作为阿朴脂蛋白－b合成抑制剂的新型三唑酮的制作方法

专利名称：：作为阿朴脂蛋白－b合成抑制剂的新型三唑酮的制作方法
技术领域：
：本发明是关于化学式(I)的一组新型化合物，包含有上述化合物的药物组合物，它们的制备以及作为医药治疗高脂血症的应用。近几年来，血胆固醇过多，尤其是与低密度脂蛋白(LDL)及很低密度脂蛋白(VLDL)残余在血浆中浓度增加有关的血胆固醇过多，与过早的动脉粥样硬化的因果关系，已被普遍地接受。不论是医生还是公众意见，都认为，治疗血胆固醇过多症具有有益的治疗效果。有限的几种药物可用于治疗高脂血症。治疗高脂血症的几种基本药剂包括胆酸多价螯合剂，纤维化剂，烟酸和β-羟-β-甲基戊二酸单酰辅酶A-还原酶抑制剂。可能得到的胆酸多价螯合剂，服用不方便，且对胃-肠有副作用，要患者接受是个主要问题。纤维化剂仅限于治疗某些症型的血胆固醇过多症。用烟酸治疗有副作用和毒性问题。近年来用于熟悉的血胆固醇过多症第一线台疗的β-羟-β-甲基戊二酸单酰辅酶A-还原酶抑制剂，有时被禁忌，因为出现肌病和肝中毒。因此，仍然需要新的降脂药，其作用机制有别于上述各种药剂。欧洲专利EP-0,006,711-A，1980年9月9日公布，公开了具有抗真菌作用性质的(4-苯哌嗪-1-基-芳氧甲基-1，3-二氧戊环-2-基)-甲基-1H-咪唑杂环衍生物和-1H-1，2，4-三唑杂环衍生物。1987年7月8日公开的欧洲专利EP-0,228,125-A，公开了具有促进抗微生物性质的[[4-[4-(4-苯基-1-哌嗪基)苯氧甲基]-1，3-二氧戊环-2-基]-甲基]-1H-咪唑和1H-1，2，4-三唑。1988年9月28日公布的欧洲专利EP0,283,992-A，公开了4-[4-[4-[4-[[2-(2，4-二氟苯基)-2-(1H-吡咯基甲基)-1，3-二氧戊环-4-基]-甲氧]苯基]-1-哌嗪基]苯基]三唑酮作为抗微生物药剂。本专利申请的化合物，从结构上(新型的三唑酮部分)，从药理模型上，尤其是它们的阿朴脂蛋白合成抑制剂活性方面，与上述各类化合物是不同的。本发明提供的新型化合物结构式如下其中，R1是C1-10烷基，C3-7环烷基或者是被C3-7环烷基取代的C1-6烷基；R2是氢或C1-6烷基；Alk代表C1-3链烷双基；-A-代表下列化学式的二价基团-CH＝CH-N＝CH-(a)，-N＝CH-N＝CH-(b)，-CH＝N-N＝CH-(c)，-CH＝CH-CH＝N-(d)；上述二价基团中的氢可能被C1-6烷基取代；Ar是未被取代的苯基；被下列取代基中的最多两个取代了的苯基卤素、C1-6烷基或者C1-6烷氧基；未被取代的萘基；或者是被下列取代基中最多两个取代了的萘基卤素、C1-6烷基或C1-6烷氧基；它们的立体化学异构体以及它们的药用的酸加成盐类。如上述定义中那样，术语卤素是指氟、氯、溴和碘；C1-6烷基是定义为含有1-6碳原子的直链或支链的饱和烃基，例如甲基、乙基、丙基、丁基、己基、1-甲基乙基、2-甲基丙基以及类似物；C1-10烷基定义为C1-6烷基及其含有7到10个碳原子的较高的同系物，如庚基、辛基、壬基和癸基以及它们的支链异构体；C3-7环烷基定义为含有3-7个碳原子的饱和环烃基团，如环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基；C1-3链烃二基代表直链或支链的二价烷基，例如，亚甲基、亚乙基亚丙基。上面提到的药用酸加成盐，是指化学式(1)化合物能够形成的，含有治疗活性，无毒的酸加成盐类。