专利名称：P38的杂环抑制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及P38抑制剂，P38为一种参与细胞增殖、细胞死亡以及对细胞外刺激的反应的哺乳动物蛋白激酶。本发明还涉及制备这些抑制剂的方法。本发明还提供了含有本发明抑制剂的药物组合物以及利用这些组合物来治疗和预防各种失调的方法。
蛋白激酶参与各种对外细胞信号的细胞反应。最近，发现了一个有丝分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)家族。这个家族的成员是Ser/Thr激酶，其通过磷酸化作用活化它们的底物[B.Stein等人，Ann.Rep.Med.Chem.,31,pp.289-98(1996)]。MAPKs本身是靠各种信号来活化的，包括生长因子，细胞因子，UV照射以及紧张诱导剂。
一种特别感兴趣的MAPK是P38。已知P38还是一种与蛋白(CSBP)和RK结合的细胞因子抑制抗炎药物，已从用脂多糖(LPS)受体、CD14转染并用LPS诱导过的鼠性动物的pre-B细胞中分离到P38。已对P38进行了分离和排序，正如cDNA在人类和鼠类动物中的编码一样。在通过压迫进行刺激的细胞中已经观察到P38的活化，例如借助脂多糖(LPS)、UV、茴香霉素或渗透休克进行处理，以及借助细胞因子，例如IL-1和TNF进行处理。
对P38激酶的抑制导致了IL-1和TNF生成的阻断。IL-1和TNF可以刺激其它炎症原性细胞因子(例如IL-6和IL-8)的生成，并牵涉到急慢性炎症疾病和绝经后的骨质疏松[R.B.Kimble等人，Endocrinol.,136,PP.3054-61(1995)]。
基于这一发现，人们认为P38及其它MAPKs在调节细胞对炎性刺激(例如白细胞聚集，巨噬细胞/单细胞活化，组织吸收，发烧，急性相反应以及中性白细胞增多症)的反应方面起着一定的作用。另外，MAPKs，例如P38还牵涉到癌症，血栓诱导的血小板聚集，自身免疫失调，免疫缺陷疾病，细胞死亡，过敏，骨质疏松和神经变性失调。P38抑制剂也通过对前列腺素内过氧化物合成酶-2诱导的抑制参与疼痛治疗领域。WO 96/21654中提出了其它与IL-1,IL-6,IL-8或TNF过量生成有关的疾病。
其它人已经开始尝试开发能特异性地抑制MAPKs的药物。例如PCT申请WO 95/31451描述了可以抑制MAPKs，特别是P38的吡唑化合物。然而，这些抑制剂在体内的效力仍在研究中。
因此，依然存在开发其它可用于治疗各种与P38活化有关的疾病状况的强P38抑制剂(包括P38-特异性抑制剂)的需要。
本发明通过提供对P38具有强抑制作用的化合物而致力于解决这一问题。
这些化合物具有下列通式 其中Q1和Q2独立地选自苯基或5-6元芳香杂环系统，或包含芳香碳环，芳香杂环或芳香碳环和芳香杂环组合的8-10元双环系统；杂环系统或杂环含有1-4个杂原子，其独立地选自N,O,S,SO以及SO2。
构成Q1的环可被1-4个取代基取代，每一个取代基均独立地选自卤素；被NR’2,OR’,CO2R’或CONR’2所任意取代的C1-C3烷基；被NR’2,OR’,CO2R’或CONR’2所任意取代的O-(C1-C3)-烷基；NR’；OCF3；CF3；NO2；CO2R’；CONR’；SR’；S(O2)N(R’)2；SCF3；CN；N(R’)C(O)R4；N(R’)C(O)OR4；N(R’)C(O)C(O)R4；N(R’)S(O2)R4；N(R’)R4；N(R4)2；OR4；OC(O)R4；OP(O)3H2；或N=C-N(R’)2；构成Q2的环可任意地被多至4个的取代基取代，每一个取代基均独立地选自卤素；被NR’2,OR’,CO2R’,S(O2)N(R’)2,N=C-N(R’)2,R3,或CONR’2所任意取代的C1-C3直链或支链烷基；O-(C1-C3)-烷基；被NR’2,OR’,CO2R’,S(O2)N(R’)2,N=C-N(R’)2, R3,或CONR’2所任意取代的O-(C1-C3)-烷基；NR’2；OCF3；CF3；NO2；CO2R’；CONR’；R3；OR3；NR3；SR3；C(O)R3；C(O)N(R’)R3；C(O)OR3；SR’；S(O2)N(R’)2；SCF3；N=C-N(R’)2；或CN；Q2’选自苯基或被1-3个取代基任意取代的5-6元芳香杂环，上述每一个取代基独立地选自卤素；被NR’2,OR’,CO2R’,CONR’2或O-P(O)3H2所任意取代的C1-C3烷基；被NR’2,OR’,CO2R’,或OP(O)3H2所任意取代的O-(C2-C3)-烷基；OCF3；CF3；OR4；O-CO2R4；O-P(O)3H2；CO2R’；CONR’；SR’；S(O2)N(R’)2；SCF3；CN；N(R’)C(O)R4；N(R’)C(O)OR4；N(R’)C(O)C(O)R4；N(R’)S(O2)R4；N(R’)R4；N(R4)2；OR4；OC(O)R4；OP(O)3H2；或N=C-N(R’)2；条件是Q2’不为被1-3个独立选自卤素，甲氧基，氰基，硝基，氨基，羟基，甲基或乙基所取代的苯基；R’选自氢；(C1-C3)-烷基；(C2-C3)-链烯基或链炔基；苯基或被1-3个独立选自卤素，甲氧基，氰基，硝基，氨基，羟基，甲基或乙基所取代的苯基；或被1-3个取代基任意取代的5-6元杂环系统，所述取代基独立地选自卤素，甲氧基，氰基，硝基，氨基，羟基，甲基或乙基；R3选自5-8元芳香或非芳香碳环或杂环系统，它们可被R’,OR4,-C(O)R’；-C(O)R4,-C(O)OR4或-J任意取代；包含芳香碳环，芳香杂环或芳香碳环和芳香杂环组合的8-10元双环系统，它们可被R’,R4,-C(O)R’；-C(O)R4,-C(O)OR4或-J任意取代。
R4为被N(R’)2,OR’,CO2R’,CON(R’)2,或SO2N(R2)2所任意取代的(C1-C4)直链或支链烷基；或被N(R’)2,OR’,CO2R’,CON(R’)2,或SO2N(R2)2任意取代的5-6元碳环或杂环系统。
R5选自氢；被R3任意取代的(C1-C3)-烷基；被R3任意取代的(C2-C3)-链烯基或链炔基；苯基或被1-3个独立选自卤素，甲氧基，氰基，硝基，氨基，羟基，甲基或乙基所取代的苯基；或被1-3个取代基任意取代的5-6元杂环系统，所述取代基独立地选自卤素，甲氧基，氰基，硝基，氨基，羟基，甲基或乙基；W选自N(R2)SO2-N(R2)2；N(R2)SO2-N(R2)(R3)；N(R2)C(O)-OR2；N(R2)C(O)-N(R2)2；N(R2)C(O)-N(R2)(R3)；N(R2)C(O)-R2；N(R2)2；C(O)-R2；CH(OH)-R2；C(O)-N(R2)2；C(O)-OR2；J；或为被N(R’)2,OR’,CO2R’,CON(R’)2,R3,SO2N(R2)2,OC(O)R2,OC(O)R’,CO(O)N(R2)2,-N(R4)(R5),-C(O)N(R5)(R2),-C(O)R5,-N(R2)C(O)N(R2)(R5),-NC(O)O(R5),OC(O)N(R2)(R5),或J任意取代的(C1-C4)直链或支链烷基；被N(R’)2,OR’,CO2R’,CON(R’)2,或SO2N(R2)2任意取代的5-6元碳环或杂环系统；或被N(R’)2,OR’,CO2R’,CON(R’)2,或SO2N(R2)2任意取代的8-10元碳环或杂环系统；条件上W不为R3取代的C1烷基。
W’选自N(R2)-SO2-Q2；N(R2)-CO2-Q2；N(R2)-C(O)-Q2；N(R2)(Q2)；C(O)-Q2；CO2-Q2；C(O)N(R2)(Q2)；C(R2)2Q2。
每个R独立选自氢，-R2,-N(R2)2,-OR2,SR2,C(O)-N(R2)2,S(O2)-N(R2)2,-C(O)-OR2或-C(O)R2，其中两个相邻的R任意地与另一个相连，并和与它们分别相连的Y一起形成4-8元碳环或杂环。
R2选自氢，(C1-C3)-烷基，或(C1-C3)-链烯基；每一个可被-N(R’)2,-OR’,SR’,-C(O)N(R’)2；-S(O2)-N(R’)2,-C(O)-COR’,-NSO2R4,-NSO2R3,C(O)N(R’)(R3),-NC(O)R4,-N(R’)(R3),-N(R’)(R4),-C(O)-R3,-C(O)N(R’)(R4),-N(R4)2,-C(O)N=C(NH)2或R3任意取代。
Y为N或C。
Z为CH,N,C(OCH3),C(CH3),C(NH2),-C(OH)或C(F)。
U选自R或W。
V选自-C(O)-NH2,-P(O)-(NH2)2,或-SO2NH2。
A,B和C独立地选自-O-,-CHR’,-CHR4-,-NR’-,-NR4-或-S-。
J为被1-3个选自D，-T-C(O)R’或-OPO3H2任意取代的(C1-C4)直链或支链烷基衍生物。
