Y+2)〕,
其中R、R1、Ar、Me和n的定义同前;并(d)将化合物Ⅳ的叠氮基还原为乙酰氨基,裂解掉亚芳基和苄基,并使R和R′残基过乙酰化,用OH基取代配糖乙酰基并反应得到相应的式Ⅰ三氯乙酰亚氨酯(X=TCAI),必要时可对残基X-Z或S进行修饰并除去保护基(R,R′=OH)。
本发明还涉及制备式Ⅱ路易斯X六糖(Ⅱ〔TCAI/W/(X)〕,k=0,l=1,x=6)的方法,其特征在于使带有大空间甲硅烷基保护基的亚芳基-2-叠氮-吡喃葡糖苷,尤其是叔丁基二甲基甲硅烷基2-叠氮-4,6-O-亚苄基-吡喃葡糖苷与相应单糖的三氯乙酰亚氨酯反应,得到式Ⅱ三糖(Ⅱ〔W/(x)〕,k=0,l=0,x=3),并使由此制备出的式(Ⅱ)供体三糖(Ⅱ〔TCAI/(x),x=3)与式V受体三糖(V〔(y)〕,m=0,y=3)相互反应,得到相应的六糖。
利用本发明的方法也可合成新的多聚路易斯X糖,尤其是四聚、六聚和八聚路易斯X抗原。
因此,本发明也涉及具有如上定义的式Ⅰ多聚路易斯X糖,但其中n为整数2-7,条件是当n为2时x可不是其中u=15、v=13的Z,且R和R′可能不是OH。这些糖具体的是
式Ⅰ的四聚路易斯X抗原(n=3),式Ⅰ的六聚路易斯X抗原(n=5)和式Ⅰ的八聚路易斯X抗原(n=7)。
本发明还涉及具有如上定义的式Ⅱ的多聚路易斯X糖,但其中k为1且1为整数1-5,和具有如上定义的式Ⅳ的多聚路易斯X糖,但其中n为整数2-7,以及具有如上定义的式V多聚路易斯X糖,但其中m为整数1-5。
权利要求7至11所述的式Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ和Ⅴ化合物适用于肿瘤诊断及制备用来治疗肿瘤的抗体。这里所说的肿瘤是其表面携带相应的多聚路易斯X抗原的肿瘤。这类肿瘤的例子包括胃肠道肿瘤、乳腺癌、卵巢癌、肝癌以及胃或胰腺癌。这些抗体是按文献中所述的已知的惯用方法制备的(如参见Harlow,LaneAntibodies,A Laboratory Manual;Cold Spring Harbor 1988)。
因此,本发明最后还涉及将权利要求7-11所述的式Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ和Ⅴ化合物用于制备治疗和诊断肿瘤的抗体。
本上下文中所用缩写的意义如下TCAI 三氯乙酰亚氨OTBS O-叔丁基二甲基甲硅烷基.
TBAF 四丁基氟化铵TMSOTf 三甲基甲硅烷基三氟甲烷磺酸酯DBU 1,8-二氮杂二环〔5.4.0〕十一-7-烯OTDS O-thexyl 二甲基甲硅烷基OTDPS O-叔丁基二苯基甲硅烷基S为间隔基(CH2)qCOOR″,其中R″为C1-C4烷基,且q可设定为所提到的值。这里的烷基可以是直链或支链烷基,具体为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基。优选的R″为甲基或乙基。q较好为6-10,尤其是8。特别优选的间隔基是-(CH2)8COOEt。
Z的定义同上,但优选OCH2CH(NHCOC15H31)CH(OH)CH=CHC13H27(N-脂酰基)。u可假定为数值13-23,优选为15-20,尤其是15。且v可假定为数值11-17,任为13-15,尤其是13。W为大空间甲硅烷基保护基,如OTBS、OTDS或OTDPS。特别优选的是OTBS。Ar为被取代或未被取代的芳基或杂芳基,更好是苯基。因此在特定吡喃半乳糖苷环上的优选保护基是亚苄基。虽然有限制,但除了本发明的亚芳基保护基外,也可使用异亚丙基。
Rsg为保护基团,且为O-乙酰基、O-苄基或O-苯甲酰基。
图1(1.1-1.5)代表了本发明方法中最重要的化合物,其编号与在实施例中的编号相对应。
下面对本发明的方法进行一般性叙述,对与碳水化合物化学中的普通方法相对应的方法步骤,如保护基的引入和脱去不作详细解释,可参看这一方面的标准文献(如T.W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,1981,John Wiley & Sons;Methods in Carbohydrate Chemistry,Vol.Ⅰ-Ⅷ,Academic Press)。
较好利用上下文中所提到的保护基(OAc、OBn、OBz、N3、OPiv)来完成本发明的方法;但也可利用足以适当引入和脱去的其它已知保护基。在上面所提到的文献中对三氯乙酰亚氨一般方法和所限定之低聚糖的合成进行了足够的描述。
本发明之合成方法所需的起始化合物是式(Ⅱ)化合物的糖,由它们可制备出本发明的供体和受体单位(式Ⅴ),且可在重复合成循环中由它们构建聚合链。式Ⅱ叠氮三糖(k=0,l=0)为最小单位。按照本身已知的方法由相应的单糖单位可制备出这些包括吡喃半乳糖、吡喃岩藻糖和吡喃葡糖环在内的中央基本单元,其中较好使用易于获得的叔丁基二甲基甲硅烷基2-叠氮-4,6-O-亚苄基-吡喃葡糖苷作为起始物。但是,在其它处被相应保护的2-叠氮基-吡喃葡糖苷也是适用的。其详细内容可参见实施例1-8。表Ⅰ(A,B)以举例方式对式Ⅱ和Ⅴ的化合物进行了分类。
表Ⅰ(A)Ⅱ〔Y/(X)〕型化合物。Y=TCAI或OTBS;X=单糖单元数;Z=三糖单元数;A=被合成之化合物的编号(实施例编号);Rsg、k和l的定义同前。
Type x/z R1k l AII [OTBS] 3/1 - 0 0 8II [TCAI] 3/1 - 0 0 10II [OTBS] 6/2 OH 0 1 13II [TCAI] 6/2 Rsg0 1 16II [OTBS]1)9/3 OH 1 1 38II [TCAI]1)9/3 Rsg1 1 41II [OTBS]1)12/4 OH 1 2 52II [TCAI]1)12/4 Rsg1 2 55II [OTBS]1)15/5 OH 1 3 -II [OTBS]1)18/6 OH 1 4 -II [OTBS]1)21/7 OH 1 5 -II [OTBS]1)24/8 OH 1 6 -II [OTBS]2)24/8 OH 6 1 -II [OTBS]3)24/8 OH 3 3 -
标记1)的化合物类型涉及的是可由六糖供体和相应受体单位制得的化合物。
如表Ⅰ所示,具有较长链长的供体与相应较短链长的受体糖的结合也是可能的(例如2)在此情况下,21-糖供体与三糖受体相连接;3)两个十二糖相连接。
表Ⅰ(B)V〔(Y)〕型化合物。Y=单糖单元数;Z=三糖单元数;A=合成之化合物的编号(实施例编号),m的定义同前。
Type y/z m AV [OTBS] 3/1 0 12V [OTBS] 6/2 1 51V [OTBS] 9/3 2 -V [OTBS] 12/4 3 -V [OTBS] 15/5 4 -V [OTBS] 18/6 5 -表Ⅱ举例显示了各种式Ⅱ化合物(Ⅱ〔TCAI/OTBS(x)〕)与式V化合物(V〔OTBS(Y)〕)的反应,其中W为OTBS。
括号中的数值表示具体化合物中的单糖单位数;A合成之化合物的编号(实施例编号);B反应条件(表Ⅲ);C预期的产率(%)(±5%);X的定义如前(式Ⅰ)。
