专利名称：一种两亲嵌段共聚物及其纳米粒子以及它们的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种两亲嵌段共聚物及其纳米粒子，以及它们的制备方法。
背景技术：
聚乙二醇一聚乳酸嵌段共聚物(PEG-6-PLA)以及聚乙二醇—聚乳酸/羟基乙酸嵌段共聚 物(PEG-6-PLGA)具有优异的生物相容性、生物降解性，其中，PEG不但可以提高PLA、 PLGA的亲水性，而且可以减少在生物体内蛋白质和细胞在胶束粒子表面的吸附，以及不易 被免疫系统识别，保护PLA 、PLGA不受免疫系统的破坏，利于体内长时间循环。PLA、PLGA 可以包覆脂溶性药物，成为可生物降解的、具有缓释功能的药物载体。
当前设计合成亲水链段含官能团的两亲性嵌段聚合物，利用链端的官能团进行连接耙向 分子，从而制备具有靶向功能的纳米粒子成为人们关注的热点。链端的官能团中，氨基的活 性高，而且与之进行连接反应的靶向分子种类繁多，因此，合成含有功能性氨基的基于聚乳 酸及聚羟基乙醇酸的嵌段聚合物，并将其制备为新型的表面含氨基的纳米粒子有很大的应用 前景。
赖氨酸是人体的一种必需氨基酸，与人体具有良好的相容性，而且其代谢产物能够通过新 陈代谢及时排出体外,对人体不会产生毒副作用。赖氨酸聚合后可形成多个氨侧基，聚合程度 也可由人工控制，能够批量生产。另一方面，聚赖氨酸对某些癌细胞具有亲和性，可以通过 细胞内吞作用进入细胞，且可生物降解，在细胞内易于被胰蛋白酶降解产生释药作用，长期 使用无免疫原性。因此，以聚赖氨酸为功能性氨基链端的基于聚乳酸及聚羟基乙醇酸的嵌段 聚合物的合成意义重大。
发明内容
针对上述现有技术，本发明提供了一种新型的侧链含有多氨基功能化的两亲嵌段共聚物， 并提供了将其制备成表面含有氨基的聚合物纳米粒子的方法。 本发明是通过以下技术方案实现的 一种两亲嵌段共聚物，结构式如下其中，n、 x、 y、 z均为整数，n=l 1000， x=l 300， y=l 800， z=0 800;
当z=0时，为PLL-6-PEG-6-PLA;
当z=l 800时，为PLL-6-PEG-6-PLGA。
PLL-6-PEG-6-PLA的制备工艺如下
(1) 在氩气氛下，依次向反应瓶中加入10 40重量份的THF、 1 5重量份的KHMDS、 2 10重量份的EO，冰浴下反应3 5天，然后再加入2 50重量份的丙交酯，反应6 10h 后，向反应瓶内滴入1 3重量份的lmol/L的盐酸或冰醋酸的丙酮溶液，冰醋酸与丙酮的体 积比为1: 6 1: 9，终止反应，并酸解产物；将酸解后的产物滴入过量的(100 400重量份) 无水乙醚中进行沉淀纯化处理，纯化后的产物真空干燥至恒重，得白色固体，为 H2N-PEG-6-PLA;
(2) 取2 10重量份的H2N-PEG-6-PLA放入三口瓶中，加入10 40重量份的DMF， 通入干燥的氩气，搅拌，然后加入1 5重量份的Lys(z)-NCA,室温反应20 45h;反应后， 减压蒸出溶剂，然后用10 60重量份的CH2Cl2溶解，再用50 400重量份的无水乙醚沉淀， 过滤，真空室温抽干，得产物；
(3) 取1~4重量份的步骤(2)中的产物溶解到10~30重量份的三氟乙酸中，氩气保 护下，加入1 5重量份的溴化氢的冰醋酸溶液，溴化氢的质量分数为50%，冰浴下搅拌反应 2 6h,然后将反应溶液倾入100 300重量份的体积比为2: 1 6: 1的HAc/MeOH混合溶 液中，抽虑，得白色固体，即为两亲嵌段共聚物PLL-6-PEG-6-PLA。
PLL-6-PEG-6-PLGA的制备工艺如下
(1) 氩气氛下，依次向反应瓶中加入10 60重量份的THF、 1 5重量份KHMDS、 2 IO重量份的的EO,冰浴下反应3 5天，形成黄色粘稠溶液，然后注入1 5重量份的甲醇 终止反应，再倾入100 300重量份的石油醚，得粉末状固体，真空干燥，得PEO;
(2) 取1~20重量份的PEO、2 20重量份的丙交酯与乙交酯的混合物加入到反应瓶中， 其中丙交酯与乙交酯的混合物中丙交酯与乙交酯的摩尔比为90: 10~50: 50，加入20 70 重量份的无水甲苯，氮气保护下，加入0.5 3重量份的辛酸亚锡，50 140'C下反应6~30h 后，向反应瓶内滴入1 3重量份的去离子水终止反应，再加入1 3重量份的lmol/L的盐 酸或冰醋酸的丙酮溶液，冰醋酸与丙酮的体积比为1: 3 1: 9，以酸解产物，将酸解后的产 物滴入50 400重量份的无水乙醚中沉淀纯化处理，纯化后的产物于40'C减压干燥至恒重， 得白色固体，为H2N-PEG-6-PLGA;