D选自基团 T或为O或NH。
G或为NH2或为OH。
在另一个实施例中，本发明提供了包含本发明P38抑制剂的药物组合物。这些组合物可以用来治疗或预防各种失调，例如癌症，炎症疾病，自身免疫疾病，破坏性骨失调，增殖失调，感染疾病，病毒疾病以及神经变性疾病。这些组合物在预防细胞死亡和高血压方面也有用处，因此可以用于治疗和预防中风中的再灌注/局部缺血，心脏病以及器官缺氧。组合物还可以用于预防血栓诱导的血小板聚集。上述每一种方法均是本发明的一部分。
这些化合物具有下列通式 其中Q1和Q2独立地选自苯基或5-6元芳香杂环系统，或包含芳香碳环，芳香杂环或芳香碳环和芳香杂环组合的8-10元双环系统；构成Q1的环可被1-4个取代基取代，每一个取代基均独立地选自卤素；被NR’2,OR’,CO2R’或CONR’2所任意取代的C1-C3烷基；被NR’2,OR’,CO2R’或CONR’2所任意取代的O-(C1-C3)-烷基；NR’；OCF3；CF3；NO2；CO2R’；CONR’；SR’；S(O2)N(R’)2；SCF3；CN；N(R’)C(O)R4；N(R’)C(O)OR4；N(R’)C(O)C(O)R4；N(R’)S(O2)R4；N(R’)R4；N(R4)2；OR4；OC(O)R4；OP(O)3H2；或N=C-N(R’)2；构成Q2的环可任意地被多至4个的取代基取代，每一个均取代基独立地选自卤素；被NR’2,OR’,CO2R’,S(O2)N(R’)2,N=C-N(R’)2,R3,或CONR’2所任意取代的C1-C3直链或支链烷基；O-(C1-C3)-烷基；被NR’2,OR’,CO2R’,S(O2)N(R’)2,N=C-N(R’)2,R3,或CONR’2所任意取代的O-(C1-C3)-烷基；NR’2；OCF3；CF3；NO2；CO2R’；CONR’；R3；OR3；NR3；SR3；C(O)R3；C(O)N(R’)R3；C(O)OR3；SR’；S(O2)N(R’)2；SCF3；N=C-N(R’)2；或CN；Q2’选自苯基或被1-3个取代基任意取代的5-6元芳香杂环，上述每一个取代基独立地选自卤素；被NR’2,OR’,CO2R’,CONR’2或O-P(O)3H2所任意取代的C1-C3烷基；被NR’2,OR’,CO2R’,或OP(O)3H2所任意取代的O-(C2-C3)-烷基；OCF3；CF3；OR4；O-CO2R4；O-P(O)3H2；CO2R’；CONR’；SR’；S(O2)N(R’)2；SCF3；CN；N(R’)C(O)R4；N(R’)C(O)OR4；N(R’)C(O) C(O)R4；N(R’)S(O2)R4；N(R’)R4；N(R4)2；OR4；OC(O)R4；OP(O)3H2；或N=C-N(R’)2；条件是Q2’不为被1-3个独立选自卤素，甲氧基，氰基，硝基，氨基，羟基，甲基或乙基所取代的苯基；R’选自氢；(C1-C3)-烷基；(C2-C3)-链烯基或链炔基；苯基或被1-3个独立选自卤素，甲氧基，氰基，硝基，氨基，羟基，甲基或乙基所取代的苯基；或被1-3个取代基任意取代的5-6元杂环系统，所述取代基独立地选自卤素，甲氧基，氰基，硝基，氨基，羟基，甲基或乙基；R3选自5-8元芳香或非芳香碳环或杂环系统，它们可被R’,OR4,-C(O)R’；-C(O)R4,-C(O)OR4或-J任意取代；包含芳香碳环，芳香杂环或芳香碳环和芳香杂环组合的8-10元双环系统，它们可被R’,R4,-C(O)R’；-C(O)R4,-C(O)OR4或-J任意取代。
R4为被N(R’)2,OR’,CO2R’,CON(R’)2,或SO2N(R2)2所任意取代的(C1-C4)直链或支链烷基；或被N(R’)2,OR’,CO2R’,CON(R’)2,或SO2N(R2)2任意取代的5-6元碳环或杂环系统。
R5选自氢；被R3任意取代的(C1-C3)-烷基；被R3任意取代的(C2-C3)-链烯基或链炔基；苯基或被1-3个独立选自卤素，甲氧基，氰基，硝基，氨基，羟基，甲基或乙基所取代的苯基；或被1-3个取代基任意取代的5-6元杂环系统，所述取代基独立地选自卤素，甲氧基，氰基，硝基，氨基，羟基，甲基或乙基；W选自N(R2)SO2-N(R2)2；N(R2)SO2-N(R2)(R3)；N(R2)C(O)-OR2；N(R2)C(O)-N(R2)2；N(R2)C(O)-N(R2)(R3)；N(R2)C(O)-R2；N(R2)2；C(O)-R2；CH(OH)-R2；C(O)-N(R2)2；C(O)-OR2；J；或为被N(R’)2,OR’,CO2R’,CON(R’)2,R3,SO2N(R2)2,OC(O)R2,OC(O)R’,CO(O)N(R2)2,-N(R4)(R5),-C(O)N(R5)(R2),-C(O)R5,-N(R2)C(O)N(R2)(R5),-NC(O)O(R5),OC(O)N(R2)(R5),或J任意取代的(C1-C4)直链或支链烷基；被N(R’)2,OR’,CO2R’,CON(R’)2,或SO2N(R2)2任意取代的5-6元碳环或杂环系统；或被N(R’)2,OR’,CO2R’,CON(R’)2,或SO2N(R2)2任意取代的8-10元碳环或杂环系统；条件是W不为R3取代的C1烷基。
W’选自N(R2)-SO2-Q2；N(R2)-CO2-Q2；N(R2)-C(O)-Q2；N(R2)(Q2)；C(O)-Q2；CO2-Q2；C(O)N(R2)(Q2)；C(R2)2Q2。
每个R独立选自氢,-R2,-N(R2)2,-OR2,SR2,C(O)-N(R2)2,S(O2)-N(R2)2,-C(O)-OR2或-C(O)R2,其中两个相邻的R任意地与另一个相连，并和与它们分别相连的Y一起形成4-8元碳环或杂环。
当两个R与和它们分别相连的Y一起形成环时，对本领域技术人员讲显而易见来自每个未稠合R的末端氢原子会缺失。例如，当如环是通过把两个R，一个是NH-FH3，另一个是-CH2-CH3，结合在一起形成的，则每个R上的末端氢原子会缺失。因此所得的环结构部分具有式-NH-CH2-CH2-CH2R2选自氢，(C1-C3)-烷基，或(C1-C3)-链烯基；每一个可被-N(R’)2,-OR’,SR’,-C(O)N(R’)2；-S(O2)-N(R’)2,-C(O)-OR’,-NSO2R4,-NSO2R3,C(O)N(R’)(R3),-NC(O)R4,-N(R’)(R3),-N(R’)(R4),-C(O)-R3,-C(O)N(R-CHR-)(R4),-N(R4)2,-C(O)N=C(NH)2或R3任意取代。
Y为N或C。
Z为CH,N,C(OCH3),C(CH3),C(NH2),-C(OH)或C(F)。
U选自R或W。
V选自-C(O)-NH2,-P(O)-(NH2)2,或-SO2NH2。
A,B和C独立地选自-O-,-CHR’-,-CHR4-,-NR’-,-NR4-或-S-。
J为被1-3个选自D,-T-C(O)R’或-OPO3H2任意取代的(C1-C4)直链或支链烷基衍生物。
D选自基团 T或为O或NH；并且G或为NH2或为OH。
根据优选的实施例，Q1选自含有1-3个取代基的苯基或吡啶基，其中至少一个所述的取代基处于邻位，并且所述的取代基独立地选自氯，氟，溴，-CH3,-OCH3,-OH,-CF3,-OCF3,-O(CH2)2CH3,NH2,3,4-亚甲基二氧基，-N(CH3)2,-NH-S(O)2-苯基，-NH-C(O)O-CH2-4-吡啶，-NH-C(O)CH2-吗啉，-NH-C(O)CH2-N(CH3)2,-NH-C(O)CH2-哌嗪，-NH-C(O)CH2-吡咯烷，-NH-C(O)C(O)-吗啉，-NH-C(O)C(O)-哌嗪，-NH-C(O)C(O)-吡咯烷，-O-C(O)CH2-N(CH3)2,或-O-(CH2)2-N(CH3)2。
更优选的是含有至少两个上述处于邻位的取代基的苯基或吡啶基。
一些优选的Q1的具体实例如下
最优选的Q1选自2-氟-6-三氟甲基苯基，2,6-二氟苯基，2,6-二氯苯基，2-氯-4-羟基苯基，2-氯-4-氨基苯基，2,6-二氯-4-氨基苯基，2,6-二氯-3-氨基苯基，2,6-二甲基-4-羟基苯基，2-甲氧基-3,5-二氯-4-吡啶基，2-氯-4,5-亚甲二氧基苯基，或2-氯-4-(N-2-吗啉代-乙酰胺基)苯基。
根据优选的实施例，Q2为含有0-3个取代基的苯基，吡啶基或萘基，其中的取代基独立地选自氯，氟，溴，甲基，乙基，异丙基，-OCH3,-OH,-NH2,-CF3,-OCF3,-SCH3,-OCH3,-C(O)-OH,-C(O)OCH3,-CH2NH2,-N(CH3)2,-CH2-吡咯烷以及-CH2OH。
一些优选的Q2的具体实例如下 未取代的2-吡啶基或未取代的苯基。
