查尔酮维甲类化合物及其应用方法

专利名称：：查尔酮维甲类化合物及其应用方法
背景技术：
：该项发明涉及新型维甲类化合物，如查尔酮维甲类化合物；及其对癌细胞或癌前病变细胞具有治疗性和/生物学活性的组合物，也涉及到查尔酮化合物的应用方法。相关
背景技术：
：的描述维甲类化合物对表皮细胞的生长、分化以及逆转癌前病变均具有重要的作用。已进行了N-(4-羧苯基)维甲酰胺治疗一些癌前病变、口腔白斑、外阴白斑、子宫颈和胃粘膜的不典型增生以及诸如此类的临床试验(韩等，invivo4153-160(1990))。其它的维甲类化合物如β-顺式维甲酸和抗癣灵，目前正作为处方药用于治疗痤疮和牛皮癣(Gander等，美国专利号NO4,126,693)。然而，维甲类化合物具有明显的毒性。由于应用已知的维甲类化合物同时发生的毒性和副作用水平，用已知的维甲类药物进行治疗遇到了一些问题，因此，有必要提供具有维甲化合物活性但毒性和/或副作用又比较低的新型化合物。Smith等，J.Clin.Oncol.10(5)839-846(1992)，对维甲类化合物在癌症治疗中的应用，着重对急性早幼粒白血病(APL)的抗肿瘤效果的应用进行了综述。Smith等报道了天然维甲化合物，全反式维甲酸(RA)诱导一些人急性髓性白血病(AML)、神经母细胞瘤，畸胎瘤，黑色素瘤和大鼠横纹肌瘤细胞的分化，并且对正常上皮细胞的分化也具有重要的作用。Smith等的文章表6中列出了在皮肤病研究中与应用维甲酸有关的临床毒性，文章揭示了维甲类化合物是公认的致畸胎物。全反式维甲酸(RA)的结构式如下Kizaki等，Seminarsinoncology19(1)95-105(1992)，报道维甲类化合物在很多实验模型中是强效抗致癌剂，且抑制转化癌细胞的生长，并诱导其分化。大量的文献专门涉及作为抗癌剂的维甲酸衍生物。Just，等美国专利号No.4,385,175揭示维甲酸酯类和氮杂环丁酮作为抗癌剂是有用的。Philippe等，美国专利号No.5,096,713，揭示了L-克拉定糖维甲酯类有抗肿瘤活性。Paust的加拿大专利号NO.1,127,170特异性地针对维甲酸N-(羧基)-苯酰胺类和7，8-脱氢-维甲酸N-(羧基)-苯酰胺类化合物，并且指出，虽维甲类化合物主要针对预防癌症，但它们可用于治疗膀胱癌、乳腺癌、皮肤癌和粘膜癌。大量文献揭示，维甲类化合物正用于癌症预防和作为细胞分化诱导剂。例如，Newton等，CancerRes.403413-3425(1980)揭示一系列酯类、胺类和酰胺类维甲酸以及它们在癌证预防中的活性。所列出的这些化合物均与异黄酮或查尔酮维甲类化合物无关。杜等，北京中国医学科学院药物研究所17331-337(1982)，揭示维甲酰胺类化合物RII(N-4(羟基苄基)维甲酰胺)和RI(4-(乙氧基羰基苯基)-维甲酰胺以及它们作为癌预防剂的应用。宋等，北京中国医学科学院药物研究所，19576-581(1984)，也描述了维甲酰胺类化合物RI和RII作为细胞分化诱导剂的特性。Shealy的专利，美国专利号No.5,124,083，揭示作为细胞分化剂的维甲酸衍生物可用于癌证预防和治疗。Shealy等的文章，J.Med，Chem.311124-1130(1988)，揭示双功能的维甲酸酯类化合物的化学预防活性。Dawson，J.Med.Chem.271516-1531(1984)，Dawson等，J.Med，Chem.24583-592(1981)，KagechiKa等，J.Med.chem.321098-1108(1989)，Skrede等，Eur.J.Clin.Investing.21574-579(1991)以及Ioev等，美国专利号NO.4,523,042均揭示作为细胞分化剂的各种维甲类化合物。Gander，美国专利号NO.4,323,581，揭示N-(4-羟苯基)一全反式维甲酰胺用于治疗乳腺癌，而在美国专利号NO、4,310,546中，Gander揭示N-(4-酰氧基苯基)-全反式维甲酰胺用于预防上皮癌。Gander等的专利，美国专利号No.4,126,693和NO.4,190,594谈到维甲酸酯类和酰胺类化合物的其他特点。