G)取2 10重量份的H2N-PEG-6-PLGA放入三口瓶中，加入10 40重量份的DMF,通入干燥的氩气，搅拌，然后加入1 5重量份的Lys(z)-NCA,室温反应20 45h;反应后， 减压蒸出溶剂，然后用10 40重量份的CH2Cl2溶解，再用50 400重量份的无水乙醚沉淀， 过滤,真空室温抽干，得产物；
(4)取1 4重量份的步骤(3)中的产物溶解到10 80重量份的三氟乙酸中，氩气保 护下，加入1 5重量份的溴化氢的冰醋酸溶液，溴化氢的质量分数为50%,冰浴下搅拌反应 2~5h,然后将反应溶液倾入100 400重量份的体积比为2: 1 9: 1的HAc/MeOH混合溶 液中，抽虑，得白色固体，即为两亲嵌段共聚物PLL-6-PEG-6-PLGA。 应用本发明的两亲嵌段共聚物可以得到表面含有多氨基的纳米粒子。 该表面含有多氨基的纳米粒子的制备方法如下称取10 100重量份的干燥的两亲嵌段 共聚物，将其溶解到1 15重量份的有机溶剂中，超声使其充分溶解，然后逐滴加入到10 150重量份的无水乙醇中，搅拌2 7h，然后将其加入到等体积的蒸馏水中，室温下搅拌， 使有机溶剂挥发除尽，即可得到表面含多氨基的纳米粒子，光散射测定结果显示该嵌段聚合 物在水中自组装成的纳米粒子的大小在30-200nm之间，且具有较窄的粒径分布(分布指数小 于0.2)。
所述有机溶剂为二氯甲烷、丙酮、四氢呋喃中的任一种或任几种的任意比例的混合溶剂。 本发明具有以下优点l、利用合成的链端含有氨基的(H2N-PEG-6-PLA)与 (H2N-PEG-WPLGA)，可以方便地进一步引发聚合Lys(z)-NCA，合成含多个侧氨基的嵌段聚 合物PLL-6-PEG-6-PLA， PLL-6-PEG-6-PLGA,合成方法简单且产率较高。2、采用溶解扩散 挥发法制备出表面含有多氨基的纳米粒子，粒径大小可控制且分布均匀，重复性好。3、采用 PLL-6-PEG-6-PLA, PLL-6-PEG-6-PLGA制备纳米粒子，可以通过控制PLL链段的长短，进 一步增加纳米粒子表面的氨基浓度。
本发明的两亲嵌段共聚物及其纳米粒子都具有良好的生物降解性和生物相容性，也都是 各国食品药物监督管理局(FDA)批准可用于人体内的成分，因此本发明的纳米粒子可以用 于体内，并且在体内降解，不但可能实现药物的恒速释放，而且可以避免生物安全性和生物 相容性的隐患。聚赖氨酸PLL是一种聚氨基酸，有好的生物相容性。主链上的肽键,在体内发 生酶解，使材料有好的生物降解性。此外聚赖氨酸(PLL)链段中伯氨基可以高效地连接许多 靶向分子，本发明根据实际需要，可以通过调节聚赖氨酸的链长短，得到侧链具有不同氨基 数量的两亲性嵌段聚合物。聚乙二醇(PEG)具有良好的生物相容性和亲水性，广泛用于生物 技术与生物医学等领域。在分子链中引入PEG链段不仅能够改善共聚物的亲水性，还可以调 节其物理机械性能、生物降解行为及药物控释行为。此外通过改变聚合物中丙交酯与乙交酯的摩尔比，可以调节嵌段聚合物的降解速度，扩大了其在药物载体领域中的应用。
本发明的纳米粒子的氨基可以高效地连接许多靶向分子，PLA或PLGA可以包覆药物， 这样就可以获得具有靶向、缓释性能以及负载药物的纳米粒子，可以用来治疗肿瘤等疾病。
图1为PLL-6-PEG-6-PLA的红外谱图； 图2为PLL-6-PEG-6-PLA的核磁谱图； 图3为PLL-6-PEG-6-PLGA的红外谱图； 图4为PLL-6-PEG-6-PLGA的核磁谱图； 图5为PLL-6-PEG-6-PLA嵌段聚合物自组装透射电镜照片； 图6为PLL-6-PEG-6-PLGA嵌段聚合物自组装透射电镜照片。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明
实施例l:制备PLL-6-PEG-6-PLA及其纳米粒子，步骤如下