起始化合物 产物 A B CII[OTBS(3)] II[TCAI(3)] 10 a 95II[OTBS(3)] V[OTBS(3)] 12 b 90II[TCAI(3)]+V[OTBS(3)] II[OTBS(6)] 13 c 80II[OTBS(6)] II[TCAI(6)] 16 d 95II[TCAI(6)]+III(2) IV(8) 26 c 75IV(8) I[X(8)] 27-37 e-k 75II[TCAI(6)]+V[OTBS(3)] II[OTBS(9)] 38 c 75II[OTBS(9)] II[TCAI(9)] 41 d 90II[TCAI(9)]+III(2) IV(11) 42 c 70IV(11) I[X(11)] 42-49 e-k 75II[OTBS(6)] V[OTBS(6)] 51 b 85II[TCAI(6)+V[OTBS(6)] II[OTBS(12)] 52 c 80II[OTBS(12)] II[TCAI(12)] 55 d 95II[TCAI(12)]+III(2) IV(14) 56 c 75IV(14) I[X(14)] 57-63 e-k 75II[OTBS(9)] V[OTBS(9)] - b 85II[TCAI(9)]+V[OTBS(9)] II[OTBS(18)] - c 80II[OTBS(18)] II[TCAI(18)] - d 90II[TCAI(18)]+III(2) IV(20) - c 80IV(20) I[X(20)] - e-k 75
起始化合物 产物 A B CII[OTBS(12)] V[OTBS(12)] - b 85II[TCAI(12)]+V[OTBS(12)] II[OTBS(24)] - c 75II[OTBS(24)] II[TCAI(24)] - d 90II[TCAI(24)]+III(2) IV(26) - c 70IV(26) I[X(26)] - e-k 75II[OTBS(9)] V[OTBS(9)] - b 85II[OTBS(15)] V[OTBS(15)] - b 80II[OTBS(18)] V[OTBS(18)] - b 80II[OTBS(15)] II[OTBS(15)] - d 95II[OTBS(21)] II[OTBS(21)] - d -II[TCAI(9)]+V[OTBS(3)] II[OTBS(12)] - c 85II[TCAI(6)]+V[OTBS(9)] II[OTBS(15)] - c 85II[TCAI(9)]+V[OTBS(6)] II[OTBS(15)] - c 80II[TCAI(12)]+V[OTBS(3)] II[OTBS(15)] - c 85II[TCAI(6)]+V[OTBS(12)] II[OTBS(18)] - c 80II[TCAI(12)]+V[OTBS(6)] II[OTBS(18)] - c 80II[TCAI(15)]+V[OTBS(3)] II[OTBS(18)] - c 85II[TCAI(6)]+V[OTBS(15)] II[OTBS(21)] - c -II[TCAI(9)]+V[OTBS(12)] II[OTBS(21)] - c -II[TCAI(12)]+V[OTBS(9)] II[OTBS(21)] - c -II[TCAI(15)]+V[OTBS(6)] II[OTBS(21)] - c -II[TCAI(18)]+V[OTBS(3)] II[OTBS(21)] - c -II[TCAI(6)]+V[OTBS(18)] II[OTBS(24)] - c 60II[TCAI(9)]+V[OTBS(15)] II[OTBS(24)] - c 80II[TCAI(15)]+V[OTBS(9)] II[OTBS(24)] - c 80II[TCAI(18)]+V[OTBS(6)] II[OTBS(24)] - c 80II[TCAI(15)]+III(2) IV(17) - c 75II[TCAI(21)]+III(2) IV(23) - c -IV(17) I[X(17)] - e-k 75IV(23) I[X(23)] - e-k 70
表Ⅲ具体列出了表Ⅱ所示的反应条件。除非另有说明,所列出的试剂,尤其是渗剂、催化剂和还原剂均可被碳水化合物化学中是常用的。其它相应的等价物所代替。当使用其中W不为OTBS,Z不为N-酯酰基的式Ⅱ和Ⅴ化合物(u=15,v=13)时,也可应用这些条件。
最好按表中所具体指出的条件并使用实施例中详细叙述的方法完成各个反应步骤。
表Ⅲ反应步骤 试剂/条件a引入TCAI(1) 1)TBAF,2)CCl3CN,DBUb亚芳基化 1)NaOCH3/CH3OH;
2)ArCH(OCH3)2,P-TsOHc糖苷化 CH3CN,TMSOTf(-40℃)d引入TCAI(2) 1)AC2O/吡啶;
2)TBAF,THF;
3)CCl3CN,DBueN3→HNAC转化 1)H2S,吡啶,H2O2)AC2O/吡啶f过乙酰化 1)Pd/C;H2,ACOH/CH3OH二噁烷2)AC2O/吡啶g糖苷OH N2H4×ACOHh引入TCAI(式I) 同a
i引入Z,S S:S-OH,TMSOTf,CH2Cl2Z:(N-酯酰基):
1)2-叠氮-3-苯甲酰氧基-4-十八碳烯-1-醇,CH2Cl2,TMSOTf;
2)H2S,吡啶,H2O;
(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳化二亚胺,C15H31COOHk除去保护基 NaOCH3,CH3OH。
在一优选实施方案中,糖苷化反应(反应C)在腈类溶剂(如乙腈)中进行,这意味着不必再将供体单位制成正位异构纯形式,这通常导致三氯乙酰亚氨的定量合成。反应物料中可便利地加入催化剂。如三甲基甲硅烷基三氟甲烷磺酸酯(TMSOTf),反应温度为-30至-80℃,优选-40℃。
制备具体三氯乙酰亚氨(反应a、d)仅需要极少量的碱(如DBu,0.1-1%),因此不会发生三氯乙酰亚氨的显著异构化作用。
可按照Sato等人的方法(1988,Tetrahedron Lett.29,4097)很容易地合成式Ⅲ的二糖化合物,尤其是化合物25。
可利用所述方法制得结晶形式的六糖13(实施例13),因此特别适于作为易于分离的定量纯中间体以组建多聚糖链。
可根据需要按本身已知的方法用所述间隔基S或路易斯X抗原残基Z取代式Ⅰ化合物的三氯乙酰亚氨残基(反应i,k)。间隔基S最好在催化剂如TMSOTf作用和室温条件下以S-OH形式引入,产率可达75-90%。残基Z最好分两步引入,尤其是当其为N-酯酰基时可通过化合物(2S,3R,4E)-2-叠氮基-3-苯甲酰氧基-4-十八烯-1-醇、棕榈酸和N-(3-二氨基丙基)-N′-乙基-碳化二亚胺(盐酸盐)完成。在完全除去特定多糖部位的保护基后,得到式Ⅰ的相应二聚至八聚路易斯X抗原(n=1-7)。
以下实施例旨在详细说明本发明。
实施例1叔丁基二甲基甲硅烷基2-叠氮基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖苷(1)按Kinzy和Schmidt的方法(Liebigs Ann.Chem.1985,1537-1545)制备化合物1。
实施例2叔丁基二甲基甲硅烷基2-叠氮基-4,6-O-亚苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖苷(2)将苯甲醛二甲基乙缩醛(10.3g,67.5mmol)和对甲苯磺酸(80mg)加到化合物1(14.37g,45mmol)的无水乙腈溶液(350ml)中。于室温下反应1小时后加入无水碳酸钾(2g),并将混合物振荡30分钟。过滤并真空浓缩。残余物经闪蒸色谱纯化〔石油醚/乙酸甲酯(5∶1)〕后得到无色浆状化合物2(17.06g,93%),薄层色谱分析〔石油醚/乙酸甲酯(5∶1)〕Rf=0.34。