此外，Blazsek等，Biomed.pharmacother.45169-177(1991)，Degos.Biomed.pharmacother.46201-209(1992)，Castaigne等，Blood76(9)1704-1709(1990)，Chomienne等，Blood76(9)1701-1717(1990)以及LoCoco等，Blood77(8)1657-1659(1991)均指出用维甲酸可分化治疗急性早幼粒白血病(APL)。已发现一些黄酮和查尔酮类化合物有抗肿瘤活性。Middleton等，Biochen，pharmacol.431167-1179(1992)，谈到黄酮类化合物的抗肿瘤效果。Harvey等，J.org.Chem.533936-3943(1988)和J.org.Chem.556161-6166(1990)及Nair等，Carcinogenesis，12(1)65-69(1991)谈到具有防癌作用的香豆素和黄酮化合物。景等，中国药理学与毒理学杂志6(4)278-280(1992)，指出一种异黄酮，大豆甙元抑制黑色素瘤细胞生长。Ishizuka等的专利，美国专利号No.5,096,924，指出一种取代的2-Benzopyrinone大豆甙元具有抗癌作用。Ito等，美国专利号No.4,960,908。Briet等，美国专利号No.4,602,034，No.4,738,533和No.5,116,954以及Kramer等，美国专利号No.4,713,465都认为4-benzopyrinone化合物为抗癌剂。Preuss-Ueberschar等，DrugRes.341305-1313(1984)指出包括香豆素在内的苯并吡喃酮类化合物无致畸性。Egan等对香豆素相关化合物的药理学进行了综述，该文指出香豆素相关的化合物具有抑制致癌物的致癌作用，并指出香豆素已被试验用于治疗黑色素瘤。Edward等，J.Med.Chem331948-1954(1990)谈到查尔酮化合物的抗有丝分裂作用。Cassady等和Ito等，AbstractCollectionofInternationalSymposiumonRecentAdVanceinChemistryandMolecularBiologyofCancerRessarch，Beijing，China，1991，pp.5-6和68-69，分别谈到各种黄酮类化合物包括Biochanin-A的抗有丝分裂作用。韩等，中国癌症研究杂志2(3)51-53(1990)，报道一种异黄酮化合物，S86019作用，S86019是中国用的一种中药葛根的一个有效成分。S86019的结构尚未公开。韩等在另一篇文章，invivo4153-160(1990)中对RII维甲酰胺化合物作为一种癌预防剂和癌化学治疗剂进行了评价，并对联合应用RII和S86019诱导HL-60细胞分化进行了讨论。在诱导细胞分化中，RII和S86019的联合应用具有协同作用，并且报道这种联合用药可应用于临床，且具有最小的病人毒性。在此引用的任何资料并不试图承认这些资料对本申请任何一项权利要求获得专利可能性是相关的已有技术或者说是经过思虑的材料。任何资料的内容或时间的陈述是以申请者在收集资料时得到的信息为基础，并不是对这样的陈述正确性构成一种承认。发明概述本项发明的目的是克服相关技术的一个或更多的不足之处，尤其克服与维甲类化合物相关的致畸性。本项发明的另一目的是为了提供新型的维甲类化合物，如在体外具有抗肿瘤活性的查尔酮维甲类化合物。本项发明一个更深远的目的是为了提供新型维甲类化合物，如在体内具有抗肿瘤活性的查尔酮维甲类化合物。本项发明还有一个更深远的目的是为了提供新型的维甲类化合物和组合物，应用现在的发明方法，对化合物和/或组合物在哺乳动物尤其人身上进行研究和/或药用是有助益的。现在权利要求的维甲类化合物和组合物协同性地联合了维甲类化合物的细胞分化作用和查尔酮化合物的有丝分裂抑制活性。本项发明的一种用途是应用该维甲类化合物作为体外试验其他化合物的抗肿瘤活性的比较化合物或组合物。该维甲类化合物作为体外，原位和/或体内化学治疗剂也是有用的。本项发明还有另一目的是为了提供合成方法，根据其中能够描述的处方(I)以获得维甲类化合物和/组合物。此外，本项发明也指导一种方法，即给予至少一种实质上由一种查尔酮维甲化合物组成的维甲类化合物和/或组合物，实质上选择性地再由至少一种抗癌药物和/或免疫调节剂组成，以治疗具有癌前病变或癌症相关病变的病人。基于本专利的描述，教授和指导，本项发明的其他特点，优点，实例，方面和目的的对从事相关
