专利名称：山苦茶多糖的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种山苦茶多糖的制备方法。
背景技术：
山苦茶又名鹧鸪叶、鹧鸪茶、毛茶、禾茶，属野生灌木，性僻耐干旱，喜欢生长于荒山野岭石头缝中。主产海南省万宁东山岭，叶圆味甘，是一种
奇特的野生茶叶。茶树高可达1一3米以上，最高甚至的10米。叶片互生，枝的上部对生，叶片呈圆状卵形，叶片长5-15厘米，顶端尖形，边全绿呈波状齿，背面有少数透明脉点，叶脉呈羽状，叶柄长l-3厘米。
山苦茶是海南省的一种采用野生的乔木树叶，晾制而成，它没有经过炒茶等传统工艺，因此泡出来的茶水清香中夹着一种植物特有的味道，鹧鸪茶甘冽爽口，并有好闻的药香，有清热解毒、清热解渴、消食利胆、降压、减肥、健脾、养胃之效，还可防治感冒，被历代文人墨客誉为"灵芝草"。茶叶香气浓烈，冲泡后汤色清亮，饮后口味甘甜，余香无穷，是理想的解油腻、助消化的保健饮料。
茶多糖是茶叶中的重要生物活性成分之一，茶多糖具有抗辐射、增强机体免疫力、抗炎、抗癌等多种功效。
发明内容
本发明的目的是提供一种山苦茶多糖的制备方法，简单易行，提高了提取率、縮短了提取时间、减少了能耗。
为达到上述目的，本发明所提供的技术方案是 一种山苦茶多糖的制备方法，包括以下步骤
a)将山苦茶于5(TC 8(TC烘干、粉碎，加入5倍重量以上的水进行加热提取，提取时间为60min 180min，提取温度为60。C 95。C，过滤，得滤液
(2)滤液①调pH值至3.0 4.0，加蛋白酶进行酶解，搅匀后，维持pH值
4在3.0 4.0， 45。C 5(TC的条件酶解，时间为450 510分钟；酶解结束后加热进行酶灭活；
(3) 降至室温，过滤，收集滤液；调节滤液的pH值至6.0 7.0;
(4) 加入95%的乙醇至滤液中乙醇体积浓度为10% 20%，室温静置3小时以上；
(5) 离心，过滤，收集滤液，加入95%乙醇至乙醇体积浓度为40% 95%，室温静置3小时以上；
(6) 过滤，沉淀物分别用95%乙醇和丙酮洗2次，真空干燥，即得山苦茶多糖。
包括山苦茶多糖的提纯歩骤
(7) 取步骤(6)制得的山苦茶多糖，加入5倍量的水搅拌溶解，离心，过滤，取过滤液；
(8) 滤液用超滤膜进行超滤，收集截留液；
(9) 截留液再次加入95%乙醇至乙醇体积浓度为40% 95%，室温静置3小时以上；
柳离心，过滤，沉淀分别用95%乙醇和丙酮洗2次，进行真空干燥，即得提纯后的山苦茶多糖。
往步骤(l)产生的滤渣中加入的3倍山苦茶重量以上的水进酶解，按每公斤山苦茶粉加入10 30万国际单位比活力的复合酶进行酶解，pH值在3.0 6.0，温度为25。C 55。C的条件下酶解，时间为60 250分钟；加热至9(TC IO(TC，加热时间为5 20min进行酶灭活，过滤，得滤液②；相应步骤(2)中
是先将合并滤液①和滤液②，然后酶解。
所述的步骤(3)中过滤包括，先用滤布进行粗过滤，再用高速冷冻离心机进行离心，再进行抽滤。
所述的步骤(6)中的过滤为用高速冷冻离心机离心，倒出上清液，收集沉淀，用95%的乙醇来洗，用抽滤器抽干。
所述超滤是采用截留分子为5 100千道尔顿的超滤膜。
所述复合酶包含有纤维素酶、淀粉酶、半纤维素酶和果胶酶，其比例为1 3 : 1 2 : 1 3 : 1 2。
本发明具有的优点通过对山苦茶进行双酶水解，经过分级醇沉及酒精
醇沉的方法，第一步分离纯化除去其他杂质，然后用分子截留为5 10KD的超滤膜进行超滤，收集截留液，再经过酒精醇沉，第二步分离纯化除去其他
杂质。这种方法的优点如下
1、 山苦茶直接经酶解等生产工艺提取山苦茶多糖，具有简单、安全、环保、低成本等优点。
2、 本发明的制备山苦茶多糖的方法所制备的山苦茶多糖纯度高，收率高，
成色好，可大量生产等优点。
3、 我们发明的山苦茶多糖的制备方法所用的复合酶对茶叶渣进行酶解进行第二次浸提，使得茶叶细胞壁破裂，促进多糖的溶出，以期达到提高提取率、縮短提取时间、减少能耗等目的。
4、 我们发明的山苦茶多糖的制备方法所用的蛋白酶酶解法，可以分解糖蛋白，有利于提高多糖的最终纯度。
5、 制备工艺简单易行，原料易得，反应条件温和，收率高，稳定性好，对制备设备及场所要求也很低，适合于大规模工业化生产。
具体实施例方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明。实施例
取2000g干燥的山苦茶粉，加入20L水进行加热提取，提取时间为120min，提取温度为80°C，过滤，得滤液①18.0L。滤渣加入10L水，加入30%柠檬酸调pH至5.2，加热至温度为48°C±2°C。按每kg山苦茶粉加入20万国际单位(比活力)复合酶的比例进酶解，加入40万国际单位(比活力)复合酶，其中，复合酶为纤维素酶、淀粉酶、半纤维素酶和果胶酶，按照比例为1 3 : 1 2 : 1 3 ■ 1 2混合而得；搅匀后，维持pH5.2、 48。C士2'C的条件水解120min。酶灭活，过滤，得滤液②8.5L。
