链阳菌素的纯化形式、其制备和含有它的药物组合物的制作方法

专利名称：：链阳菌素的纯化形式、其制备和含有它的药物组合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种链阳菌素的纯化形式，其中含有与以下通式(II)定义的A组链阳菌素的至少一种“小”成分组合的至少一种B组成分。已知的链阳菌素中，1955年第一次分离到原始霉素(RP7293)，一种由始旋链霉菌产生的天然来源抗菌素。以商品名Pyostacine销售的原始霉素主要由原始霉素IA和原始霉素IIA组成。链阳菌素类的另一抗菌素维及尼霉素是从维及尼链霉菌ATCC13161制得的[抗生素与化疗，5,632(1955)]。维及尼霉素(Staphylomycine)主要由S成分和M1成分组成。专利US3325359中描述了含有由抗生素899S成分和M1成分组成的抗生素物质的药物组合物。在专利申请FR2619008中描述了A组的和B组的成分在治疗痤疮中的用途。天然来源的链阳菌素类抗菌素由2类成分的混合物组成B组的成分和A组的成分，每类具有自己的抗菌活性。已证明由这两类成分形成的组合能在提高制菌和杀菌活性方面和在扩大活性谱方面产生协同作用。在Georg-August大学数学与自然科学系博士论文(Gottingen，1979)《作为阳离子经膜输送模型系统的链阳菌素》中、在抗生素III，521(1975)和在C.Cocito微生物学综述145-98(1979)的《维及尼霉素类抗生素含有协同成分的抑制剂》一文中，描述了链阳菌素的A组和B组成分。J.Preud′Homme、P.Tarridec和A.Belloc在法国化学协会杂志2,585(1968)中也描述了天然原始霉素以及组成它的不同成分。纯链阳菌素组合的所有尝试一般都涉及A组的主成分[原始霉素IIA(PIIA)]，认为它是活性和协同作用所必需的。研究还得出该成分引起良好协同作用的重要性EP506561(第2页)。但这些偿试从没获得成功，一方面因为工业制备的困难，特别是因为纯的原始霉素IIA是结晶产品，其生物利用度很低不能设想用作药物的活性成分。从这种产品的工业制备角度来看，用现有技术还不能在制备阶段获得足够纯的形式，不能以足够稳定和可重现的质量进行批量生产，以满足一些国家在注册方面的法规要求。例如，天然原始霉素的工业批量产品经纯化后还含有可达20％的杂质。迄今所进行的纯化努力总是以失败而告终，常常导致各组成分中的一种降解，这是由于许多操作导致不稳定产物中环形结构的打开或A组成分的脱水。由于这一事实，多年来认为纯度的提高是不可能达到的。在1988年，纯化还被认为是一个问题液相色谱杂志，11(11)，2367(1988)。同样在1988年，N.K.SHARMA和M.J.0.ANTEUNIS也表示维及尼霉素各成分的分离和纯化出于分析目的是可能的，但考虑到所遇到的各种困难，对产品的生产来说这种纯化是不可想象的比利时化学协会杂志，97(3)，193(1988)。这种局面造成的结果是原始霉素(Pyostacine)的销售被严格限制在诸如法国和比利时的一些国家中。维及尼霉素(Staphy-lomycine)的情况相同，在人类医疗方法只在有限的几个国家中销售，以及密柑霉素，其销售(限于日本)现已停止。这导致某些人口区失去了对革兰氏阳性球菌严重感染(尤其是耐2，6-二甲氧基苯青霉素的葡萄球菌感染)的一种治疗或失去了对性传染疾病的一种治疗。在抗菌素领域中，医生熟知某些类别的抗生素在使用后会发生过敏或抗药性[新英格兰医学杂志，324(9)，601(1991)]。在对病人的医护中，人们特别认识到了许多种金黄色葡萄球菌抗性菌株。这就是为什么有大范围的不同化学类别的抗生素可供使用对医生特别重要的原因，以便使治疗适应于待治疗的具体病例。