(1) 在氩气气氛下，依次将15g的THF (四氢呋喃)、1.5g的KHMDS (六甲基二硅基 胺基钾)、4g的EO(环氧乙垸)加入反应瓶中，冰浴下反应3天，既而将3.5g的d山-LA (d工-丙交酯)加入到反应瓶中，反应8小时后，向反应瓶内滴入lg体积比l: 6的冰醋酸与丙酮 的混合溶液，室温搅拌30min，终止和酸解产物，将产物滴入200g无水乙醚中沉淀纯化处理。 纯化后的产物真空干燥至恒重，为H2N-PEG-6-PLA。
(2) 取4g H2N-PEG-6-PLA放入三口瓶中，加入20g DMF，通入干燥的氩气、搅拌、 然后加入1.2gLys(z)-NCA，室温反应30小时，减压蒸出溶剂后用20g CH2C12溶解，然后用 300g的无水乙醚沉淀，过滤，真空室温抽干，得产物。
(3) 将lg上述的产物溶解到10g三氟乙酸中，氩气保护，加入3g质量分数为50%溴 化氢的冰醋酸溶液，冰浴搅拌反应4h,将溶液倾入150g体积比为3: l的HAc/MeOH的混 合溶液中，抽虑得白色固体，即为PLL-6-PEG-6-PLA,如图5所示，真空干燥，产率为85.5%。
GPC(THF): Mn=14500， PDI-1.21 。红夕卜(FTIR): 3480cm"(vO-H), 3010.3cm"、 2960.7 cm" (VC-H), 2878cm-1 (v-CH2-)， 1759cm-1(vC=0), 1090cm-1 (vC-0-C)， 1525cm-、vC—N) ， 1651cm-'和 1540cm-1为肽键酰胺峰，如图1所示。核磁(111 NMR) (DMSO)数据PLA (S CH3=1.58 ppm and S CH=5.15 ppm); PGA(SCH2=4.82ppm); PEG (SCH2=3.61 ppm); PLL: (S-(CH2)3-)=1.60~1.69, (S-CH2)=2.%, S(-HN-CH<)=4.23,如图2所示，此外没有显示苄基上质子的化学位移 (SC6H5CH2-)=4.97, (SC6H5-)=7.21~7.30,从而可以确定苄氧羰基已经完全除去，生成了氨基。称取60mg干燥好的聚合物，将其溶解到6g的丙酮中，超声使其充分溶解，然后逐滴 加入到10倍量无水乙醇中，搅拌2h，然后将其加入到等体积的蒸馏水中，室温下搅拌使有机 溶剂挥发除尽，即可得到表面含多氨基的PLL-6-PEG-6-PLA的纳米粒子，粒径为106.5nm，粒 径分布0.176。
实施例2:制备？1^-&- ￡0-6- 1^及其纳米粒子，步骤如下
(1) 在氩气氛下，依次将30.0g的THF、 3.0g的KHMDS、 5.8g的EO加入反应瓶中，冰 浴下反应5天，形成黄色粘稠溶液，既而将6g的丙交酯加入到反应瓶中，反应8小时后，向反 应瓶内滴入Ug的lmol/L的盐酸，室温搅拌30min,终止和酸解产物。将产物滴入无水乙醚 中沉淀纯化处理。纯化后的产物于40'C减压干燥至恒重，得H2N-PEG-6-PLA。
(2) 取7gH2N-PEG-6-PLA放入三口瓶中，加入25gDMF，通入干燥的氩气、搅拌、然 后加入2.8g Lys(z)-NCA，室温反应30小时，减压蒸出溶剂后用CH2Cl2溶解，然后用200g的无水 乙醚沉淀，过滤，真空室温抽干，得产物。
(3) 将lg产物溶解到10g三氟乙酸中，加入3g 50%溴化氢的冰醋酸溶液，氩气保护，搅 拌反应5h,将溶液倾入100g无水乙醚中，抽虑得白色固体，真空干燥，产率为84.5%。
GPC测试结果:M『18500，多分散系数(PD"U7。红外与核磁表征数据同实例l。 称取30mg干燥好的聚合物，将其溶解到4g的二氯甲烷中，超声使其充分溶解，然后 逐滴加入到15倍量无水乙醇中，搅拌2h，然后将其加入到等质量的蒸馏水中，室温下搅拌使 有机溶剂挥发除尽，即可得到表面含多氨基的PLL各PEG-6-PLA的纳米粒子，粒径为 136.5nm，粒径分布0.186。
实施例3:制备PLL-6-PEG-6-PLGA及其纳米粒子，步骤如下
(1) 在氩气氛下，依次将20.0g的THF、 1.2g的KHMDS、 2.6g的EO加入100mL反应 瓶中，冰浴下反应5天，形成黄色粘稠溶液，注入lg甲醇终止反应，倾入120g的石油醚中得到 粉末状固体，真空干燥，得PEO。