最优选的化合物是其中Q2选自苯基，2-异丙基苯基，3,4-二甲基苯基，2-乙基苯基，3-氟苯基，2-甲基苯基，3-氯-4-氟苯基，3-氯苯基，2-羰甲氧苯基，2-羧基苯基，2-甲基-4-氯苯基，2-溴苯基，2-吡啶基，2-亚甲基羟基苯基，4-氟苯基，2-甲基-4-氟苯基，2-氯-4-氟苯基，2,4-二氟苯基，2-羟基-4-氟苯基，2-亚甲基羟基-4-氟苯基，1-萘基，3-氯-2-亚甲基羟基，3-氯-2-甲基，或4-氟-2-甲基。
根据本发明的另一个优选的实施例，每个Y均为C。
根据更优选的实施例，每个Y均为C并且连接在Y上的R和U选自氢或甲基。
根据另一个优选的实施例，W为终端是醇、胺、羧酸、酯、酰胺或杂环的0-4原子链。
一些优选的W的具体实例如下 最优选的W选自 U的优选和最优选的实施例同W。根据更优选的实施例，Y为C，且W和/或U不为氢。下列表1-6中给出了一些优选的实施例
表1
表2
表3
表4
表5
表6
特别优选的实施例包括 其中X为H， 特别优选的实施例还包括 其中X为NH2或N(CH3)2； 其中X为OH,NH2或N(CH3)2；其它特别优选的实施例包括 其中X为OH,NH2或N(CH3)2， 其它特别优选的实施例包括 其中X=H 其中X= 其它特别优选的实施例包括 其中X= 其中X= 最优选的实施例包括
根据另一个实施方面，本发明提供了制备上述式(Ⅰa)、(Ⅰb)、(Ⅰc)、(Ⅰd)和(Ⅰe)P38抑制剂的方法。下文将描述式(Ⅰa)化合物具有代表性的合成路线。
反应路线1-3说明了化合物的制备，其中W为氨基、羧基或醛基功能基。在每种情况下，特定的基团可用文献中已知的化学方法进行修饰。例如最终的氨基化合物D和N(相应为反应路线1和4)可进行酰化、磺化或烷基化，制备得到在W范围内的化合物。在所有的反应路线中，最初原料上的L1和L2基团代表与杂环上氮原子相邻的离去基团。例如，化合物A可为2,6-二氯-3-硝基吡啶。反应路线1 在反应路线1中，W选自氨基衍生化合物，例如N(R2)SO2-N(R2)2;N(R2)SO2-N(R2)(R3)；N(R2)C(O)-OR2；N(R2)C(O)-N(R2)2；N(R2)C(O)-N(R2)(R3)；N(R2)C(O)-R2；或N(R2)2。
在反应路线1中，利用本领域内众多可生成二芳基化合物反应之中的一个反应，将Q2环引入其中。其中一个实例是使芳基锂化合物与吡啶中间体A进行反应。或者，在Pd0催化剂存下，使芳基金属化合物例如芳基锡或芳基硼酸与芳基卤化物(中间体A)部分进行反应，生成产物B。在下一步中，可用碱如氢化钠、酰胺钠、LDA、六甲基二硅氮(disilazide)锂或任何其它非亲核性的碱对Q1取代的衍生物例如苯乙腈衍生物进行处理，使α-位去质子生成氰基基团，其代表了一个被保护的酰胺基团。然后使此离阴子与中间体B接触形成C。再使中间体C的腈或等价基团进行水解，形成酰胺，硝基基团在还原条件下形成胺中间体D。然后通过化学反应例如文献中已知的酰基化反应、磺酰化反应或烷基化反应，利用中间体D来引入各种指定的W官能团。根据此过程最初两步反应的区域化学，最初两步反应是可以互换的。反应路线2 在反应路线2中，W选自羧基衍生化合物，例如C(O)-R2；CH(OH)-R2；C(O)-N(R2)2；或C(O)-OR2。
反应路线2基本上与反应路线1中所描述的相同，除了以羧基中间体(例如E)作为起始原料。最初的两步反应同反应路线1，正如反应路线1中所提到的，根据具体实施例的区域化学，它们是可以互换的。从最初的两步反应可以形成中间体G，此物质可以按照羧基中间体H所用的方法进行水解。然后用文献中已知的方法修饰羧基基团，得到指定W取代基的同类物，例如通过酰化反应，酰胺化反应以及酯化反应。反应路线3 在反应反应路线3中，W选自被N(R’)2,OR’,CO2R’,CON(R’)2,R3或SO2N(R2)2任意取代的(C1-C4)直链或支链烷基；或被N(R’)2,OR’,CO2R’,CON(R’)2,或SO2N(R2)2任意取代的5-6元碳环或杂环系统；条件是W不为R3取代的C1烷基。
在反应路线3中，使吡啶衍生物进行金属化，并用多种已知可以生成醛的亲电反应之一终止反应，形成中间体I。然后可将醛保护起来形成二甲缩醛J。按照反应路线1和2中所述的，使此中间体进行引入Q1和Q2取代基的反应，生成中间体L。如前所述，根据具体的区域化学，最初两步反应是可以互换的。然后可使被保护的醛L进行脱保护，并采用已知的化学方法例如烷基化反应和还原胺化反应利用其形成具有指定W取代基的化合物。
反应路线4-6和反应路线1-3相似，除了其目标化合物是那些Z=氮的化合物。这些反应路线中的步骤与反应路线1-3平行，例外的是苯乙腈的烷基化反应被与Q1胺衍生物例如取代的苯胺衍生物的还原反应所取代。然后，将分子的酰胺部分引入到酰基化反应中，例如与氯代磺酰基异氰酸酯的反应。反应路线4 在反应路线4中，W选自氨基衍生基团，例如N(R2)SO2-N(R2)2；N(R2)SO2-N(R2)(R3)；N(R2)C(O)-OR2；N(R2)C(O)-N(R2)2；N(R2)C(O)-N(R2)(R3)；N(R2)C(O)-R2；或N(R2)2。
在反应路线4中，在碱如碳酸钾存在下，用例如苯胺衍生物处理中间体B(得自反应路线1)。另外如果需要，可以利用钯催化剂来提高这类反应的活性。生成的胺衍生物进行酰化反应，形成中间体M。还原M的硝基基团，形成N，然后可以按照反应路线1所述方法，使氨基基团进行衍生化。正如反应路线1-3中所述的，根据具体化合物的特定区域化学，在引入Q1和Q2取代基中涉及的步骤是可以互换的。反应路线5 在反应路线5中，W选自羧基衍生基团，例如C(O)-R2；CH(OH)-R2；C(O)-N(R2)2；或C(O)-OR2。反应路线6
在反应路线6中，W选自被N(R’)2,OR’,CO2R’,CON(R’)2,R3或SO2N(R2)2任意取代的(C1-C4)直链或支链烷基；或被N(R’)2,OR’,CO2R’,CON(R’)2，或SO2N(R2)2任意取代的5-6元碳环或杂环系统；条件是W不为R3取代的C1烷基。
反应路线5和6基本上同前述的过程。
本领域技术人员会认识到，反应路线1-6可用来合成通式(Ⅰb)、(Ⅰc)、(Ⅰd)和(Ⅰe)的化合物。
根据本发明的另一个实施例，可在体外、体内或细胞系上进行本发明P38抑制剂的活性分析。体外分析包括活化的P38的激酶活性或ATP酶活性的抑制测定。或者体外定量分析抑制剂结合P38的能力，这可以在结合前对抑制剂进行放射标记，分离抑制剂/P38复合，并测定放射标记结合物(radiolabel bound)的量来测定，也可以通过实施竞争实验来测定，其中新的抑制剂与已与已知放射配体结合的P38培养。
本发明化合物抑制效果的细胞培养分析可以测定用抑制剂处理过的全血或细胞中其细胞成分中所产生的TNF、IL-1,IL-6或IL-8的量，并可与用阴性对照处理过的细胞所得结果进行比较。这些细胞因子的水平可以通过市售的ELISAs来进行测定。
可用于测定本发明P38抑制剂抑制活性的体内分析是患有丁酸分枝杆菌-诱导的辅助关节炎的大鼠后爪水肿抑制实验。J.C.Boehm等人在J.Med Chem.,39,pp.3929-37(1996)中描述了上述实验，在这里作为参考文献引用。正如A.M.Badger等人在J.Pharmacol.Experimental Therapeutics,279,pp.1453-61(1996)中所描述的，还可以在关节炎、骨吸收、内毒素休克及免疫功能等动物模型中分析本发明P38抑制剂。上述公开在这里作为参考文献引用。
P38抑制剂或其药用盐类可以配制成药物组合物给予动物或人类。这些含有可以治疗或预防P38介导的症状的有效量P38抑制剂及制药上可接受载体的药物组合物是本发明的另一个实施方面。
这里所用的术语“P38介导的症状”是指任何已知P38在其中扮演角色的疾病或其它有害的状况。其包括由IL-1、TNF、IL-6或IL-8的过度生成而引起的症状。这类疾病状况包括但不限于炎症疾病，自身免疫疾病，破坏性骨失调，增殖失调，感染疾病，神经变性疾病，过敏，中风中的再灌注/局部缺血，心脏病，血管生成失调，器官缺氧，高血压，心脏肥大，血栓诱导的血小板聚集以及与前列腺素内过氧化酶-2合成有关的疾病。
可用本发明化合物治疗或预防的炎症疾病包括但不限于急性胰腺炎，慢性胰腺炎，哮喘，过敏或成年人呼吸困难综合症等。
可用本发明化合物治疗或预防的自身免疫疾病包括但不限于肾小球性肾炎，风湿性关节炎，系统性红斑狼疮，硬皮病，慢性甲状腺炎，Graves’疾病，自身免疫性胃炎，糖尿病，自身免疫性溶血性贫血，自身免疫性中性白细胞减少症，血小板减少症，异位性皮炎，慢性活动肝炎，重症肌无力，多发性硬化，肠道炎症疾病，溃疡性结肠炎，Crohn’s疾病，牛皮癣，或移植物对抗宿主疾病等。
可用本发明化合物治疗或预防的破坏性骨失调包括但不限于骨硬化，骨关节炎和复合性骨髓瘤有关的骨疾病等。
可用本发明化合物治疗或预防的增殖性疾病包括但不限于急性骨髓性白血病，慢性骨髓性白血病，转移性黑色素瘤，Kaposi’s肉瘤及复合性骨髓瘤等。