用适当的酸处理化学式(I)碱形式的化合物，很方便地制得酸加成盐类。适当的酸包括，例如无机酸如氢卤酸，例如盐酸或氢溴酸；硫酸；硝酸；磷酸以及类似的酸；或者是有机酸如，例如乙酸、丙酸、羟乙酸、乳酸、三聚氰酸、草酸、丙二酸、丁二酸、顺-丁烯二酸、反-丁烯二酸、羟基丁二酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对-甲苯磺酸、环己烷氨基磺酸、水杨酸、对氨基水杨酸。pamoic酸以及类似的酸。上面提到的术语加成盐，也包括化学式(I)化合物及其盐类所能形成的溶剂化物。这种溶剂化物例如是水合物、醇化物以及类似物。相反地，通过加碱处理，能够将盐的形式转变成游离碱形式。前面提到的术语“立体化学异构体形式”，定义为化学式(I)化合物可能具有的所有的异构体形式。除非特别提到或指出，化合物的化学命名指的是所有可能立体化学异构体形式的混合物，所谓混合物，包括该基本分子结构的非对映异构体及对映异构体。更具体地说，立体中心可能有R-或S-构型；在二价环状饱和基团上的取代基，可能有顺式或反式构型。化学式(I)化合物的立体化学异构体显然被包括在本发明的范围之内。化学式(I)的一类化合物也以互变异构形式存在。在上面的化学式里虽然没有直接地指明这种情况，但化学式(I)化合物的互变异构形式，规定也包括在本发明的范围之内。一组感兴趣的化合物是化学式为(I)的一组化合物，其中R1是C1-10烷基。还有一组感兴趣的化合物，是化学式为(I)的化合物，其中R2是氢或甲基。另一组有兴趣的化合物是化学式为(I)的化合物，其中Ar是未被取代的萘基，或是被1或2个卤原子取代的苯基，这两个卤原子最好是氯或氟原子。更加感兴趣的化合物是这些感兴趣的化合物，其中R1是甲基、乙基、丙基或丁基，最好是2-丙基或2-丁基。另一组更加感兴趣的化合物是这些感兴趣的化合物，其中Ar是萘基、4-氯苯基、4-氟苯基、2，4-二氟苯基或2，4-二氯苯基。优选的化合物是顺式-2-[4-[4-[4-[[2-(2，4-二氟苯基)-2-(1H-1，2，4-三唑-1-基-甲基)-1，3-二氧戊环-4-基]甲氧]苯基]-1-哌嗪基]苯基]-2，4-二氢-4-(1-甲基丙基)-3H-1，2，4-三唑-3-酮，或者是它的立体化学异构体形式，或者是它的可药用的酸加成盐。化学式(I)的化合物可以采用化学式(III)的1，3-二氧戊环衍生物来将化学式(II)的酚进行O-烷基化来制备，其中R1和R2所代表的基团与化学式(I)相同，在化学式(III)中，A，Alk和Ar的定义与化学式(I)相同，W代表一个适当的离去基团如卤素，例如氯或溴，或者是磺酰氧基离去基团，例如，4-甲基苯磺酰氧(甲苯磺酸根)或者甲磺酰氧(甲磺酰根)。上面所说的O-烷基化反应，按照已知的工艺，能够很方便地进行，例如将反应物置于适当的溶剂中在碱存在条件下，进行搅拌和加热；这种溶剂如对质子惰性的偶极性溶剂，例如N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺；存在的碱例如是碱金属的氢氧化物或碳酸盐，例如钠和钾的氢氧化物，或者钠和钾的碳酸盐。制备化学式(I)的化合物的另一个方法是将化学式(IV)的中间体进行N-烷基化，化学式(IV)中的A、Alk、Ar和R2的定义同化学式(I)；这里所用的烷基化试剂是化学式(V)的化合物，其中R1定义同化学式(I)中所述，W的定义与上面相同。