为法呢基蛋白转移酶抑制剂的三环抗肿瘤化合物的制作方法

专利名称：为法呢基蛋白转移酶抑制剂的三环抗肿瘤化合物的制作方法
技术领域：
本发明的简述本发明涉及式(1.0)化合物或其药学上可接受的盐
其中当在C-11位存在双键时，X为N、CH或C；a、b、c和d中之一代表N或NR9，其中R9为O-、-CH3或-(CH2)nCO2H，其中n是1-3，而其余的a,b,c和d基团代表CR1或CR3；或每个a、b、c和d独立选自CR1或CR2；每个R1和每个R2独立选自H、卤代、-CF3、-OR10(如-OCH3)、-COR10、-SR10(如-SCH3和-SCH2C6H5)、-S(O)tR11(其中t是0、1或2，如-SOCH3和-SO2CH3)、-SCN、-N(R10)2、-NR10R11、-NO2、-OC(O)R10、-CO2R10、-OCO2R11、-CN、-NHC(O)R10、-NHSO2R10、-CONHR10、-CONHCH2CH2OH、-NR10COOR11、
-SR11C(O)OR11(如-SCH2CO2CH3)、-SR11N(R12)2，其中每个R12独立选自H和-C(O)OR11(如-S(CH2)2NHC(O)O-叔丁基和-S(CH2)2NH2)、苯并三唑-1-基氧基、四唑-5-基硫代或取代的四唑-5-基硫代(如烷基取代的四唑-5-基硫代，像1-甲基-四唑-5-基硫代)、链炔基、链烯基或烷基，所述烷基或链烯基任选被卤代、-OR10或-CO2R10取代；R3和R4是相同的或不同的，且各自独立代表H、R1和R2的任何取代基，或者R3和R4一起代表与苯环(环Ⅲ)稠合的饱和或不饱和C5-C7环；R5、R6、R7和R8各自独立代表H、-CF3、-COR10、烷基或芳基，所述烷基或芳基任选被下列基团取代-OR10、-SR10、-S(O)tR11、-NR10COOR11、-N(R10)2、-NO2、-COR10、-OCOR10、-OCO2R11、-CO2R10、OPO3R10，或R5与R6结合代表=O或=S，和/或R7与R8结合代表=O或=S；R10代表H、烷基、芳基或芳烷基(如苄基)；R11代表烷基或芳基；碳原子5和6之间的虚线代表任选的双键，如此当存在双键时，A和B独立代表-R10、卤代、-OR11、-OCO2R11或-OC(O)R10，当碳原子5和6之间无双键存在时，A和B每个独立代表H2、-(OR11)2、H和卤代、二卤代、烷基和H、(烷基)2、-H和-OC(O)R10、H和-OR10、=O、芳基和H、=NOR10或-O-(CH2)p-O-，其中p是2、3或4；和v为0-5；w为0或1；Y为
-O-C1-C6-烷基或-OM+，其中M+为碱金属阳离子；R21和R22分别独立为H、C1-C6烷基、-CH2CONH2、苯基、苄基、-SO2-(C1-C6-烷基)、-NH-苯基、乙酰基、C3-C6环烷基、吡啶基、氯代苯基、
或R21和R22与它们所连接的氮一起形成
或
破折号代表任选的化学键；其中Q为苯或杂环如吡啶、吡嗪或噻吩。
在本发明的化合物中优选的为式(1.0)化合物
其中R1、R2、X、A、B、a、b、c和d与上述相同，v为0-4,w为0,y为
其中R21和R22与上述相同。
也优选式(1.0)化合物，其中a为N,R5、R6、R7和R8均为H，且R1、R2和R3分别独立选自H或卤代。
也优选式(1.0)化合物，其中R1为H,R2为Br,R3和R4分别独立选自Br和Cl。
也优选式(1.0)化合物，其中X为CH。
也优选式(1.0)化合物，其中R3为Cl,R4为Br。
也优选式(1.0)化合物，其中a为N或NO-,R5、R6、R7和R8均为H，且R1、R2、R3和R4分别独立选自H或卤代。
也优选式(1.0)化合物，其中A和B分别为H2,b和d优选为CH。
优选的另一组式(1.0)化合物为其中w是1,v为0-5,R1为H,R2为Br,R3和R4独立为Cl和Br,R5-R8分别为H,X为CH,Y为-O-C1-C6-烷基、NH2或-OM+。
本发明的示例性化合物为下列化合物
和
式(1.0)化合物可以用作法呢基蛋白转移酶抑制剂。因此，式(1.0)化合物可以用于抑制肿瘤生长。可被抑制的肿瘤的例子包括(但不限于)乳腺癌、前列腺癌、肺癌(如肺腺癌)、胰癌(如胰腺癌像外分泌性的胰腺癌)、结肠癌(如结肠直肠癌像结肠腺癌和结肠癌)、骨髓性白血病(如急性骨髓性白血病(AML)、甲状腺滤泡癌、脊髓发育不良综合征(MDS)、膀胱癌和表皮癌。
本发明也涉及治疗肿瘤的药用组合物，它包括式(1.0)化合物和药学上可接受的载体。
本发明也涉及治疗肿瘤的方法，该方法包括抗肿瘤有效量的式(1.0)化合物。
本发明的详述式(1.0)化合物可以以非溶剂化形式以及溶剂化形式包括水合物形式(如半水合物)存在。一般而言，对于本发明的目的而言，与药学上可接受的溶剂如水、乙醇等的溶剂化的形式与非溶剂化的形式是等同的。
部分本发明的化合物可以存在立体异构体形式。所有此类异构体及其混合物均包括在本发明范围内。除特别指明外，在此公开的制备方法可能产生包括所有可能的结构异构体的产物，尽管可以理解生理反应可能随立体化学结构的变化而变化。可以用常规方法如分步结晶或HPLC(高效液相层析)分离异构体。
式(1.0)化合物可以形成药学上可接受的盐。优选的药学上可接受的盐为通过向本发明的适当的化合物中加入约化学计算量的无机酸，如盐酸、氢溴酸、硫酸或磷酸，或者有机酸如乙酸、丙酸、戊酸、油酸、棕榈酸、硬脂酸、月桂酸、苯甲酸、乳酸、对-甲苯磺酸、甲磺酸、柠檬酸、马来酸、富马酸、琥珀酸等而分别形成非毒性酸加成盐。
当在此以及在所附的权利要求书中使用时，除特别指明外，下列术语具有下列意义
烷基(包括烷氧基、烷基氨基和二烷基氨基的烷基部分)-代表直链和支链碳链并含有1-20个碳原子，优选1-6个碳原子的碳链；酰基代表式
，其中R为C1-6烷基、苯基、吡啶基、氯代苯基，如上述；烷二基代表具有1-20个碳原子、优选1-6个碳原子的二价、直链或支链烃链，两个键可以具有相同或不同碳原子，如亚甲基、亚乙基、-CH2CH2CH2-、-CH2CHCH3、-CHCH2CH3等。
环烷基代表3-20个碳原子，优选3-7个碳原子的支链或非支链的饱和碳环；氯代苯基代表其中一个氢被氯取代的苯基部分；链烯基代表具有至少一个碳-碳双键且含有2-12个碳原子(优选2-6个碳原子，并最优选3-6个碳原子)的直链和支链碳链；链炔基代表具有至少一个碳-碳三键且含有2-12个碳原子(优选2-6个碳原子)的直链和支链碳链；芳基(包括芳氧基和芳烷基的芳基部分)代表含有6-15个碳原子并具有至少一个芳环(如芳基是苯基)的碳环基，碳环的所有可取代的碳原子可以作为可能的连接点，所述碳环任选被下列基团的一个或多个(如1-3个)取代卤代、烷基、羟基、烷氧基、苯氧基、CF3、氨基、烷氨基、二烷基氨基、-COOR10或-NO2；M+为碱金属阳离子，优选为钠或锂阳离子；卤代代表氟、氯、溴和碘。
所述取代基R1、R2、R3及R4的位置根据下面的编号环结构进行参照
例如，R1可以在C-4位，R2可以在C-2位或C-3位。例如R3也可以在C-8位且R4可以在C-10位。
当Ⅳ环与C-11碳之间的键为单键时，所有的立体异构体均包括在式(1.0)内，即外消旋物、R-异构体和S-异构体。
根据下列方法可以制备本发明的化合物。
如反应流程1、2和3所示，可以制备本发明的化合物。其它的常规技术例如酯水解和保护基团的脱去可以用于所述方法中以制备本发明的化合物。