可用本发明化合物治疗或预防的血管生成失调包括固体肿瘤，眼部新血管形成或婴幼儿血管瘤等。
可用本发明化合物治疗或预防的感染性疾病包括但不限于脓毒症，脓毒性休克，或志贺菌病等。
可用本发明化合物治疗或预防的病毒性疾病包括但不限于急性肝炎感染(包括甲型，乙型肝炎和丙型肝炎)，HIV感染或CMV视网膜炎等。
可用本发明化合物治疗或预防的神经变性疾病包括但不限于Alzheimer’s疾病，Parkinson’s疾病，大脑局部缺氧或由创伤损伤引起的神经变性疾病等。
“P38介导的疾病状况”还包括中风中的局部缺血/再灌注，心脏病，心肌局部缺血，器官缺氧，高血压，心脏肥大及血栓诱导的血小板聚集。
另外，本发明P38抑制剂还能够抑制诱导的前炎症蛋白的表达，例如前列腺素内过氧化合成酶-2(PGHS-2)，还有环氧酶-2(COX-2)。因此，其它可用本发明化合物治疗“P38介导的疾病状况”包括水肿，痛觉缺失，发烧和疼痛，例如神经肌肉疼痛，头疼，癌症疼痛，牙疼或关节疼痛。
可用本发明P38抑制剂治疗或预防的疾病还可以方便地通过细胞因子(IL-1、TNF、IL-6或IL-8)来进行归类，其被认为与这类疾病有关。
因此，IL-1介导的疾病或症状包括风湿性关节炎，骨关节炎，中风，内毒素血症和/或毒性休克综合症，内毒素诱导的炎症反应，肠炎，结核，动脉粥样硬化，肌肉退化，恶质病，牛皮癣性关节炎，Reiter’s综合症，痛风，创伤性关节炎，风疹关节炎，急性滑膜炎，糖尿病，胰腺β-细胞疾病及Alzheimer’s疾病。
TNF介导的疾病状况包括风湿性关节炎，风湿性脊椎炎，骨关节炎，脓毒症，脓毒性休克，内毒性休克，革兰氏阴性脓毒症，毒性休克综合症，成年人呼吸困难综合症，大脑疟疾，慢性肺炎，硅肺，肺部肉样瘤病，骨吸收疾病，再灌注损伤，移植物对抗宿主疾病，同种移植排斥，发烧及由于感染引起的肌痛，继发于感染的恶质病，AIDS,ARC或恶性肿瘤，癍痕瘤形成，伤疤组织形成，Crohn’s疾病，溃疡性结肠炎或发热(pyresis)。TNF介导的疾病状况还包括病毒感染，例如HIV,CMV，流感及疱疹；兽类病毒感染，例如晶状体病毒(lentivirus)感染，包括但不限于马感染贫血病毒，羊关节炎病毒，绵羊髓鞘性脑白质炎病毒或Maedi病毒；或逆转录病毒感染，包括猫自身免疫缺陷病毒，牛自身免疫缺陷病毒或狗自身免疫缺陷病毒。
IL-8介导的疾病状况包括以大量中性白细胞浸润为特征的疾病，例如牛皮癣，肠炎，哮喘，心和肾再灌注损伤，成年人呼吸困难综合症，血栓形成及肾小球性肾炎。
另外，本发明化合物还可以局部用于治疗或预防由IL-1或TNF引起或加重的疾病状况。这类疾病包括关节发炎，湿疹，牛皮癣，皮肤发炎，例如晒伤，眼部发炎，例如结膜炎，发热，疼痛以及其它与炎症有关的疾病。
除了本发明化合物外，本发明化合物制药上可接受的盐类也可用于组合物来治疗或预防上述指出的疾病。
本发明化合物制药上可接受的盐类包括那些衍生自制药上可接受的无机和有机酸及碱的化合物。合适的酸加成盐的实例包括乙酸盐，己二酸盐，藻酸盐，天冬氨酸盐，苯甲酸盐，苯磺酸盐，硫酸氢盐，丁酸盐，柠檬酸盐，樟脑酸盐，樟脑磺酸盐，环戊丙酸盐，二葡糖酸盐，十二烷基磺酸盐，乙磺酸盐，甲酸盐，富马酸盐，葡庚酸盐，甘油磷酸盐，甘醇酸盐，半硫酸盐，庚酸盐，己酸盐，氢氯酸盐，氢溴酸盐，氢碘酸盐，2-羟基乙磺酸盐，乳酸盐，马来酸盐，丙二酸盐，甲磺酸盐，2-萘基磺酸盐，尼古丁酸盐，硝酸盐，草酸盐，棕榈酸盐，果酸盐，过(二)硫酸盐，3-苯基丙酸盐，磷酸盐，苦味酸盐，新戊酸盐，丙酸盐，水杨酸盐，琥珀酸盐，硫酸盐，酒石酸盐，硫代氰酸盐，甲苯磺酸盐以及十一烷酸盐。其它酸，例如草酸，其本身不是制药学上可接受的，但可以用于制备盐类，这些盐类在获得本发明化合物及其制药上可接受的酸加成盐的过程中是有用的中间体。衍生自合适的碱的盐类包括碱金属(例如钠和钾)，碱土金属(例如镁)，铵以及N-(C1-4烷基)4+等盐类。本发明还包括这里所公开的化合物中任意碱性含氮基团的季铵化作用。水或油溶性产品或可分散产品可通过这种季铵化作用制备得到。
可用于本发明化合物的制药上可接受的载体包括但不限于离子交换剂，氧化铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白质，例如人类血清白蛋白，缓冲物质，例如磷酸，甘油，山梨酸，山梨酸钾，饱和植物脂肪酸部分甘油酯混合物，水，盐类或电解质，例如硫酸鱼精蛋白硫酸盐，磷酸氢二钠，磷酸氢钾，氯化钠，锌盐，胶态二氧化硅，三硅酸镁，聚乙烯吡咯烷酮，纤维素基质物质，聚乙二醇，羧甲基纤维素钠，聚丙烯酸盐，蜡，聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物，聚乙二醇以及羊毛脂。
本发明化合物可经口服、非肠道、吸入喷雾、局部、直肠、鼻腔、颊、阴道或埋植等途径进行给药。这里所用的术语“非肠道”包括皮下、静脉、肌内、关节内、滑液内、胸骨内、鞘内、病灶内以及头盖内注射或滴注技术。优选地，组合物是经口服、腹膜内或静脉内给药。
本发明化合物的无菌注射剂型可以是水性或油性悬浮液。可以按照本领域已知的技术，采用合适的分散剂或加湿剂及悬浮剂来配制这些悬浮液。无菌可注射制剂还可以是溶于非毒性非肠道-可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如1,3-丁二醇。可应用的可接受的载体和溶剂有水、Ringer’s溶液和等渗氯化钠溶液。另外，通常采用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。为此目的，可以应用任何温和的固定油，包括合成的单-或二甘油酯。在制备可注射制剂时，脂肪酸(例如油酸及其甘油酯衍生物)是很有用的，就象天然的制药上可接受的油(如橄榄油或蓖麻油，尤其是它们的聚氧乙基化形式)一样。这些油溶液或悬浮液可以含有长链的醇稀释剂或分散剂，例如羧甲基纤维素或类似的分散剂，它们在配制制药上可接受的剂型(包括乳剂和悬浮剂)时经常被采用。为了制成制剂，还可以使用在制备药用固体、液体或其它剂型时经常采用的其它常用的表面活性剂例如Tweens、Spans及其它乳化剂或生物利用度增强剂。
本发明药物组合物可以任何口服可接受的剂型进行给药，其包括但不限于胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液。在口服片剂情况下，常用的载体包括乳糖和玉米淀粉。典型地，还需要添加润滑剂，例如硬脂酸镁。在以胶囊形式进行口服给药时，有用的稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉。当需要以水性悬浮液进行口服给药时，将活性成分与乳化剂和悬浮剂进行混合。如有所需，还可以加入一些甜味剂、芳香剂或增色剂。
另外本发明药物组合物可以栓剂形式进行直肠给药。使活性成分与合适的非刺激性赋形剂进行混合可以制备得到上述制剂，所述赋形剂在室温下为固体，但在直肠温度下为液体，因而可在直肠中熔化释放出药物。这些物质包括可可脂、蜂蜡及聚乙二醇。
本发明药物组合物还可以进行局部给药，尤其是当治疗的靶部位是局部用药非常容易的区域或器官，包括眼部、皮肤或下部肠道等疾病。用于这些区域或器官的合适的局部配方均可很容易地制得。
下部肠道的局部应用可通过直肠栓剂配方(参见上文)或合适的灌肠剂来实施，也可以采用局部皮透贴剂。
对于局部应用来说，药物组合物可以配制成含有活性成分(悬浮或溶解于一或多种载体中)的合适的软膏剂。用于局部给药的本发明化合物的载体包括但不限于矿物油，液体凡士林，白凡士林，丙二醇，聚氧乙烯，聚氧丙烯，乳化的蜡和水。另外药物组合物可配制成含有活性成分(悬浮或溶解于一或多种制药可接受的载体中)的合适的洗液或霜剂。合适的载体包括但不限于矿物油，脱水山梨醇单硬脂酸酯，聚山梨酸酯60，十六烷基酯蜡，十六烷基(cetearyl)醇，2-辛基十一醇，苄醇和水。
对于眼部应用来说，可将药物组合物配制成于等渗且pH调节的无菌生理盐水中的微化悬浮液，其中可以含有防腐剂，也可不含，例如氯化苯甲烃铵。另外，对于眼部应用来说，可将药物组合物配制成软膏剂，例如凡士林。
本发明药物组合物还可经鼻气溶胶或吸入进行给药。按照制药配方领域内已知的技术可以制备这类组合物，可将其制成生理盐水溶液，并可以应用苄醇或其它合适的防腐剂，用于提高生物利用度的吸收促进剂，氟碳化合物和/或其它常规的助溶剂或分散剂。
可与载体物质结合形成单一剂型的P38抑制剂的量可根据所治疗的宿主情况、给药方式等因素进行相应的变化。优选地，组合物应该按照如下剂量进行配制给予接受这些组合物患者的抑制剂剂量在0.01-100mg/kg/体重/天。