上面所说的N-烷基化反应，按照已知的工艺，能够很方便地进行，例如将反应物置于适当溶剂中，在碱存在条件下，进行搅拌和加热；这种适当溶剂如对质子惰性的偶极性溶剂，例如N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺；存在的碱，如碱金属的氢氧化物或碳酸盐，例如钠和钾的氢氧化物，或者钠和钾的碳酸盐。化学式(I)的化合物，按照已知的官能团变换工艺，也可能相互转变。前面制备工艺中所用的中间体和起始原料，一些是已知的化合物，另一些可按照已知的制备上述或者相似化合物的制备方法来制备，但仍有另一些化合物是新的。1989年9月6日公布的欧洲专利EP-0,331,232-A介绍了化学式(II)的中间体。欧洲专利EP-0,228,125介绍了化学式(III)的中间体，其中-A-是化学式(a)和(b)的二价基团，Alk是亚甲基，Ar是未被取代的苯基，或者是多达两个卤原子取代的苯基。其中Alk是C2-3链烷双基基团的化学式(III)的中间体是新的。当化学式(III)中，Ar是未被取代的萘基，或者是被多达两个卤原子取代的萘基，二价基团-A-定义同化学式(I)，这种中间体是新型的；以及中间体中-A-二价基团是化学式(d)，Ar定义同化学式(I)，这种中间体是新型的。本发明的化合物抑制阿朴脂蛋白B的合成，阿朴脂蛋白B是很低密度脂蛋白(VLDL)和低密度脂蛋白(LDL)的主要蛋白成分。接近60-70％的总的血清胆固醇在低密度脂蛋白(LDL)中转送。血清中LDL-胆固醇浓度增加，是与动脉粥样硬化的形成相关的。通过抑制阿朴脂蛋白B的合成，有害的低密度脂蛋白的量就减少了。鉴于本发明的化合物具有抑制阿朴脂蛋白-B合成的活性，有降低伴生脂质的活性，这些化合物可以作为医药使用，尤其是用于治疗高脂血症的患者。本发明的化合物可能特别用来制备成药物治疗由于很低密度脂蛋白(VLDL)或低密度脂蛋白(LDL)过剩，而引起的病症，尤其是治疗与上述VLDL和LDL有关联的胆固醇引起的病症。很多遗传的或后天获得性疾病，都能导至高脂血症。高脂血症可划分为原发性或继发性两种。最普遍引起继发性高脂血症的是糖尿病、饮酒过多、滥用药物、甲状腺机能减退、慢性肾衰竭、肾病、胆汁郁积和食欲过盛。原发性高脂血症，一般是血胆固醇过多、有高脂血症的家族史，血胆固醇过多的家族史，其余的高脂血症。乳糜微粒血症，有高甘油三脂家族史。本发明的化合物可能用来预防治疗动脉粥样硬化，尤其是冠状动脉粥样硬化，更普遍地是用采预防和治疗与动脉粥样硬化有关的病症如缺血性心脏病，外周血管疾病和脑血管疾病。本化合物可能使得粥样硬化消退，抑制粥样硬化在临床上产生的恶果，尤其是减少发病率和死亡率。签于本发明的化合物具有抑制阿朴脂蛋白B合成的活性，这些化合物可以制成各种剂型、便于服用。为了制备这些药用组合物，将这些化合物中的某一具体化合物，它的游离碱或酸加成盐的形式，作为活性成分取有效剂量，直接与药用载体混合。上述载体有各种形式，这取决于制备什么样的剂型。这些药物组成希望有统一的剂量，适合于口服、直肠用药或是肠胃外的注射用药。例如，在制备的组合物用于口服剂型时，可能应用任何常用的药用介质，如，例如，水、乙二醇、油脂、醇类以及类似物，用于制备口服液制剂，如悬浮液、糖浆剂、酏剂(甘香酒剂)和溶液；固体载体如淀粉、蔗糖、高岭土、润滑剂、粘合剂、崩解剂以及类似物，用于制备粉剂、丸剂、片剂和胶囊。从服用方便来看，片剂和胶囊是最方便口服剂型，在制备片剂和胶囊时，显然是采用固体药物载体。对于肠胃外给药的组合物，其载体通常包含有无菌水，至少大部分是无菌水，虽然也包括有其它的成分，例如助溶剂。