技术领域：
的技术人员将是很清楚的。所选实例的详细描述本发明提供了一组新的具有生物活性的维甲类化合物，显示有癌预防活性。这些化合物包括但不局限于有下式(1)的查耳酮维甲化合物。本发明的查耳酮维甲化合物有如(1)的通式式中R1＝OH；或C1-C5烷氧基；R2＝OH，羧基，C1-C6烷酯基，或NHCOR3，其中R3是甲基、乙基、丙基或丁基；X＝NH或C2-C4烯基，Z＝NH或O。R2优选为OH，COOC2H5，COOC3H7，COOH，NHCOCH3，NHCOCH2CH3。X＝烯基时最好是CH＝CH。表1中列举的化合物(I-A)-(I-S)为通式(I)的非限制性实例，这类化合物以各种组合构成本发明的化合物或组合物表1</tables>这些化合物或它们的异构体以各种组合构成本发明的化合物或组合物。本发明的这类维甲化合物意外地发现有抗癌活性，提供了体外、局部或体内治疗与癌症有关的病理过程化合物或组合物，可任选地与其它药物有效成分合用，如抗病毒化疗剂，和(或)免疫刺激剂，抗病毒抗体或抗体的片段。本发明所涉及的与肿瘤相关的病理过程(但不限于肿瘤及肿瘤发生的病理过程)包括白血病，淋巴瘤，黑色素瘤，肉瘤，与病毒有关的癌症以及其它任何已知的癌症。“抗癌活性”一语是指至少能导致以下一种过程的能力(1)抑制已转化或突变的癌前或癌细胞的生长或有丝分裂；(2)启动细胞凋亡；和(或)(3)抑制血管生成。本发明所涉及的抑制或激动作用，作为定量指标时，是相对于特定的对照，具有10％-100％的抑制作用或10％-1000％的激动作用。除了给予一个或几个本发明的维甲化合物，在同一条件下可以不限于同一细胞或动物。本发明还提供了合成通式(I)化合物的方法，对于本领域的普通技术员，根据本发明所述方法结合本领域的皆知的技术，完全可以合成预期化合物。总体来说，以合成的查耳酮化合物和/或维甲醇化合物为起始原料，加上合适的取代基，改变或直接利用已知的化学反应步骤得到对应于通式(I)的维甲化合物。合成通式(I)维甲化合物的通法是一定摩尔量(如2.5mmol)的查耳酮衍生物溶于一定量(如20ml)的无水有机代溶剂(如无水四氢呋喃)中制成溶液，加入稍过量(如2.75mmol)的二或三烷基取代的胺(如三乙胺)。室温搅拌下向该混合液中逐滴加入过量(如2.75mmol)的烷基卤代甲酸酯(如氯甲酸乙酯)并继续搅拌0.2-3.0小时(如1小时)。加入石油醚，滤除固体，滤液真空浓缩至干。加入适量的无水有机溶剂(如20ml无水乙腈)重新溶解，然后加入等摩尔量的烷基取代的苯酚(如2.5mmol乙酰氨基酚)。将该混合液微热，得到澄清溶液，搅拌下加入一定量(如0.25g)的二或三烷基取代的胺(如三乙胺)和适量(如20mg)二取代的烷基氨基吡啶(如4-二甲基氨基吡啶)该混合液于40-60℃(如50℃)加热0.5-3小时(如1小时)。浓缩溶剂至一半体积，收集在该浓度下得到的晶体，洗涤，并用90-99％的乙醇重结晶(如95％乙醇)，得到60-99％本发明的纯维甲化合物。抗癌活性测定确定某一化合物和(或)组合物体外抗肿瘤活性的实验方法很多。这些方法是皆知的，本领域的普通操作者用常规实验方法，可以测定本发明的维甲类化合物是否对某肿瘤病有特异的抗癌活性。下面列举的方法可以用于筛选具有通式(1)的查耳酮维甲化合物至少一种药理作用；这些实验是基于下面所述的方法。非限制性体外抗肿瘤活性实验实例，包括但不限于其活性为(1)拮抗十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯对Hela细胞磷脂磷酸化的诱导，用于筛选抗促癌作用；(见Shibata，StemCells1244-52(1994)；(2)软琼脂克隆生成实验(见Rangeletal.