专利名称：14α-羟基-4-雄甾烯-3，6，17-三酮水合晶体及其制备方法
技术领域：
本发明涉及14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮水合晶体及其制备方法。
14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮对人体胎盘产生的雌甾二烯合成酶有抑制作用的生物活性，预计可由它制成抗癌药物。
14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮是一种已知的化合物，可用例如日本专利公告号1－32236(EP－A300062)所公开的方法合成。根据这一方法，将6β，14α－羟基－4－雄甾烯－3，17－二酮溶于氯仿中，並将氧化剂加到溶液中进行反应。反应完成后，过滤混合物，以除去氧化剂，並充分洗涤残留物。然后，除去溶剂，得到粗产物。将这一产物溶于少量的氯仿或甲醇中，将该溶液进行高效液体色谱(HPLC)分离，洗脱和分离出14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17-三酮。
通过从有机溶剂溶液中蒸出溶剂的方法得到14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮晶体。上述专利公开的内容提到，这样得到的晶体是白色的。但严格地说，它是黄色的。
首先以有机溶剂溶液的形式得到，最后从有机溶剂溶液中蒸出溶剂得到的14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮是无水晶体，它具有吸水性，並且由于吸水会变色。所以，该化合物难以在配方步骤中处理，因此用作药物制剂不适宜。
也就是说，14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮无水晶体(下文称为“α型晶体”)在贮存或配方过程中很容易吸水，并增重，而且成稍带淡黄的白色。所以，当使用α型晶体时，会出现称重误差。由它制备的药物的颜色不均匀，各批制剂的颜色有差异。因此，难以得到有恒定质量的药物。所以，本发明的目的是要提供适宜作药物起始制剂的14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮。
由于本发明者进行的深入研究的结果，业已发现，14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮的晶体形式具有多晶型现象，即除了无水晶体外，还存在两种没有吸水性和变色问题的稳定水合晶体，因此完成了本发明。也就是说，本发明提供了14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮水合晶体及其制备方法。本发明的详细内容如下。
根据本发明，提供了用如下衍射图表征的14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮水合物晶体，衍射图中特征X射线Cu Kα的结晶粉末衍射的特征峰出现在衍射角为10.7、14.2、14.8、15.7、16.3和17.8(度)处(下文称为“β型晶体”)。
此外，根据本发明，提供了用如下衍射图表征的14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮水合物晶体，衍射图中特征X射线Cu Kα的结晶粉末衍射特征峰出现在衍射角为7.9、10.7、14.2、15.9和18.5(度)处，(下文称为“γ型晶体”)。
此外，根据本发明，提供了制备β型晶体的方法，其特征是将α型晶体或γ型晶体悬浮在水中。此外，根据本发明，还提供了制备γ型晶体的方法，其特征是在水存在下使14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮从有机溶剂溶液中结晶出来。
图1表示14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮无水晶体(α型晶体)的结晶粉末X射线衍射图。
图2表示14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮的水合晶体(β型晶体)的结晶粉末X射线衍射图。
图3表示14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮的水合晶体(γ型晶体)的结晶粉末X射线衍射图。