实施例32,3,4-三-O-苄基-α/β-L-吡喃岩藻糖(3)按照Dejter-Juszynski和Flowers的方法(Carbohydr.Res.18(1971)219-226)制备化合物3。
实施例40-(2,3,4-三-O-苄基-α/β-吡喃岩藻糖基)-三氯乙酰亚胺(4)将三氯乙腈(10g)和DBU(7滴)加到化合物3(10.0g.23.0mmol)的无水二氯甲烷溶液(50ml)中。30分钟后,真空浓缩浅黄色溶液,并利用短硅胶柱〔石油醚/乙酸甲酯(3∶1)+1%三乙胺〕纯化残余物,以α∶β=1∶4的比例得到无色油状化合物4(11.85g,89%),该化合物逐步固化;薄层色谱分析〔石油醚/乙酸甲酯(3∶1)+1%三乙胺〕,α-三氯乙酰亚胺的Rf=0.76,β-三氯乙酰亚胺的Rf=0.50。以下数值都是使用β-三氯乙酰亚胺测得的〔α〕20=-16.0(C=1,CHCl3)。
实施例5叔丁基二甲基甲硅烷基O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)-2-叠氮基-4,6-O-亚苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖苷(5)于氩气环境下将化合物2(2.93g,7.19mmol)溶于尽可能少的无水乙醚中,并加入0.1M三甲基甲硅烷基三氟甲基磺酸酯溶液(1ml)。在搅拌下缓慢滴加化合物4(6.5g,11.25mmol)在无水乙醚中制成的浓溶液。加完三氯乙酰亚胺后5分钟,用碳酸氢钠(约0.5g)中和混合物,过滤并真空浓缩。经色谱法(用石油醚/乙酸甲酯(7∶1)作为流动相)纯化后得到无色泡沫状的化合物5(5.35g,85%);薄层色谱分析〔石油醚/乙酸甲酯(5∶1)〕Rf=0.54,〔α〕20=-76.0(C=1,CHCl3)。
实施例6叔丁基二甲基甲硅烷基O-(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)-2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖苷(6)用分子筛(4 )搅拌化合物5(10g,12.13mmol)和氰基氢硼化钠(7.6g,121mmol)于无水四氢呋喃(250ml)中制成的溶液,向其中滴加氯化氢的乙醚饱和溶液,直至混合物呈酸性。为进行处理,将固体碳酸氢钠、乙醚(400ml)和饱和碳酸氢钠溶液(100ml)加到反应容器中,并在玻璃棉上过滤该混合物。分离出有机相,真空浓缩并用闪蒸色谱法〔石油醚/乙酸甲酯(6∶1→5.5∶1)〕纯化,得到无色泡沫状化合物6(6.72g,67%);薄层色谱分析〔石油醚/乙酸甲酯(4∶1)〕Rf=0.48,〔α〕20=-30.0(C=2,CHCl3)。
实施例7O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃半乳糖基)-三氯乙酰亚胺(7)按Schmidt、Michel和Roos的方法(Liebigs Ann.Chem.1984,1343-1357)制备化合物7。
实施例8叔丁基二甲基甲硅烷基0-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖苷(8)将受体6(9.0g,10.89mmol)和三氯乙酰亚胺7(10.72g,21.78mmol)溶于最小量乙醚中。搅拌下滴加三甲基甲硅烷基三氟甲烷磺酸酯(0.15ml)的乙醚溶液(4ml)。加完催化剂后20分钟用碳酸氢钠(约2g)中和混合物,过滤并真空浓缩之。经闪蒸色谱法〔甲苯/丙酮(16∶1→15∶1→14∶1)〕纯化后得到化合物8(8.94g,71%)薄层色谱分析〔甲苯/丙酮(10∶1)〕Rf=0.47,〔α〕20=-19.0(C=1,CHCl3)。
实施例92,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖基-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-2叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-α/β-D-吡喃葡糖(9)于-45℃搅拌下将冰醋酸(0.25ml,4.32mmol)加到化合物8(5.0g,4.32mmol)于无水四氢呋喃(50ml)中制成的溶液内,然后向其中滴加1M四丁基氟化铵的四氢呋喃(5ml)溶液。将混合物加温到0℃,并用乙醚(500ml)稀释,然后用饱和氯化钠溶液(3×80ml)洗有机相,经真空浓缩和闪蒸色谱法〔石油醚/乙酸甲酯(5∶4)〕后得到无色泡沫状的化合物9(4.32g,95%);薄层色谱〔石油醚/乙酸甲酯(5∶4)〕Rf=0.36,〔α〕20=-7.5(C=1,CHCl3)。
实施例10O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-α/β-D-吡喃葡糖基-三氯乙酰亚胺(10)将三氯乙腈(10g)和DBU(3滴)加到化合物9(2.19g,2.08mmol)的无水二氯甲烷溶液(100ml)中。15分钟后,真空浓缩混合物,并在硅胶柱上洗脱残余物(以石油醚/乙酸甲酯(3∶2)+1%三乙胺作为流动相),得到α∶β=4∶5的无色泡沫状化合物10(2.47g,100%);对于α-端基异构体,Rf=0.36,〔α〕20=+27.0(C=1,CHCl3);对于β-端基异构体,Rf=0.26,〔α〕20=-24.0(C=1,CHCl3)。
实施例11叔丁基二甲基甲硅烷基O-β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-〔2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖苷(11)将化合物8(4.2g,3.63mmol)溶于无水甲醇(约200ml)中,并加入2M甲醇钠溶液(0.5ml)。将该溶液放置过夜并于第二天用Amberlite RIR 120(Rohm and Haas)中和之。通过离子交换过滤,真空浓缩溶液,并将残余物与甲苯共蒸发两次。定量得到未经进一步纯化即为分析纯的化合物11(3.22g)。薄层色谱分析〔甲苯/丙酮(1∶1)测得Rf=0.6,〔α〕20=-47.0(C=1,CHCl3)。
实施例12叔丁基二甲基甲硅烷基O-(4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖苷(12)将苯甲醛二甲基乙缩醛(1.1g,7mmol)和对甲苯磺酸(200mg)加到化合物11(3.5g,3.5mmol)的无水乙腈(150ml)溶液中,室温下1小时后加入无水碳酸钾(约2g),并将混合物振荡30分钟。过滤及真空浓缩后,在硅胶柱上洗脱残余物,利用石油醚/乙酸甲酯(7∶4→7∶5→7∶6→1∶1)作为流动相。得到无色泡沫状化合物12(3.22g,88%);薄层色谱分析〔石油醚/乙酸甲酯(1∶1)〕Rf=0.46,〔α〕20=-96.0(C=1,CHCl3)。