(2) 取2.5g的PEO、 8g的丙交酯与乙交酯的混合物加入到反应瓶中，其中丙交酯与乙交 酯的混合物中丙交酯与乙交酯的摩尔比为90: 10，加入30g无水甲苯，氩气保护下，加入0.8g 辛酸亚锡，70'C反应15小时后，向反应瓶内滴入l.lg的去离子水终止反应，加入lg体积比为l: 6的冰乙酸与丙酮的混合溶液酸解产物酸解产物。将产物滴入200g无水乙醚中沉淀纯化处理。 纯化后的产物于40'C减压干燥至恒重，得H2N-PEG-6-PLGA。
(3) 取8gH2N-PEG-6-PLGA放入三口瓶中，加入30g DMF，通入干燥的氩气、搅拌、 然后加入1.3 g Lys(z)-NCA,室温反应37小时，减压蒸出溶剂后用CH2C12溶解，然后用250g
8无水乙醚沉淀，过滤，真空室温抽干，得产物。
(4)将lg产物溶解到15g三氟乙酸中，加入3g 50%溴化氢的冰醋酸溶液，搅拌反应4h， 将溶液倾入130g体积比为3: l的HAc/MeOH的混合溶液中，抽虑得白色固体，即为 PLL-6-PEG-6-PLGA，如图6所示，真空干燥至恒重，产率为88.5%。
GPC(THF): Mn=13800， PDI=U8。红外(FTIR): 3480cm"GO-H)， 3010.3cm"、 2960.7 cm" (VC-H)， 2878cm-1 (V-CH2-), 1759cm-1 (vOO)， KWOcm-1 (vC-0-C), 1525cm"(vC-N) , 1651cm-!和 1540cm'1为肽键酰胺峰，如图3所示。核磁(111 NMR) (DMSO)数据PLA(S CH3=1.58 ppm and S CH-5.15 ppm)， PGA(SCH2=4.88ppm), PEG (SCH2-3.61 ppm), PLL: (S-(CH2)3-)=1.60-1.69, (S-CH2)=2.96， (S-HN-CH<)=4.23, 如图4所示，此外没有显示苄基上质子的化学位移 (SC6H5CH2-)=4.97， (SC6H5-)=7.21~7.30，从而可以确定苄氧羰基已经完全除去，生成了氨基。
称取50mg干燥好的聚合物，将其溶解到5g的丙酮中，超声使其充分溶解，然后逐滴 加入到30倍量无水乙醇中，搅拌3h，然后将其加入到等体积的蒸馏水中，室温下搅拌使有机 溶剂挥发除尽，即可得到表面含多氨基的PLL-WPEG-6-PLGA的纳米粒子，粒径为142.5nm， 粒径分布0.135。
实施例4:制备PLL-6-PEG-6-PLGA及其纳米粒子，步骤如下
(1) 在氩气氛下，依次将25.0gTHF、 3.5gKHMDS、 6.8g EO加入100mL反应瓶中，冰浴 下反应3d，注入1.5g甲醇终止反应，倾入260g的石油醚中得到粉末状固体，真空干燥，得PEO。
(2) 取3gPEO、 6g摩尔比为80: 20的丙交酯与乙交酯的混合物加入到反应瓶中，加入 45g无水甲苯，氩气保护下，加入1.15g辛酸亚锡，70'C反应11小时后，向反应瓶内滴入1.2经 的去离子水终止反应，加入1.5g lmol/L的盐酸溶液，酸解产物。将产物滴入170g无水乙醚 沉淀纯化处理。纯化后的产物于40'C减压干燥至恒重，得H2N-PEG-PLGA。
(3) 取5.2gH2N-PEG-6-PLGA放入三口瓶中，加入32gDMF，通入干燥的氩气、搅拌、 然后加入3.0gLys(z)-NCA,室温反应35小时，减压蒸出溶剂后用CH2C12溶解，然后用140g无 水乙醚中沉淀，过滤,真空室温抽干，得产物。
(4) 取1.5g产物溶解到18g三氟乙酸中，加入3,5g 50%溴化氢的冰醋酸溶液，搅拌反应 4h,将溶液倾入200g体积比为4: l的HAc/MeOH的混合溶液中，抽虑得白色固体，真空干 燥至恒重，产率为89.0%。
GPC(THF): Mn=146 00, PDI=1.16。红外(FTIR)与核磁(111 NMR) (DMSO)数据同实例3。 称取40mg干燥好的聚合物，将其溶解到6g的四氢呋喃中，超声使其充分溶解，然后 逐滴加入到10倍量无水乙醇中，搅拌2h，然后将其加入到等质量的蒸馏水中，室温下搅拌使有机溶剂挥发除尽，即可得到表面含多氨基的PLL-6-PEG-6-PLGA的纳米粒子，粒径为 150.0nm，粒径分布0.185。
实施例5:制备PLL-6-PEG-6-PLGA及其纳米粒子，步骤如下
(1) 在氩气氛下，依次将30.0gTHF、 4.0gKHMDS、 8.8g EO加入100mL反应瓶中，冰浴 下反应4d，注入lg甲醇终止反应，倾入200g的石油醚中得到粉末状固体，真空干燥，得PEO。