具体地讲，流程1所示为在偶合试剂例如DEC存在下，用适当的羧酸处理胺1可以合成酰胺。流程1A所示为式1化合物的制备，其中w为1用标准偶合试剂例如DEC和HOBT使式1胺与式10二酸单酯反应可以制备酯，其中Y为-O-烷基；通过常规方法可以将产生的酯水解为酸并转化为碱金属盐，例如通过将该酯溶于醇中并用氢氧化钠处理可以制备钠盐。再次用标准的偶合方法如DEC和HOBT使所述盐与胺反应，得到式1酰胺(即其中Y为-NR21R22)。
流程1
流程1A
流程2表示了式5脲、式7乙酰胺和式8二酰胺的制备。在流程2中，用TFA/CH2Cl2或二氧六环-HCl脱去N-BOC保护基团。在TFA中用三甲基硅烷基异氰酸酯处理产生的胺4得到脲5。用乙酰氯或乙酸酐处理式4化合物得到式7乙酰胺。于约40℃-50℃温度下在二甲基甲酰胺中用羧酸酐处理5、然后用Ac2O处理产生的加成物并于约85℃-95℃加热得到式8的二酰胺。
流程2
流程3所示为胺1与4-氯代丁基氯反应得到式8酰胺。用胺处理式8酰胺得到式9的4-氨基取代的类似物。
流程3
用于制备本发明化合物的原料是已知的，可以根据已知的方法制备，或者可以用与已知的方法类似的方法制备。
根据本领域熟知的方法可以制备在三环部分的环1包含吡啶基N-氧化物的式1化合物。例如，在适当的有机溶剂例如二氯甲烷(通常为无水的)中，在适当的温度下，使式1胺化合物与MCPBA反应，得到式1a的N-氧化物
一般而言，在加入MCPBA前将式1的有机溶剂溶液冷却至约0℃。然后在反应过程中使反应物温热至室温。根据标准分离方法可以回收所需产物，例如用适当的碱水溶液，像饱和的碳酸氢钠或氢氧化钠(如1N氢氧化钠)洗涤反应混合物，然后用无水硫酸镁干燥。真空浓缩含有产物的溶液，经标准方法如硅胶层析(像快速柱层析)纯化产物。
根据本领域已知的方法，如在WO95/10516、U.S.5,151,423公开的方法以及下述的方法可以制备式1化合物。根据包括下列步骤的方法可以制备式1化合物，其中三环结构吡啶环的C-3位由溴取代，所述方法包括(a)在强碱存在下，使下式的酰胺
其中R11a为Br,R5a为氢，R6a为C1-C6烷基、芳基或杂芳基；R5a为C1-C6烷基、芳基或杂芳基，R6a为氢；R5a和R6a独立选自C1-C6烷基和芳基；或R5a和R6a与它们所连接的氮一起形成含有4-6个碳原子或包括3-5个碳原子以及1个选自-O-和-NR9a(其中R9a为H、C1-C6烷基或苯基)的杂部分的环；与下式的化合物
其中R1a、R2a、R3a和R4a独立选自氢和卤代，R7a为Cl或Br，反应得到下式的化合物
(b)使步骤(a)的化合物与(ⅰ)POCl3反应得到下式的氰基化合物
；或(ⅱ)DIBALH反应得到下式的醛化合物
(c)使该氰基化合物或醛化合物与下式的哌啶衍生物反应
其中L为选自Cl或Br的离去基团，分别得到下式的醛或醇
或
(d)(ⅰ)用CF3SO3H使醛环化得到式Ⅱ化合物，其中虚线代表双键；或(d)(ⅱ)用多磷酸使醇环化得到式Ⅱ化合物，其中虚线代表单键。
制备式Ⅰ化合物的方法公开于WO95/10516、U.S.5,151,423中并按下面所述方法使用三环酮中间体。下式的中间体
其中R11b、R1a、R2a、R3a和R4a独立选自氢和卤代，可以用下列方法制备，该方法包括(a)使下式的化合物
(ⅰ)在钯催化剂和一氧化碳的存在下，与式NHR5aR6a的胺反应，其中R5a和R6a与上述方法中定义相同，得到下式的酰胺
；或
(ⅱ)在钯催化剂和一氧化碳的存在下，与式R10aOH的醇反应，其中R10a为C1-C6低级烷基或C3-C6环烷基，得到下式的酯
，然后使该酯与式NHR5aR6a的胺反应，得到酰胺；(b)在强碱存在下，使该酰胺与下式的碘代苄基化合物反应
其中R1a、R2a、R3a、R4a和R7a与上述定义相同，得到下式的化合物
(c)用式R8aMgL试剂，其中R8a为C1-C8烷基、芳基或杂芳基，L为Br或Cl，使步骤(b)的化合物环合，前提为在环化前，使其中R5a或R6a为氢的化合物与适当的N-保护基反应。
用包括高对映体选择性的酶催化酯基转移方法可以制备其中X为CH的式1化合物的(+)-异构体。优选使式1的外消旋化合物(其中X为C，在环Ⅲ的10-位存在双键和非H的取代基)与酶如ToyoboLIP-300和酰化剂如三氟乙基异丁酸酯反应；然后水解产生的酰胺，例如在回流下用酸例如硫酸水解，得到相应的旋光性的富集(+)-异构体的产物。或者首先将式1外消旋的化合物(其中X为C，在环Ⅲ的10-位存在双键和非H的取代基)还原为相应的式1外消旋化合物(其中X为CH)，然后根据上述用酶(Toyobo LIP-300)和酰化剂处理得到(+)-酰胺，将其水解得到旋光性的富集(+)-异构体的产物。
硝化反应
或
制备式10-18化合物的方法如下所示。这些化合物可以用作制备本发明的式(1.0)化合物的中间体。该方法包括将1摩尔量的式A或B悬浮于适当的酸水溶液如浓硫酸中、然后将该反应混合物冷却至-20℃至40℃、接着在相同温度下加入1.1摩尔量的硝酸钾。于此温度下将该反应混合物搅拌1小时，然后用10-16小时温热至室温。接着将该反应混合物倾至冰中，用适当的碱例如浓氢氧化铵或50％氢氧化钠水溶液碱化。用适当的溶剂例如二氯甲烷萃取，经重结晶或柱层析获得所需化合物。
在低温硝化方法中获得的化合物
根据下列测定方法可以证明为法呢基蛋白转移酶抑制剂的本发明化合物的生物活性。
测定1．体外酶测定法呢基蛋白转移酶和香叶基香叶基蛋白转移酶的抑制根据Yokoyama等(Yokoyama,K.等(1991),A proteingeranylgeranyl transferase from bovine brain:Implications forprotein prenylation specificity,Proc.Natl.Acad.Sci USA 88:5302-5306，在此引入作参考)所述基本相同的方法，由大鼠脑中经硫酸铵分步分离、经Q-Sepharose(Pharmacia,Inc)阴离子交换层析部分纯化法呢基蛋白转移酶(FPT)。用编码a和b亚基的cDNA克隆也可以在大肠杆菌中表达人法呢基蛋白转移酶。使用的方法类似于公开的方法(Omer,C.等，(1993),Characterization of recombinant humanfarnesyl protein transferase:Cloning,expression,farnesyldiphosphate binding,and functional homology with yeastprenyl-protein transferases,Biochemistry 32:5167-5176)。可以根据上述方法由大肠杆菌的可溶性蛋白组分中部分纯化人法呢基蛋白转移酶。在此公开的三环法呢基蛋白转移酶抑制剂可以以相同的效力抑制人和大鼠酶。可以制备这些酶底物的两种形式的val12-Ha-Ras蛋白，它们在羧基末端的序列不同。一种形式末端为半胱氨酸-缬氨酸-亮氨酸-丝氨酸(Ras-CVLS)，另一种形式末端为半胱氨酸-缬氨酸-亮氨酸-亮氨酸(Ras-CVLL)。Ras-CVLS为法呢基蛋白转移酶的底物，而Ras-CVLL为香叶基香叶基蛋白转移酶Ⅰ的底物。构建编码这些蛋白的cDNAs，使这些蛋白含有6个组氨酸残基的氨基延伸端。两种蛋白均可以在大肠杆菌中表达并可用甲基螯合亲和层析纯化。放射标记的异戊二烯基焦磷酸酯底物，即[3H]法呢基焦磷酸酯和[3H]香叶基香叶基焦磷酸酯可购自DuPont/New England Nuclear。