实施例13叔丁基二甲基甲硅烷基0-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖苷(13)于-40℃将0.05M三甲基甲硅烷基三氟甲烷磺酸酯溶液(0.8ml)滴加到化合物10(4.75g,4.0mmol)和化合物12(4.84g,4.5mmol)的无水乙腈(60ml)溶液中。10分钟后向溶液中加入碳酸氢钠(约0.5g),并将混合物加温至室温。过滤及真空浓缩后,将残余物在一短硅胶柱上以色谱法(利用石油醚/乙酸甲酯(3∶2)作为流动相)纯化。将浓缩后形成的泡沫溶于乙醚(60ml)中并用石油醚(20ml)结晶得到无色结晶产物(6,72g,80%);薄层色谱分析〔甲苯/乙酸甲酯(4∶1)〕Rf=0.38〔α〕20=-56.5(C=1,CHCl3),m.p.=195℃。
实施例14叔丁基二甲基甲硅烷基0-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖苷(14)将化合物13(6.20g,2.95mmol)溶于吡啶/乙酸酐(1∶1,30ml)中并将所得溶液放置过夜。第二天上午进行真空浓缩,并将残余物与甲苯共蒸发两次。经闪蒸色谱〔石油醚/乙酸甲酯(5∶3)纯化后得到化合物14(6.13g,97%),薄层色谱分析〔石油醚/乙酸甲酯(2∶1)〕测到Rf=0.22,〔α〕20=-70.5(C=1,CHCl3)。
实施例15O-(2,3,4,4-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-α/β-D-吡喃葡糖(15)按制备化合物9所述使化合物14(5.83g,2.72mmol)的无水四氢呋喃(50ml)溶液与冰醋酸(0.16ml,2.72mmol)和四丁基氟化铵于四氢呋喃(3.4ml)中的1M溶液反应。借助以石油醚/乙酸甲酯(1∶1→4∶5)为流动相的短硅胶柱进行纯化后得到无色泡沫状化合物15(5.41g,98%);薄层色谱分析〔石油醚/乙酸甲酯(1∶1)〕Rf=0.30,〔α〕20=-55.5(C=1,CHCl3)。
实施例16O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-α/β-D-吡喃葡糖基-三氯乙酰亚胺(16)
将三氯乙腈(20g)和DBU(5滴)加到化合物15(5.41g,2.67mmol)的无水二氯甲烷(150ml)溶液中。30分钟后,真空浓缩混合物,并以闪蒸色谱法〔石油醚/乙酸甲酯(1∶1)+1%三乙胺〕纯化残余物,以α∶β=1∶2的比例得到无色泡沫状化合物16(5.8g,100%)。薄层色谱分析〔石油醚/乙酸甲酯(1∶1)〕α-三氯乙酰亚胺的Rf=0.56,β-三氯乙酰亚胺的Rf=0.62,α-三氯乙酰亚胺的〔α〕20=-46.0(C=1,CHCl3),β-三氯乙酰亚胺的〔α〕20=62.0(C=1,CHCl3)。
实施例17苄基O-(2,4,6-三-O-苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-3,6-二-O-苄基-2-O-新戊酰基-β-D-吡喃葡糖苷(25)按Sato等人的方法(Tetrahedron Lett.29(1988)4097-4100)合成化合物25。
实施例18苄基0-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-3,6-二-O-苄基-2-O-新戊酰基-β-D-吡喃葡糖苷(26)于-40℃将0.05M三甲基甲硅烷基三氟甲烷磺酸酯溶液(0.3ml)滴加到作为α/β混合物的化合物16(1.35g,623mmol)和受体25(1.21g,1.25mmol)的乙腈(5ml)溶液中。当溶液温度变为室温时过滤掉碳酸氢钠。利用石油醚/乙酸甲酯(2∶1→3∶2)作为流动相通过闪蒸色谱法纯化,得到无色泡沫状化合物26(1.37g,74%);经薄层色谱分析〔石油醚/乙酸甲酯(3∶2)〕Rf=0.42,〔α〕20=-71.0(C=1,CHCl3)。
实施例19苄基O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-3,6-二-O-苄基-2-O-新戊酰基-β-D-吡喃葡糖苷(27)使叠氮化合物26(1.37g,416μmol)与硫化氢于吡啶/水混合物(约100ml)中制成的溶液反应30分钟,并将混合物于室温下放置数天。随后在吡啶/乙酸酐(1∶1)中进行N-乙酰基化,再经闪蒸色谱法〔甲苯/丙酮(4∶1→3∶1)〕纯化后得到无色泡沫(1.23g,88%);薄层色谱分析〔甲苯/丙酮(5∶2)〕Rf=0.43,〔α〕20=-44.0(C=1,CHCl3)。
实施例20乙酰基O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-3,6-二-O-乙酰基-2-O-新戊酰基-α/β-D-吡喃葡糖苷(28)于4巴压力的氢气环境下在乙酸、甲醇和二噁烷的1∶1∶1混合物中用钯-活性碳催化剂氢化化合物27(1.34g,406μmol)48小时。从钯-活性碳中倾除掉溶液。用硅藻土过滤,将钯-活性碳于甲醇中悬浮几次,再次倾除掉溶液并过滤。接着在吡啶/乙酸酐(1∶1)中反应,经用甲苯/丙酮/甲醇(11∶6∶0.3→10∶6∶0.3)进行闪蒸色谱纯化后得到白色粉末(769mg,80%);薄层色谱分析〔甲苯/丙酮/甲醇(7∶6∶0.3)〕Rf=0.45,〔α〕20=-35.0(C=1,CHCl3)。
实施例212,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-3,6-二-O-乙酰基-2-O-新戊酰基-α/β-D-吡喃葡糖(29)将过乙酰化化合物28(758mg,320μmol)溶于无水二甲基甲酰胺(20ml)中,并于50℃下加入肼醋酸酯(59mg,640μmol)。30分钟后,用乙酸乙酯(150ml)稀释混合物,并用饱和氯化钠溶液(30ml)洗。水相用乙酸乙酯(2×60ml)萃取。真空浓缩合并的有机萃取物,再经闪蒸色谱法〔甲苯/甲醇(10∶1→9∶1)〕纯化即得到白色粉末状化合物29(670mg,90%);薄层色谱分析〔甲苯/丙酮/甲醇(6∶6∶0.3)〕Rf=0.47,〔α〕20=-37.0(C=1,CHCl3)。
实施例22O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-3,6-二-O-乙酰基-2-O-新戊酰基-α-D-吡喃葡糖基-三氯乙酰亚胺(30)将化合物29(658mg,283μmol)溶于无水二氯甲烷(20ml),并加入三氯乙腈(1ml)和DBU(1滴)。30分钟后,真空浓缩混合物,残余物在短硅胶柱上纯化(利用甲苯/甲醇(10∶1)作为流动相),得到白色粉末(608mg,87%);薄层色谱分析〔甲苯/丙酮/甲醇(7∶6∶0.3)〕Rf=0.48,〔α〕20=-25.5(C=1,CHCl3)。
实施例238-乙氧羰基-辛-1-醇(31)按照Gerlach等人的方法(1978,Heov.Chim.Acta,61(4),(1978)1226)由油酸甲酯合成化合物31。
实施例248-乙氧羰基O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-3,6-二-O-乙酰基-2-O-新戊酰基-β-D-吡喃葡糖苷(32)将三氯乙酰亚胺30(233mg,94.5μmol)和用作间隔基的实施例23化合物(51滴,约0.23mmol)溶于无水二氯甲烷(2ml)中并用分子筛(4
)将溶液搅拌3小时。滴加0.01M三甲基甲硅烷基三氟甲基磺酸酯溶液(0.5ml)。30分钟后,用碳酸氢钠中和混合物,过滤并真空浓缩。经闪蒸色谱法〔甲苯/甲醇(12∶1→10∶1→9∶1)〕纯化得到化合物32(175mg,75%);薄层色谱分析〔甲苯/丙酮/甲醇(7∶6∶0.3)〕Rf=0.47,〔α〕20=-48.0(C=1,CHCl3)。