(2) 取3gPEO、 6g摩尔比为70: 30的丙交酯与乙交酯的混合物加入到反应瓶中，加入50g 无水甲苯，氩气保护下，加入1.5g辛酸亚锡，7(TC反应12小时后，向反应瓶内滴入1.16g的去 离子水终止反应，加入2g体积比为l:7的冰乙酸与丙酮的混合溶液酸解产物。将产物滴入300g 无水乙醚中沉淀纯化处理。纯化后的产物于40'C减压干燥至恒重，得H2N-PEG-6-PLGA。
(3) 取5gH2N-PEG-6-PLA放入三口瓶中，加入30gDMF，通入干燥的氩气、搅拌、然 后加入3.4 g Lys(z)-NCA,室温反应33小时，减压蒸出溶剂后用CH2C12溶解，然后用160g无 水乙醚中沉淀，过滤，真空室温抽干，得产物。
(4) 取2g产物溶解到15g三氟乙酸中，加入4g50。/。溴化氢的冰醋酸溶液，搅拌反应5h， 将溶液倾入300g体积比为3: l的HAc/MeOH的混合溶液中，抽虑得白色固体，真空干燥至 恒重，产率为83.7%。
GPC(THF): Mn=16 000， PDI=U9。红外(FTIR)与核磁(111 NMR) (DMS0)数据同实例3。 称取40mg干燥好的聚合物，将其溶解到7g的四氢呋喃中，超声使其充分溶解，然后
逐滴加入到10倍量无水乙醇中，搅拌2h，然后将其加入到等质量的蒸馏水中，室温下搅拌使
有机溶剂挥发除尽，即可得到表面含多氨基的PLL-6-PEG-6-PLGA的纳米粒子，粒径为
162.5nm,粒径分布0.165。
表l为PLL-6-PEG-6-PLA， PLL-6-PEG-6-PLGA的合成及其纳米粒子的表征，其中，样品1
5同实施例1 5——对应。
表1. PLL-6-PEG-6-PLA, PLL-6-PEG-6-PLGA的合成及其纳米粒子的表征
样品嵌段共聚物LA/GAMw/MnPEGYield粒子浓度粒径分散指数
Mn (GPC)Mn(%)(mg/mL)(—PDI
112500100/01.08200090.211050.140
214050100/0U2画91.511400.165
31800080/201.19220086.011600.175
42150070/301.20200082.81175O.l卯
52750060/401.21200083.511800.150实施例6:制备PLL-6-PEG-6-PLA及其纳米粒子，步骤如下
(1) 在氩气氛下，依次向反应瓶中加入10g的THF、 lg的KHMDS、 2g的EO,冰浴下 反应3天，然后再加入2g的丙交酯，反应6h后，向反应瓶内滴入lg的lmol/L的盐酸，终 止反应，并酸解产物；将酸解后的产物滴入100g的无水乙醚中进行沉淀纯化处理，纯化后的 产物真空干燥至恒重，得白色固体，为H2N-PEG-6-PLA;
(2) 取2g的H2N-PEG-6-PLA放入三口瓶中，加入10g的DMF，通入干燥的氩气，搅 拌，然后加入lg的Lys (z)-NCA,室温反应20h;反应后，减压蒸出溶剂，然后用10g的CH2C12 溶解，再用50g的无水乙醚沉淀,过滤,真空室温抽干，得产物；
(3) 取lg的步骤(2)中的产物溶解到10g的三氟乙酸中，氩气保护下，加入lg的溴 化氢的冰醋酸溶液，溴化氢的质量分数为50%，冰浴下搅拌反应2h,然后将反应溶液倾入100g 的体积比为2: 1的HAc/MeOH混合溶液中，抽虑，得白色固体，即为两亲嵌段共聚物 PLL冊6國PEG-6-PLA。
纳米粒子的制备称取10g的干燥的上述两亲嵌段共聚物，将其溶解到lg的二氯甲垸中， 超声使其充分溶解，然后逐滴加入到10g的无水乙醇中，搅拌2h，然后将其加入到等体积的
蒸馏水中，室温下搅拌，使有机溶剂挥发除尽，即可得到表面含多氨基的纳米粒子。
实施例7:制备PLL-6-PEG-6-PLA及其纳米粒子，步骤如下
(1) 在氩气氛下，依次向反应瓶中加入40g的THF、 5g的KHMDS、 10g的EO，冰浴 下反应5天，然后再加入50g的丙交酯，反应10h后，向反应瓶内滴入3g的冰醋酸的丙酮溶 液，冰醋酸与丙酮的体积比为1: 6,终止反应，并酸解产物将酸解后的产物滴入400g的 无水乙醚中进行沉淀纯化处理，纯化后的产物真空干燥至恒重，得白色固体，为 顆-PEG-6-PLA;