测定法呢基蛋白转移酶活性的数种方法已有描述(Reiss等，1990，Cell 62:81；Schaber等，1990,J.Biol.Chem.265:14701；Manne等，1990,PNAS 87:7541；和Barbacid&Manne 1993,U.S.专利5,185,248号)。用类似于Reiss等(1990,Cell 62:81)中所述的条件，通过测定[3H]法呢基由[3H]法呢基焦磷酸酯向Ras-CVLS的转移测定活性。该反应混合物含有40mM Hepes,pH7.5；20mM氯化镁；5mM二硫苏糖醇；0.25μM[3H]法呢基焦磷酸酯；10ml Q-Sepharose纯化的法呢基蛋白转移酶；指定浓度的三环化合物或二甲基亚砜(DMSO)溶媒对照(5％DMSO终浓度)以及5mM Ras-CVLS，总体积为100ml。使反应于室温下进行30分钟，用0.5ml 4％十二烷基硫酸钠(SDS)使反应终止，接着加入0.5ml冷的30％TCA。将样品置于冰中45分钟，然后用Brandel细胞捕获仪将沉淀的Ras蛋白收集于GF/C滤垫上。用6％TCA、2％SDS将滤垫洗涤一次，在Wallac 1204 Betaplate BS液体闪烁计数仪上测定放射活性。根据相对于DMSO溶媒对照计算抑制百分比。
2．细胞基测定val12-Ha-Ras-CVLS和val12-Ha-Ras-CVLL在COS猴肾细胞中的瞬时表达法呢基蛋白转移酶抑制剂对Ras加工和对转化Ras诱导的无序细胞生长的作用。
用含有编码Ras-CVLS或Ras-CVLL的cDNA插入的质粒pSV-SPORT(Gibco/BRL)经电穿孔转染COS猴肾细胞，分别产生法呢基蛋白转移酶或香叶基香叶基蛋白转移酶Ⅰ的Ras底物的瞬时过度表达(见上述)。
在电穿孔后，将细胞加入6-孔组织培养皿中，该皿中含有1.5mlDulbecco氏改良Eagle培养基(GIBCO,Inc.)，补充有10％胎牛血清和适当的法呢基蛋白转移酶抑制剂。24小时后，去除培养基，再加入含有适当药物的新鲜培养基。
在电穿孔48后，在显微镜下观察细胞以监测转化Ras诱导的无序细胞生长。表达转化Ras的细胞变得更圆并可折射，且过度生长转化的表型复原(reminiscent)单层。然后对细胞进行摄影，用1ml冷磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤两次，用乳胶刮刷从培养皿中刮于1ml含有25mMTris,pH8.0；1mM乙二胺四乙酸；1mM苯甲基磺酰氟；50mM亮胰蛋白酶肽和0.1mM胃酶抑制剂的缓冲液中。将细胞匀化溶解，于2000xg离心10分钟去除细胞碎片。
加入冰冷的三氯乙酸沉淀细胞内蛋白，再溶于100ml SDS-电泳样品缓冲液中。将样品(5-10ml)上于14％聚丙烯酰胺微型凝胶(Novex,Inc.)上，电泳至泳道染料接近凝胶边缘。将在凝胶上分离的蛋白电印迹于硝酸纤维素膜上进行免疫检测。
通过于4℃将膜在含有2.5％脱脂奶粉和0.5％Tween-20的PBS中孵育过夜封闭该膜，然后将其与Ras-特异单克隆抗体Y13-259(Furth,M.E等(1982))、Harvey鼠肉瘤病毒和细胞ras基因家族(J.Virol.43:294-304)的转化基因p21产物的单克隆抗体一起在含有1％胎牛血清的PBS中于室温下孵育1小时。洗涤后，将细胞膜与1∶5000稀释度的第二抗体，即与辣根过氧化物酶共轭的兔抗鼠IgG一起在含有1％胎牛血清的PBS中于室温下孵育1小时。根据生产商(Bio-Rad)的说明用过氧化物酶显色试剂(4-氯代-1-萘酚)检测加工的和未加工的Ras-CVLS或Ras-CVLL的存在。
本发明的化合物显示下列生物学活性。
表2.FPT抑制
表3.COS细胞活性
在由本发明所述的化合物制备药用组合物时，惰性的、药学上可接受的载体可以为固体或液体。固体制剂包括粉剂、片剂、分散颗粒剂、胶囊剂、扁囊剂和栓剂。粉剂和片剂可含有约5-约70％的活性组分。适当的固体载体是本领域已知的，如碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、蔗糖、乳糖。片剂、粉剂、扁囊剂和胶囊剂为适合口服给药的固体剂型。
制备栓剂时，首先将低熔点的蜡如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物融化，搅拌下将活性组分均匀分散其中。融化将融化的均匀混合物倾至常规大小的模中，使其冷却并因此固化。
液体制剂包括溶液、悬浮液和乳液。适合胃肠外注射的实例为水或水-丙二醇溶液。
液体制剂也可以包括供鼻内给药的溶液。
适合吸入的气雾剂制剂可包括溶液和粉末形式的固体，它们可以与药学上可接受的载体例如惰性压缩气体混合。
也包括在使用前将其转化为供口服或胃肠外给药的液体制剂的固体制剂形式。此类液体制剂包括溶液、悬浮液和乳剂。
也可以将本发明的化合物透皮给药。透皮组合物可以为膏剂、洗剂、气雾剂和/或乳剂，包括如常规本领域此目的而常用的基质型或药库型的透皮贴剂。
优选该化合物口服给药。
优选该药用制剂为单位剂型。为此类剂型时，该制剂可以分为含有适当量(如达到所需目的的有效量)的活性组分的单位剂量。
制剂的单位剂型中活性化合物的量可以根据具体的使用情况在约0.1mg-1000mg、更优选在约1mg-300mg之间变化或调整。
根据病人的需要和待治疗疾病的严重程度可以改变使用的实际剂量。本领域技术人员可以容易地决定特殊情况下的合适剂量。一般而言，治疗以比该化合物的最佳剂量稍低的剂量开始。此后，逐渐增加剂量至在特定情况下达到最佳效果。为方便起见，可以将每日总剂量分开，并根据需要在全天中分次给药。
在考虑了各种因素如病人的年龄、身体状况和体积以及治疗的症状的严重程度后，根据医师的判断调整本发明的化合物及其药学上可接受的盐的给药量和频率。口服给药的一般推荐剂量方案为每天10mg-2000mg、优选每天10-1000mg在全天分2-4次给药以阻断肿瘤生长。当在该剂量范围内给药时，所述化合物是无毒性的。
在结合以上提出的特殊实施方案描述本发明时，它的许多另外的方案、修改和变化对本领域普通技术人员来说应是显而易见的。所有这些选择、修改和变化都将认为是在本发明的精神和范围内。
根据公开于WO95/10516号(1995年4月20日公开)、共同未决的专利申请序列08/410,187号(1995年3月20日提交)、共同未决的专利申请序列08/557,951号(1995年12月22日提交)和共同未决的专利申请序列08/615,760号(1996年3月13日提交)的方法和下列所述的方法可以制备本发明的化合物。
制备实施例1
将2g(15mmol)3-(二甲基氨基)丙酸甲酯溶于20ml乙醇中，然后加入20ml 1M氢氧化锂。于室温下，将该反应混合物搅拌16小时。蒸发溶剂。将产生的物质溶于水中，将pH调至约6。浓缩该反应混合物得到产物。质谱MH+=118。
制备实施例2
将2g(12.7mmol)2-氧代-1-吡咯烷乙酸甲酯溶于20ml乙醇中，然后加入20ml 1M氢氧化锂。于室温下，将该反应混合物搅拌16小时。蒸发溶剂。将产生的物质溶于水中，将pH调至约4。浓缩该反应混合物得到产物。质谱MH+=144。
制备实施例3(+)-4-(3-溴代-8,10-二氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-[4-(氯代)-1-氧代丁基]哌啶