应该明白，需要根据每个患者的具体情况来改变剂量和治疗方案，包括所应用化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药时间、排泄速率、联合用药以及治疗医生的判断和所治病情的严重程度等。组合物中抑制剂的量要根据具体化合物来决定。
根据另一个实施方面，本发明提供了治疗或预防P38介导的疾病状况的方法，其包括给予患者上述药物组合物之中的一种组合物。这里所用的术语“患者”是指动物，优选的是人类。
优选地，该方法可用来治疗或预防如下疾病炎症疾病，自身免疫疾病，破坏性骨失调，增殖失调，感染疾病，神经变性疾病，过敏，中风中的再灌注/局部缺血，心脏病，生成血管失调，器官缺氧，高血压，心脏肥大以及血栓诱导的血小板聚集。
根据另一个实施方面，本发明化合物可以用来治疗或预防IL-1,IL-6,IL-8或TNF介导的疾病或状况。上面已对这些疾病状况进行了描述。
根据所治疗或预防的具体P38介导的疾病状况，还可以与本发明抑制剂一起给予其它常用来治疗或预防这类疾病的药物。例如可与本发明P38抑制剂一起联合给予化疗剂或其它抗增殖剂来治疗增殖性疾病。
那些其它制剂可作为复合制剂方案的一部分，与含有P38抑制剂的组合物分开给药。另外，那些制剂也可以作为单一剂型的一部分，与P38抑制剂一起混合在单一组合物中。
为了能更清楚地了解本发明，提供了下列实施例。应该明白，这些实施例目的仅仅是为了说明本发明，而不是以任何方式限制本发明。
实施例1P38抑制剂化合物6的合成 -78℃下，向LDA(60mmol,40mLs)中滴加2,6-二溴吡啶(40mmol,9.48gms)的THF溶液(30mLs，干燥的)。混合物于-78℃下搅拌20分钟。加入甲酸乙酯(400mmol,32.3mLs)，继续于-78℃下搅拌2小时。加入饱和氯化铵溶液(200mLs)，使混合物升温至室温。用乙酸乙酯稀释反应混合物，有机层用酸和碱的水溶液进行洗涤。干燥有机层并减压蒸发。生成的物质用硅胶闪式柱层析纯化，以10％乙酸乙酯的正己烷溶液进行洗脱，得到化合物1(32mmol,8.41gms)，其为白色固体。 使化合物1的溶液(13.08mmol,3.1gms)与浓硫酸(1ml)的甲醇(50ml)溶液回流过夜。冷却反应混合物，用碱性水溶液中和，乙酸乙酯提取。干燥有机层并减压蒸发。得到化合物2(11.77mmol,3.63gms)，其为油状物 向叔丁氧化合物(2.2mmol,2mLs)溶液中滴加2,6-二氯苯胺(1.0mmol,162gms)的THF溶液(2mLs，干燥的)。混合物于室温下搅拌20分钟。加入化合物2的溶液(1.0mmol,309mgs)的THF溶液(2mLs)，继续搅拌3小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物，有机层用酸和碱的水溶液进行洗涤。干燥有机层并减压蒸发。生成的物质用硅胶闪式柱层析纯化，以5％丙酮的正己烷溶液进行洗脱，得到化合物3(0.33mmol,128gms)，其为橙色固体。 将邻甲苯基硼酸(0.34mmol,46mgs)和化合物3(0.20mmol,80mgs)溶于甲苯/乙醇(5/1)混合物中。向溶液中加入碳酸铊(0.5mmol,235mgs)和四(三苯基磷酸)钯(0)(10mg)，使此浆状物回流30分钟。用乙酸乙酯稀释反应混合物，有机层用酸和碱的水溶液进行洗涤。干燥有机层并减压蒸发。生成的物质用硅胶闪式柱层析纯化，以5％甲醇的二氯甲烷溶液进行洗脱，得到化合物4(0.17mmol,61gms)，其为白色固体。 使化合物4(0.17mmol,61gms)和氯代磺酰基异氰酸酯(1mmol,141.5mgs)的二氯甲烷溶液(5mLs)在室温下搅拌过夜。用乙酸乙酯稀释反应混合物，有机层用酸和碱的水溶液进行洗涤。干燥有机层并减压蒸发。生成的物质用硅胶闪式柱层析纯化，以5％丙酮的正己烷溶液进行洗脱，得到化合物5(0.12mmol,46gms)，其为白色固体。 将硼氢化钠(1.0mmol,39.8gms)加到化合物5(0.12mmol,46gms)的甲醇溶液(10mLs)中，并搅拌15分钟。用水终止反应。用乙酸乙酯稀释反应混合物，有机层用酸和碱的水溶液进行洗涤。干燥有机层并减压蒸发。生成的物质用硅胶闪式柱层析纯化，得到化合物6(0.08mmol,36gms)，其为白色固体。
化合物6的光谱数据为1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ7.90(d,1H),7.60(d,2H),7.5-7.3(m,5H),6.30(d,2H),4.5(s,2H),2.3(s,2H).
P38抑制剂化合物7的合成 将氨基醇(500mg,1.43mmol)(其采用与化合物4相同的制备方法得到)溶于二氯甲烷中。加入三乙胺(433mg,4.29mmol)，接着加入乙酰氯(168mg,2.15mmol)。混合物在室温下搅拌1小时后，倾入水中，用二氯甲烷提取。减压蒸发有机层提取物，将残渣溶于10.0mL甲苯中。向其中加入20％的光气甲苯溶液(5.0mL)，使之回流2小时。冷却，加入5.0mL浓氢氧化铵，沉淀出白色固体。将混合物倾入水中，用甲苯提取。干燥(硫酸镁)有机层并减压蒸发，得到205mg尿素-乙酸酯7，其为白色固体。
化合物7的光谱数据为1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.80(d,1H),7.62-7.50(m,2H),7.25-7.0(m,5H),6.59(d,1H),5.1(s,2H),2.12(s,3H).HRMS显示MH+434.2(主峰)。
P38抑制剂化合物8的合成 将尿素-醇(548mg,1.4mmol)(其采用与化合物6相同的制备方法得到)溶于5.0mL甲苯中。向其中加入20％的光气甲苯溶液(5.0mL)，使之回流2小时。冷却，加入5.0mL浓氢氧化铵，沉淀出白色固体。将混合物倾入水中，用甲苯提取。干燥(硫酸镁)有机层并减压蒸发，得到284mg氨基甲酸酯8，其为白色固体。
化合物8的光谱数据为1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.77(d,1H),7.55-7.45(m,2H),7.15-6.95(m,5H),6.50(d,1H),5.40(brs,2H),5.00(s,2H).HRMS显示MH+435.1(主峰)。
实施例2P38抑制剂化合物16的合成
将1当量的2,6-二氯吡啶-4-甲酸溶于THF溶液中。使溶液冷却至0℃，加入1当量硼烷二甲基硫化物复合物。溶液在室温下搅拌12小时。将混合物倾入水中，用乙醚提取。干燥提取物，减压蒸发，得到化合物9，产率93％。 将1当量的化合物9溶于二氯甲烷中。加入1当量的甲基氯甲基醚，接着加入1当量的乙基二异丙基胺。反应混合物在室温下搅拌几小时，倾入水中，并用与水不混溶的溶剂提取。干燥提取物，减压蒸发，得到化合物10，产率86％。 室温下，将1当量叔丁醇钾加到1当量2,6-二氯苯乙腈的THF溶液中。混合物于室温下搅拌30分钟。加入二氯吡啶10的THF溶液。继续搅拌1.5小时。将混合物倾入氯化铵水溶液中，用乙酸乙酯提取。干燥提取物并减压蒸发。残渣用闪式层析纯化，得到化合物11，产率为79％，其为白色粉末。 使乙缩醛11与浓盐酸进行混合，并搅拌几小时。混合物用与水不混溶的有机溶剂进行提取。用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤提取物，干燥并减压蒸发，得到化合物12。 将腈12与浓硫酸进行混合，并加热至100℃，保持几分钟。冷却混合物，倾入冰中，过滤，得到化合物13。 将1当量的氯代吡啶13溶于1,2-二甲氧乙烷中。加入3-氯-2-甲基苯基硼酸。向其中加入1当量碳酸钠的水溶液以及催化剂量的四(三苯基磷酸)钯(0)(10mg)。混合物在80℃下加热几小时。将其倾入水中，用与水不混溶的有机溶剂进行提取。提取物干燥并减压蒸发，经闪式层析纯化，得到化合物14。 将1当量的醇14溶于THF中。将混合物冷却至0℃，加入1当量的甲磺酰氯，接着加入1当量的三乙胺。溶液搅拌几小时后，将其倾入水中，用与水不混溶的有机溶剂进行提取。提取物干燥并减压蒸发，得到粗品甲磺酰酯15。 将1当量的甲磺酰酯15溶于THF中。将溶液冷却至0℃，加入1当量的N-乙基哌嗪，接着加入1当量的三乙胺。溶液搅拌几小时后，将其倾入水中，用与水不混溶的有机溶剂进行提取。提取物干燥并减压蒸发，经闪式层析纯化，得到胺16纯品。化合物16的光谱数据为1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ9.85(brs,1H),7.47(dd,1H),7.42(d,1H),7.27(m,5H),6.75(s,1H),5.95(s,1H),5.7(brs,1H),3.5(ABq,2H),2.5-2.3(m,10H),2.3(s,3H),1.2(t,3H).