(2) 取10g的H2N-PEG-6-PLA放入三口瓶中，加入40g的DMF，通入干燥的氩气， 搅拌，然后加入5g的Lys (z)-NCA，室温反应45h;反应后，减压蒸出溶剂，然后用60g的 CH2Cb溶解，再用400g的无水乙醚沉淀,过滤，真空室温抽干，得产物；
(3) 取4g的步骤(2)中的产物溶解到30g的三氟乙酸中，氩气保护下，加入5g的溴 化氢的冰醋酸溶液，溴化氢的质量分数为50%,冰浴下搅拌反应6h，然后将反应溶液倾入300g 的体积比为6: 1的HAc/MeOH混合溶液中，抽虑，得白色固体，即为两亲嵌段共聚物 PLL-6-PEG-6-PLA。
纳米粒子的制备称取100g的干燥的两亲嵌段共聚物，将其溶解到15 g的丙酮中，超 声使其充分溶解，然后逐滴加入到150g的无水乙醇中，搅拌7h，然后将其加入到等体积的
11蒸馏水中，室温下搅拌，使有机溶剂挥发除尽，即可得到表面含多氨基的纳米粒子。 实施例8:制备PLL-6-PEG-6-PLA及其纳米粒子，步骤如下
(1) 在氩气氛下，依次向反应瓶中加入25g的THF、 3g的KHMDS、 6g的EO，冰浴 下反应4天，然后再加入25g的丙交酯，反应8h后，向反应瓶内滴入2g的冰醋酸的丙酮溶 液，冰醋酸与丙酮的体积比为1: 8，终止反应，并酸解产物；将酸解后的产物滴入250g的 无水乙醚中进行沉淀纯化处理，纯化后的产物真空干燥至恒重，得白色固体，为 ,-PEG-6孔A;
(2) 取6g的H2N-PEG-6-PLA放入三口瓶中，加入2的DMF，通入干燥的氩气，搅拌， 然后加入3g的Lys (z)-NCA，室温反应30h;反应后，减压蒸出溶剂，然后用35g的CH2C12 溶解，再用200g的无水乙醚沉淀,过滤,真空室温抽干，得产物；
(3) 取3g的步骤(2)中的产物溶解到20g的三氟乙酸中，氩气保护下，加入3g的溴 化氢的冰醋酸溶液，溴化氢的质量分数为50%，冰浴下搅拌反应4h，然后将反应溶液倾入200g 的体积比为4: 1的HAc/MeOH混合溶液中，抽虑，得白色固体，即为两亲'嵌段共聚物 PLL-6-PEG-6孔A。
纳米粒子的制备称取50g的干燥的两亲嵌段共聚物，将其溶解到8g的四氢呋喃中，超 声使其充分溶解，然后逐滴加入到80g的无水乙醇中，搅拌5h，然后将其加入到等体积的蒸 馏水中，室温下搅拌，使有机溶剂挥发除尽，即可得到表面含多氨基的纳米粒子。
实施例9:制备PLL-6-PEG-6-PLGA及其纳米粒子，步骤如下
(1) 氩气氛下，依次向反应瓶中加入10g的THF、 lg的KHMDS、 2g的的EO，冰浴 下反应3天，形成黄色粘稠溶液，然后注入lg的甲醇终止反应，再倾入100g的石油醚，得 粉末状固体，真空干燥，得PEO;
(2) 取lg的PEO、 2g的丙交酯与乙交酯的混合物加入到反应瓶中，其中丙交酯与乙交 酯的混合物中丙交酯与乙交酯的摩尔比为90: 10,加入20g的无水甲苯，氮气保护下，加入 0.5g的辛酸亚锡，50'C下反应30h后，向反应瓶内滴入lg的去离子水终止反应，再加入lg 的lmol/L的盐酸，以酸解产物，将酸解后的产物滴入50g的无水乙醚中沉淀纯化处理，纯 化后的产物于40'C减压干燥至恒重，得白色固体，为H2N-PEG-6-PLGA;
(3) 取2g的H2N-PEG-Z>-PLGA放入三口瓶中，加入10g的DMF，通入干燥的氩气， 搅拌，然后加入lg的Lys (z)-NCA,室温反应20h;反应后，减压蒸出溶剂，然后用10g的 CH2Cb溶解，再用50g的无水乙醚沉淀，过滤,真空室温抽干，得产物；
(4) 取lg的步骤(3)中的产物溶解到10g的三氟乙酸中，氩气保护下，加入lg的溴
12化氢的冰醋酸溶液，溴化氢的质量分数为50%，冰浴下搅拌反应2h,然后将反应溶液倾入lOOg 的体积比为2: 1的HAc/MeOH混合溶液中，抽虑，得白色固体，即为两亲嵌段共聚物 PLL-6-PEG誦6孔GA。
纳米粒子的制备，取50g的干燥的两亲嵌段共聚物，将其溶解到8g的四氢呋喃中，超 声使其充分溶解，然后逐滴加入到80g的无水乙醇中，搅拌5h，然后将其加入到等体积的蒸 馏水中，室温下搅拌，使有机溶剂挥发除尽，即可得到表面含多氨基的纳米粒子。
实施例10:制备PLL-6-PEG-6-PLGA及其纳米粒子，步骤如下
(1) 氩气氛下，依次向反应瓶中加入60g的THF、 5g的KHMDS、 10g的的EO,冰浴 下反应5天，形成黄色粘稠溶液，然后注入5g的甲醇终止反应，再倾入300g的石油醚，得 粉末状固体，真空干燥，得PEO;