，CancerChemother.Pharmacol.33460-64(1994)；(3)癌细胞的细胞抑制作用(见Rajalaetal.Ann.Chir.Gynacol.Suppl20650-53(1993)；抑制人胃癌细胞分化(Shibata.supra)；(4)拮抗癌细胞的细胞毒作用(见Ngassapaetal.J.Nat.Prod.56.1676-81(1993)；Sanyaletal.，Neoplasma40219-22(1993)；Perezetal.，CancerChemother.Pharmacol.33245-250(1993)；Hahnetal.，Cancer722705-11(1993)；(5)抑制肿瘤集落形成单位(见Eckardtetal.，J.Nat′1CancerInst.8630-33(1994)；Chenetal.，AnticancerDrugs4447-57(1993)；(6)人早幼粒白血病细胞的分化；(7)抑制癌细胞的MTT实验，文献内容见上述参考文献以及文献中所引文献。非限制生体内抗肿瘤活性，包括但不限于其活性为(1)抑制小鼠皮肤肿瘤生成(见Shibata，StemCells1244-52(1994)；(2)抑制动物致癌作用的模型(见Kennedy，Prev.Med.22796-811(1993)；Johnsonetal.，CancerChemother.Pharmacol.32339-46(1993)，如裸鼠或无胸腺小鼠(见Toppetal.，Blood822837-44(1993)；Saikawaetal.，Jpn，J.CancerRes.84-787-93(1993)；(3)单核细胞激活实验(Shietal.，CancerRes.53.3986-91(1993)；(4)血清肿瘤坏死实验(Shietal.，CancerRes533986-91(1993)；(5)巴豆油诱导的小鼠耳水肿；和(6)巴豆油诱导的小鼠表皮ODC活性；文献内容见上述参考文献以及文献中所引文献。另外，利用预测性统计方法和人工智能提供的计算机程序，结合原始数据计算活性模式，结构信息，以及分子靶点中细胞的表达，结合筛选实验结果以及基于结构的药物设计和检验预测某个化合物的作用机制，Weinsteinetal.，StemCells1212-22(1994)，文献内容见上述参考文献以及文献中所引文献。药用组合物本发明的查耳酮维甲化合物的药用组合物包括所有成分，其中包括至少一种含量足以达到预期目的的药用化合物或成分。另外，该药用组合物还包含合适的药用载体，构成赋形剂和助剂，以便将活性化合物制成药用制剂。本发明的药用组合物也可包含抗肿瘤药和/或免疫调节剂。本发明的药用化合物或组合物还可以包含至少一种下列成分单链核苷抑制蛋白(抑制与肿瘤有关的受体细胞或组织中与癌有关的蛋白质的表达)；细胞因子或生长因子。淋巴细胞产生的细胞因子称为淋巴因子，类似地，单核细胞或巨噬细胞产生的肽称为单核因子。所以细胞因子，淋巴因子，和介素可以相互换用，为调节宿主对外来抗原的反应或在宿主受伤时调节白细胞生长，移动性和分化的肽类分子。本发明所谓的细胞因子是指适于充当本发明药用组合物的其它活性成分。本发明的另一内容是，该药用组合物还可以包括细胞毒或化学治疗药物，还可以任选地含有转运载体，该载体优选地结合于癌症的靶点，或促进药物/诊断试剂或组合物与癌症细胞结合。这种类型的治疗靶点可以是生长因子受体，分化抗原，或其它未完全确定的与癌细胞或癌前细胞特异相关的细胞表面抗原。药用组合物也包括为注射或口服方便的溶液，含有0.001-99％的活性成分，优选为20-75％。口服的药用组合物包括片剂和胶囊。直肠吸收的组合物包括栓剂。活性成分的药用载体可以是喷雾或非喷雾形式。非喷雾形式可以是半固体或固体，构成可转运到局部的载体，其粘度最好大于水的粘度。同时也适于全身或局部用药，尤其是对粘膜和肺，由活性成分与一种固态或液态的惰性载体材料结合成的可喷的气雾剂。