一定类别的抗生素不能上市的结果可能是严重的，甚至悲惨的，因为这能造成不能耐受其他类型抗生素的病人无法治疗。另外，已进行的纯化偿试总是以消除链阳菌素小成分为目标，这些小成分被认为是不必要的，甚至是杂质。在天然链阳菌素的A组成分中，原始霉素IIB(PIIB)是一种小成分，其重量比在天然原始霉素中小于10％，通常为8％左右，而在维及尼霉素中为6％左右。作为本发明的目的，现发现由一种或多种通式(I)B组成分和一种或多种通式(II)A组“小”成分构成的组合，由于其体内活性而特别有意义其中A1是下式基团其中R′为氢原子或羟基，Y是氢原子、甲基氨基或二甲氨基，R是乙基或当R′代表氢原子时R还可代表甲基，及R1和R2代表氢原子，或者A1为下式基团R为异丁基，及R1为羟基及R2为甲基；其中R”为氢原子或甲基或乙基。事实上，本发明的组合显示出明显高于天然产物(例如天然维及尼霉素或天然原始霉素)或高于涉及A组主成分之组合的体内生物作用，特别是其具有完全令人满意的生物利用度。另外这种组合可以大规模制备。还可能达到含有6％以下杂质的具有良好活性水平的终产物的纯化、可生物利用的形式。其中R”为乙基以下称为原始霉素IIF(PIIF)的通式(II)产物和其中R”为氢原子以下称为原始霉素IIG(PIIG)的通式(II)产物是新产物，构成链阳菌素的很小量成分，在天然批量产物中其重量比例小于0.5％。最好以10/90到90/10(重量)的比例，优选以20/80到80/20的比例制备本发明的组合。这些组合呈粉末的物理混合状态，但根据本发明的另一方面，呈共沉淀状态；或根据本发明的第三方面，呈如下所定义的共结晶状态。本发明还涉及通过至少一种通式(I)B组成分与至少一种通式(II)定义的A组成分共结晶组合所构成的纯化形式。这种共结晶是以1摩尔通式(I)成分与2摩尔的通式(II)A组成分的恒定化学计量进行的[当成分A为其中A1为(Ia)结构的通式(I)产物时，该化学计量相当于相对重量比例为约43-44/57-56]。本发明的共结晶组合可用作纯化、稳定并具有改善的体内活性以及良好生物利用度的抗菌剂，或作为纯化相应于通式(II)的链阳菌素的一种小成分的方法。实际上，以前从不可能通过结晶纯化通式(II)A组的一种成分；鉴于此，迄今已知的制备通式(II)A组纯化产品的仅有方法是层析方法，未知其他任何方法能够大量分离这些产物。现已证明通过借助于以上定义的共结晶组合可以获得纯态的通式(II)A组成分。含有至少30％的通式(II)A组的一种小成分、溶于一种有机溶剂如酮(例如丙酮、甲乙酮、甲基异丁基酮)、酯(例如乙酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、乙酸异丁酯)、含氯溶剂(例如二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷)、或腈(例如乙腈)并加有通式(I)定义的一种B组成分的粗混合物，产生一种比例如前所定义的共结晶化合物。应理解，要适当地选择所引入的通式(I)化合物的量，以使该物的残余浓度(共结晶后)低于其在介质中的溶解度。还应认识到，起始介质中通式(II)产物和通式(I)产物的相应含量的变化不应引起所得共结晶化合物的改变。将如此获得的共结晶组合溶于溶剂如甲基异丁基酮或二氯乙烷中，并处理成酸性介质(例如用硫酸、氢氯酸)，用诸如已烷的溶剂处理有机相后可获得纯化的、不含B组成分的A组小成分。这种共结晶组合另外还有稳定性大大提高、纯度提高、尤其是易于工业化的优点。应清楚认识到，该方法还可以适用于制备与链阳菌素B组天然化合物的修饰衍生物的共结晶，这些共结晶也落在本发明范围内；同样从这种共结晶制备通式(II)小成分的纯化形式的方法也在本发明的范围之内。