实施例2昆虫细胞中P38激酶的克隆人体P38激酶的两种剪接突变体CSBP1和CSBP2已被鉴定。特异性寡核苷酸引物被用来扩增CSBP2 cDNA的编码区，利用Hela细胞文库(Stratagene)作为模板。聚合酶链式反应(PCR)产物被克隆到pET-15b载体(Novagen)中。将pET-15b-(His)6-p38的XbaⅠ-BamHⅠ片段亚克隆到质粒pVL1392(Pharmigen)的互补位点，从而构建成杆状病毒转移载体Pvl-(His)6-p38。
质粒pVL-(His)6-p38指导重组蛋白合成，这个蛋白含有一个由23个残基组成的多肽(MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMLE，其中LVPRGS序列代表凝血酶裂解位点)，并在框架内稠合到P38的N-端，这一点已被DNA序列测定以及表达蛋白N端序列测定所证实。将秋粘虫(Sf9)昆虫细胞(ATCC)的单层培养物保养在27℃由10％胎牛血清供济的TNM-FH培养基(Gibco BRL)(其处于T-型烧瓶中)中，再将Autographa califonica亲核多角体病毒(Pharmingen)的线性病毒DNA和转移载体pVL-(His)6-p38利用脂转染(Invitrogen)对处于对数期的Sf9细胞进行共转染。重组杆状病毒的克隆利用1％低熔点的琼脂糖，通过噬斑分析纯化。
实施例3重组P38激酶的表达和纯化27℃下，使Trichoplusia ni(Tn-368)High-FiveTM细胞(Invitrogen)在无Excel-405蛋白介质(JRH-Bioscience)的振摇烧瓶中悬浮生长。用上述的重组杆状病毒对密度为1.5×106细胞/ml的细胞进行感染，感染的重复次数为5。采用兔子抗-P38抗体(Santa Cruz Biotechnology)，用免疫示踪法测定重组P38的表达水平。感染72小时后收集细胞物质，此时P38的表达水平达到其最大值。
将表达(His)6-标记P38细胞的冷冻细胞膏状物在5倍体积的缓冲液A(50mM NaH2PO4,pH=8.0,200mM NaCl,2mMβ-巯基乙醇，10％甘油和0.2mM PMSF)中进行融化。在一个微流体化器中对细胞进行机械破碎后，使溶解产物在30,000×g的转速下离心30分钟。上清液在4℃下用TalonTM(Clontech)金属亲和树脂分批培养3-5小时，树脂的用量比为每2-4mg预期P38用1mg树脂。在500×g的转速下离心5分钟使树脂沉淀下来。用缓冲液A分批温和地洗涤树脂。将树脂制浆并倾入柱(大约2.6×5.0cm)中，并用缓冲液A+SmM咪唑洗涤。
用缓冲液A+100mM咪唑洗脱(His)6-P38,然后在4℃下相对于2L的缓冲液B(50mM HEPES,pH=7.5,25mMβ-甘油磷酸，5％甘油和2mM DTT)进行透析过夜。每mg P38加入1.5单位的凝血酶(Calbiochem)从而除去His6-tag,然后在20℃下培养2-3小时。加入0.2mM PMSF终止凝血酶，将整个样品加装到2ml的苄脒琼脂糖柱(美国国际化学品)上。
通过组分的流动相直接加装到事先用缓冲液B+0.2mM PMSF平衡过的2.6×5.0cm Q-Sepharose(Pharmacia)柱上。用20倍柱体积的0.6M NaCl的缓冲液B溶液对P38进行梯度洗脱。收集蛋白质峰值部分的洗脱液，并于4℃下在缓冲液C(50mM HEPES,pH=7.5,5％甘油，50mM NaCl,2mM DTT,0.2mM PMSF)中透析过夜。
将透析的蛋白质在Centriprep(Amicon)中浓缩至3-4ml，加装到2.6×100cm Sephacryl S-100HR(Pharmacia)柱上。以35ml/小时的流速洗脱蛋白质。收集主要峰值部分的洗脱液，加入20mM DTT,浓缩至10-80mg/ml,-70℃下进行等分冷冻或立即使用。
实施例4P38的活化在20℃下，使0.5mg/ml p38与溶于缓冲液B溶液+10mMMgCl2,2mM ATP,0.2mM Na2VO4中的0.005mg/ml DD-双突变MKK6结合30分钟从而使p38活化。然后将活化混合物加装到1.0×10cm的MonoQ(Pharmacia)柱上，并用20倍柱体积的1.0M NaCl的缓冲液B对其进行梯度洗脱。在ADP和ATP后活化的p38被洗脱。收集洗脱下来的活化p38峰值部分，在缓冲液B+0.2mM Na2VO4中透析除去NaCl。在透析的蛋白质中加入4.0M的磷酸钾储备溶液，将之调节至1.1M，然后加装到事先用缓冲液D(10％甘油，20mMβ-甘油磷酸酯，0.2mM DTT)+1.1M磷酸氢二钾平衡过的1.0×10cm HIC(Rainin Hydropore)柱上。并用20倍柱体积的缓冲液D+50mM磷酸氢二钾溶液对其进行线性梯度洗脱。将作为主要峰值成分的双磷酸化P38进行洗脱并收集起来，在缓冲液B+0.2mM Na2VO4中进行透析。将活化p38储存于-70℃下。
实施例5p38的抑制分析A．EGF受体肽的磷酸化抑制在10mM MgCl2,25mMβ-甘油磷酸酯，10％甘油以及100mMHEPES缓冲液(pH 7.6)存在下进行此项分析。为了进行典型的IC50测定，制备含有上述所有成分和活化p38(5nM)的储备溶液。将储备溶液等分装入小瓶中。每个小瓶中引入固定体积的DMSO或溶于DMSO中的抑制剂(反应中DMSO的最终浓度为5％)，混合，并在室温下培养15分钟。向每个小瓶中加入EGF受体肽，KRELVEPLTPSGEAPNQALLR,p38催化激酶反应(1)中的磷酸化接受体，至最终浓度为200μM。用ATP(100μM)引发激酶反应，小瓶在30℃下进行培养。30分钟后，用等体积10％三氟乙酸(TFA)终止反应。
用HPLC定量分析对磷酸化肽进行定量。通过反相柱(Deltapak,5μm,C18 100D,部分号码011795)并使用水和丙酮(其中均含有0.1％TFA)二元梯度洗脱，将磷酸化肽从未磷酸化的肽中分离出来。用剩余的活性百分比(％)相对于抑制剂浓度绘图，可以得到IC50值(产生50％抑制时抑制剂的浓度)。B．ATP酶活性的抑制在10mM MgCl2,25mM β-甘油磷酸酯，10％甘油以及100mMHEPES缓冲液(pH7.6)存在下进行此项分析。为了进行典型的Ki测定，在缺乏抑制剂和有两种浓度抑制剂存在下，对活化p38反应的ATP酶活性中的ATP的Km进行测定。制备含有上述所有成分和活化p38(60nM)的储备溶液。将储备溶液等分装入小瓶中。每个小瓶中引入固定体积的DMSO或溶于DMSO中的抑制剂(反应中DMSO的最终浓度为2.5％)，混合，并在室温下培养15分钟。向每个小瓶中加入各种浓度的ATP，然后在30℃下进行培养。30分钟后，用50μlpH=8.0的EDTA(最终浓度为0.1M)终止反应。用HPLC对p38 ATP酶活性产物，ADP，进行定量。
通过反相柱(Supelcosil,LC-18,3μm，部分号码5-8985)并使用下列组分的二元溶剂进行梯度洗脱，溶剂A-含有8mM四丁基硫酸氢铵(Sigma,Chemical Co，目录号T-7158)的0.1M磷酸缓冲液，溶剂B-带有30％甲醇的溶剂A将ADT与ATP分离。
Ki是从作为抑制剂和ATP浓度函数的速率数据中测定得到的。
本发明p38抑制剂将抑制p38 ATP酶的活性。C．在LPS-刺激的PBMCs中IL-1、TNF、IL-6和IL-8生成的抑制用20mM的DMSO储备液对抑制剂进行系列稀释。至少制备6系列的稀释物。然后，将4μl抑制剂稀释物加至1ml RPMI 1640介质/10％胎儿牛血清中，制备4×抑制剂储备液。4×抑制剂储备液所含抑制剂浓度为80μmM,32μM,12.8μM,5.12μM,2.048μM,0.819μM,0.328μM,0.131μM,0.052μM,0.021μM等。将4×抑制剂储备液在37℃下进行预热直至使用。
在1500×g转速下离心15分钟，于Vacutainer CPT(来自Becton& Dickinson,其中含有4ml血及足够的DPBS，没有Mg2+/Ca2+填充在管子中)中将新鲜的人血棕黄色(buffy)细胞从其它细胞中分离出来。将位于Vacutainer中梯度顶部位置的外周血单核细胞(PBMCs)转移出来，用RPMI1640介质/10％胎儿牛血清洗涤两次。在500×g转速下离心10分钟收集PBMCs。用Neubauer Cell Chamber测定细胞总数，并在细胞培养介质(用10％胎儿牛血清供济的RPMI1640)中将细胞调节至浓度为4.8×106细胞/ml。
或者，在分析中直接使用含有抗凝剂的全血。