(2) 取20g的PEO、 20g的丙交酯与乙交酯的混合物加入到反应瓶中，其中丙交酯与乙 交酯的混合物中丙交酯与乙交酯的摩尔比为50: 50，加入70g的无水甲苯，氮气保护下，加 入3g的辛酸亚锡，140'C下反应6h后，向反应瓶内滴入3g的去离子水终止反应，再加入 3g的冰醋酸的丙酮溶液，冰醋酸与丙酮的体积比为1: 3，以酸解产物，将酸解后的产物滴入 400g的无水乙醚中沉淀纯化处理，纯化后的产物于40'C减压干燥至恒重，得白色固体，为 H2N-PEG-6-PLGA;
(3) 取10g的H2N-PEG-6-PLGA放入三口瓶中，加入40g的DMF，通入干燥的氩气， 搅拌，然后加入5g的Lys (z)-NCA，室温反应45h;反应后，减压蒸出溶剂，然后用40g的 CH2Cb溶解，再用400g的无水乙醚沉淀，过滤，真空室温抽干，得产物；
(4) 取4g的步骤(3)中的产物溶解到80g的三氟乙酸中，氩气保护下，加入5g的溴 化氢的冰醋酸溶液,溴化氢的质量分数为50%，冰浴下搅拌反应5h,然后将反应溶液倾入400g 的体积比为9: 1的HAc/MeOH混合溶液中，抽虑，得白色固体，即为两亲嵌段共聚物 PLL-6-PEG-6-PLGA。
纳米粒子的制备称取10g的干燥的上述两亲嵌段共聚物，将其溶解到lg的二氯甲烷中， 超声使其充分溶解，然后逐滴加入到10g的无水乙醇中，搅拌2h，然后将其加入到等体积的
蒸馏水中，室温下搅拌，使有机溶剂挥发除尽，即可得到表面含多氨基的纳米粒子。
实施例ll:制备PLL-6-PEG-6-PLGA及其纳米粒子，步骤如下 (1)氩气氛下，依次向反应瓶中加入35g的THF、 3g的KHMDS、 6g的的EO，冰浴 下反应4天，形成黄色粘稠溶液，然后注入3g的甲醇终止反应，再倾入200g的石油醚，得 粉末状固体，真空干燥，得PEO;
13(2) 取10g的PEO、 lOg的丙交酯与乙交酯的混合物加入到反应瓶中，其中丙交酯与乙 交酯的混合物中丙交酯与乙交酯的摩尔比为70: 30，.加入45g的无水甲苯，氮气保护下，加 入2g的辛酸亚锡，90'C下反应20h后，向反应瓶内滴入2g的去离子水终止反应，再加入2g 的冰醋酸的丙酮溶液，冰醋酸与丙酮的体积比为1: 5，以酸解产物，将酸解后的产物滴入200g 的无水乙醚中沉淀纯化处理，纯化后的产物于40'C减压干燥至恒重，得白色固体，为 H2N-PEG-6-PLGA;
(3) 取6g的H2N-PEG-6-PLGA放入三口瓶中，加入25g的DMF,通入干燥的氩气， 搅拌，然后加入3g的Lys (z)-NCA，室温反应30h;反应后，减压蒸出溶剂，然后用25g的 CH2Cl2溶解，再用200g的无水乙醚沉淀,过滤，真空室温抽干，得产物；
(4) 取3g的步骤(3)中的产物溶解到50g的三氟乙酸中，氩气保护下，加入3g的溴 化氢的冰醋酸溶液，溴化氢的质量分数为50%，冰浴下搅拌反应4h，然后将反应溶液倾入250g 的体积比为6: 1的HAc/MeOH混合溶液中，抽虑，得白色固体，即为两亲嵌段共聚物 PLL-6-PEG-6-PLGA。
纳米粒子的制备称取100g的干燥的两亲嵌段共聚物，将其溶解到15 g的丙酮中，超
声使其充分溶解，然后逐滴加入到150g的无水乙醇中，搅拌7h，然后将其加入到等体积的 蒸馏水中，室温下搅拌，使有机溶剂挥发除尽，即可得到表面含多氨基的纳米粒子。
权利要求
1.一种两亲嵌段共聚物，结构式如下其中，n、x、y、z均为整数，n＝1～100，x＝1～300，y＝1～800，z＝0～800；当z＝0时，为PLL-b-PEG-b-PLA；当z＝1～800时，为PLL-b-PEG-b-PLGA。