这些气雾剂可含有溶剂，缓冲剂、表面剂、香料和/或抗氧剂，添加于本发明的维甲类化合物中或组合物中。给药方式本发明的药用化合物或组合物只要能够达到预期目的，如治疗或预防癌或癌前病变，可以任一方式给药。本发明中“防止癌或癌前病变”中的“预防”一语，包含“预防”、“抑制”或“治疗”的意思。“预防”是指在病变的诱因发生前服用药用组合物。“抑制”是指在病变的临床表现发生前服用该组合物。“治疗”是指在病变出现后服用保护性组合物。在医药和兽药中，并不总是能够区分“预防”和“抑制”作用，因为直到病变发生以后很长的时间内，最终的诱因或病因对患者也可能是未知的、潜伏的或不确定的。因此，本发明涉及的“预防”一语包含“防止”和“抑制”作用，以区别于“治疗”。参见。Berkowetal.，eds.，TheMerckManual，16thedition，MeerckandCo.，Rahway，N.J.，1992；Goodmanetal.，eds.，Goodman，andGilman′sThePharmacologicalBasisofTherapeutics，8thedition，PergamonPress，Inc.，Elmsford，N.Y.，(1990)；Katzung，BasicandClinicaipharmacology，Appletonandlange，Norwalk，Conn，(1992)，文献内容见上述参考文献以及文献中所引文献。这里提出的“保护”作用并非是绝对保护，如某一疾病不可能完全预防或清除，只要相对于对照有显著的统计学提高(p＝0.05)。保护作用也可以指减轻该疾病临床表征的严重性和快速发展。本发明中至少有一种维甲化合物可以通过上述的药用组合物以任一给药方式以达到预期目的。例如，通过多种肠道外方式，包括皮下，静脉，皮内肌肉，腹膜内，鼻内，颅内，透皮或口腔给药。肠道给药方式包括通过丸粒注入和在一定时间内灌注的方法。还可以通过口服给药。本发明的药用化合物或组合物的另一使用方法是局部用药。本发明的一个药用化合物或组合物可以药膏或软膏的方式局部使用。有代表性的治疗或预防的方案包括一天或几天内服用有效剂量，最长可以达到一周到六个月。本发明的药用化合物或组合物服用的剂量与年龄，性别，健康，以及受试者的体重，协同治疗类型，以及治疗频率，期望的药效等因素有关。本发明提供的剂量范围不是一个限定的范围，而是有代表性的优选剂量范围。不过最佳的剂量要由熟练掌握这一技术的人员根据个体进行调节。参见，Berkowetal.，supra，Goodmanetal.，supra，andKatzung，supra；Avery′sDrugTreatmentPrinciplesandPracticeofClinicalPharmacologyandTherapeutics，3rdedition，ADISPress，LTD.，WilliamsandWilkines，Baltimore，MD.(1987)，Ebadi，Pharmacology，Little，BrownndCo.，Boston，(1985)，文献内容见上述参考文献以及文献中所引文献。每个疗程的总剂量可以一次给药或分次给药。药用化合物或组合物可以单独给药或与其它对症药物以及治疗该病其它症状的药物一起使用。本发明的一个药用化合物或组合物的有效剂量范围为每公斤体重0.001μg到100mg，优选5mg到100mg/公斤体重，最佳范围为20mg到50mg/公斤体重，给药间隔为4-72小时，分2天至5年给药。本发明的化合物和/或组合物的给药对象优选为哺乳动物，最好是人。上面已对本发明作了一般性叙述，通过以下的实例可以更好地理解本