制备注射液，其载体可能是生理盐水、葡萄糖溶液，或者是生理盐水与葡萄糖溶液的混合物。制备注射用悬浮液，可以采用适当的液体载体，助悬剂及类似物。制备用于透过皮肤吸收的组合物，载体任选地包含穿透增强剂和(或)适当的润湿剂，并任选地同适当的少量添加剂结合，这些添加剂对皮肤没有显著损伤。加入上述添加剂，可能有助于皮肤用药，和(或)有助于制备所需要的组合物。这些组合物可能有各种方式用药，例如透过皮肤吸收的膏药，点涂药、油膏。由于化学式(I)化合物的酸加成盐，比相应的游离碱形式，其水溶性增加了，因此更适合于制备含水的药物组合物。将前面提到的药物组合物，制备成方便用药的剂型和统一的剂量，这一点特别有益。本说明书中使用的剂量单位形式是指适合于作为统一剂量的物理上分离的单位，每一单位包含着预先计算好的活性成分的量，活性成分的这个量能产生预期的治疗效果，并含有所需要的药物载体。这种剂量单位形式的例子是片剂(包括刻痕裸核和包衣的片剂)、胶囊、丸剂、袋装粉剂、糯米纸囊剂、注射溶液和悬浮液，茶匙剂量，汤匙剂量以及类似的剂量单位形式，还有这些剂量单位形式的不同的整数倍。熟悉治疗高脂血症中的人员，根据此后的试验结果，能够很容易地测出每日的有效剂量。一般说来，预期治疗的有效剂量是0.001mg/kg体重到5mg/kg体重，较好地是0.01mg/kg体重到0.5mg/kg体重。将每天治疗的有效剂量，分成2、3、4或更多的小剂量，分散在适当的时间间隔用药，这种方式是比较适当的。上面所说的小剂量，可以设计成单位剂量形式，例如，包含0.05到250mg活性成分的单位剂量，尤其是含有0.5到50mg活性成分的单位剂量。精确的剂量和用药的次数取决于所采用的化学式(I)的特定的化合物，病人的特定的症状、病人病情轻重、年龄、体重、病人的一般身体条件，以及病人正在使用的其它药物，这些，对于熟练的技术人员都是知道的。显然，上述的日有效剂量可能增加或减少，这要取决于被治疗的患者的反应，以及使用本发明化合物给病人治病的医生的评价。这里的日有效剂量范围，仅是一般指导。实验部分术语“DIPE”代表二异丙基醚，术语“mlk”代表甲基异丁基酮。A.中间体的制备例1a)将氯化铝(0.3mol)仔细地加入到1，3-二氟苯(0.26mol)中，在搅拌情况下，将混合物加热到50℃。在40℃条件下(在冰浴上冷却)在15分钟期间，滴加0.26mol3-氯丙酰氯，再在50℃下，搅拌混合物。将混合物倒入水(250ml)，冰(250g)和HCl(25ml)中，搅拌20分钟。滤出形成的沉淀后，滤液用CH2Cl2和水萃取，得到40g(75％)的3-氯-1-(2，4-二氟苯基)-1-丙酮(中间产物1)。b)将中间产物(0.2mol)，1，2，4-三唑(1mol)和碳酸钾(165g)置于2-丙酮(500ml)中，搅拌并回流2小时。加水，用水和CH2Cl2萃取。有机相经MgSO4干燥并过滤后，蒸干。残渣用硅胶柱色谱纯化(淋洗剂CH2Cl2/CH3OH，两者比例为100/0，99.5/0.5，99/1，98/2和96/4)。收集纯品部分并蒸发。在2-丙醇中，将残渣转变成盐酸盐(1∶l)。滤出沉淀并在75℃下真空干燥。得到35.6g(65％)1-(2，4-二氟苯基)-3-(1H-1，2，4-三唑-1-基)1-丙酮的单盐酸盐；熔点153.8℃(中间产物2)。c)将中间产物(2)(0.106mol)，1-丁醇(0.15mol)和4-甲基苯磺酸(24g)置于甲苯(500ml)中，搅拌并加热。