将4-溴代丁酸(5g,29.9mmol)溶于50ml二氯甲烷中，然后加入亚硫酰氯(35.6g,299mmol)。于室温下，将该反应混合物搅拌约16小时。旋转蒸发去除过量的亚硫酰氯，用甲苯去除最终痕量的亚硫酰氯。高真空下干燥粗品产物得到4.47g粗品酰氯。向该酰氯(0.65g,3.5mmol)中加入制备实施例7的目标化合物(1.0g,2.3mmol)和三乙胺(0.7ml,5.2mmol)，然后溶于10ml二氯甲烷中。于室温下，将该反应混合物搅拌16小时。用饱和的碳酸氢钠萃取，用硫酸镁干燥二氯甲烷组分，浓缩得到0.63g目标化合物FAB-MS:MH+=531制备实施例4
于5℃，将4-(8-氯代-3-溴代-5,6-二氢-11H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-亚基)-1-哌啶-1-甲酸乙酯(15g,38.5mmol)与150ml浓硫酸合并，然后加入3.89g(38.5mmol)硝酸钾，搅拌4小时。将该混合物倾至3L冰中，用50％氢氧化钠水溶液碱化。用二氯甲烷萃取该混合物，经硫酸镁干燥，然后过滤，真空浓缩为残留物。从丙酮中重结晶该残留物得到6.69g产物。1H NMR(CDCl3,200MHz):8.5(s,1H)；7.75(s,1H)；7.6(s,1H)；7.35(s,1H)；4.15(q,2H)；3.8(m,2H)；3.5-3.1(m,4H)；3.0-2.8(m,2H)；2.6-2.2(m,4H)；1.25(t,3H)。
步骤B
将步骤A的产物(6.69g,13.1mmol)与100ml 85％乙醇/水混合，然后加入0.66g(5.9mmol)氯化钙和6.56g(117.9mmol)铁，然后于回流下将该混合物加热过夜。通过celite过滤热的反应混合物，用热乙醇洗涤滤饼。真空浓缩滤液得到7.72g产物。质谱MH+=478.0。
步骤C
将7.70g步骤B的产物与35ml乙酸混合，然后加入45ml溴的乙酸溶液，于室温下将该混合物搅拌过夜。加入300ml 1N氢氧化钠水溶液，然后加入75ml 50％氢氧化钠水溶液，用乙酸乙酯萃取该混合物。经硫酸镁干燥萃取物，真空浓缩为残留物。将残留物层析(硅胶，20％-30％乙酸乙酯/己烷)得到3.47g产物(以及另外的1.28g部分纯化的产物)。质谱MH+=555.9。
1H NMR(CDCl3,300MHz):8.5(s,1H)；7.5(s,1H)；7.15(s,1H),4.5(s,2H)；4.15(m,3H)；3.8(br s,2H)；3.4-3.1(m,4H)；9-2.75(m,1H)；2.7-2.5(m,2H)；2.4-2.2(m,2H)；1.25(m,3H)。
步骤D
将亚硝酸叔丁酯(0.557g,5.4mmol)与3ml DMF混合，将该混合物加热至60-70℃。缓慢滴加2.00g(3.6mmol)步骤C的产物与4ml DMF的混合物，然后将该混合物冷却至室温。于40℃再加入0.64ml亚硝酸叔丁酯，将该混合物再加热至60-70℃0.5小时。冷却至室温，将该混合物倾至150ml水中。用二氯甲烷萃取，经硫酸镁干燥并真空浓缩为残留物。层析(硅胶，10％-20％乙酸乙酯/己烷)该残留物得到0.74g产物。质谱MH+=541.0。
1H NMR(CDCl3,200MHz):8.52(s,1H)；7.5(d,2H)；7.2(s,1H),4.15(q,2H)；3.9-3.7(m,2H)；3.5-3.1(m,4H)；3.0-2.5(m,2H)；2.4-2.2(m,2H)；2.1-1.9(m,2H)；1.26(t,3H)。
将步骤D的产物(0.70g,1.4mmol)与8ml浓盐酸水溶液混合，于回流下将该混合物加热过夜。加入30ml 1N氢氧化钠水溶液，然后加入5ml 50％氢氧化钠水溶液，用二氯甲烷萃取该混合物。用硫酸镁干燥萃取物，真空浓缩得到0.59g目标化合物。质谱M+=468.7。m.p.=123.9-124.2℃。
制备实施例5 步骤A
制备得自制备实施例4的目标化合物(8.1g)的甲苯溶液，加入17.3ml 1M DIBAL的甲苯溶液。于回流下加热该混合物，用40分钟缓慢滴加另外21ml 1M DIBAL/甲苯溶液。将该反应混合物冷却至约0℃，加入700ml 1M盐酸水溶液。分离并弃去有机相。用二氯甲烷洗涤水相，弃去萃取物，然后加入50％氢氧化钠水溶液碱化水相。用二氯甲烷萃取该混合物，经硫酸镁干燥萃取物，真空浓缩得到7.30g目标化合物，为对映体的外消旋混合物。
步骤B-对映体的分离
用制备性手性层析(Chiralpack AD,5cm×50cm柱，用20％异丙醇/己烷+0.2％二乙胺洗脱)分离步骤A的外消旋的目标化合物，得到目标化合物的(+)-异构体和(-)-异构体。
(+)-异构体的理化数据m.p.=148.8℃；质谱MH+=472；[α]D25=+65.6°(12.93mg/2ml甲醇)(-)-异构体的理化数据m.p.=112℃；质谱MH+=472；[α]D25=-65.2°(3.65mg/2ml甲醇)制备实施例6 步骤A
将原料酮(40.0g,0.124mol)与200ml硫酸混合，冷却至0℃。用1.5小时缓慢加入13.78g(0.136mol)硝酸钾，然后加热该混合物至室温并搅拌过夜。用与制备实施例4步骤A所述基本相同的方法处理反应物。层析(硅胶，用20％、30％、40％、50％乙酸乙酯/己烷，然后用100％乙酸乙酯洗脱)得到28g 9-硝基产物以及少量的7-硝基产物和19g7-硝基化合物与9-硝基化合物的混合物。
步骤B
根据与制备实施例4步骤C基本相同的方法，使步骤A的9-硝基产物(28g,76.2mmol)、400ml 85％乙醇/水、3.8g(34.3mmol)氯化钙和38.28g(0.685mol)铁反应，得到24g产物。
步骤C
将步骤B的产物(13g,38.5mmol)与140ml乙酸混合，用20分钟缓慢加入2.95ml(57.8mmol)溴的10ml乙酸溶液。于室温下搅拌该反应混合物，然后真空浓缩为残留物。加入二氯甲烷和水，然后用50％氢氧化钠水溶液将pH调至8-9。顺序用水和盐水洗涤有机相，经硫酸钠干燥。真空浓缩得到11.3g产物。
步骤D
将100ml浓盐酸水溶液冷却至0℃，然后加入5.61g(81.4mmol)亚硝酸钠，搅拌10分钟。缓慢加入(分次)11.3g(27.1mmol)步骤C的产物，于0-3℃将该混合物搅拌2.25小时。缓慢加入(分次)180ml 50％次磷酸水溶液，于0℃放置过夜。用30分钟缓慢加入(分次)150ml 50％氢氧化钠将pH调至9，然后用二氯甲烷萃取该混合物。顺序用水和盐水洗涤萃取物，用硫酸钠干燥。将该混合物真空浓缩为残留物，层析(硅胶，2％乙酸乙酯/二氯甲烷)得到8.6g产物。
步骤E
将步骤D的产物(8.6g,21.4mmol)与300ml甲醇混合，冷却至0-2℃。加入1.21g(32.1mmol)硼氢化钠，于约0℃搅拌该混合物1小时。再加入另外0.121g(3.21mmol)硼氢化钠并于0℃再搅拌该混合物2小时，然后于0℃放置过夜。真空浓缩为残留物，使其分配于二氯甲烷和水之间。分离有机相，真空(50℃)浓缩得到8.2g产物。
步骤F
将步骤E的产物(8.2g,20.3mmol)与160ml二氯甲烷混合，冷却至0℃，然后用30分钟缓慢加入(滴加)14.8ml(203mmol)二氯亚砜。将该混合物温热至室温，搅拌4.5小时，然后真空浓缩为残留物，加入二氯甲烷，顺序用1N氢氧化钠水溶液和盐水洗涤，用硫酸钠干燥。真空浓缩为残留物，然后加入无水THF和8.7g(101mmol)哌嗪，于室温下搅拌过夜。真空浓缩为残留物，加入二氯甲烷，顺序用0.25N氢氧化钠水溶液、水和盐水洗涤。经硫酸钠干燥并真空浓缩，得到9.46g粗品产物。层析(硅胶，5％甲醇/二氯甲烷+氨)得到3.59g目标化合物，为外消旋物。1H NMR(CDCl3,200MHz):8.43(d,1H)；7.55(d,1H)；7.45(d,1H)；7.11(d,1H)；5.31(s,1H)；4.86-4.65(m,1H)；3.57-3.40(m,1H)；2.98-2.55(m,6H)；2.45-2.20(m,5H)。