合并滤液①和滤液②共26.5L，滤液用酸调pH值至3.4，温度保持为48°C±2°C，按每kg山苦茶粉加入15万国际单位(比活力)蛋白酶的比例，加入30万国际单位(比活力)蛋白酶，搅匀后，维持pH3.4、 48匸±2"的条件水解480min。酶解结束后加热进行酶灭活；
降温至室温，过滤，收集滤液25.0L;滤液加入用18% (重量百分比)的NaOH溶液调节pH值至6.4;调过pH值的滤液加入95。/。的乙醇至醇浓度为20%，室温静置；离心，过滤，收集滤液，加入95%乙醇醇沉，室温静置；
离心，过滤，取沉淀，沉淀分别用95%乙醇和丙酮洗2次，真空干燥，即得山苦茶多糖粗品337.21g;
取山苦茶多糖粗品300g，加入8L水搅拌进行溶解，离心，过滤，得滤液7.5L，用对分子截留为5 100千道尔顿的滤膜进行超滤，收集截留液得7.0L。离心，过滤，加入95%的酒精至醇浓度为70%，静置过夜。离心，过滤，取沉淀，沉淀分别用95%乙醇和丙酮洗2次，抽干，置真空干燥箱中干燥，即得山苦茶多糖精品8.21g。取样进行含量测定，分子量测定等检测，备用。
检验结果
1. 多糖鉴别苯酚一硫酸试剂反应，结果为阳性；
2. 多糖含量95.83% (用苯酚一硫酸法测定)
3. 多糖分子量测定71186道尔顿(参考2005年药典二部附录V H)
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。
权利要求
1、一种山苦茶多糖的制备方法，包括以下步骤(1)将山苦茶于50℃～80℃烘干、粉碎，加入5倍重量以上的水进行加热提取，提取时间为60min～180min，提取温度为60℃～95℃，过滤，得滤液①。(2)滤液①调pH值至3.0～4.0，加蛋白酶进行酶解，搅匀后，维持pH值在3.0～4.0，45℃～50℃的条件酶解，时间为450～510分钟；酶解结束后加热进行酶灭活；(3)降至室温，过滤，收集滤液；调节滤液的pH值至6.0～7.0；(4)加入95％的乙醇至滤液中乙醇体积浓度为10％～20％，室温静置3小时以上；(5)离心，过滤，收集滤液，加入95％乙醇至乙醇体积浓度为40％～95％，室温静置3小时以上；(6)过滤，沉淀物分别用95％乙醇和丙酮洗2次，真空干燥，即得山苦茶多糖。
2、 根据权利要求1所述的山苦茶多糖的制备方法，其特征在于包括山 苦茶多糖的提纯步骤(7) 取步骤(6)制得的山苦茶多糖，加入5倍量的水搅拌溶解，离心，过滤， 取过滤液；(8) 滤液用超滤膜进行超滤，收集截留液；(9) 截留液再次加入95%乙醇至乙醇体积浓度为40% 95%，室温静置3 小时以上；鹏离心，过滤，沉淀分别用95%乙醇和丙酮洗2次，进行真空干燥，即 得提纯后的山苦茶多糖。
3、 根据权利要求l所述的山苦茶多糖的制备方法，其特征在于往步骤 (1)产生的滤渣中加入3倍山苦茶重量以上的水进行酶解，按每公斤山苦茶粉 加入10 30万国际单位比活力的复合酶进行酶解，pH值在3.0 6.0，温度 为25。C 55。C的条件下酶解，时间为60 250分钟；加热至90°C 100°C ，加热时间为5 20min进行酶灭活，过滤，得滤液②；相应步骤(2)中是先将合 并滤液①和滤液②，然后酶解。
4、 根据权利要求l所述的山苦茶多糖的制备方法，其特征在于所述的 步骤(3)中过滤包括，先用滤布进行粗过滤，再用高速冷冻离心机进行离心，再进行抽滤。
5、 根据权利要求l所述的山苦茶多糖的制备方法，其特征在于所述的步骤(6)中的过滤为用高速冷冻离心机离心，倒出上清液，收集沉淀，用95%的乙醇来洗，用抽滤器抽干。
6、 根据权利要求l所述的山苦茶多糖的制备方法，其特征在于所述超滤是采用截留分子为5 100千道尔顿的超滤膜。
7、 根据权利要求3所述的山苦茶多糖的制备方法，其特征在于所述的复合酶包含有纤维素酶、淀粉酶、半纤维素酶和果胶酶，其比例为1 3 : l 2 : 1 3 : 1 2。
全文摘要
本发明公开了一种山苦茶多糖的制备方法，依次由下述过程组成将山苦茶烘干、粉碎，加水加热提取，过滤，得滤液。滤液加酶进行酶解，酶灭活，离心，过滤，取滤液。滤液加入95％的乙醇至醇浓度为10％～20％，室温静置。离心，过滤，收集滤液，加入95％乙醇至醇终浓度为40％～95％，室温静置。离心，取沉淀，沉淀用95％的乙醇洗两次，真空干燥，即得山苦茶多糖粗品。取山苦茶多糖粗品用水溶解，离心，过滤，滤液用超滤膜进行超滤，收集截留液，醇沉，静置过夜。离心，取沉淀，沉淀用95％的乙醇洗两次，真空干燥，即得高纯度的山苦茶多糖。这种提取方法收率高、生产成本低，得到的山苦茶多糖纯度高，适合大规模工业化生产。
文档编号C08B37/00GK101475648SQ20091000126
公开日2009年7月8日 申请日期2009年1月16日 优先权日2009年1月16日
发明者伍曾利, 吴家强, 王海生 申请人:伍曾利