发明内容，但所举实例并不限定本发明的范围。实例1通式(I)查耳酮维甲化合物(I-N)1-(3，5-二叔丁基-4-甲氧基苯基)-3-[4-(4-乙酰氨基苯氧酰基)苯基]-2-丙烯基-1-酮的制备。分子式C33H37NO5，分子量＝527.670.987g(2.5mmol)1-(3，5-二叔丁基-4-甲氧基苯基)-3-(4-羧基苯基)-2-丙烯基-1-酮溶于20ml无水四氢呋喃，加入0.251g(2.75mmol)三乙胺。搅拌下往该混合液中逐滴加入0.300g(2.75mmol)氯甲酸乙酯，室温搅拌1小时。加入石油醚，过滤除去固体，滤液真空浓缩至干。残余物用20ml无水乙腈溶解，加入0.378g(2.5mmol)乙酰氨基酚，微热使之完全溶解得到澄清溶液。搅拌下加入0.25g三乙胺和20mg4-二甲基氨基吡啶。混合液于50℃下加热1小时。浓缩溶剂至一半体积，收集晶体，洗涤并用95％乙醇重结晶，得到0.995g(75.4％)的纯品，mp210-212℃；MS(m/z)527(M+)，377(100％)，349；元素分析C23H37NO5，FW＝527.67，计算值(％)C75.12，H7.07，N2.56，实际值(％)C75.46，H7.05，N2.75。实例2通式(I)查耳酮维甲化合物(I-B)N-4-[4-(乙酰氨基苯氧酰基)苯基]-3，5-二叔丁基-4-羟基苯甲酰胺的制备。分子式C30H34N2O5，分子量＝502.61。1.85g(5.0mmol)起始原料N-(4-羧基苯基)-3，5-二叔丁基-4-羟基苯甲酰胺，按实例1相同的条件，得到0.80g(32％)纯品。纯品mp332-334℃(乙醇)，MS(m/z)502(M+)，369(100％)，352，233。实例3通式(I)查耳酮维甲化合物(I-J)N-4-[4-(乙酰氨基苯氧酰基)基苯]-3，5-二叔丁基-4-甲氧基苯甲酰胺的制备。分子式C31H36N2O5，分子量＝516.64。0.960g(2.5mmol)起始原料N-(4-羧基苯基)-3，5-二叔丁基-4-甲氧基苯甲酰胺，按实例1相同的条件，得到0.35g(27.1％)纯品。纯品mp248-252℃(85％乙醇)，MS(m/z)516(M+)，501，411，366(100％)，247。实例4通式(I)查耳酮维甲化合物(I-Q)4-[4-(乙酰氨基苯氧酰基)苯基]-3，5-二叔丁基-4-羟基苯甲酸酯的制备。分子式C30H33NO6，分子量＝503.60。0.926g(2.5mmol)起始原料4-羧基苯基-3，5-二叔丁基-4-羟基苯甲酸酯，按实例1相同的条件，得到0.25g(20％)纯品。纯品mp178-190℃(乙醇)，MS(m/z)503(M+)，353(100％)，271，233。实例5通式(I)查耳酮维甲化合物(I-P)1-(3，5-二叔丁基-4-甲氧基苯基)-3-[4-(4-羧基苯基氨基羰基)苯基]-2-丙烯基-1-酮的制备。分子式C32H35NO5，分子量＝513.64。0.50g(1.27mmol)1-(3，5-二叔丁基-4-甲氧基苯基)-3-(4-羧基苯基)-2-丙烯基-1-酮与3ml二氯亚砜溶于15ml苯，加热回流15分钟。蒸出溶剂后复溶于干燥乙醚。室温搅拌下将此溶液加入到0.174g(1.27mmol)4-氨基苯甲酸和2ml干燥吡啶的乙醚溶液中。加完后室温搅拌4小时放置过夜。蒸除溶剂后加水用稀HCl调pH3-4。收集固体，水洗。稀乙醇重结晶，得到0.4g产品(51.3％)。mp306-308℃，MS(m/z)513(M+)，498，377(100％)，349，319。实例6通式(I)查耳酮维甲化合物(I-A)N-4-[4-(羟基苯基氨基羰基)苯基]-3，5-二叔丁基-4-羟基苯甲酰胺的制备，C28H32N2O4，FW＝460.58。1.347gN-(4-羧基苯基)-3，5-二叔丁基-4-羟基苯甲酰胺按实例1方法合成。得到0.780g(46.5％)纯品，mp160-162℃(乙醇)。元素分析分子式C28H32O4.H2O，计算值(％)C71.73，H6.99，N5.56，实验值(％)C71.95，H7.10，N5.84。MS(m/z)461(M++1)，397(100％)，233。实例7通式(I)查耳酮维甲化合物(I-R)4-(4-乙氧羰基苯基氨基羰基)苯基-3，5-二叔丁基-4-羟基苯甲酸酯的制备，C31H35NO6，FW＝517.63。1.85g4-羧基苯基-3，5-二叔丁基-4-羟基苯甲酸酯和0.85g4-氨基苯甲酸乙酯按实例1方法合成。