本发明的一种优选实施方式涉及原始霉素IB[如上所定义，其中A1代表式(Ia)基团，其中Y为甲基氨基及R′为氢原子，R为乙基]或维及尼霉素S1[如上所定义，其中A1代表式(Ia)基团，其中Y和R′为氢原子，R为乙基]或维及尼霉素S1的和维及尼霉素S4[如上所定义，其中A1如维及尼霉素S1下所定义，R为甲基]的一种混合物与原始霉素IIB[如上通式(II)所定义，其中R”为甲基]的组合，并含有低于6％的杂质，优选低于3％的杂质。本发明的一种优选实施方式还涉及一种由通式(I)所定义的一种链阳菌素B组成分和通式(II)一种A组成分的组合构成的纯化链阳菌素，其中B和A组成分的相对比例为恒定摩尔比1/2左右。按照本发明，至少一种通式(I)链阳菌素B组成分和至少一种通式(II)A组成分的新组合，例如可以通过如上所定义的共结晶化合物的制备来获得。当想要获得不同比例的组合时，可将如此制备的共结晶化合物与事先纯化的至少一种通式(I)成分或与至少一种通式(II)的A组成分以适当的量结合，以获得所希望的比例；或者可以通过共结晶纯化通式(II)的A组成分(或其混合物)，然后以所希望的比例与通式(I)的一种或多种B组成分混合。或者，本发明的组合可以这样制备通过从相应的天然链阳菌素纯化分离B组成分和通式(II)A组成分后，以如上定义的所希望的比例混合纯化的组分。本发明的组合还可以按所希望的比例进行共沉淀将通式(I)和(II)的成分在甲基异丁基酮、在丙酮或二氯甲烷中的溶液[或共结晶和通式(I)或(II)的一种成分的溶液]倒入己烷、环己烷中或水中。按照或通过类似于J.Prend′homme及同事在法国化学协会杂志，第2卷，585(1968)中、在抗生素和化疗，5,632(1955)或7,606(1957)中、在第二次布鲁塞尔色谱学会议，181(1962)中、在抗生素年鉴，728-784(1954-55)中、在美国专利3299047中或在Georg-August大学数学与自然科学系博士论文(Gottingen，1979)《作为阳离子经膜输送模型系统的链阳菌素》中描述的方法或如以下实施例中所述，通过发酵并从发酵液中分离组分来进行A和B组成分的制备和分离。尤其对原始霉素而言，通过将粗链阳菌素悬浮在如乙酸酯(例如乙酸乙酯)的有机溶剂中，然后过滤或离心A组粗组分，并将B组成分萃取在酸性水介质中、再反萃取到二氯甲烷介质中，从而分离A和B组成分。也可以通过酸萃取粗链阳菌素在甲基异丁基酮中的溶液，然后从水相萃取B组成分，通过沉淀从有机相分离A组成分，从而分离A和B组成分。分离后，链阳菌素B组成分的纯化可通过在醇如乙醇、甲醇或异丙醇中、在乙酸酯(例如乙酸异丙酯或乙酸丁酯)中、在酮(例如甲基乙基酮)中或在乙腈中结晶或通过层析来进行。通式(II)A组成分的纯化可通过层析用乙腈-水混合物洗脱来进行。或者，通式(II)和(I)的相应A和B组成分的制备可以如法国专利申请2689518中所述来进行。按以下步骤分别发酵-第一步(非强制性)，对非选择性链阳菌素生产菌进行诱变，及-第二步，筛选选择性微生物。非选择性微生物一般是放线菌和真菌。可用于该方法的起始微生物尤其是选自下面的一种链阳菌素的非选择性生产菌原始霉素、维及尼霉素、密柑霉素、蛎灰菌素、绿灰菌素、春霉素和宜他霉素。例如可使用的非选择性微生物列于下表中。</tables>更具体地讲，是用选自S.alborectus、三鹰链霉菌、始旋链霉菌、蛎灰链霉菌和维及尼链霉菌的微生物进行这种制备的。该制备方法的第一步是修饰非选择性微生物，以便提高其生产抗生素的整体能力，和/或为了让其只合成链阳菌素2种成分中的一种。这可以通过遗传修饰(例如在生物合成途径中相关酶的结构基因中突变，或在使得这些结构基因表达的序列中突变)或生物化学修饰(改变翻译后机制，改变反向抑制机制等)来达到。