步骤G-对映体的分离
根据制备实施例6步骤D所述方法，层析分离步骤F的外消旋的目标化合物(5.7g)，用30％异丙醇/己烷+0.2％二乙胺洗脱，得到2.88g目标化合物的R-(+)-异构体和2.77g目标化合物的S-(-)-异构体。
R-(+)-异构体的理化数据质谱MH+=472.0；[α]D25=+12.1°(10.9mg/2ml甲醇)R-(-)-异构体的理化数据质谱MH+=472.0；[α]D25=-13.2°(11.5lmg/2ml甲醇)制备实施例7
(+)-异构体步骤A
将制备实施例4步骤B的产物(9.90g,18.9mmol)溶于150ml二氯甲烷和200ml乙腈中，加热至60℃。加入2.77g(20.8mmol)N-氯代琥珀酰亚胺，加热至回流3小时，用TCL(30％乙酸乙酯/水)监测反应进行。再加入2.35g(10.4mmol)N-氯代琥珀酰亚胺，再回流45分钟。将该反应混合物冷却至室温，用1N氢氧化钠和二氯甲烷萃取。用硫酸镁干燥二氯甲烷层，过滤并经快速层析(1200ml正相硅胶，用30％乙酸乙酯/水洗脱)，得到6.24g所需产物。M.p.193-195.4℃。
步骤B
于-10℃，向160ml浓盐酸中加入2.07g(30.1mmol)亚硝酸钠，搅拌10分钟。加入步骤A的产物(5.18g,10.1mmol)，将该反应混合物从-10℃加热至0℃2小时。将反应物冷却至-10℃，加入100ml次磷酸，放置过夜。为萃取反应混合物，将其倾至碎冰中，用50％氢氧化钠/二氯甲烷碱化。用硫酸镁干燥有机层，过滤并浓缩至干。经快速层析(600ml正相硅胶，用20％乙酸乙酯/水洗脱)纯化，得到3.98g产物。质谱MH+=497.2。
步骤C
将3.9g步骤B的产物溶于100ml浓盐酸中并回流过夜。冷却该混合物，用50％w/w氢氧化钠碱化，用二氯甲烷萃取产生的混合物。用硫酸镁干燥二氯甲烷层，蒸发溶剂，在真空下干燥得到3.09g所需产物。质谱MH+=424.9。
步骤D
用类似于制备实施例6的方法，得到1.73g所需产物，m.p.169.6-170.1℃；[α]D25=+48.2°(c=1,MeOH)。
制备实施例8
步骤A
将WO95/10516的制备实施例1步骤G的产物(82.0g,0.26mol)与1L甲苯混合，然后加入20.06g(0.53mol)氢化铝锂，于回流下将该反应混合物加热过夜。将该混合物冷却至室温，加入约1L乙醚，接着滴加饱和的硫酸钠水溶液至形成沉淀。过滤并在硫酸镁中搅拌滤液30分钟，然后真空浓缩得到产物化合物，产率为83％。质谱MH+=313。
步骤B
将步骤A的产物(24.32g,74.9mmol)、500ml甲苯、83ml Et3N和65.9ml氯代甲酸乙酯混合，于回流下将该混合物加热过夜。冷却至25℃，倾至200ml水中，用乙酸乙酯萃取。经硫酸镁干燥萃取物，真空浓缩为残留物，层析(硅胶，50％乙酸乙酯/己烷)得到15g产物化合物。质谱MH+=385。
步骤C
将3.2g(10.51mmol)四-正丁基硝酸铵溶于25ml二氯甲烷中，加入2.2g(10.51mmol,1.5ml)TFAA。冷却至0℃，于0℃通过导管将该混合物加至3.68g(9.56mmol)步骤B产物的50ml二氯甲烷溶液中，然后于0℃搅拌3小时。在搅拌下使该混合物温热至25℃过夜，然后用饱和的碳酸氢钠水溶液萃取，经硫酸镁干燥。真空浓缩为残留物，层析(硅胶，30％乙酸乙酯/己烷)得到1.2g产物化合物。质谱MH+=430。
步骤D
将步骤C的产物(2.0g,4.7mmol)与85％乙醇水溶液混合，加入2.4g(42mmol)铁屑和0.24g(2.1mmol)氯化钙，于回流下加热16小时。通过celite垫过滤热的混合物，用热乙醇洗涤celite。真空浓缩滤液，得到100％产率的产物化合物。质谱MH+=400。
步骤E
将步骤D的产物(2.0g,5.2mmol)与20ml 48％HBr混合，将该混合物冷却至-5℃。加入1.4ml溴，于-5℃搅拌该混合物15分钟，缓慢加入1.07g(15.5mmol)亚硝酸钠的10ml水溶液。搅拌45分钟，然后用50％氢氧化钠水溶液骤冷至pH约为10。用乙酸乙酯萃取，经硫酸镁干燥合并的萃取物，真空浓缩得到产物化合物。质谱MH+=465。
步骤F
通过与WO95/10516实施例358步骤A所述基本相同的方法，水解4.0g步骤E的产物，得到1.39g产物化合物。质谱MH+=392。
实施例1(+)-4-(3-溴代-8,10-二氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌啶甲酰胺
将制备实施例7步骤D的目标化合物(0.3g,0.7mmol)和三甲基硅烷基异氰酸酯(1.6g,14.1mmol)溶于二氯甲烷(6ml)中，于室温、氮气下将该反应物搅拌72小时。然后加入饱和的碳酸氢钠水溶液(20ml)。用二氯甲烷萃取所需产物。经硫酸镁干燥合并的二氧甲烷萃取物，真空浓缩，得到为白色固体的目标化合物(0.3g，产率97％,mp=101.9-102.8℃,MH+=470)。
实施例2(+)-4-(3,10-二溴代-8-氯代-6,11-二氢-SH-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-[4-(二甲基氨基)-1-氧代丁基]哌啶
将制备实施例5步骤B的-(+-异构体)目标化合物溶于7ml DMF中，然后冷却至约4℃。然后顺序加入4-(二甲基氨基)丁酸盐酸盐(0.13g,0.83mmol)、DEC(0.16g,0.83mmol)、HOBT(0.11g,0.83mmol)和4-甲基吗啉(0.08g,91mM,0.83mmol)。于室温下，将该反应混合物搅拌过夜，真空浓缩反应混合物为残留物，使其分配于二氯甲烷和饱和的碳酸氢钠水溶液之间。用二氯甲烷进一步萃取水相。合并二氯甲烷组分，经硫酸镁干燥，然后真空浓缩为残留物，经硅胶柱层析，用10％氨饱和的甲醇/二氯甲烷洗脱，得到为白色固体的目标化合物(0.3g，产率81％,mp=78-80℃,MH+=584)。
实施例3(+)-1-(氨基乙酰基)-4-(3-溴代-8,10-二氯代-6,11-二氢-SH-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)哌啶
将实施例26的目标化合物(0.6g,1.02mmol)溶于二氯甲烷(6ml)中，然后加入三氟乙酸(6ml)。于室温下，将该反应混合物搅拌4小时。将其倾至冰中，用50％(w/v)氢氧化钠水溶液将pH调至10。用二氯甲烷萃取反应混合物。用水和盐水洗涤合并的二氯甲烷萃取物，经硫酸钠干燥。旋转蒸发去除溶剂，得到为白色固体的目标化合物(0.447g,mp=81-122℃,MH+=484)。
根据与上述实施例2所述基本相同的方法，但是用下列表1第1栏的羧酸代替4-(二甲基氨基)丁酸盐酸盐，用(+)-4-(3-溴代-8,10-二氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌啶代替(+)-4-(3,10-二溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-哌啶(制备实施例7步骤D的目标化合物)，可以得到表1第2栏所列的终产物。