得到1.83g(70.6％)纯品。mp162-164℃(乙醇)，MS(m/z)517(M+)，502，472，284，233(100％)，217，164。实例8通式(I)查耳酮维甲化合物(I-S)4-(4-羟基苯基氨基羰基)苯基-3，5-二叔丁基-4-羟基苯甲酸酯的制备，C29H31NO6，FW＝489.57。将实例7制得的化合物溶于乙醇，加入过量的10％NaOH水溶液。该悬浮液室温搅拌4小时，放置过夜。得到的澄清溶液用稀HCl中和至pH6，蒸除溶剂。残余物加水，酸化到pH2-3，收集固体，用稀乙醇重结晶，得到0.65g(46％)固体，mp＞280℃。MS(m/z)489(M+)，474，355，257，233(100％)217，121。实例9查耳酮维甲化合物4′-[(4-乙酰氨基)苯氧羰基苯基]4-羟基-3，5-二叔丁基苯甲酸酯(I-Q)的合成。2.5mmol对羧基苯基4-羟基-3，5-二叔丁基苯甲酸酯溶于20ml无水四氢呋喃，室温下加入2.75mmol三乙胺，搅拌5分钟，逐滴加入2.75mmol氯甲酸乙酯/5ml四氢呋喃溶液。加完后室温搅拌2小时。加入20ml石油醚，滤除固体，滤液真空浓缩得到黄色油。将油状物溶于20ml无水乙腈，加入2.5mmol乙酰氨基酚，微热得到澄清溶液。随后加入2.75mmol三乙胺和催化量4-N，N-二甲基吡啶，50℃搅拌7小时。混合物减压浓缩，用10％HCl中和。固体用稀乙醇重结晶。收率20％；mp178-9℃；MS(m/z)503(M+，3)，353(3)，233(100)，121(50)。元素分析，分子式C30H33NO6＝503.67。计算值(％)C71.84；H6.63；N2.79；实验值(％)C71.94；H6.50；N2.93。实例10查耳酮维甲化合物4′-[(4-乙氧羰基)苯氨基羰基苯基]4-羟基-3，5-二叔丁基苯甲酸酯(I-R)的合成。查耳酮维甲化合物1-R按实例9合成，将乙酰氨基酚换成对氨基苯甲酸乙酯。收率70.6％，mp162-4℃，MS(m/z)518(M+14)，472(3)，233(100)。元素分析，分子式C31H35NO6，分子量517.63，计算值(％)C71.93；H6.82；N2.70；实验值(％)C71.80；H6.80；N2.67。实例11查耳酮维甲类化合物4′-(4-羟苯基)-4-羟基-3，5-二叔丁基苯甲酰胺(I-S)的合成。1.50g查耳酮维甲类化合物I-R溶于10ml95％的乙醇，将其与5ml10％的NaOH溶液混合，在室温条件下搅拌一天，调pH至6，减压条件下去除大部分乙醇，加入10ml水，酸化至pH1，用稀释的乙醇结晶得出白色固体。产率46.0％，熔点＞360℃；质谱m/Z490(M+1，55)，472，(15)，258(60)，233(100)。实例12查耳酮维甲类化合物的细胞分化作用及其对癌细胞的抑制作用。用含10％加热灭活的小牛血清及100u/ml的青霉素加100μg/ml链霉素的RPMI-1640培养液培养人早幼粒白血病HL-60细胞。将含有细胞和培养液的培养瓶置于5％CO2，37℃的温孵箱内培养。取对数生长期细胞以1.2×105-1.4×105的细胞数/毫升的浓质接钟到能容纳5ml培养基的培养瓶中培养。每组由三个培养瓶组成。加入不同浓度的查耳酮-维甲类化合物。于查耳酮-维甲类化合物加入后不同时间取少量细胞，用占盼蓝排斥法在光镜下计数活细胞数。根据形态学和四唑氮蓝(NBT)还原判断细胞分化。NBT还原能力测定于药物处理后不同时间取出少量查耳酮-维甲化合物处理的细胞，然后离心，离心后每管加入0.5ml0.1％NBT(含100ng十四烷酰佛波醋酸酯)，然后将试管内容物在37℃温孵1小时。从细胞沉淀中制作细胞涂片。用Wright-Giemsa技术染色。每一涂片，在光镜下用油浸镜检查分离的200个细胞，染有蓝黑粒的细胞被视为NBT-阳性细胞。以被试的香豆素-维甲化合物的摩尔浓度表示50％分化或有效浓度(ED50或EC50)。细胞形态的测定在每一查耳酮-维甲类化合物浓度组处理细胞后不同时间制作细胞涂片，Wright-Giemsa染色。