使用了不同的诱变工具-物理试剂X线、紫外线；或-化学试剂烷基化试剂如甲磺酸乙酯(EMS)、N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(Delic等，突变研究，9(1970)167-182)，或4-硝基喹啉-1-氧化物(NQO)；双烷基化试剂；嵌合剂；或-DNA的所有突变插入系统，特别是转座子、整合性质粒、噬菌体或原噬菌体；或-原生质体融合(Cohen，自然268(1977)171-174)。这些工具(单独或联合)可用于孢子态、出芽孢子态或正在出芽的非选择性微生物，或用于菌丝体。该制备方法还可能要求(随机的或定向的)遗传操作，通过该操作可从非选择性微生物获得能选择性生产链阳菌素一种成分的微生物。该制备方法的第二步涉及选择性微生物的鉴别和分离。这一步尤其可通过一种对某细菌的敏感性试验来实现。存在对链阳菌素A或B组成分特异性敏感的不同细菌例如枯草芽孢杆菌(ATCC6633)、环状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌(Watanabe，抗生素杂志，A系，XIII(1)(1960)62)，或干燥棒杆菌(Watanabe，同前)对B组成分特异性敏感；无乳链霉球菌B96(抗微生物剂和化疗，10(5)(1976)795)、藤黄微球菌(Prikrylova，同前)或藤黄八叠球菌(ATCC9341)对A组成分特异性敏感。通过在对链阳菌素2种成分都敏感的细菌中插入其中一种成分的抗性基因，也可能人为地制备对链阳菌素的一种成分特异性敏感的细菌。一些这样的抗性基因已被克隆(LeGoffic等，抗生素杂志XXX(8)，665(1977)；LeGoff-ic等，巴斯德研究所微生物学年鉴128B.471(1977)；Solh等，微生物病理学，32(5)，362，(1984)，这些基因通过分子生物学常规技术被引入到不同的细菌中。还可以通过借助于A或B成分特异抗体的ELISA试验或通过分析技术如色谱法(液相色谱，薄层色谱等)来实现筛选步骤。在测定对某细菌的敏感性的试验中，另外优选通过色谱定量法使筛选更有效。因而，按照本发明现在可能以工业生产量获得一种链阳菌素的新纯化形式，其杂质率、组成的确定性和稳定性符合注册的法规要求，另外其体内活性和生物利用度提高而毒性较小。这样，这种新组合将能够缓解许多国家对用此类抗菌素治疗的缺乏。一种通式(I)的链阳菌素B组成分和一种通式(II)的链阳菌素A组成分的这种新组合具有特别有益的活性，尤其是对革兰氏阳性菌。口服30-50mg/kg的剂量，它在小鼠体内对金黄色葡萄球菌IP8203显示活性。作为实例，以下给出了通式(I)和(II)成分多种组合在金黄色葡萄球菌IP8203的小鼠实验感染中的口服DC50值。下表I中所研究的组合是用通式(I)和(II)成分在甲基异丁基酮或丙酮中的溶液在己烷中共沉淀制得的。表I<tablesid="table2"num="002"><tablewidth="763">产物(I)/产物II的组合PI(实施例1)/PIIB(实施例18)DC50(mg/kg)口服10/904420/803230/703070/303080/203090/1050</table></tables>下表II中所示组合是如实施例中所述制备的共结晶产物。表II下表III中所述组合是以粉末的物理混合物形式制备的。表III另外，这种新组合没有显示毒性口服150mg/kg(给药2次)在小鼠中没有显示任何毒性迹象。按照本发明，当这种共结晶组合用作通式(II)成分的纯化工具时，通过酸萃取共结晶化合物在酮(如甲基异丁基酮)中的溶液，然后从有机相沉淀提取分离A组成分。给出以下实施例用于非限制性地说明本发明。