再加入1，2，3-丙三醇(0.52mol)，将混合物搅拌并回流7小时。将混合物冷却，部分蒸发，溶于CH2Cl2中，用NaHCO3水溶液中和，再用NaHCO3水溶液洗涤一次。分出有机相，用MgSO4干燥，滤掉MgSO4，并蒸发，得到油状31.9g(96％)的(±)-(顺式+反式)-2-(2，4-二氟苯基)-2-[2-(1H1，2，4-三唑-1-基)乙基]-1，3-二氧戊环-4-甲醇(中间产物3)d)将中间产物(3)(0.1mol)，4-甲基苯磺酰氯(0.13mol)和N.N-二甲基-4-吡啶胺(0.5g)置于N，N-二乙基乙胺(20ml)和二氯甲烷(250ml)中，置于冰浴上，搅拌过夜。混合物用水萃取两次，静置分层。合并有机相，加MgSO4干燥，过滤，滤液在室温下蒸发，得到51.3g残渣。此残渣通过硅胶柱层析纯化(淋洗剂为CH2Cl2/CH3OH，98/2)。收集纯的部分并蒸发将部分1在n-C4H9OH中研制。滤出沉淀，用n-C4H9OH和DIPE(二异丙醚)洗涤，室温下干燥，得到23.2g(50％)的(±)反式-2-(2，4-二氟苯基)-2-[2-(1H-1，2，4-三唑-1-基)乙基]1，3-二氧戊环-4-甲醇4-甲基苯磺酸酯(酯)；熔点101.2℃(中间体4)。部分在MIK和DIPE中研制，转变成4-甲基苯磺酸盐(1∶1)，室温下干燥，得到9.6g(21％)的(±)-顺式-2-(2，4-二氟苯基)-2-[2-(1H-1，2，4-三唑-1-基)乙基]-1，3-二氧戊环-4-甲醇4-甲基苯磺酸酯(酯)4-甲基苯磺酸盐(1∶1)(中间产物5)。用相似方法可以制备(±)-反式-2-(4-氯苯基)-2-[2-(1H-1，2，4-三唑-1-基)乙基]-1，3-二氧戊环-4-甲醇4-甲基苯磺酸酯(酯)；熔点为96.7℃(中间体6)。例2a)将1H-1，2，4-三唑-4-胺(44g)，2-溴-1-(1-萘基)乙酮(200g)和乙腈(1000ml)混合物在回流温度下，搅拌3小时。冷却后，滤出沉淀产物，经乙腈洗涤后，真空干燥，得到209g(78.4％)的4-氨基-1-[2-(1-萘基)-2-氧代乙基]-1H-1，2，4-三唑鎓溴化物；熔点170℃(中间体7)。b)将次膦酸溶液(50％)(181g)加入中间体(7)(209g)与盐酸(1636ml)的混合物中。再向混合物中滴加亚硝酸钠(87g溶于299ml水中)水溶液，加完后，在室温下继续搅拌16小时。滤出沉淀产品，用水洗，并溶于水中。混合物再用氢氧化铵处理。滤出产品，并在甲苯中结晶。滤出晶体干燥后得102g(68.2％)的1-(1-萘基)-2-(1H-1，2，4-三唑-1-基)乙酮；熔点为130℃(中间体8)。c)将中间体(8)(102g)，1，2，3-丙三醇(123ml)和甲磺酸(400ml)混合在一起，在60℃下，搅拌24小时。如此获得的混合物滴加到碳酸氢钠(500g)的水和二氯甲烷溶液中。加完后，用二氯甲烷萃取产物。萃取物用水洗，干燥，过滤后，蒸发，残渣在4-甲基-2-戊酮中结晶。滤出产物，干燥，得到50.8g(38.8％)的(顺式+反式)-2-(1-萘基)-2-(1H-1，2，4-三唑-1-基甲基)-1，3-二氧戊环-4-甲醇(中间产物9)。d)将中间产物(9)(0.116mol)和N，N-二甲基-4-吡啶胺(3g)在二氯甲烷(300ml)、乙酸乙酯(300ml)和N，N-二乙基乙胺(100ml)中进行搅拌。再加2-萘磺酰氯(0.15mol)，将混合物搅拌过夜。将混合物倒入水中，并使之分层。