在光镜下用油浸镜计数和分类染色的细胞。用香豆素-维甲类化合物处理后的HL-60细胞的形态向成熟的粒细胞分化。这一改变表现为细胞体积变小，核与胞浆比率缩小，核变小或消失，染色质浓聚，一定比例的中期和晚期成粒细胞(早幼粒细胞)，拉长的杆状细胞和核分叶的粒细胞。单层细胞培养以测试查尔酮维甲类化合物对癌细胞的抑制效应。0.5ml的胰蛋白酶(0.3mg/ml)液加入培养瓶中用于消化，96孔微量培养板用于细胞培养。每孔加入200μl悬液(1200个瘤细胞)，37℃温孵24小。在加入测试化合物后，将对照组和药物处理组培养瓶置于CO2温孵箱中培养5天。MTT法的测定加入200μl的MTT溶液(5mg溶于10ml磷酸盐缓冲液)和培养液，再温孵4小时。温孵后弃去上清液，每孔加入200μlDMSO。温和搅拌后，用MR700酶探仪在570nm处测定OD值(参考波长450nm)。化合物的ED50值和肿瘤细胞的存活率，以抑制百分率计算。表2一些查尔酮-维甲类化合物的抗肿瘤活性。现在已经全部描述了该项发明，那些熟悉这一领域的人员都很清楚，在相同参数、浓度、条件的宽范围内，也能作出同样的发明，但都不脱离本发明的实质和范围。当结合具体的实例描述完这项发明后，由此可以推断，该发明是可以修改的，但本专利申请书试图涵盖任何变异，用途或大体上遵从该项发明的原理而对本发明进行的修改，包括对现在所揭示的如该项发明所涉及的领域范围的已知的或习惯的实践的修改和对待审批权利要求范围内提到的上文实质性特征的应用的修改。在此引用的所有参考文献，包括杂志文章或摘要，已公布的或相应的美国或外国专利申请书，出版的美国或外国专利或其他的参考文献都并入到这里的参考文献中，包括所有的数据，表格，图以及引用的参考文献描述的内容。此外，在引用的参考文献范围内引用的参考文献的所有内容也均合并到参考文献中。在任何情况下，关于已知的方法步骤，常规的方法步骤，已知方法或常规的方法的参考文献未允许进入相关领域所揭示的、教导的或建议的该项发明的任何方面，描述或实例中。前面具体实例的描述如此全面地揭示了该项发明的一般性质，以致于其他人能够应用该领域技术范围内的知识(包括这里引用的参考文献的内容)，在实验操作得当，能够很容易地改变和/或修改之，以适应具体实例的不同应用，但这都不脱离本发明的一般概念。因此，基于这里所提供的教授和指导，这样的修改和改变都会落在本发明所描述实例的等同含义和范围内。人们应当明白，这里的用词或专业术语目的是便于描述而不是为了限制。因此，根据这里传授的知识和指导，结合该领域常规技术的知识，有经验的技术人员能够解释本专利申请书载明的专业术语或用词。权利要求1.具有通式(1)的化合物，式中R1＝OH或C1-C5烷氧基；R2＝OH，羧基，C1-C5烷基酸或NHCOR3，R3＝甲基，乙基，丙基或丁基；X＝NH或C2-C4烯基；Z＝NH或O。2.如权利要求1中的所述化合物，其中R1＝OH或CH3O；R2＝OH，NHCOCH3，NHCOC2H5，COOC2H5，COOH，COOCH3，或COOC3H7；X＝NH，O，或CH＝CH；Z＝NH或O。3.如权利要求1所述的化合物，其中该化合物是指从(I-A)，(I-B)，(I-C)，(I-D)，(I-E)，(I-F)，(I-G)，(I-H)，(I-I)，(I-J)，(I-K)，(I-L)，(I-M)，(I-N)，(I-O)，(I-P)，(I-Q)，(I-R)，(I-S)中任选某个化合物以及相应的异构体。4.含有权利要求1所述的化合物和药用载体的药用组合物。5.如权利要求4所述的药用组合物，包括至少一个抗癌药化合物和一种免疫调节剂。6.抑制哺乳动物的细胞或组织的前癌或癌的方法，包括服用达到抑制癌或前癌有效剂量的权利要求1化合物。全文摘要本发明提供了一些新型维甲类化合物如查尔酮维甲类化合物及其组合物,它们对癌细胞和前癌细胞具有医疗和/或生物活性作用,并提供了维甲类化合物的应用方法。文档编号C07C233/25GK1187185SQ96194473公开日1998年7月8日申请日期1996年6月7日优先权日1996年6月7日发明者韩锐,郭宗儒申请人:中国医学科学院药物研究所