注意下列实施例中含量是以重量百分含量给出。B组成分的分离和纯化实施例1将30kg原始霉素粗品[原始霉素IA(PIA)20.7％，原始霉素IB(PIB)3.9％，原始霉素IC(PIC)0.6％，原始霉素ID(PID)0.3％，原始霉素IIB(PIIB)8％，原始霉素IIA(PIIA)45％，原始霉素IIF(PIIF)＜0.5％(未定量)，原始霉素IIG(PIIG)＜0.5％，(未定量)]悬浮在210升乙酸乙酯中，室温下搅拌15小时。过滤该悬浮液，收集的乙酸乙酯滤液用2×20升1N硫酸萃取，然后用20升蒸馏水萃取。合并水相，用6×15升乙酸乙酯洗涤，然后通过加入30升10％碳酸氢钠调节pH至7，并用3×30升二氯甲烷萃取。合并二氯甲烷层并用10升蒸馏水洗涤。然后蒸去二氯甲烷，用50升乙醇代替。然后用0.8kgL3S碳黑回流处理该混合物30分钟。过滤并用2×5升乙醇洗涤后，15小时内将混合物冷却至10℃。在10℃保持一小时后，过滤悬浮液并用3×7升乙醇洗涤。固体在40℃减压干燥后得到5.7kg纯化原始霉素I(以下称为PI)。纯度96.8％(PIA81.1％，PIB12％，PIC2.6％，PID1.1％)；PIA的得率74％。将1500g纯化PI重新溶于9升1，2-二氯乙烷中，然后加入1.5当量的琥珀酸酐和0.015当量的二甲氨基吡啶。将该溶液于20℃保持一周，然后上样于含10kg二氧化硅(20-45μm)的柱上(柱高1m；直径20cm)。通过用1，2-二氯乙烷/甲醇的混合物以18升/小时的流速渗滤6小时进行洗脱；在层析过程中甲醇(水中5％的含量)的百分比从0增至4％。收集47份，每份2.4升。合并第5-15份，蒸去1，2-二氯乙烷，用5升乙醇代替。结晶后获得99.8％的PIA365g。实施例2合并实施例1中所述层析的36-39流份，蒸去1，2-二氯乙烷；得到210g固体。将40g这种固体重溶于8升加有10N盐酸8ml的水中。90℃下3小时后用碳酸氢钠中和溶液至pH6.5。用3×1升乙酸乙酯萃取溶液，滤液用2×0.2升水洗涤。用炭黑处理后蒸去乙酸乙酯，加入600ml乙醇。重结晶后得到97％的PIB20g。实施例3合并实施例1中所述层析的22-26流份，蒸去1，2-二氯乙烷；得到139g固体。将该固体重溶于少量1，2-二氯乙烷中，上样于二氧化硅柱。通过用1，2-二氯乙烷/甲醇的混合物以18升/小时的流速渗滤6小时进行洗脱，甲醇的百分比在层析过程中从0增至5％。每2.4升一份收集48份。将38-43流份蒸发，固体重溶于300ml乙醇中。重结晶后得到含40％PIC的PI22g。用二氯甲烷/甲醇(98/2，体积)洗脱在二氧化硅(20-45μm)上进行连续层析，得5g固体，在甲基异丁基酮中搅拌并在乙醇中重结晶后得95％的PIC。实施例4将1000g如实施例1中所述获得的PI溶于最小量氯仿中，在二氧化硅柱(20-45μm)上连续分级纯化。用含2-5％甲醇的氯仿洗脱后，将得到的产物浓缩至干。该产品随后在Diaion树脂柱上用乙腈/水(60/40，体积)混合物渗滤连续通过两次而纯化。用色谱法检查流份。合并含PID的流份并浓缩至干。这样得到约3g含60％PID的产品。通过用溶剂混合物甲基异丁基酮/丙酮/甲酸(体积比40/2/40)进行逆流层析而进一步纯化。将含PID的流份浓缩至干，得到1g含95％PID的固体。实施例5将400gStaphylomycine(片剂形式，原始组成维及尼霉素S1(S1)3.4％，维及尼霉素S4(S4)0.9％)置于4升水中。20℃下搅拌15分钟使药片崩解。加入1升二氯甲烷，继续搅拌1小时。倾出并过滤二氯甲烷相，然后30分钟内倒入5升搅拌下的己烷中。搅拌1小时后过滤该悬液，收集固体并用3×250ml己烷洗涤。