表1的R基团指下面式(1.0)”化合物的基团。
表1
实施例27(+)-1-(4-氨基-1-氧代丁基)-4-(3-溴代-8,10-二氯代-6.11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)哌啶
根据与上述实施例3所述基本相同的方法，但是用HCl的二氧六环溶液代替TFA，由实施例25的目标化合物制备该目标化合物，得到为白色固体的目标化合物(mp=112-118℃,MH+=512,αD24=64.0°,c=0.14，乙醇)。
实施例28(+)-N-[2-[4-(3-溴代-8,10-二氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)哌啶基]-2-氧代乙基]甲磺酰胺
将实施例3的目标化合物(0.15g,0.31mmol)溶于二氯甲烷(1.5ml)中。然后加入4-甲基吗啉(102μl)，接着加入甲磺酰氯(36μl,0.47mmol,1.5eq)。于室温下将反应混合物搅拌过夜。用饱和的碳酸氢钠和盐水将二氯甲烷相洗涤两次，然后经硫酸钠干燥。旋转蒸发去除二氯甲烷，产生的残留物经硅胶柱层析纯化，用30％乙酸乙酯/二氯甲烷洗脱，得到为白色固体的目标化合物(0.109g,mp=120-140℃,MH+=562)。
实施例29(+)-N-[4-[4-(3-溴代-8,10-二氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)哌啶基]-2-氧代丁基]甲磺酰胺
根据与实施例28所述基本相同的方法，由实施例27的目标化合物制备该目标化合物，得到为白色固体的目标化合物(mp=110-113℃,MH+=590)。
实施例30(+)-N-[2-[4-(3-溴代-8,10-二氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)哌啶基]-2-氧代乙基]脲
根据与实施例1所述基本相同的方法，由实施例3的目标化合物制备该目标化合物，得到为白色固体的目标化合物(MH+=527)。
实施例31(+)-N-[2-[4-(3-溴代-8,10-二氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)哌啶基]-2-氧代丁基]脲
将实施例27的目标化合物(0.05g,0.091mmol)溶于水(1ml)中，加入脲(0.055g,0.9mmol)。于约78℃将该反应物搅拌过夜。使反应混合物分配于1N氢氧化钠和二氯甲烷之间。经硫酸镁干燥二氯甲烷组分，浓缩。残留物经硅胶板层析纯化，用5％氨饱和的甲醇-二氯甲烷洗脱，得到为淡黄色粉末的目标化合物(MH+=555,mp=182-190℃)。
实施例32(+)-4-(3,10-二溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-[4-(1,3-二氢-1,3-二氧代-2H-异吲哚-2-基)-1-氧代丁基]哌啶
将制备实施例5步骤B(+对映体)目标化合物(100mg,0.21mmol)溶于2ml DMF中，加入1-羟基苯并三唑水合物(43mg,0.32mmol)、4-(1,3-二氧代-1,3-二氢异吲哚-2-基)丁酸(0.02ml,0.32mmol)、1-甲基-吗啉(0.04ml,0.32mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(61mg,0.32mmol)。于室温下，将产生的混合物搅拌65小时，将其倾至10ml饱和的碳酸氢钠溶液中。用二氯甲烷萃取混合物水溶液，用盐水和水洗涤有机溶液，经硫酸镁干燥并蒸发。产生的残留物经硅胶层析纯化，用2.5％氨饱和的甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂，得到107mg为白色固体的目标化合物(mp 100.5℃-101.8℃,MH+686)。
实施例334-(8,10-二氯代-3-溴代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-[4-(1,3-二氢-1,3-二氧代-2H-吡咯并[3,4-c]吡啶-2-基)-1-氧代丁基]哌啶
将制备实施例27的目标化合物(93.3mg,0.171mmol)溶于0.75mlDMF和三乙胺(50μl,0.36mmol)中，加入3,4-吡啶二羧酸酐(30.4g,0.204mmol)。于室温下，将该混合物搅拌4.5小时，加热至40℃至50℃0.5小时，然后蒸发至干。将残留物悬浮于1ml乙酸酐中，加热至85℃至95℃24小时。将该混合物蒸发至干。将残留物溶于2ml DMF和0.5ml水中，于蒸汽浴上加热0.5小时，然后加至搅拌的碳酸氢钠(170.3mg)的10ml水溶液中。过滤产生的悬浮液，用水洗涤滤饼，然后于50℃真空干燥16小时，得到81.9mg为白色固体的目标化合物。mp 105.9℃-112.2℃,MH+643。
实施例344-(8,10-二氯代-3-溴代-6,11-二氢-54-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-[4-(1,3-二氢-1,3-二氧代-2H-吡咯并[3,4-b]吡啶-2-基)-1-氧代丁基]哌啶
将制备实施例27的目标化合物(104mg,0.191mmol)溶于0.75mlDMF和三乙胺(50μl,0.36mmol)中,加入2,3-吡啶二羧酸酐(301.6mg,0.212mmol)。于室温下，将该混合物搅拌2小时，然后蒸发至干。将残留物悬浮于1ml乙酸酐中，加热至70℃至80℃2小时，蒸发至干。将残留物溶于1.5ml热DMF中，加至146mg碳酸氢钠的10ml水溶液中。过滤产生的沉淀，用水洗涤，于50℃真空干燥16小时，得到74.0mg为白色固体的目标化合物(mp 126.0℃-135.2℃，以每分钟2-3℃速率加热)，MH+643。
实施例354-(8,10-二氯代-3-溴代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-[4-(1,3-二氢-1,3-二氧代-2H-吡咯并[3,4-b]吡嗪-2-基)-1-氧代丁基]哌啶
根据实施例33的方法，用100.0mg(0.19mmol)实施例37的目标化合物、44.0mg(0.241mmol)2,3-吡嗪二羧酸酐和55μl三乙胺的0.75ml DMF溶液。根据实施例33所述方法，得到为白色固体的目标化合物mp 124.0℃-125.5℃,MH+610。
实施例36(+/-)-1-(5-氮杂-8,8-二甲基-1,6-二氧代-7-氧基壬基)-4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)哌啶
根据与实施例27的原料制备中所述基本相同的方法，由制备实施例8的目标化合物制备该目标化合物(mp=90.3℃-93.4℃,MH+=578)。
实施例37(+/-)-1-(4-氨基-1-氧代丁基)-4-(3-溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)哌啶