2. —种权利要求1所述两亲嵌段共聚物的制备工艺，其特征在于，PLL-6-PEG-6-PLA的制备 工艺如下(1) 在氩气氛下，依次向反应瓶中加入10 40重量份的THF、 1 5重量份的KHMDS、 2 10重量份的EO，冰浴下反应3 5天，然后再加入2 50重量份的丙交酯，反应6 10h后，向反应瓶内滴入1 3重量份的lmol/L的盐酸或冰醋酸的丙酮溶液，冰醋酸与丙 酮的体积比为l: 6 1: 9，终止反应，并酸解产物；将酸解后的产物滴入100~400重量 份的无水乙醚中进行沉淀纯化处理，纯化后的产物真空干燥至恒重，得白色固体，为 H2N-PEG-6-PLA;(2) 取2 10重量份的H2N-PEG-6-PLA放入三口瓶中，加入10 40重量份的DMF， 通入干燥的氩气，搅拌，然后加入1 5重量份的Lys(z)-NCA,室温反应20 45h;反应 后，减压蒸出溶剂，然后用10 60重量份的CH2Cl2溶解，再用50 400重量份的无水乙 醚沉淀，过滤,真空室温抽干，得产物；(3) 取1 4重量份的步骤(2)中的产物溶解到10 30重量份的三氟乙酸中，氩气保护 下，加入1~5重量份的溴化氢的冰醋酸溶液，溴化氢质量分数为50%,冰浴下搅拌反应 2 6h，然后将反应溶液倾入100 300重量份的体积比为2: 1 6: l的HAc/MeOH混合 溶液中，抽虑，得白色固体，即为两亲嵌段共聚物PLL-6-PEG-6-PLA。
3. —种权利要求1所述的两亲嵌段共聚物的制备工艺，其特征在于，PLL-6-PEG-6-PLGA的 制备工艺如下(1)氩气氛下，依次向反应瓶中加入10 60重量份的THF、 1 5重量份KHMDS、 2~ IO重量份的的EO,冰浴下反应3 5天，形成黄色粘稠溶液，然后注入1 5重量份的甲 醇终止反应，再倾入100 300重量份的石油醚，得粉末状固体，真空干燥，得PEO;(2) 取1 20重量份的PEO、 2 20重量份的丙交酯与乙交酯的混合物加入到反应瓶中， 其中丙交酯与乙交酯的混合物中丙交酯与乙交酯的摩尔比为90: 10 50: 50，加入20 70重量份的无水甲苯,氮气保护下,加入0.5 3重量份的辛酸亚锡，50 140'C下反应6 30h后，向反应瓶内滴入1 3重量份的去离子水终止反应，再加入1 3重量份的lmol/L 的盐酸或冰醋酸的丙酮溶液，冰醋酸与丙酮的体积比为1: 3~1: 9，酸解产物，将酸解 后的产物滴入50 400重量份的无水乙醚中沉淀纯化处理，纯化后的产物于40。C减压干 燥至恒重，得白色固体，为H2N-PEG-6-PLGA:(3) 取2 10重量份的H2N-PEG-6-PLGA放入三口瓶中，加入10 40重量份的DMF, 通入干燥的氩气，搅拌，然后加入1 5重量份的Lys(z)-NCA,室温反应20-45h;反应后， 减压蒸出溶剂，然后用10 40重量份的CH2Cl2溶解，再用50 400重量份的无水乙醚沉 淀,过滤,真空室温抽干，得产物；(4) 取1 4重量份的步骤(3)中的产物溶解到10 80重量份的三氟乙酸中，氩气保护 下，加入1 5重量份的溴化氢的冰醋酸溶液，溴化氢的质量分数为50%,冰浴下搅拌反 应2 5h，然后将反应溶液倾入100~400重量份的体积比为2: 1 9: 1的HAc/MeOH 混合溶液中，抽虑，得白色固体，即为两亲嵌段共聚物PLL-6-PEG-6-PLGA。
4. 一种利用权利要求1所述的两亲嵌段共聚物制备纳米粒子的方法，其特征在于，步骤如下 称取10 100重量份的干燥的两亲嵌段共聚物，将其溶解到1 15重量份的有机溶剂中， 超声使其充分溶解，然后逐滴加入到10 150重量份的无水乙醇中，搅拌2 7h,然后将 其加入到等体积的蒸馏水中，室温下搅拌，使有机溶剂挥发除尽，即可得到表面含多氨基 的纳米粒子。
5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述有机溶剂为二氯甲烷、丙酮、四氢呋喃中 的任一种或任几种的任意比例的混合溶剂。
6. 釆用权利要求4所述的方法制备得到的纳米粒子。
全文摘要
本发明公开了一种两亲嵌段共聚物，结构式如右，其中，n、x、y、z均为整数，n＝1～1000，x＝1～300，y＝1～800，z＝0～800；当z＝0时，为PLL-b-PEG-b-PLA；当z＝1～800时，为PLL-b-PEG-b-PLGA。本发明的两亲嵌段共聚物及其纳米粒子都具有良好的生物降解性和生物相容性，本发明的纳米粒子的氨基可以高效地连接许多靶向分子，PLA或PLGA可以包覆药物，这样就可以获得具有靶向、缓释性能以及负载药物的纳米粒子，可以用来治疗肿瘤等疾病。
文档编号C08G63/664GK101565497SQ200910014888
公开日2009年10月28日 申请日期2009年5月11日 优先权日2009年5月11日
发明者宋继彬, 张广照, 鲁在君 申请人:山东大学;张广照