有机相被干燥、过滤和蒸干。残渣用硅胶柱色谱纯化〔淋洗剂为(CH2Cl2/CH3OH，96/4)/己烷/EtOAc50/20/30〕。收集纯化了的部分并蒸干。残渣自DIPE/2-丙醇中结晶，得到12.8g(22％)的(±)-顺式-[2-(1-萘基)-2-(1H-1，2，4-三唑-1-基甲基)-1，3-二氧戊环-4-基]甲基2-萘磺酸酯(中间产物10)。用相似方法可以制备(±)-顺-[2-(1H-咪唑-1-基甲基)-2-(1-萘基)-1，3-二氧戊环-4-基]甲基2-萘磺酸酯(中间产物11)例3a)将1H-吡唑(1.3mol)置于4-甲基-2-戊酮(500ml)中所得到的混合物进行搅拌和回流。将1-(2，4-二氟苯基)-2-氯乙酮(0.26mol)溶于4-甲基-2-戊酮(500L)中，滴加到混合物中，并将混合物搅拌和回流3小时。将混合物冷却后倒入水中并分层。有机层被蒸干。残渣在HCl/水中搅拌，滤出，并用水洗涤。再将沉淀在己烷中搅拌，滤出，45℃真空干燥后，得到45g(78％)的1-(2，4-二氟苯基)-2-(1H-吡唑-1-基)乙酮；熔点76.4℃(中间产物12)。b)中间体(12)(0.17mol)和1，23-丙三醇(0.85mol)在甲磺酸(150ml)中的混合物在室温下搅拌48小时，然后再在50℃下搅拌2天。将混合物冷却后倒入饱和的NaHCO3/H2O溶液中，用CH2Cl2萃取有机层被干燥，过滤和蒸干。将残渣(48g)在DIPE中搅拌。滤出沉淀，在60℃真空干燥，得到46.7g(93％)的(±)(顺式+反式)-2-(2，4-二氟苯基)-2-(1H-吡唑-1-基甲基)-1，3-二氧戊环-4-甲醇(中间体13)。将中间体(13)(0.157mol)和N，N-二甲基-4-吡啶胺(5g)在二氯甲烷(500ml)以及N，N-二乙基乙胺(60ml)中所组成的混合物，在10℃下搅拌。将2-萘磺酰氯(0.175mol)分批加入混合物中，并将混合物在室温下搅拌4小时。混合物倒入水中，用CH2Cl2萃取。有机层用水洗涤，干燥、过滤，并蒸干。残渣用硅胶柱层析纯化，(淋洗剂CH2Cl2/CH3OH，99/1)收集第一部分，并蒸干。将残渣置于DIPE中搅拌，过滤。所得沉淀在50℃下真空干燥，得到30g(39％)的(±)-顺式-[2-(2，4-二氟苯基)-2-(1H-吡唑-1-基甲基)-1，3-二氧戊环-4-基]甲基-2-萘磺酸酯；熔点108.8℃(中间产物14)。B.最终化合物的制备例4在搅拌情况下，向2，4-二氢-2-[4-[4-(4-羟苯基)-1-哌嗪基]苯基]-4-丙基-3H1，2，4-三唑-3-酮(5.1g)的二甲亚砜(150ml)溶液中加入50％氢化钠分散体(0.65g)。在50℃下，整个地搅拌到发泡。然后，加入顺-[2-(2，4-二氯苯基)-2-(1H-咪唑-1-基甲基)1，3-二氧戊环-4-基甲基]-甲磺酸酯(5.5g)，并在80℃下，继续搅拌4小时。将反应混合物冷却，倒入水中，产品用二氯甲烷萃取。合并萃取物，用稀氢氧化钠溶液洗涤，干燥、过滤和蒸干。残渣通过硅胶柱层析纯化，淋洗剂是三氯甲烷和甲醇混合物(体积比是98.5∶1.5)。收集纯品部分，并将淋洗液蒸干。残渣自4-甲基-2-戊酮中结晶析出。滤出产物，干燥，得到3.8g(42％)的顺式-2-[4-[4-[4-[2-(2，4-二氯苯基)-2-(1H-咪唑-1-基-甲基)-1，3-二氧戊环-4-基甲氧]苯基]-1-哌嗪基]苯基]-2，4-二氢-4-丙基-3H-1，2，4-三唑-3-酮；熔点177.2℃。