干燥后得52g固体，将其悬浮在370ml乙酸乙酯中，20℃下连续搅拌洗涤2次并持续18小时。将每次搅拌洗涤相应的滤液弄干，然后回流下溶于850ml甲醇中。16小时内持续降温至-20℃后，过滤收集固体，用少量甲醇洗涤。将固体于35℃减压干燥后得到9gS成分(维及尼霉素S)。纯度96％(S175.4％，S420.6％)S1成分(维及尼霉素S1)的得率50％。实施例6如以上实施例5中所述得到的S成分1g溶于乙腈达125mg/ml，通过在Nucleosi15C8柱(高25cm，外径2.54cm)上层析经4次操作纯化，每次注射2ml的体积，用水/乙腈60/40(体积)的混合物以7.5ml/分钟的流速洗脱。每次收集120ml含S1成分的流份，共480ml。重复4次层析以处理所有1gS成分。这样收集到约500ml含S1成分的流份。旋转蒸发除去乙腈。水相用3×50ml二氯甲烷萃取。合并二氯甲烷相，用50ml蒸馏水洗涤，在硫酸钠上干燥并过滤。减压下(5mm汞柱)旋转蒸发除去二氯甲烷。这样得到纯度99.6％的S1成分0.67g。A组粗成分的制备实施例7将500g原始霉素粗品[原始霉素IA(PIA)20.7％，原始霉素IB(PIB)3.9％，原始霉素IC(PIC)0.6％，原始霉素ID(PID)0.3％，原始霉素IIB(PIIB)8％，原始霉素IIA(PIIA)45％]溶于50升甲基异丁基酮中。该溶液用由2.5升水和2.5升1N硫酸组成的水相萃取5次，然后用3×10升水洗脱。然后甲基异丁基酮相用35g/升的碳酸氢钠水溶液7.5升处理，再用5升水洗涤。每次将水相与有机相混合、倾析并分离。使所得有机相与750g氧化铝接触，过滤，浓缩至约4升并重溶于5倍体积的己烷中。过滤并干燥所得沉淀。得300g产品，将其悬浮在1升异丙醇中。55℃下搅拌45分钟，于4℃过滤。将过滤后的母液浓缩至干，重溶于500ml甲基异丁基酮，并加入5倍体积的己烷。过滤沉淀，用己烷洗涤并在40℃下减压干燥。得到含36％PIIB、6％PIIA不含PIA的PIIB粗品69g。实施例8如以上实施例7中所得PIIB粗品60g在Nucloosi15C8柱(直径5cm，高30cm)上层析，用水/乙腈60/40洗脱，经多次操作而纯化。这样得到250mg原始霉素IIF(PIIF)。共结晶产物的制备在下列实施例中表明在相同溶剂中共结晶产物的X衍射谱不同于单独B组成分结晶(当存在时)的衍射谱。实施例9将以上实施例7中所得PIIB粗品溶于190ml丙酮中，加入33g纯化PI(PIA81.1％，PIB12％，PIC2.6％，PID1.1％)。20℃搅拌17小时后得到一悬液，4℃过滤，干燥并浓缩。在丙酮中以100g/l重结晶后得到10g白色结晶，其含有55％的PIIB+PIIF+PIIG，43％的PIA+PIB+PIC+PID。实施例10将如以下实施例18中所得的纯化PIIB250mg溶于17ml乙酸乙酯中。加入纯化PI300mg(PIAS1.1％，PIB12％，PIC2.6％，PID1.1％)。20℃下搅拌20小时后，过滤、洗涤并干燥，得到125mg白色结晶。PIIB+PIIF+PIIG的含量56％，其中PIIB54％PIA+PIB+PIC+PID含量43％。实施例11如以下实施例18中所述制得的纯PIIB560mg溶于5ml丙酮，加入480mgPIA(纯度99.8％)。于20℃搅拌20小时，过滤悬浮液。用1ml丙酮洗涤后，于40℃减压(＜1kPa)干燥30小时，得到590mg白色结晶。PIIB+PIIF+PIIG的含量56％；其中PIIB54％PIA的含量43％。回收上述结晶的母液并加入一批新的PIIB560mg。这样PIIB/PIA的质量关系大约为4。搅拌20小时后过滤、洗涤并干燥，得到195mg纯化结晶，其组成与第一批产生的结晶相同。