图4表示α型晶体的热分析图(DSC(差示扫描量热法))和TG(热重分析)图。
图5表示α型晶体的热分析图。
图6表示γ型晶体的热分析图。
图7表示α型晶体的FT－IR谱图(付里叶变换红外光谱)。
图8表示β型晶体的FT-IR谱图。
图9表示γ型晶体的FT-IR谱图。
本发明的水合晶体用α型晶体作为原料来制备。α型晶体可用以上引述的专利中描述的方法来制得。
也就是说，用特定微生物例如用属于枝顶孢属的FERM P－9143作用于作为底物的4－雄甾稀－3，17－二酮，生成6β，14α－二羟基－4－雄甾烯－3，17－二酮。进一步，使6β，14α－二羟基－4－雄甾烯－3，17－二酮在氧化催化剂存在下反应，制得14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮粗产物。
然后，将该粗产物溶于少量氯仿或甲醇中。将该溶液进行高效液体色谱分离，使用硅胶柱和洗脱溶剂(氯仿∶甲醇＝98∶2)，洗脱和分离出14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮。从分离出的溶液中除去溶剂，制得14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮的α型晶体。该α型晶体有这样的衍射图，其中特征X射线Cu Kα的结晶粉末衍射的特征峰出现在衍射角为12.7、14.5、17.3、17.6、21.1和25.7(度)处。
本发明的β型晶体可用将α型晶体或γ型晶体悬浮在水中的方法来制备，γ型晶体例如可用下文提到的方法由α型晶体制备。悬浮处理最好在0～100℃以及搅拌下进行，通常室温足可作为悬浮温度。水的用量並不重要，可用能足以浸没α型晶体或γ型晶体的水量。通常，水的用量为晶体重量的1～10倍(体积／重量)。悬浮时间可较短，其终止时间由结晶粉末的X射线衍射决定，一般至少1小时，优选至少2小时就足够了。
本发明的β型晶体也可通过α型晶体的潮解，直到水含量达到平衡的方法来制备。潮解处理最好在10℃或更高的温度下以及75％或更高的相对温度下进行，优选的是40～80℃和相对湿度75～100％。具体地说，这一潮解处理通过如下方法来完成将α型晶体存放在装有一无机盐如硝酸钾的饱和水溶液的干燥器中，一直到水含量平衡，不再增重为止。
本发明的β型晶体有这样的衍射图，其中特征X射线Cu Kα的结晶粉末衍射的特征峰出现在衍射角为10.7、14.2、14.8、15.7、16.3和17.8(度)处。这－β型晶体为稍带淡黄的白色粉末，根据尔费歇尔试剂测定水含量的结果和热重量结果，该晶体为单水合物。
本发明的γ型晶体可通过在水存在下使14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮从有机溶剂溶液中结晶出来的方法制得。该有机溶剂溶液可用液体色谱法从合成14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮的反应混合物中分离出含有该化合物的馏分制得，或将已知的α型晶体溶于有机溶剂或含水有机溶剂中的方法制得，含水有机溶剂的水含量不应对该化合物的溶解度有不良影响。
在水存在下从有机溶剂溶液中结晶的方法可通过降低14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮的溶解度来实现，例如通过加水以增加水在有机溶剂溶液中的比例或通过冷却有机溶剂溶液来实现。可使用极性有机溶剂如甲醇、乙醇、丙酮、二噁烷、二甲基亚砜和二甲基甲酰胺作为溶剂。可根据14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮在有机溶剂中的溶解度，来选定水的用量。最好是使水的用量与溶于有机溶剂中的化合物等摩尔或更多。按水和有机溶剂的总量计，水的数量通常是2％(体积)或更多，优选的是3％(体积)或更多，更优选的是4％(体积)或更多。
本发明的γ型晶体有这样的衍射图，其中特征X射线Cu Kα的结晶粉末衍射的特征峰出现在衍射角为7.9、10.7、14.2、15.9和18.5(度)处。象β型晶体一样，该γ型晶体为稍带淡黄的白色粉末，根据用卡尔费歇尔试剂测定水含量的结果和TG结果，该晶体是单水合物。