根据与实施例27中所述基本相同的方法，由实施例36的目标化合物制备该目标化合物，得到为淡黄色固体的目标化合物(mp50.8-55.5℃,MH+478)。
实施例38(+)-4-(3-溴代-8,10-二氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-[4-(哌啶基)-1-氧代丁基]哌啶
将制备实施例3的目标化合物(0.1g,0.17mmol)和哌啶(0.1ml,1.04mmol)溶于5ml二氯甲烷中，于室温下搅拌48小时。去除所有的挥发物，产生的粗品产物经硅胶制备板层析纯化，用20％甲醇-氨-二氯甲烷洗脱，得到0.02g目标化合物，FAB-MS:MH+=580。
实施例39(+)-4-(3-溴代-8,10-二氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11-基)-1-[4-(吗啉基)-1-氧代丁基]哌啶
根据与实施例38中所述基本相同的方法，但是用吗啉代替哌啶制备该目标化合物，得到固体，FAB-MS:MH+=582。
实施例42
将实施例27的目标化合物(0.1g,0.18mmol)、溴代乙酰胺(0.04g,0.3mmol)和碳酸钾溶于2ml DMF中，使其静置18小时。真空浓缩该反应混合物。将残留物溶于乙酸乙酯中，用水洗涤，经硫酸镁干燥，浓缩得到白色固体。mp=110℃-123℃,MH=626,αD24=+30.6°,c=0.17，二氯甲烷。
实施例43
根据与实施例2中所述基本相同的方法，但是用4-(二乙基氨基)丁酸代替4-(甲基氨基)丁酸，制备该目标化合物，mp=69.9-70.1℃。
实施例44
根据与实施例2中所述基本相同的方法，但是用硫代吗啉S-二氧化物乙酸代替4-(二乙基氨基)丁酸，制备该目标化合物。
实施例45(+)-4-(3,10-二溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11(R)-基)-β-氧代-1-哌啶丙酸乙酯
将制备实施例5步骤B的(+-异构体)产物(0.4g,0.85mmol)溶于DMF(10ml)中，然后冷却至约4℃。加入丙二酸一乙酯钾盐(0.19g,1.1mmol)，接着加入DEC(0.2g,1.1mmol)、HOBT(0.15g,1.1mmol)和4-甲基吗啉(0.11g,0.12μl,1.1mmol)。然后于室温下，将该反应物搅拌过夜。真空浓缩反应混合物为残留物，使其分配于二氯甲烷和饱和的碳酸氢钠水溶液之间。用二氯甲烷萃取水相，经硫酸镁干燥合并的二氯甲烷组分，真空浓缩。产生的残留物经硅胶柱层析，用50％乙酸乙酯-己烷作为洗脱剂，得到为白色固体的目标化合物(0.41g,产率82％,m.p.=86-87℃,MH+=585)。
实施例46(+)-4-(3,10-二溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11(R)-基)-β-氧代-1-哌啶丙酸钠
将实施例45的产物(0.34g,0.58mmol)溶于无水乙醇(10ml)中。加入水(0.7ml),接着加入氢氧化钠(0.03g,0.7mmol)。于室温下，将该反应混合物搅拌16小时。旋转蒸发去除溶剂，得到为白色固体的目标化合物(0.34g，产率100％,m.p.=230℃(分解)，MH+=556)。
实施例474-(3,10-二溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11(R)-基)-β-氧代-1-哌啶丙酰胺
将实施例46的产物(0.4g,0.72mmol)溶于DMF(10ml)中，然后冷却至约4℃。加入氯化铵(0.05g,0.94mmol)，接着加入DEC(0.17g,0.94mmol)、HOBT(0.13g,0.94mmol)和4-甲基吗啉(0.09g,0.1μl,0.094mmol)。然后于室温下，将该反应物搅拌过夜。真空浓缩反应混合物为残留物，使其分配于二氯甲烷和饱和的碳酸氢钠水溶液之间。用二氯甲烷进一步萃取水相，经硫酸镁干燥合并的二氯甲烷组分，真空浓缩。产生的残留物经硅胶柱层析，用50％乙酸乙酯-己烷作为洗脱剂，得到为白色固体的目标化合物(0.22g，产率55％,m.p.=143-144℃,MH+=556)。
实施例48(+)-4-(3,10-二溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11(R)-基)-γ-氧代-1-哌啶丁酸甲酯
根据与实施例45中所述基本相同的方法，用适当的二酸单酯制备该目标化合物，得到为白色固体的目标化合物(产率72％,m.p.=78-79℃,MH+=584)。
实施例49(+)-4-(3,10-二溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11(R)-基)-γ-氧代-1-哌啶丁酸钠
根据与实施例46中所述基本相同的方法，用实施例48的产物制备该目标化合物，得到为白色固体的目标化合物(产率94％,m.p.=270℃(分解)，MH+=570)。
实施例50(+)-4-(3,10-二溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11(R)-基)-γ-氧代-1-哌啶丁酰胺
根据与实施例47中所述基本相同的方法，用实施例49的产物制备该目标化合物，得到为白色固体(产率45％,m.p.=134-135℃,MH+=570)。
实施例51(+)-4-(3,10-二溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11(R)-基)-δ-氧代-1-哌啶戊酸甲酯
根据与实施例45中所述基本相同的方法，用适当的二酸单酯制备该目标化合物，得到为白色固体的目标化合物(产率94％,m.p.=74-75℃,MH+=599)。
实施例52(+)-4-(3,10-二溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11(R)-基)-δ-氧代-1-哌啶戊酸钠
根据与实施例46中所述基本相同的方法，用实施例51的产物制备该目标化合物，得到为白色固体的目标化合物(产率93％,m.p.=282℃(分解)，MH+=584)。
实施例53(+)-4-(3,10-二溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11(R)-基)-δ-氧代-1-哌啶戊酰胺
根据与实施例47中所述基本相同的方法，用实施例52的产物制备该目标化合物，得到为白色固体(产率61％,m.p.=124-125℃,MH-=584)。
实施例54(+)-4-(3,10-二溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11(R)-基)-ε-氧代-1-哌啶己酸甲酯
根据与实施例45中所述基本相同的方法，用适当的二酸单酯制备该目标化合物，得到为白色固体的目标化合物(产率92％,m.p.=84-85℃,MH+=613)。
实施例55(+)-4-(3,10-二溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11(R)-基)-ε-氧代-1-哌啶己酸钠
根据与实施例46中所述基本相同的方法，用实施例54的产物制备该目标化合物，得到为白色固体的目标化合物(产率97％,m.p.=135-136℃,MH+=598)。