实施例12按以上实施例11所述进行操作，但用480mgPIB(纯度97％)代替PIA，得到820mg白色结晶，其中PIIB+PIIF+PIIG含量为56％(其中PIIB54％)，PIB含量为43％。实施例13如实施例11所述进行操作，但使用4ml丙酮中的680mgPIIB和580mgPIC(纯度95％)，得到315mg白色结晶，其中含PIIB+PIIF+PIIG57％(其中PIIB55％)，含PI42％(其中PIC37％)。实施例14如实施例11所述进行操作，但用480mgPID(纯度95％)代替PIA，得到475mg白色结晶，其中含PIIB+PIIF+PIIG55％(其中PIIB53％)，含PID39％。实施例15如实施例11所述进行操作，但使用4ml丙酮中的450mgPIIB和380mgS成分(S175.4％，S420.6％)，得到550mg白色结晶，其中含有PIIB+PIIF+PIIG58％(其中PIIB56％)，含S成分41％(其中S1为37％)。实施例16如实施例11中所述进行操作，但用480mgS1成分代替PIA，得到750mg白色结晶，其含有PIIB+PIIF+PIIG58％(其中PIIB54％)，含有S1成分41％。实施例17如实施例11中所述进行操作，但使用2ml丙酮中的224mgPIIF和192mg的S成分，得到220mg白色结晶，其中含有PIIF55％，S成分39％(其中S1成分31％，S4成分5％)。实施例9-17产品的X衍射图下表IV中给出了主要谱线的相对强度。在有钴对阴极的PhillipsPW1700衍射仪上进行X衍射图的测定。以15.8的谱线作为参照100。根据谱线的高度估测这些相对值，这些谱线以递减顺序排列。表IVEX.实施例不论是哪种共结晶产物，其X衍射图相似(主要谱线的网间距没有明显不同)。一种A组成分的纯化实施例18将实施例9中所得产品9.3g溶于490ml甲基异丁基酮中。用0.5N硫酸水溶液370ml萃取该溶液2次，然后用2×150ml水洗涤。将有机相浓缩至约80ml，倒入5倍体积的己烷中。过滤所得沉淀，洗涤并干燥。为除去甲基异丁基酮，以100g/l重溶于丙酮中，倾入10倍体积己烷中，洗涤并干燥。得到含纯化PIIB而不再含PI的产品3.5g。含PIIB+PIIF+PIIG约95％，其中PIIB92％。本发明还涉及可用于人类或兽医的药物组合物，其含有作为活性产物的链阳菌素纯化新组合，该组合含有与通式(II)A组成分组合的至少一种链阳菌素B组成分，呈纯态或存在一种或多种相容性且药物上可接受的稀释剂或佐剂。这些药物组合物可通过口服或局部途径使用。这些组合物可含有本发明的粉末物理混合物、共沉淀或共结晶状态的组合。作为口服组合物可使用片剂、胶囊剂、丸剂、冻干粉剂或粒剂。在这些组合物中，本发明的活性成分可与一种或多种隋性稀释剂或佐剂混合，如蔗糖、乳糖或淀粉。这些组合物还可以包含其他物质，如诸如硬脂酸镁的润滑剂。局部应用的组合物例如可以是乳剂、软膏、或洗剂。在人或动物的治疗中，本发明组合物在治疗细菌引起的感染中特别有用，尤其是革兰氏阳性球菌的严重感染葡萄球菌的感染(特别是抗2，6-二甲氧基苯青霉素的葡萄球菌感染)，链球菌感染(特别是抗青霉素和抗大环内酯抗生素的肺炎球菌感染)；它们还对治疗嗜血杆菌、莫拉氏菌M.catarrhalis、淋病奈瑟菌、砂眼衣原体、人支原体、肺炎支原体、尿素原体U.urealyticum引起的感染特别有用。本发明的组合物可特别用于上呼吸道和下呼吸道感染的治疗(例如肺感染的治疗)、皮肤感染的治疗、骨或关节感染的长期治疗、在牙外科和泌尿外科中心内膜炎的治疗或预防、传染性性病的治疗，以及对艾滋病人中突发的细菌或寄生虫性条件感染的治疗以及免疫缺陷病人中葡萄球菌感染的预防。