本发明的β型晶体和γ型晶体都有一些特点，这些特点从以下实施例中进行的稳定性试验结果可清楚看到。它们没有吸水性，甚至当它们在五氧化二磷存在下在干燥器中真空干燥时结晶水也不脱挥。而且它们对热和光是稳定的，也不变色。因此，在配方步骤中可防止称重误差、制剂出现不均匀的颜色以及各批制剂颜色的差异，从而很容易制得均匀质量的药物。所以，它们作为药物的起始制剂是极好的。偶尔，在有些情况下，β型晶体和γ型晶体的结晶粉末X射线衍射的特征峰有一些滑移出现，这与仪器和测量方法有关。但是，有基本上相同峰的晶体都包括在本发明中。
因为当γ型晶体悬浮在水中或在化学动力条件下(如研磨和压缩)转变成β型晶体，所以当在药物制备中需要均匀的晶体形式时，最好使用有最稳定晶体的形式的β型晶体。
用以下实施例详细地说明本发明，但是不应以任何方式把这些实施例作为对本发明的限制。
实施例1将5克α型晶体(水含量1.9％)和10毫升蒸馏水装在30毫升茄型烧瓶中，並在悬浮状态下搅拌2小时。然后，用吸滤的方法从悬浮液中回收晶体，回收的晶体在五氧化二磷存在下真空干燥过夜，得到5.1克稍带淡黄的白色β型晶体(水含量5.4％)。用结晶粉末X射线衍射(Cu Kα)、热分析和付里叶变换红外光谱(FT－IR，测量方法粉末样品的慢反射谱)鉴定β型晶体。用费歇尔水分析仪测量水含量。上述β型晶体的稳定性试验结果示于表1和2。
实施例2在称重的瓶中称取0.501克α型晶体(水含量1.0％)，並在40℃下在装有硝酸钾饱和水溶液的干燥器中贮存4天，得到0.526克稍带淡黄的白色β型晶体。用如实施例1中相同的方法鉴定β型晶体。
实施例3
在滤纸套管中装有10克α型晶体(水含量1.9％)，与300毫升蒸馏水－丙酮(5∶95)一起在加热下回流並用索格利特萃取器连续萃取。冷却后，晶体在烧瓶中沉出，用吸滤的方法回收晶体，回收的晶体在五氧化二磷存在下真空干燥过夜，得到9.7克稍带淡黄的白色γ型晶体(水含量5.4％)。用如实施例1相同的方法鉴定γ型晶体和测量水含量。上述γ型晶体的稳定性试验结果列入表1和2。
实施例4在200毫升茄形烧瓶中装入1克α型晶体(水含量1.9％)並加入54毫升甲醇，加热溶解晶体。加入6毫升蒸馏水，加热回流，然后用冰冷却。用吸滤的方法回收沉淀的晶体，回收的晶体在五氧化二磷存在于真空干燥过液。得到0.8克稍带淡黄的白色γ型晶体。用如实施例1相同的方法鉴定γ型晶体和测量水含量。
表1 晶体的外观和水含量的变化(试验方法将晶体贮存在40℃和相对湿度75％的气氛中)
(注)贮存时间为0天的样品中的水含量用卡尔费歇尔水份仪测量，而以后样品的水含量由重量变化率计算。
表2水合晶体的稳定性 (注)纯度用HPLC测量。
使用本发明的β型晶体和γ型晶体可以很容易制得有均匀含量和均匀颜色的药物，因为它们不会在如上所述的药物制备过程中和从制备到使用过程中由于温度、湿度和光照而变化。
权利要求
1.14α-羟基-4-雄甾烯-3，6，17-三酮水合晶体，它有一个衍射图，其中特征X射线CuKa的结晶粉末衍射的特征峰出现在衍射角为10.7、14.2、14.8、15.7、16.3和17.8(度)处。
2.14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮水合晶体，它有一个衍射图，其中特征X射线CuKα的结晶粉末衍射的特征峰出现在衍射角为7.9、10.7、14.2、15.9和18.5(度)处。
3.一种制备权利要求1的14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮水合晶体的方法，该方法包括将14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮的无水晶体或权利要求2的晶体悬浮在水中。
4.一种制备权利要求2的14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮水合晶体的方法，该方法包括在水存在下从14α－羟基－4－雄甾烯－3，6，17－三酮的有机溶剂溶液中进行结晶。
全文摘要
提供了对人体胎盘产生的雌甾二烯合成酶有抑制作用的生物活性的14α-羟基-4-雄甾烯-3，6，17-三酮的稳定水合晶体。这些水合晶体包括两种在结晶粉末X射线衍射时，某些衍射角有特征峰的衍射图的14α-羟基-4-雄甾烯-3，6，17-三酮水合物晶体。还提供了制备这些水合晶体的方法。
文档编号C07J1/00GK1100101SQ9410558
公开日1995年3月15日 申请日期1994年5月27日 优先权日1993年5月28日
发明者大朏和男, 光信昭一, 今泉义弘, 本多伸吉, 井上谕 申请人:日本化药株式会社, 雪印乳业株式会社