表2</tables>表3表4</tables>药理学举例例5阿朴脂蛋白-B(apoB)抑制试验将能够合成和分泌低密度脂蛋白的人工培养的肝细胞(HepG2-细胞)在含有放射性标记的亮氨酸液体介质中，37℃，培育过夜。这样，放射性标记的亮氨酸掺合到阿朴脂蛋白B中。倾析液体介质，通过双免疫沉淀析出法，分离阿朴脂蛋白B，即首先向液体介质中加入阿朴脂蛋白B特异性抗体(抗体1)，接着加入第二个抗体(抗体2)，该抗体选择性地与阿朴脂蛋白B-抗体1-复合物结合。这样形成的阿朴脂蛋白B-抗体1-抗体2复合物沉淀析出，再离心分离。通过测量分离出来的复合物的放射性，可以定量地推算出，培育一夜后合成阿朴脂蛋白B的量。为了测量被试验化合物的抑制活性，可将被试验化合物以不同浓度加入到液体介质中。分别测定加入被试验化合物时阿朴脂蛋白B的浓度〔阿朴脂蛋白B浓度(之后)〕和未加被试验化合物时阿朴脂蛋白B的浓度〔阿朴脂蛋白浓度(对照组)〕，并加以比较。每次实验对于阿朴脂蛋白B生成的抑制率，表达如下对于每个相同浓度进行几次实验后，则可根据这些实验，计算出平均值。同时也计算出IC50值(相对于对照组，阿朴脂蛋白B分泌量减少到50％时所需药物的浓度)。表5</tables>药物组合物举例下面的制剂是关于一些典型的药物组合物的举例，其剂量单位形式适合于按照本发明给一些热血动物系统地或局部地用药。用在下面所有这些例子里的“活性成分”(A.I.)是指化学式(I)的化合物，一种N-氧化物形式，可药用的酸加成盐，或者它的立体化学异构形式。例6口服液将9g4-羟基苯甲酸甲酯和1g4羟基苯甲酸丙酯溶于4升沸腾的纯化过的水中。取3升上述溶液，首先溶入10g2，3-二羟基丁二酸，然后再溶入20g活性成分。后面得到的溶液与前面剩余的溶液合并，再加入12升1，2，3-丙三醇和3升山梨醇的70％溶液。再加入40g糖精钠溶在0.5升水中，所得到的溶液中加入2ml红梅和2ml鹅梅香精。将后面的溶液与前面的溶液合并，并加适量的水，使体积达到20升。如此制得的口服液，每茶匙(5ml)含活性成分5mg。最后制得的溶液灌装到适当的容器中。例7胶囊将20g活性成分，6g硫酸月桂酯钠，50g淀粉、56g乳糖、0.8g二氧化硅胶体和1.2g硬脂酸镁放在一起，进行剧烈搅拌。所得到的混合物，分装于1000个适当的硬明胶胶囊中，每个胶囊含20mg活性成分。例8有涂膜的片剂片核的制备将100g活性成分，570g乳糖和200g淀粉很好地混合，并用硫酸十二烷基酯钠和10g聚乙烯吡咯烷酮(Kollidon-K90)溶于200ml水中所得到的溶液，把混合物润湿。将此湿润的粉末混合物过筛、干燥、再过筛。然后加入100g微晶纤维素(Avicel)和15g氢化植物油(Sterotex)。混好后，压成片，制得10,000片，每片含活性成分10mg。涂膜将5g乙基纤维素(Ethocel22cps)溶于150ml二氯甲烷中，并把此溶液加入到由10g甲基纤维素(Methocel60HG)溶于75ml变性酒精中形成的溶液中。然后加入75ml二氯甲烷和2.5ml1，2，3-丙三醇。将10g聚乙二醇熔化，并溶于75ml二氯甲烷中，并将此溶液加入到前面的溶液中。然后再加入2.5g硬脂酸镁，5g聚乙烯吡咯烷酮和30ml浓缩的带色分散剂(OpasprayK-1-2109)，最后，全部物质混合均匀。用所制备的混合物在涂膜装置里，给片核涂膜。例9注射液将1.8g4-羟基苯甲酸甲酯和0.2g4-羟基苯甲酸丙酯溶于约0.5升注射用沸水中。