总的说来，医生将根据年龄、体重、感染程度和有关待治疗对象的其他因素确定他认为最合适的剂量。一般对成人口服给药的情况，剂量在0.4-3.5g活性产物之间，每天2次或3次。下列实施例用于非限定性地说明本发明的组合物实施例A按常规技术制备含250mg共结晶PIB/PIIB组合的不透明胶囊。实施例B按常规技术制备含250mg共结晶S成分/PIIB组合的不透明胶囊。实施例C按常规技术制备含384mg活性物质并具有如下组成的片剂-PIB/PIIB(45％/55％)384mg-羟丙基甲基纤维素25mg-硬脂酸镁35mg-硅胶14mg-淀粉加足至700mg实施例D按常规技术制备含384mg活性物质并具有如下组成的片剂-S成分/PIIB(45％/55％)384mg-羟丙基甲基纤维素25mg-硬脂酸镁35mg-硅胶14mg-淀粉加足至700mg权利要求1.一种链阳菌素的纯化形式，其特征在于它由一种或多种通式(I)的链阳菌素B组成分和一种或多种通式(II)的链阳菌素A组小成分的组合构成，呈共结晶状态、共沉淀态或粉末的物理混合物状态其中A1是下式基团其中R′为氢原子或羟基，Y是氢原子、甲基氨基或二甲氨基，R是乙基或当R′代表氢原子时R还可代表甲基，及R1和R2代表氢原子，或者A1为下式基团R为异丁基，及R1为羟基及R2为甲基；其中R”为氢原子或甲基或乙基。2.根据权利要求1的链阳菌素纯化形式，其特征在于它含有少于6％的杂质。3.根据权利要求1或2的链阳菌素纯化形式，它由如权利要求1中所定义的一种或多种链阳菌素B组成分和一种或多种链阳菌素A组成分按10/90～90/10(重量)的比例组合而成，它呈共沉淀态或粉末物理混合物状态。4.根据权利要求1-3之一的链阳菌素纯化形式，它由如权利要求1中所定义的一种或多种链阳菌素B组成分和一种或多种链阳菌素A组成分按20/80～80/20(重量)的比例组合而成，它呈共沉淀态或粉末物理混合物状态。5.根据权利要求1或2的链阳菌素纯化形式，其特征在于它是一种如权利要求1所定义的一种或多种链阳菌素B组成分和一种或多种链阳菌素A组成分的约1/2摩尔比的共结晶化合物。6.权利要求5的共结晶化合物在制备权利要求1-4之一的链阳菌素纯化形式中的应用。7.权利要求5的共结晶化合物在纯化一种如权利要求1中所定义的A组小成分中的应用。8.权利要求1-5之一链阳菌素纯化形式的制备方法，其特征在于如权利要求1中所定义的链阳菌素A组成分与链阳菌素B组成分共结晶，然后必要时将所得共结晶化合物与A或B组的适当成分结合，以获得所需比例的组合。9.权利要求1中定义的链阳菌素A组一种小成分的纯化方法，其特征在于先制备该成分与一种或多种链阳菌素B组成分的共结晶化合物，然后通过酸性介质处理除去B组成分。10.权种要求1中所定义的链阳菌素A组的一种纯化成分，它是借助于权利要求5的共结晶化合物获得的。11.下式的一种链阳菌素A组成分其中R”为氢原子或乙基。12.如权利要求1中所定义的一种或多种链阳菌素A组小成分的用途，其用于制备与一种或多种链阳菌素B组成分或其衍生物的共结晶。13.由权利要求1所定义的一种或多种链阳菌素B组成分或其衍生物和一种或多种链阳菌素A组小成分构成的共结晶化合物。14.一种药物组合物，其特征在于它含有纯态的权利要求1-5之一的链阳菌素纯化形式，或有相容性和药物上可接受的所有稀释剂或佐剂存在。全文摘要由一种或多种通式(I)的链阳菌素B组成分和一种或多种通式(Ⅱ)的链阳菌素A组小成分的组合构成的呈共结晶状态、共沉淀态或粉末的物理混合物状态的链阳菌素纯化形式。其中A文档编号C07K7/54GK1159197SQ94195158公开日1997年9月10日申请日期1994年8月12日优先权日1993年2月17日发明者P·安格,B·伯纳瓦德,A·卡莱特,P·莱夫里申请人:罗纳-布朗克罗莱尔股份有限公司