将100μl细胞悬浮液或全血置于96孔池细胞培养皿的每个孔中。然后向细胞中加入50μl 4×抑制剂储备液。最后，再加入50μl脂多糖(LPS)工作储备液(16ng/ml，溶于细胞培养介质中)，使分析中的最终浓度达到4ng/ml LPS。通过加入50μl细胞培养介质，将载体对照的总分析体积也调节至200μl。然后在37℃/5％CO2湿气氛中，将PBMC细胞或全血培养过夜(12-15小时)。
次日，将细胞在振荡器上混合3-5分钟，然后在500×g转速下离心5分钟。收集细胞培养的上清液，根据制造商的指导，用ELISA分析IL-1b(R&D Systems,Quantikine Kits,#DBL50),TNF-α(BioSource,#KHC3012),IL-6(Endogen,#EH2-IL6)以及IL-8(Endogen,#EH2-IL8)的水平。ELISA数据可用来建立剂量-反应曲线，由此可以得到IC50值。
本发明各种P38抑制剂的激酶分析(“激酶”；上述亚部分A中所述)、LPS刺激的PBMCs(“细胞”)中IL-1和TNF以及全血(“WB”)中的IL-1、TNF和IL-6的作用结果列于下列表7中。表7
本发明其它P38抑制剂也显示出对EGF受体肽类磷酸化有抑制作用，并可以在LPS刺激的PBMCs或全血中抑制IL-1、TNF、IL-6以及IL-8的生成。D．IL-1-LPS刺激的PBMCs中对IL-6及IL-8生成的抑制按照与上述相同的方法，在PBMCs上进行这项分析，除了加入50μl的IL-1b工作储备液(2ng/ml，溶于细胞培养介质中)替代(LPS)工作储备液。
按照上述方法收集细胞培养上清夜，根据制造商的指导，用ELISA分析IL-6(Endogen,#EH2-IL6)及IL-8(Endogen,#EH2-IL8)的浓度。ELISA数据可用来建立剂量-反应曲线，由此可以得到IC50值。E．对PBMCs中PLS诱导的前列腺素内过氧化物合成酶-2(PGHS-2或COX-2)诱导的抑制在Vacutainer CPT(Becton & Diclinson)中离心，使人类外周单核细胞(PBMCs)从新鲜的人类血沉棕黄层中分离出来。在含有用10％胎牛血清、50U/ml青霉素、50μg链霉素以及2mM L-葡糖胺供济的RPMI1640的6-孔组织培养皿中，接种15×106细胞。加入终浓度为0.2,2.0及20μM的化合物DMSO溶液。然后加入终浓度为4ng/ml的LPS，诱导酶表达。最终的培养体积为10ml/孔。
37℃,5％CO2培养过夜后，采用刮除方法收集细胞，然后离心，移去上清夜，用冰冷的DPBS(Dulbecco’s磷酸盐缓冲生理盐水，Bioehittaker)洗涤细胞两次。细胞在50μl含有1μl Benzonase(Merck公司，DNAse)的冰冷的溶解缓冲液(20mM Tric-HCl,pH7.2,150mMNaCl,1％Triton-X-100,1％脱氧胆酸,0.1％SDS,1mM EDTA,2％抑肽酶(Sigma),10μg/ml pepstatin,10μg/ml leupeptin,2mM PMSF,1mM苄脒，1mM DTT)中于冰上溶解10分钟。用BCA分析(Pierce)测定每个样品中蛋白质的浓度，以牛血清白蛋白作为标准。然后用冷的溶解缓冲液将每个样品中蛋白质浓度调节至1mg/ml。向100μl溶解物中加入等体积的2×SDS PAGE loading缓冲液，使样品沸腾5分钟。将蛋白质(30μg/lane)在4-20％SDS PAGE梯度凝胶(Novex)上进行按尺寸大小分级分馏，然后在含有20％甲醇的Towbin转移缓冲液(25mM Tris,192mM甘氨酸)中，通过电泳方法将其转移至硝酸纤维膜上。转移完成后，室温下用抑制性缓冲液(blocking buffer)(用0.1％Tween-20供济的5％非脂肪干牛奶的DPBS溶液)预处理膜1小时。4℃下，用存在于抑制性缓冲液中的单克隆抗-COX-2抗体(Transduction Laboratories)的1∶250稀释液对膜进行培养过夜。用DPBS/0.1％Tween-20洗涤3次后，在室温下于抑制性缓冲液中，将膜与辣根过氧化酶一共轭羊抗血清和鼠Ig(Amersham)的1∶1000稀释液培养1小时。再次用DPBS/0.1％Tween-20洗涤膜3次。采用ECL检测系统(SuperSignalTMCL-HRP Substrate System,Pierce)检测COX-2的表达水平。
尽管在上文中我们提供了本发明的一些实施方案，很显然，基于我们的基本构思也可以利用本发明的方法提供其它实施方案。
权利要求
1．具下式的化合物 其中Q1和Q2独立地选自苯基或5-6元芳香杂环系统，或包含芳香碳环，芳香杂环或芳香碳环和芳香杂环组合的8-10元双环系统；构成Q1的环可被1-4个取代基取代，每一个取代基均独立地选自卤素；被NR’2,OR’,CO2R’或CONR’2所任意取代的C1-C3烷基；被NR’2,OR’,CO2R’或CONR’2所任意取代的O-(C1-C3)-烷基；NR’；OCF3；CF3；NO2；CO2R’；CONR’；SR’；S(O2)N(R’)2；SCF3；CN；N(R’)C(O)R4；N(R’)C(O)OR4；N(R’)C(O)C(O)R4；N(R’)S(O2)R4；N(R’)R4；N(R4)2；OR4；OC(O)R4；OP(O)3H2；或N=C-N(R’)2；构成Q2的环可任意地被多至4个的取代基取代，每一个取代基均独立地选自卤素；被NR’2,OR’,CO2R’,S(O2)N(R’)2,N=C-N(R’)2,R3,或CONR’2所任意取代的C1-C3直链或支链烷基；O-(C1-C3)-烷基；被NR’2,OR’,CO2R’,S(O2)N(R’)2,N=C-N(R’)2,R3,或CONR’2所任意取代的O-(C1-C3)-烷基；NR’2；OCF3；CF3；NO2；CO2R’；CONR’；R3；OR3；NR3；SR3；C(O)R3；C(O)N(R’)R3；C(O)OR3；SR’；S(O2)N(R’)2；SCF3；N=C-N(R’)2；或CN；Q2’选自苯基或被1-3个取代基任意取代的5-6元芳香杂环，上述每一个取代基独立地选自卤素；被NR’2,OR’,CO2R’,CONR’2或O-P(O)3H2所任意取代的C1-C3烷基；被NR’2,OR’,CO2R’,或OP(O)3H2所任意取代的O-(C2-C3)-烷基；OCF3；CF3；OR4；O-CO2R4；O-P(O)3H2；CO2R’；CONR’；SR’；S(O2)N(R’)2；SCF3；CN；N(R’)C(O)R4；N(R’)C(O)OR4；N(R’)C(O)C(O)R4；N(R’)S(O2)R4；N(R’)R4；N(R4)2；OR4；OC(O)R4；OP(O)3H2；或N=C-N(R’)2；条件是Q2’不为被1-3个独立选自卤素，甲氧基，氰基，硝基，氨基，羟基，甲基或乙基所取代的苯基；R’选自氢；(C1-C3)-烷基；(C2-C3)-链烯基或链炔基；苯基或被1-3个独立选自卤素，甲氧基，氰基，硝基，氨基，羟基，甲基或乙基所取代的苯基；或被1-3个取代基任意取代的5-6元杂环系统，所述取代基独立地选自卤素，甲氧基，氰基，硝基，氨基，羟基，甲基或乙基；R3选自5-8元芳香或非芳香碳环或杂环系统，它们可被R’,OR4,-C(O)R’；-C(O)R4,-C(O)OR4或-J任意取代；包含芳香碳环，芳香杂环或芳香碳环和芳香杂环组合的8-10元双环系统，它们可被R’,R4,-CO)R’；-C(O)R4,-C(O)OR4或-J任意取代，R4为被N(R’)2,OR’,CO2R’,CON(R’)2,或SO2N(R2)2所任意取代的(C1-C4)直链或支链烷基；或被N(R’)2,OR’,CO2R’,CON(R’)2,或SO2N(R2)2任意取代的5-6元碳环或杂环系统，R5选自氢；被R3任意取代的(C1-C3)-烷基；被R3任意取代的(C2-C3)-链烯基或链炔基；苯基或被1-3个独立选自卤素，甲氧基，氰基，硝基，氨基，羟基，甲基或乙基所取代的苯基；或被1-3个取代基任意取代的5-6元杂环系统，所述取代基独立地选自卤素，甲氧基，氰基，硝基，氨基，羟基，甲基或乙基；W选自N(R2)SO2-N(R2)2；N(R2)SO2-N(R2)(R3)；N(R2)C(O)-OR2；N(R2)C(O)-N(R2)2；N(R2)C(O)-N(R2)(R3)；N(R2)C(O)-R2；N(R2)2；C(O)-R2；CH(OH)-R2；C(O)-N(R2)2；C(O)-OR2；J；或为被N(R’)2,OR’,CO2R’,CON(R’)2,R3,SO2N(R2)2,OC(O)R2,OC(O)R’,CO(O)N(R2)2,-N(R4)(R5),-C(O)N(R5)(R2),-C(O)R5,-N(R2)C(O)N(R2)(R5),-NC(O)O(R5),OC(O)N(R2)(R5),或J任意取代的(C1-C4)直链或支链烷基；被N(R’)2,OR’,CO2R’,CON(R’)2,或SO2N(R2)2任意取代的5-6元碳环或杂环系统；或被N(R’)2,OR’,CO2R’,CON(R’)2,或SO2N(R2)2任意取代的8-10元碳环或杂环系统；条件是W不为R3取代的C1烷基，W’选自N(R2)-SO2-Q2；N(R2)-CO2-Q2；N(R2)-C(O)-Q2；N(R2)(Q2)；C(O)-Q2；CO2-Q2；C(O)N(R2)(Q2)；C(R2)2Q2,每个R独立选自氢，-R2,-N(R2)2,-OR2,SR2,C(O)-N(R2)2,S(O2)-N(R2)2,-C(O)-OR2或-C(O)R2，其中两个相邻的R任意地与另一个相连，并和与它们分别相连的Y一起形成4-8元碳环或杂环。