实施例258-乙氧羰基辛基O-(β-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-〔(α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-β-D-吡喃葡糖苷(33)将化合物32(168mg,68.2μmol)溶于无水甲醇(40ml)中,加入1M甲醇钠溶液(0.5ml)并将混合物于45℃搅拌24小时。用Amberlite RIR120中和后,过滤混合物并真空浓缩。用无水乙醇(100ml)重新溶解残余物,加入0.5M甲醇钠溶液(1ml)并将混合物于45℃下搅拌24小时。用AmberliteRIR120中和后,过滤并真空浓缩后得到一种几乎无色的化合物。可利用填有RP18硅胶的短闪蒸柱分离掉〔以甲醇/水(1∶1)作为流动相〕少量杂质,得到乙氧羰基辛-1-基-二聚路易斯X(105mg,90%);薄层色谱分析〔乙酸甲酯/异丙醇/水(3∶3∶2)〕测得Rf=0.43,RP8薄层色谱分析〔甲醇/水(1∶1)〕Rf=0.37,〔α〕20=-57.0(C=1,MeOH)。
实施例26(2S,3R,4E)-2-叠氮基-3-甲酰氧基-4-十八烷-1-醇(34)按照Zimmermann的方法(Tetrahedron Lett.27(1986)481;Angew.Chem.98(1986)722)合成化合物34。
实施例27O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-(3,6-二-O-乙酰基-2-O-新戊酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→1)-(2S,3R,4E)-2-叠氮基-3-O-苯甲酰基-4-十八碳烯-1,3-二醇(35)将0.01M三甲基甲硅烷基三氟甲烷磺酸酯溶液(0.3ml)加到三氯乙酰亚胺30(137mg,55.5μmol)和受体34(48mg,111μmol)的无水二氯甲烷溶液(1ml)中,经闪蒸色谱法〔甲苯/甲醇(13∶1→11∶1)〕纯化后得到化合物35(114mg,75%)的白色粉末;薄层色谱分析〔甲苯/丙酮/甲醇(7∶6∶0.3)〕Rf=0.55,〔α〕20=-44.0(C=1,CHCl3)。
实施例28O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-(3,6-二-O-乙酰基-2-O-新戊酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→1)-(2S,3R,4E)-3-O-苯甲酰基-2-十六烷氨基-4-十八碳烯-1,3-二醇(36)使硫化氢通过化合物34(114mg,41.6μmol)在吡啶(10ml)和水(2ml)中制成的溶液。3天后,于20℃高真空条件下浓缩混合物。直接将所得固体残余物溶解于无水二氯甲烷(5ml)中并与棕榈酸(25mg,100μmol)和N-(3-二-甲基氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(E.Merck,Darmstadt,FRG)(29mg,150μmol)反应。18小时后,用二氯甲烷(50ml)稀释混合物,并用水(20ml)洗。真空浓缩有机相。用闪蒸色谱法(甲苯/甲醇(12∶1→11∶1)〕纯化后得到化合物36(105mg,85%)的白色粉末;薄层色谱分析〔甲苯/丙酮/甲醇(7∶6∶0.3)〕Rf=0.55,(α〕20=-35.0(C=1,CHCl3)。
实施例29O-(β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-(β-D-吡喃葡糖基)-(1→1)-(2S,3R,4E)-2-十六烷氨基-4-十八碳烯-1,3-二醇(37)将1M甲醇钠溶液(0.5ml)加到化合物36(100mg,33.7μmol)的无水甲醇(30ml)溶液中,并将混合物于45℃下搅拌24小时。用Amberlite IR120中和,过滤并真空浓缩。将残余物加到RP18硅胶柱上,并用甲醇/水(12∶1→14∶1→16∶1)洗脱。将脱去保护基的鞘糖脂(62mg,90%)溶于水中并冷冻干燥;薄层色谱分析〔正酸甲酯/异丙醇/水(7∶6∶4)〕Rf=0.5,RP8薄层色谱分析〔甲醇/水(9∶1)〕Rf=0.33,〔α〕20=-46.0(C=1,MeOH)。
实施例30叔丁基二甲基甲硅烷基O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖苷(38)于-40℃下将0.05M三甲基甲硅烷基三氟甲烷磺酸酯溶液(0.6ml)滴加到三氯乙酰亚胺16(1.72g,790μmol)(实施例16)和受体12(1.13g,1.05mmol)(实施例12)的无水乙腈(20)溶液中。按常规方法处理混合物,用闪蒸色谱法〔甲苯/丙酮(5∶1→4∶1)〕纯化后得到化合物38(1.73g,71%);薄层色谱分析〔石油醚/乙酸甲酯(4∶3)〕Rf=0.35,〔α〕20=-83.0(C=1,CHCl)。
实施例31叔丁基二甲基甲硅烷基O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖苷(39)用吡啶/乙酸酐(1∶1,10ml)处理化合物38(1.70g,551μmol)24小时。真空浓缩溶液后,将残余物与甲苯共蒸发。经用闪蒸色谱法〔石油醚/乙酸甲酯(4∶3)〕纯化后得到化合物39(1.62g,94%);薄层色谱分析〔石油醚/乙酸甲酯(4∶3)〕Rf=0.35,〔α〕20=-84.0(C=1,CHCl3)。
实施例32O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-α/β-D-吡喃葡糖(40)
如实施例9所述,使化合物39(1.40g,448μmol)的无水四氢呋喃(20ml)溶液与冰醋酸(26μl,448μmol)和1M四丁基氟化铵(1ml)溶液反应。用闪蒸色谱法〔石油醚/乙酸甲酯(4∶5)〕纯化后得到化合物40(1.23g,91%);薄层色谱分析〔石油醚/乙酸甲酯(1∶1)〕Rf=0.23,〔α〕20=-73.0(C=1,CHCl3)。
实施例33O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-α/β-D-吡喃葡糖(41)将三氯乙腈(3.0ml)和DBU(1滴)加到化合物40(980mg,325μmol)的无水二氯甲烷(30ml)溶液中。30分钟后真空浓缩混合物,用闪蒸色谱法〔甲苯/丙酮(5∶1)+1%的三乙胺〕纯化后得到α∶β约为1∶2的三氯乙酰亚胺41(943mg,92%);薄层色谱分析〔甲苯/丙酮(5∶1)〕对于α-三氯乙酰亚胺,Rf=0.22,〔α〕20=-62.0(C=1,CHCl3);对于β-三氯乙酰亚胺,Rf=0.29,〔α〕20=-73.5(C=1,CHCl3)。
实施例34苄基O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-3,6-二-O-苄基-2-O-新戊酰基-β-D-吡喃葡糖苷(42)如实施例18所述,于-40℃将三氯乙酰亚胺41(662mg,210μmol)和受体25(305mg,315μmol)在乙腈(3ml)中反应。经闪蒸色谱〔甲苯/丙酮(8∶1→7∶1)〕得到化合物42(598mg,72%);经薄层色谱分析〔甲苯/丙酮(6∶1)〕Rf=0.34,〔α〕20=-84.0(C=1,CHCl)。