冷却到约50℃，在搅拌情况下，加入4g乳酸，0.05g聚乙二醇和4g活性成分。使溶液冷却到室温，补充适当量的注射用水，使总体积达到1升，该溶液含有效成分为4mg/ml。将此溶液过滤灭菌(U.S.P.XVIIp.811)后灌装于无菌容器中。权利要求1.下面化学式的化合物，它们的立体化学异构体以及可以药用的酸加成盐，其中，R1是C1-10烷基，C3-7环烷基，或者被C3-7环烷基取代的C1-6烷基；R2是氢或C1-6烷基；Alk代表C1-3链烷双基；-A-代表下列二价基团之一；-CH＝CH-N＝CH(a)-N＝CH-N＝CH(b)CH＝N-N＝CH(c)-CH＝CH-CH＝N(d)上述二价基团的氢原子可以被C1-6烷基取代；Ar是未取代的苯基或者是被下列取代基中至多达两个取代的苯基卤素、C1-6烷基或者C1-6烷氧基；未被取代的萘基；或者是被下列取代基中至多达两个取代的萘基卤素、C1-6烷基或C1-6烷氧基。2.权利要求1中的化合物，其中Ar是未被取代的苯基；被至多达两个卤原子取代的苯基；未被取代的萘基；或者被至多达两个卤原子取代的萘基。3.权利要求2中的化合物，其中R1是甲基、乙基、丙基、2-丙基或者2-丁基。4.权利要求1中化合物其中化合物是顺式-2-[4-[4-[4-[[2-(2，4-二氟苯基)-2-(1H-1，2，4-三唑-1-基-甲基)-1，3-二氧戊环-4-基]甲氧]苯基]-1-哌嗪基]苯基]-2，4-二氢-4-(1-甲基丙基)-3H-1，2，4-三唑-3-酮，或者是它们的立体化学异构体形式，或者是它们的可药用的酸加成盐。5.一种药物组合物，包含有可药用的载体和治疗有效剂量的活性成分，此活性成分即是权利要求1-4中的任一化合物。6.权利要求4中药物组合物的制备方法，其中将治疗有效剂量的权利要求1-3中的化合物同可药用的载体密切混合。7.化学式(III)的中间体，其中-A-是权利要求1中定义的二价基团，Ar是未被取代的萘基或是至多达两个卤原子取代的萘基。8.化学式(III)的中间体，其中Ar与权利要求1中的定义相同，-A-是化学式(d)的二价基团。9.化学式(III)的中间体，其中-A-和Ar的定义与权利要求1中的相同，Alk是C2-3链烷双基。10.权利要求1到4中任一个化合物，用作医药。11.化学式(I)化合物的制备方法，其特征在于a)用化学式(III)的中间体将化学式(II)的中间体进行O-烷基化；在化学式(II)中间体中，R1和R2同权利要求1中所定义；在化学式(III)中，-A-、Alk和Ar同权利要求1所定义，W是适当的离去基团，如卤素，或者是磺酰氧基离去基团，b)用化学式(V)的中间体将化学式(IV)的中间体进行N-烷基化；在化学式(IV)中，-A-、Alk、Ar和R2同权利要求1中所定义；在化学式(V)中，R1同权利要求1中所定义，W是适当的离去基团，如卤素，或者是磺酰氧基离去基团，或者任选地通过官能团变换反应使化学式(I)化合物的各种形式互相转换；如果需要的话，将化学式(I)的化合物转变成有医疗活性、无毒的酸加成盐，或者反过来，加碱将酸加成盐转变为游离碱；和(或)制备其立体化学异构体形式。全文摘要本发明涉及式(Ⅰ)的一组新型化合物,式中R文档编号C07D405/14GK1181079SQ96193235公开日1998年5月6日申请日期1996年4月12日优先权日1995年4月20日发明者J·希雷斯,L·J·J·巴克斯,P·A·C·鲁伊茨,D·R·G·G·德查弗伊德－科尔克勒斯申请人:詹森药业有限公司