R2选自氢，(C1-C3)-烷基，或(C1-C3)-链烯基；每一个可被-N(R’)2,-OR’,SR’,-C(O)N(R’)2；-S(O2)-N(R’)2,-C(O)-OR’,-NSO2R4,-NSO2R3,C(O)N(R’)(R3),-NC(O)R4,-N(R’)(R3),-N(R’)(R4),-C(O)-R3,-C(O)N(R-CHR-)(R4),-N(R4)2,-C(O)N=C(NH)2或R3任意取代，Y为N或C，Z为CH,N,C(OCH3),C(CH3),C(NH2),-C(OH)或C(F),U选自R或W，V选自-C(O)-NH2,-P(O)-(NH2)2,或-SO2NH2,A,B和C独立地选自-O-,-CHR’,-CHR4-,-NR’-,-NR4-或-S-。J为被1-3个选自D，-T-C(O)R’或-OPO3H2任意取代的(C1-C4)直链或支链烷基衍生物，D选自基团 T或为O或NH；并且G或为NH2或为OH。
2．权利要求1中的化合物，其中Q1选自含有1-3个取代基的苯基或吡啶基，所述的取代基独立地选自氯，氟，溴，-CH3,-OCH3,-OH,-CF3,-OCF3,-O(CH2)2CH3,NH2,3,4-亚甲基二氧基，-N(CH3)2,-NH-S(O)2-苯基,-NH-C(O)O-CH2-4-吡啶,-NH-C(O)CH2-吗啉,-NH-C(O)CH2-N(CH3)2,-NH-C(O)CH2-哌嗪，-NH-C(O)CH2-吡咯烷，-NH-C(O)C(O)-吗啉,-NH-C(O)C(O)-哌嗪,-NH-C(O)C(O)-吡咯烷，-O-C(O)CH2-N(CH3)2,或-O-(CH2)2-N(CH3)2,并且其中至少一个所述的取代基处于邻位。
3．权利要求2中的化合物，其中Q1至少含有两个处于邻位的取代基。
4．权利要求2中的化合物，其中的Q1选自
5．权利要求4中的化合物，其中的Q1选自2-氟-6-三氟甲基苯基，2,6-二氟苯基，2,6-二氯苯基，2-氯-4-羟基苯基，2-氯-4-氨基苯基，2,6-二氯-4-氨基苯基，2,6-二氯-3-氨基苯基，2,6-二甲基-4-羟基苯基，2-甲氧基-3,5-二氯-4-吡啶基，2-氯-4,5-亚甲基二氧苯基，或2-氯-4-(N-2-吗啉代-乙酰胺基)苯基。
6．权利要求1中的化合物，其中的Q2选自苯基，吡啶基或萘基，并且其中的Q2任意地含有最多至3个取代基，每个取代基独立地选自氯，氟，溴，甲基，乙基，异丙基，-OCH3,-OH,-NH2,-CF3,-OCF3,-SCH3,-OCH3,-C(O)-OH,-C(O)OCH3,-CH2NH2,-N(CH3)2,-CH2-吡咯烷以及-CH2OH。
7．权利要求6中的化合物，其中的Q2选自 未取代的2-吡啶基或未取代的苯基。
8．权利要求7中的化合物，其中的Q2选自苯基，2-异丙苯基，3,4-二甲基苯基，2-乙基苯基，3-氟苯基，2-甲基苯基，3-氯-4-氟苯基，3-氯苯基，2-羰甲氧苯基，2-羧基苯基，2-甲基-4-氯苯基，2-溴苯基，2-吡啶基，2-亚甲基羟基苯基，4-氟苯基，2-甲基-4-氟苯基，2-氯-4-氟苯基，2,4-二氟苯基，2-羟基-4-氟苯基，2-亚甲基羟基-4-氟苯基，1-萘基，3-氯-2-亚甲基羟基，3-氯-2-甲基，或4-氟-2-甲基。
9．权利要求1中的化合物，其中每个Y为C。
10．权利要求9中的化合物，其中连接在Y上的每个R和U独立地选自氢或甲基。
11．权利要求1中的化合物，其中U,W或U和W都为终端是醇、胺、羧酸、酯、酰胺或杂环的0-4原子链。
12．权利要求11中的化合物，其中U,W或U和W都选自
13．权利要求12中的化合物，其中U,W或U和W选自
14．权利要求1中的化合物，其中的化合物选自表1-6中所描述化合物中任意一个。
15．权利要求1中的化合物，其中的化合物为 其中X为H，
16．权利要求1中的化合物，其中的化合物为 其中X为NH2或N(CH3)2。
17．权利要求1中的化合物，其中的化合物为 其中X为OH,NH2或N(CH3)2。
18．权利要求1中的化合物，其中的化合物为 其中X为OH,NH2或N(CH3)2。
19．权利要求1中的化合物，其中的化合物为 并且其中X为OH,NH2或N(CH3)2，
20．权利要求1中的化合物，其中的化合物为 其中X=H,
21．权利要求1中的化合物，其中的化合物为 其中X=
22．权利要求1中的化合物，其中的化合物为 其中X=
23．权利要求1中的化合物，其中的化合物为 其中X=
24．权利要求1中的化合物，其中所述的化合物选自下列化合物之一
25．有含可有效抑制P38量的权利要求1-24任意一个中所述化合物及制药上可接受载体的药物组合物。
26．治疗或预防炎症疾病，自身免疫疾病，破坏性骨失调，增殖失调，感染疾病，神经变性疾病，过敏，中风中的再灌注/局部缺血，心脏病，生成血管失调，器官缺氧，高血压，心脏肥大，血栓诱导的血小板聚集或患者体内与前列腺素内过氧化酶-2合成有关疾病的方法，所述的方法包含给予所述的患者权利要求25中的组合物。
27．权利要求26中所述的方法，其中的方法用来治疗或预防选自急性胰腺炎，慢性胰腺炎，哮喘，过敏或成年人呼吸综合症等炎症疾病。
28．权利要求26中所述的方法，其中所述的方法可用来治疗或预防选自肾小球性肾炎，风湿性关节炎，系统性红斑狼疮，硬皮病，慢性甲状腺炎，Graves’疾病，自身免疫性胃炎，糖尿病，自身免疫性溶血性贫血，自身免疫性中性白细胞减少症，血小板减少症，异位性皮炎，慢性活性肝炎，重症肌无力，多发性硬化，肠道炎症疾病，溃疡性结肠炎，Crohn’s疾病，牛皮癣，或移植物对抗宿主疾病等自身免疫疾病。
29．权利要求26中所述的方法，其中所述的方法可用来治疗或预防骨关节炎，骨硬化或复合性骨髓瘤有关的骨疾病等破坏性骨失调疾病。
30．权利要求26中所述的方法，其中所述的方法可用来治疗或预防选自急性骨髓性白血病，慢性骨髓性白血病，转移性黑色素瘤，Kaposi’s肉瘤或复合性骨髓瘤等增殖性疾病。
31．权利要求26中所述的方法，其中所述的方法可用来治疗或预防选自脓毒症，脓毒性休克，或志贺菌病等感染性疾病。
32．权利要求26中所述的方法，其中所述的方法可用来治疗或预防选自急性肝炎感染，HIV感染或CMV视网膜炎等病毒性疾病。
33．权利要求26中所述的方法，其中所述的方法可用来治疗或预防选自Alzheimer’s疾病，Parkinson’s疾病，大脑局部缺氧或由创伤损伤引起的神经变性疾病等神经变性疾病。
34．权利要求26中所述的方法，其中所述的方法可用来治疗或预防中风中的再灌注/局部缺血，心肌局部缺血，肾局部缺血，心脏病，器官缺氧或血栓诱导的血小板聚集。
35．权利要求26中所述的方法，其中所述的方法可用来治疗或预防选自水肿，感冒，痛觉缺失或疼痛等与前列腺素内过氧化酶-2合成有关的疾病。
36．权利要求35中所述的方法，其中所述的疼痛选自神经肌肉疼痛，头疼，癌症疼痛，牙疼或关节疼痛。
37．权利要求26中所述的方法，其中所述的方法可用来治疗或预防选自固体肿瘤，眼新血管形成或婴幼儿血管瘤等血管生成性疾病。
全文摘要
本发明涉及P38抑制剂,P38为一种参与细胞增殖、细胞死亡以及对细胞外刺激的反应等过程的哺乳动物蛋白激酶。本发明还涉及制备这些抑制剂的方法。本发明还提供了含有本发明抑制剂的药物组合物以及利用这些组合物来治疗和预防各种失调的方法。
文档编号C07D213/56GK1306512SQ99807647
公开日2001年8月1日 申请日期1999年5月11日 优先权日1998年5月11日
发明者F·萨利特罗, V·加卢罗, S·贝朗, G·贝米斯, J·柯奇兰 申请人:沃泰克斯药物股份有限公司