实施例35苄基O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-3,6-二-O-苄基-2-O-新戊酰基-β-D-吡喃葡糖苷(43)如实施例19所述,使硫化氢通过化合物42(591mg,149μmol)于吡啶(40ml)和水(14.5ml)中制成的溶液。然后在吡啶/乙酸酐(1∶1)中进行N-乙酰基化反应,再经用闪蒸色谱法〔石油醚/乙酸甲酯(6∶7→5∶6→4∶5)〕,纯化后得到化合物43(520mg,86%);薄层色谱分析〔石油醚/乙酸甲酯(4∶5)〕Rf=0.52,〔α〕20=-84.0(C=1,CHCl3)。
实施例36
乙酰基O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-3,6-二-O-乙酰基-2-O-新戊酰基-α/β-D-吡喃葡糖苷(44)如实施例20所述,于4巴压力的氢气环境下在乙酸/甲醇/二噁烷(1∶1∶1,30ml)中用钯-活性碳(10%Pd,200mg)催化剂氢化化合物43(346mg,85.5μmol)。经用吡啶/乙酸酐(1∶1)处理并用闪蒸色谱法〔甲苯/丙酮/甲醇(9∶6∶0.3→8∶6∶0.3)〕纯化后得到白色粉状化合物44(214mg,78%),薄层色谱分析〔甲苯/丙酮/甲醇(7∶6∶0.3)〕Rf=0.31,〔α〕20=-45.0(C=1,CHCl3)。
实施例372,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-3,6-二-O-乙酰基-2-O-新戊酰基-α/β-D-吡喃葡糖(45)按实施例21所述,使化合物44(145mg,45.1μmol)与肼乙酸酯(9.2mg,100μmol)在无水二甲基甲酰胺(5ml)中反应,按常规方法处理。经用闪蒸色谱法〔甲苯/丙酮/甲醇(8.5∶6∶0.3→7.5∶6∶0.3)〕纯化后得到化合物45(125mg,87%);薄层色谱分析〔CH2Cl2/MeOH(20∶1)〕Rf=0.10,〔α〕20=-48.0(C=1,CHCl3)。
实施例38O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-3,6-二-O-乙酰基-2-O-新戊酰基-α/β-D-吡喃葡糖基-三氯乙酰亚胺(46)将三氯乙腈(1ml)和DBU(1滴)加到化合物45(114mg,35.8μmol)的无水二氯甲烷(5ml)溶液中。30分钟后,真空浓缩混合物,再经闪蒸色谱法〔CH2Cl2/MeOH(20∶1→17.5∶1→15∶1)〕处理得到化合物46;薄层色谱分析〔甲苯/丙酮/甲醇(7∶6∶0.3)〕Rf=0.31,〔α〕20=-29.5(C=1,CHCl3)。
实施例39O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-3,6-二-O-乙酰基-2-O-新戊酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→1)-(2S,3R,4E)-2-叠氮基-3-O-苯甲酰基-4-十八碳烯-1,3-二醇(47)用分子筛(4A)搅拌三氯乙酰亚胺46(60.4mg,17.7μmol)和受体34(15mg,35.4μmol)的无水二氯甲烷(1ml)溶液。4小时后,滴加5mM三甲基甲硅烷基三氟甲基磺酸酯溶液(0.35ml)。按实施例24进行处理,经用闪蒸色谱法〔甲苯/丙酮/甲醇(10.5∶6∶0.4)〕纯化后得到化合物47(46.5mg,73%);薄层色谱分析〔甲苯/丙酮/甲醇(7∶6∶0.3)〕Rf=0.40,〔α〕20=-53.0(C=1,CHCl3)。
实施例40O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-3,6-二-O-乙酰基-2-O-新戊酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→1)-(2S,3R,4E)-3-O-苯甲酰基-2-十六烷氨基-4-十八碳烯-1,3-二醇(48)使硫化氢通过化合物47(27.6mg,7.63μmol)在吡啶(10ml)和水(2ml)中制成的溶液。3天后于20℃高真空下浓缩混合物。将残余物溶于无水二氯甲烷(2ml)中,并与棕榈酸(5mg,20μmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(5mg,30μmol)反应。按实施例28所述方法处理。经用闪蒸色谱法〔甲苯/丙酮/甲醇(10.5∶6∶0.3)〕纯化后得到化合物48(24.2mg,84%);薄层色谱分析〔甲苯/丙酮/甲醇(7∶6∶0.3)〕Rf=0.40,〔α〕20=-45.0(C=1,CHCl3)。
实施例41O-(β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-α/β-D-吡喃葡糖基-三氯乙酰亚胺(55)将三氯乙腈(10ml)和DBU(1滴)加到化合物54(525mg,131μmol)的无水二氯甲烷(20ml)溶液中。30分钟后,真空浓缩该混合物。经用闪蒸色谱法〔甲苯/丙酮(5∶1→4∶1)+1%三乙胺〕纯化后得到作为α∶β≈1∶2之α/β混合物的化合物55(495mg,91%);Rf=0.47(两种端基异构体)。
实施例48苄基O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-3,6-二-O-苄基-2-O-新戊酰基-β-D-吡喃葡糖苷(56)如实施例18所述,使三氯乙酰亚胺55(389mg,93.9μmol)与受体25(136mg,141μmol)在乙腈(2ml)中于-40℃下反应。经用闪蒸色谱法〔甲苯/丙酮(9∶1→7∶1→6∶1)〕纯化后得到化合物56(358mg,77%);薄层色谱分析〔甲苯/丙酮(5∶1)〕Rf=0.37,〔α〕20=-92.5(C=1,CHCl3)。
实施例49苄基O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖苷(52)于-40℃下将0.05M三甲基甲硅烷基三氟甲基磺酸酯溶液(0.15ml)滴加到三氯乙酰亚胺16(626mg,288μmol)和受体51(727mg,360μmol)(实施例43)的无水乙腈(12ml)溶液中。经常规处理并用闪蒸色谱法〔石油醚/乙酸甲酯(3∶2→5∶4)〕纯化后,得到化合物52(859mg,77%);薄层色谱分析〔石油醚/乙酸甲酯(1∶1)〕Rf=0.63,〔α〕20=-101.0(C=1,CHCl3)。
实施例45叔丁基二甲基甲硅烷基-O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖-(β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-(β-D-吡喃葡糖基)-(1→1)-(2S,3R,4E)-2-十六烷氨基-4-十八碳烯-1,3-二醇(49)将0.2M甲醇钠溶液(0.25ml)加到化合物48(20.6mg,5.45μmol)的无水甲醇(6ml)溶液中,并将混合物于45℃下搅拌24小时。用Amberlite IR 120中和、过滤并真空浓缩。使用RP18硅胶和甲醇/水(9∶1→11∶1→12.5∶1)以色谱法纯化残余物,得到三聚Lex抗原(12.3mg,88%);薄层色谱分析〔乙酸甲酯/异丙醇/水(7∶6∶4)〕Rf=0.23,RP8薄层色谱〔甲醇/水(10∶1)〕Rf=0.42,〔α〕20=-55.0(C=1,MeOH)。