实施例56(+)-4-(3,10-二溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11(R)-基)-ε-氧代-1-哌啶己酰胺
根据与实施例47中所述基本相同的方法，用实施例55的产物制备该目标化合物，得到为白色固体的目标化合物(产率38％,m.p.=119-120℃,MH+=598)。
实施例57(+)-4-(3,10-二溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11(R)-基)-ω-氧代-1-哌啶庚酸甲酯
根据与实施例45中所述基本相同的方法，用适当的二酸单酯制备该目标化合物，得到为油状物的目标化合物(产率97％,MH+=627)。
实施例58(+)-4-(3,10-二溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11(R)-基)-ω-氧代-1-哌啶庚酸钠
根据与实施例46中所述基本相同的方法，用实施例57的产物制备该目标化合物，得到为白色固体的目标化合物(产率82％,m.p.=142-143℃,MH+=613)。
实施例59(+)-4-(3,10-二溴代-8-氯代-6,11-二氢-5H-苯并[5,6]芳庚并[1,2-b]吡啶-11(R)-基)-ω-氧代-1-哌啶庚酰胺
根据与实施例47中所述基本相同的方法，用实施例58的产物制备该目标化合物，得到为白色固体的目标化合物(产率30％,m.p.=96-97℃,MH+=612)。
实施例60
根据与实施例47中所述基本相同的方法，用适当的胺由实施例58的产物制备该目标化合物，得到目标化合物。
实施例61
根据与实施例47中所述基本相同的方法，用适当的胺和实施例58的产物制备该目标化合物，得到目标化合物。
实施例62
根据与实施例47中所述基本相同的方法，用适当的胺和实施例58的产物制备该目标化合物，得到目标化合物。
药物剂型实施例实施例A-片剂
制备方法使序号1和2的成分在适合的混合器中混合10-15分钟。将与序号3成分的混合物制粒。如果需要可通过粗筛(如1/4”,0.63cm)磨碎湿颗粒。干燥湿颗粒。如果需要，过筛干燥的颗粒并使其与序号4的成分混合10-15分钟。加入序号5的成分并混合1-3分钟。在合适的压片机上将该混合物压片成适当的大小和重量。
实施例B-胶囊
制备方法使序号1,2和3的成分在适合的混合器中混合10-15分钟。加入序号4的成分并混合1-3分钟。在合适的包囊机上将该混合物填入两节的硬明胶胶囊中。
尽管结合以上提出的具体的实施方案介绍本发明，它的许多另外的方案、修改和变化对本领域普通技术人员来说应是显而易见的。所有这些选择、修改和变化都将认为是在本发明的精神和范围内。
权利要求
1．下式的化合物或其药学上可接受的盐
其中当在C-11位存在双键时，X为N、CH或C；a、b、c和d中之一代表N或NR9，其中R9为O-、-CH3或-(CH2)nCO2H，其中n是1-3，而其余的a,b,c和d基团代表CR1或CR2；或每个a、b、c和d独立选自CR1或CR2；每个R1和每个R2独立选自H、卤代、-CF3、-OR10(如-OCH3)、-COR10、-SR10(如-SCH3和-SCH2C6H5)、-S(O)tR11(其中t是0、1或2，如-SOCH3和-SO2CH3)、-SCN、-N(R10)2、-NR10R11、-NO2、-OC(O)R10、-CO2R10、-OCO2R11、-CN、-NHC(O)R10、-NHSO2R10、-CONHR10、-CONHCH2CH2OH、-NR10COOR11、
-SR11C(O)OR11(如-SCH2CO2CH3)、-SR11N(R12)2，其中每个R12独立选自H和-C(O)OR11(如-S(CH2)2NHC(O)O-叔丁基和-S(CH2)2NH2)、苯并三唑-1-基氧基、四唑-5-基硫代或取代的四唑-5-基硫代(如烷基取代的四唑-5-基硫代，像1-甲基-四唑-5-基硫代)、链炔基、链烯基或烷基，所述烷基或链烯基可选被卤素、-OR10或-CO2R10取代；R3和R4是相同的或不同的，且各自独立代表H、R1和R2的任何取代基，或者R3和R4一起代表与苯环(环Ⅲ)稠合的饱和或不饱和C5-C7环；R5、R6、R7和R8各自独立代表H、-CF3、-COR10、烷基或芳基，所述烷基或芳基任选被下列基团取代-OR10、-SR10、-S(O)tR11、-NR10COOR11、-N(R10)2、-NO2、-COR10、-OCOR10、-OCO2R11、-CO2R10、-OPO3R10，或R5与R6结合代表=O或=S，和/或R7与R8结合代表=O或=S；R10独立代表H、烷基、芳基或芳烷基；R11代表烷基或芳基；碳原子5和6之间的虚线代表任选的双键，如此当存在双键时，A和B独立代表-R10、卤代、-OR11、-OCO2R11或-OC(O)R10，当碳原子5和6之间无双键存在时，A和B每个独立代表H2、-(OR11)2、H和卤代、二卤代、烷基和H、(烷基)2、-H和-OC(O)R10、H和-OR10、=O、芳基和H、=NOR10或-O-(CH2)p-O-，其中p是2、3或4；和v为0-5；w为0或1；Y为
-O-C1-C6-烷基或-OM+，其中M+为碱金属阳离子；R21和R22分别独立为H、C1-C6烷基、-CH2CONH2、苯基、苄基、-SO2-(C1-C6-烷基)、-NH-苯基、乙酰基、C3-C6环烷基、吡啶基、氯代苯基、
或R21和R22与它们所连接的氮一起形成
或
破折号代表可选的化学键；其中Q为苯或杂环。
2．下式的权利要求1的化合物
其中v为0-4,w为0,y为
3．权利要求1的化合物，其中a为N,R1、R2、R3和R4分别独立选自H或卤素。
4．权利要求3的化合物，其中R1为H,R2为Br,R3和R4分别独立选自Br和Cl。
5．权利要求4的化合物，其中X为CH。
6．权利要求5的化合物，其中R3为Cl和R4为Br。
7．权利要求1的化合物，其中w是1、v为0-5,R1为H,R2为Br,R3和R4独立为Cl和Br,R5-R6分别为H,X为CH和Y为-O-C1-C6-烷基、NH2或-OM+。
8．权利要求1的化合物选自下式的化合物或其药学上可接受的盐
和
9．治疗表达激活的ras癌基因的肿瘤细胞的方法，该方法包括给子有效量的权利要求1的化合物。
10．权利要求9的方法，其中被治疗的细胞为胰肿瘤细胞、乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、肺癌细胞、骨髓性白血病肿瘤细胞、甲状腺滤泡肿瘤细胞、脊髓发育不良肿瘤细胞、表皮癌肿瘤细胞、膀胱癌肿瘤细胞和结肠肿瘤细胞。
11．权利要求9的方法，其中所述抑制针对其中Ras蛋白因另一种非Ras基因的基因致癌突变而被激活的肿瘤细胞。
12．抑制法呢基蛋白转移酶的方法，该方法包括给予有效量的权利要求1的化合物。
13．抑制细胞异常生长的药用组合物，它包括有效量的权利要求1的化合物和药学上可接受的载体。
14．将下式的化合物转化为相应的7-或9-硝基化合物的方法，
或
该方法包括a)将式A或B化合物与酸水溶液混合，b)将所述反应混合物冷却至-20℃至-40℃，c)并随后在步骤b的温度下加入硝酸钾。
全文摘要
本发明涉及式(1.0)三环化合物，其中R
文档编号C07D401/14GK1238770SQ97199602
公开日1999年12月15日 申请日期1997年9月11日 优先权日1996年9月13日
发明者F·G·乔罗格, R·J·多尔, S·W·雷米斯泽维斯基 申请人:先灵公司