实施例42叔丁基二甲基甲硅烷基O-(β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖苷(50)将化合物13(819mg,390μmol)(实例13)悬浮于无水甲醇(100ml)中。于45℃下滴加1.5M甲醇钠溶液(10滴)。2小时后,用Amberlite IR120处理该澄清溶液并过滤。真空浓缩后得到化合物50(764mg,100%);薄层色谱分析〔甲苯/丙酮(5∶3)〕Rf=0.37,〔α〕20=-82.0(C=1,CHCl3)。
实施例43叔丁基二甲基甲硅烷基O-(4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖苷(51)如实施例12所述,使化合物50(758mg,387μmol)的无水乙腈(SOml)溶液与苯甲醛二甲基乙缩醛(147mg,968μmol)和对-甲苯磺酸(30mg)反应。按常规方法处理所得混合物。用闪蒸色谱法〔石油醚/乙酸甲酯(3∶2→5∶4→1∶1)〕纯化后得到化合物51(627mg,86%);薄层色谱分析〔石油醚/乙酸甲酯(1∶1)〕Rf=0.36〔α〕20=-112.0(C=1,CHCl3)。
实施例44叔丁基二甲基甲硅烷基O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖苷(53)用吡啶/乙酸酐(1∶1,6ml)处理化合物52(579mg,144μmol)24小时。真空浓缩混合物并将残余物与甲苯共蒸发。经用闪蒸色谱法〔石油醚/乙酸甲酯(3∶2→5∶4)〕纯化后得到化合物53(594mg,100%);薄层色谱分析〔石油醚/乙酸甲酯(5∶4)〕Rf=0.40,〔α〕20=-97.0(C=1,CHCl3)。
实施例46O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-α/β-D-吡喃葡糖(54)如实施例9所述,使化合物53(582mg,141μmol)的无水四氢呋喃(10ml)溶液与冰醋酸(8μl,141μmol)和1M四丁基氟化铵(0.3ml)反应。经用闪蒸色谱法(石油醚/乙酸甲酯(1∶1→5∶6→4∶5)纯化后得到化合物54(531mg,94%);薄层色谱分析〔石油醚/乙酸甲酯(4∶5)〕Rf=0.58,〔α〕20=-91.0(C=1,CHCl3)实施例47O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-叠氮基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2-O-乙酰基-4,6-O-亚苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-2-叠氮基-6-O-苄基-2--〔(2,3,4-三-O-苄基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-苄基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-苄基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-3,6-二-O-苄基-2-O-新戊酰基-β-D-吡喃葡糖苷(57)按实施例19所述,使硫化氢通过化合物56(349mg,70.6μmol)在吡啶(40ml)和水(15ml)中制成的溶液。在吡啶/乙酸酐(1∶1)中进行N-乙酰基化反应并用闪蒸色谱法〔石油醚/乙酸甲酯(4∶5→3∶4→2∶3)〕纯化后得到化合物57(305mg,85%);薄层色谱分析〔石油醚/乙酸甲酯(3∶4)〕Rf=0.26,〔α〕20=-55.0(C=1,CHCl3)。
实施例50乙酰基O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-3,6-二-O-乙酰基-2-O-新戊酰基-α/β-吡喃葡糖苷(58)如实施例20所述,于4巴压力的氢气环境下在乙酸/甲醇/二噁烷(1∶1∶1,30ml)中用钯-活性碳(10%Pd,150mg)催化氢化化合物57(300mg,59.0μmol)。经用吡啶/乙酸酐(1∶1)处理并用闪蒸色谱法〔二氯甲烷/甲醇(97∶3→96∶4→95∶5→94∶6)〕纯化后得到化合物58(193mg,81%);薄层色谱分析〔甲苯/丙酮/甲醇(6∶6∶0.3)〕Rf=0.41,〔α〕20=-48.0(C=1,CHCl3)。
实施例512,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-3,6-二-O-乙酰基-2-O-新戊酰基-α/β-D-吡喃葡糖(59)按实例21所述,使化合物58(186mg,46.0μmol)与肼乙酸酯(9.2mg,100μmol)在无水二甲基甲酰胺(6ml)中反应。按常规方式处理该混合物。经用闪蒸色谱法〔二氯甲烷/甲醇(25∶1→20∶1→15∶1)〕纯化后得到化合物59(163mg,88%);薄层色谱分析(CH2Cl2/MeOH(19∶1)〕Rf=0.12,〔α〕20=-53.5(C=1,CHCl3)。
实施例52O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-3,6-二-O-乙酰基-2-O-新戊酰基-α/β-D-吡喃葡糖基-三氯乙酰亚胺(60)将三氯乙腈(1ml)和DBU(1滴)加到化合物59(156mg,38.8μmol)的无水二氯甲烷(6ml)溶液中。30分钟后,真空浓缩该混合物,其残余物用闪蒸色谱法〔二氯甲烷/甲醇(20∶1→17.5∶1→15∶1)〕,纯化后得到作为α∶β=3∶1之α/β混合物的化合物60(141mg,89%);薄层色谱分析〔二氯甲烷/甲醇(16∶1)〕Rf=0.31(两种端基异构体)。
实施例53O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-(3,6-二-O-乙酰基-2-O-新戊酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→1)-(2S,3R,4E)-2-叠氮基-3-O-苯甲酰-4-十八碳烯-1,3-二醇(61)用分子筛(4
)搅拌三氯乙酰亚胺60(134mg,32.8μmol)和受体34(28.2mg,65.6μmol)的无水二氯甲烷(2ml)溶液。6小时后,滴加0.01M三甲基甲硅烷基三氟甲基磺酸酯溶液(0.33ml)。按实施例24所述方法处理之。经用闪蒸色谱法〔二氯甲烷/甲醇(25∶1→22.5∶1→20∶1)〕纯化得到化合物61(110mg,76%);薄层色谱分析〔甲苯/丙酮/甲醇(7∶6∶0.3)〕Rf=0.45,〔α〕20=-54.0(C=1,CHCl3)。
实施例54O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(2,3,4-三-O-乙酰基-α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-6-O-乙酰基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(2,4,6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-(3,6-二-O-乙酰基-2-O-新戊酰基-β-D-吡喃葡糖基)-(1→1)-(2S,3R,4E)-3-O-苯甲酰-2-十六烷氨基-4-十八碳烯-1,3-二醇(62)使硫化氢通过化合物61(104mg,23.7μmol)的吡啶(10ml)和水(2ml)中制成的溶液。3天后,于20℃高真空下浓缩该混合物。将残余物直接溶解于无水二氯甲烷(5ml)中并与棕榈酸(20mg,80μmol)和N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(23mg,120μmol)反应。按实例28所述方法处理并经用闪蒸色谱法〔二氯甲烷/甲醇(25∶1→23∶1→20∶1)〕纯化后得到化合物62(92.3mg,85%);薄层色谱分析〔甲苯/丙酮/甲醇(6∶7∶0.3)〕Rf=0.64,〔α〕20=-47.0(C=1,CHCl3)。
实施例55O-(β-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡糖基)-(1→3)-(β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-〔(α-L-吡喃岩藻糖基)-(1→3)〕-(2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃半乳糖基)-(1→3)-(β-D-吡喃半乳糖基)-(1→4)-(β-D-吡喃葡糖基)-(1→1)-(2S,3R,4E)-2-十六烷氨基-4-十八碳烯-1,3-二醇(63)将1M甲醇钠溶液(0.25ml)加到化合物62(87.5mg,19.1μmol)的无水甲醇(30ml)溶液中,并将混合物于45℃搅拌24小时。用Amberlite
IR中和,过滤并真空浓缩之。利用RP18硅胶和甲醇/水(8∶1→12∶1)→甲醇以色谱法纯化残余物,得到四聚LeX抗原(54.2mg,91%);薄层色谱分析〔二氯甲烷/甲醇/水(7∶7∶2)〕Rf=0.35;RP8薄层色谱分析〔甲醇/水(9∶1)〕Rf=0.32,〔α〕20=-57.5(C=1,MeOH)。
权利要求
1.一种利用六糖单位制备式Ⅰ之多聚路易斯X糖的方法
其中X为OC(=NH)CCl3(TCAI)、Z或S,Z为OCH2CH(NHCOCuH2u+1)CH(OH)CH=CHCvH2v+1,S为(CH2)qCOOR11,R为OH或Rsg,Rsg为OAc,OBn或OBz,R1为OH、OAc或OPivR11为C1-C4烷基,Ac为乙酰基,Bn为苄基,Bz为苯甲酰基,Piv为新戊酰基,n为整数0-7,q为整数4-12,u为整数13-23,v为整数11-17,其特征在于进行以下各步骤反应(a)将选自式Ⅱ化合物之一的其1-O-位被活化的供体糖单位(Ⅱ[TCAI/(X)]),
式Ⅱ中Y为OC(=NH)CCl3(TCAI)或W,W为O-叔丁基二甲基甲硅烷基(OTBS),O-thexyl二甲基甲硅烷基(OTDS)或O-叔丁基二苯基甲硅烷(OTDPS),R的定义同前,R1为R,Ar为芳基Me为甲基且k和l为整数0-6,且其中Y为TCAI时,R1为OAc、OBn或OBz,Y为W时,R1为OH,用式V的受体糖单位糖基化
式V中R、Ar、Me和W的定义同前,且m为整数0-5,以得到具有更高链长的式Ⅱ糖(Ⅱ[W(X+Y)]),其中X为6、9、12、15、18或21,且Y为3、6、9、12、15或18,它们代表多糖中的单糖单元数,且X+Y可能不超过24;(b)用相应保护基取代游离OH基且用TCAI残基取代W,使(a)中得到的糖转化为具有更高链长的式Ⅱ的相应供体糖(Ⅱ[TCAI/(X+Y)]);(c)利用式Ⅲ的二糖-其中R和R1的定义同前一作为受体,使得自(b)的1-O-位已被活化的供体糖糖苷化,
得到式Ⅳ[(X+Y+2)]的糖,
其中R、R1、Ar、Me和n的定义同前;和(d)将化合物Ⅳ的叠氮基还原为乙酰氨基,裂解掉亚芳基和苄基并使残基R和R1过乙酰基化,用OH取代糖苷乙酰基并反应得到相应的式Ⅰ三氯乙酰亚胺(X=TCAI),必要时可对残基X-Z或S进行修饰,并除去保护基(R、R1=OH)。
2.根据权利要求1的方法,其特征在于所使用的式Ⅱ化合物中的末端吡喃半乳糖环被乙酰基化。
3.根据权利要求1或2的方法,其特征在于使用新戊酰基化的式Ⅱ化合物(R′=OPiv)。
4.根据权利要求1-3中任一项的方法,其特征在于糖苷化在腈类溶剂中进行。
5.根据权利要求1-4中任一项的方法,其特征在于利用化合物13(图1(1.1))作为六糖单位。
6.根据权利要求1-5中任一项的方法,其特征在于所使用的相应化合物中W为O一叔丁基二甲基甲硅烷基(OTBS),Ar为苯基,u=15且v=13。
7.式Ⅰ的多聚路易斯X糖,其定义如权利要求1,但其中n为整数2-7,条件是当n为2时,X可以不是Z,R和R′可以不是OH。
8.式Ⅰ的四聚路易斯X抗原(n=3);式Ⅰ的六聚路易斯X抗原(n=5);式Ⅰ的八聚路易斯X抗原(n=7)。
9.式Ⅱ的多聚路易斯X糖,其定义同权利要求1,但其中k为1,1为整数1-5。
10.式Ⅳ的多聚路易斯X糖,其定义同权利要求1,但其中n为整数2-7。
11.式Ⅴ的多聚路易斯X糖,其定义同权利要求1,但其中m为整数1-5。
12.制备式Ⅱ六聚路易斯X糖(Ⅱ(TCAI/W/(X)〕,k=0,l=1,X=6)的方法,其特征在于将带有大空间甲硅烷基保护基的2一叠氮基一亚芳基一吡喃葡糖苷与相应单糖的三氯乙酰亚胺反应,得到式Ⅱ的三糖(Ⅱ〔W/(X)〕,k=0,l=0,X=3),然后将由之制得的式Ⅱ(Ⅱ〔TCAI/(X)〕,X=3)供体三糖与式Ⅴ(Ⅴ〔(Y)〕,m=0,y=3)的受体三糖反应,以得到相应的六糖。
13.根据权利要求12的方法,其特征在于其中使用了叔丁基二甲基甲硅烷基2一叠氮基一4,6-O-亚苄基一吡喃葡糖苷。
14.制备式Ⅳ路易斯X糖的方法,其特征在于使式Ⅱ(Ⅱ〔TCAI/(X)〕的供体糖按权利要求1步骤(c)进行反应。
15.制备式Ⅴ之路易斯X糖的方法,其特征在于脱去式Ⅱ(Ⅱ〔W/(X)〕,k=0,l=0)化合物之末端吡喃半乳糖环上的保护基,并使之在4位和6位上亚芳基化,且更好是亚苄基化。
16.根据权利要求1-6中之任一项或权利要求14或15的制备式Ⅰ、Ⅳ和Ⅴ之路易斯X糖的方法,其特征在于所使用的式Ⅱ的六糖是按权利要求12所述方法制得的。
17.用根据权利要求7-11中之任一项所述的式Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ和Ⅴ的化合物制备可用于治疗肿瘤和诊断肿瘤的抗体。
全文摘要
本发明涉及制备有下列结构式之多聚路易斯X糖的方法和制备其相应中间产物的方法,以及新的多聚合路易斯X糖。特别是涉及四聚至八聚路易斯X抗原。可以高产率立体选择性地合成该多聚糖。
文档编号C07H15/04GK1082055SQ93107648
公开日1994年2月16日 申请日期1993年6月30日 优先权日1992年6月30日
发明者R·施米特, A·托普福, W·津泽, J·霍姆伯格 申请人:默克专利股份有限公司